本發(fā)明屬于生物發(fā)酵工程
技術(shù)領(lǐng)域：
，尤其是一種磷酸用于溫敏型菌種發(fā)酵生產(chǎn)谷氨酸的方法。
背景技術(shù)：
：無機鹽是微生物生命活動不可缺少的物質(zhì)。谷氨酸發(fā)酵過程中需要磷、鉀等營養(yǎng)元素，磷是無機鹽中代謝過程中氧化磷酸化的主要元素，它也是核酸、磷脂、某些輔酶的組成成分；高能磷酸鍵在能量貯存與傳遞中起著重要的作用，磷酸鹽還是一種重要的緩沖劑。在谷氨酸發(fā)酵中也不例外，磷含量的高低對其影響很大，磷濃度過高，菌體代謝有轉(zhuǎn)向合成擷氨酸的傾向。磷濃度過低，菌體生長不好，表現(xiàn)為耗糖慢、殘?zhí)歉?，菌體生長緩慢。生產(chǎn)中經(jīng)常使用磷酸氫二鈉、磷酸氫二鉀等磷酸鹽提供磷元素；氯化鉀(KCl)提供鉀元素。目前，在溫敏型菌種發(fā)酵生產(chǎn)谷氨酸的過程中，發(fā)酵培養(yǎng)基中常常添加磷酸鹽進(jìn)行制備，但是，使用磷酸鹽制備發(fā)酵培養(yǎng)基存在如下缺點：一方面克服磷酸鹽完全溶于水需要的時間較長，容易造成發(fā)酵培養(yǎng)基的混合不均勻，提高了發(fā)酵培養(yǎng)基的配制時間，降低了生產(chǎn)效率；另一方面比產(chǎn)酸速率較低，延長了發(fā)酵周期，菌體產(chǎn)酸較慢，提高了生產(chǎn)成本。因此，亟需一種新的溫敏型菌種發(fā)酵生產(chǎn)谷氨酸的方法。通過檢索，發(fā)現(xiàn)如下兩篇與本專利申請相關(guān)的專利公開文獻(xiàn)：1、玉米浸泡水用于溫敏型發(fā)酵工藝生產(chǎn)谷氨酸的方法(CN102154396A)，該方法是用玉米浸泡水代替溫敏型發(fā)酵工藝中的玉米漿制備發(fā)酵培養(yǎng)基，發(fā)酵生產(chǎn)谷氨酸。本發(fā)明在不增加任何額外設(shè)備和人力投入的情況下，縮短了整個發(fā)酵周期，并大幅提高了L-谷氨酸的產(chǎn)量(147g/L以上)和轉(zhuǎn)化率(64％以上)，該工藝技術(shù)操作方便，節(jié)水節(jié)能，有利于降低谷氨酸的發(fā)酵成本，適于在生產(chǎn)中全面推廣。2、磷酸鹽用量對谷氨酸發(fā)酵影響的研究(作者：劉利鋒，于衛(wèi)紅，發(fā)酵科技通訊第36卷)，為了提高谷氨酸的產(chǎn)酸率，從培養(yǎng)基的配方中尋找突破口。首先從增加鉀鹽考慮，將磷酸氫二鉀的用量由0.17％增加到0.20％。從試驗結(jié)果看產(chǎn)酸低，原因是：整個發(fā)酵過程中，磷鹽的多少與菌體變形及生長速度有很大的關(guān)系，磷鹽多,菌體短而粗，自10～20h，菌體大量增殖，并且耗糖，最終導(dǎo)致耗脲少，產(chǎn)酸低，確定用16％的雙酶糖的培養(yǎng)基中，用磷酸氫二鉀0.14％的用量較好，其產(chǎn)酸率平穩(wěn)，平均10.55％，轉(zhuǎn)化率平穩(wěn)且較高，平均65.95％。在實際生產(chǎn)操作工程中，磷酸鹽的溶解速度比較慢，磷酸鹽完全溶于水需要的時間較長，容易造成發(fā)酵培養(yǎng)基的混合不均勻，增加了發(fā)酵培養(yǎng)基的配制時間，從而降低了生產(chǎn)效率。通過對比，本發(fā)明專利申請與上述專利公開文獻(xiàn)存在本質(zhì)的不同。技術(shù)實現(xiàn)要素：本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)的不足之處，提供一種磷酸用于溫敏型菌種發(fā)酵生產(chǎn)谷氨酸的方法，該方法中使用磷酸代替溫敏型菌種發(fā)酵生產(chǎn)谷氨酸工藝中的磷酸鹽制備發(fā)酵培養(yǎng)基，發(fā)酵生產(chǎn)谷氨酸，一方面可以克服磷酸鹽完全溶于水需要的時間較長，容易造成發(fā)酵培養(yǎng)基的混合不均勻，縮短發(fā)酵培養(yǎng)基的配制時間，提高生產(chǎn)率；另一方面可以提高比產(chǎn)酸速率，縮短發(fā)酵周期，促進(jìn)菌體產(chǎn)酸，從而降低生產(chǎn)成本，提高產(chǎn)酸率及糖酸轉(zhuǎn)化率。本發(fā)明的目的是通過以下技術(shù)方案實現(xiàn)的：一種磷酸用于溫敏型菌種發(fā)酵生產(chǎn)谷氨酸的方法，在發(fā)酵生產(chǎn)過程中，使用磷酸代替溫敏型菌種發(fā)酵生產(chǎn)谷氨酸工藝中的磷酸鹽制備發(fā)酵培養(yǎng)基，發(fā)酵生產(chǎn)谷氨酸。而且，磷酸代替溫敏型菌種發(fā)酵生產(chǎn)谷氨酸工藝中的磷酸鹽制備發(fā)酵培養(yǎng)基時，需利用堿性物質(zhì)對發(fā)酵培養(yǎng)基進(jìn)行中和，使發(fā)酵培養(yǎng)基的pH符合菌體生長要求。而且，以等摩爾當(dāng)量的磷酸替代替發(fā)酵培養(yǎng)基中的磷酸鹽，用堿性物質(zhì)對發(fā)酵培養(yǎng)基進(jìn)行中和，使發(fā)酵培養(yǎng)基的pH符合菌體生長要求。而且，所述發(fā)酵培養(yǎng)基為：水解糖50～65g/L，玉米漿15～30g/L，糖蜜10～18g/L，豆粕水解液1.0～2.1g/L，H3PO40.8～4g/L，MgSO4·7H2O1.0～2.1g/L，MnSO4·7H2O0.064～0.01g/L，F(xiàn)eSO4·7H2O0.055～0.085g/L，KCl2～7g/L，蘇氨酸0.08～0.15g/L，消泡劑0.031～0.035g/L，用氫氧化鈉中和磷酸使發(fā)酵培養(yǎng)基的pH為6.5～7.2。而且，所述發(fā)酵培養(yǎng)基為：水解糖50～65g/L，玉米漿15～30g/L，糖蜜10～18g/L，豆粕水解液1.0～2.1g/L，H3PO40.8～4g/L，MgSO4·7H2O1.0～2.1g/L，MnSO4·7H2O0.064～0.01g/L，F(xiàn)eSO4·7H2O0.055～0.085g/L，KCl2～7g/L，蘇氨酸0.08～0.15g/L，消泡劑0.031～0.035g/L，用碳酸鈉中和磷酸使發(fā)酵培養(yǎng)基的pH為6.5～7.2。而且，所述發(fā)酵培養(yǎng)基為：水解糖50～65g/L，玉米漿15～30g/L，糖蜜10～18g/L，豆粕水解液1.0～2.1g/L，H3PO40.8～4g/L，MgSO4·7H2O1.0～2.1g/L，MnSO4·7H2O0.064～0.01g/L，F(xiàn)eSO4·7H2O0.055～0.085g/L，KCl2～7g/L，蘇氨酸0.08～0.15g/L，消泡劑0.031～0.035g/L，用氨水中和磷酸使發(fā)酵培養(yǎng)基的pH為6.5～7.2。而且，所述發(fā)酵培養(yǎng)基為：水解糖50～65g/L，玉米漿15～30g/L，糖蜜10～18g/L，豆粕水解液1.0～2.1g/L，H3PO40.8～4g/L，MgSO4·7H2O1.0～2.1g/L，MnSO4·7H2O0.064～0.01g/L，F(xiàn)eSO4·7H2O0.055～0.085g/L，KCl2～7g/L，蘇氨酸0.08～0.15g/L，消泡劑0.031～0.035g/L，用氫氧化鉀中和磷酸使發(fā)酵培養(yǎng)基的pH為6.5～7.2。而且，步驟如下：⑴配料：按照配比，將各種原料稱量好，溶解完全配制成發(fā)酵培養(yǎng)基；⑵滅菌：將配好的發(fā)酵培養(yǎng)基滅菌，溫度108～110℃，維持時間8～10分鐘，滅菌好的發(fā)酵培養(yǎng)基在發(fā)酵罐內(nèi)降溫至33℃等待接種；⑶將OD值為0.3～0.8的溫敏型谷氨酸生產(chǎn)菌種的種子培養(yǎng)液按發(fā)酵培養(yǎng)基的體積的10～15％比例接入發(fā)酵培養(yǎng)基中；發(fā)酵溫度控制在32～40℃；補充氮源至pH為6.8～7.2，控制通氣量為2～10L/min；發(fā)酵周期為24-28h，即得谷氨酸。而且，所述步驟⑶中溫敏型谷氨酸生產(chǎn)菌種的種子培養(yǎng)液的制備步驟如下：⑴菌種活化：取斜面保藏溫敏型谷氨酸生產(chǎn)菌種1～2環(huán)接種于裝有種子培養(yǎng)基的斜面試管中，31～33℃恒溫靜置培養(yǎng)24h，得活化菌種；⑵種子培養(yǎng)：將己滅菌的裝有100～200mL種子培養(yǎng)基的三角瓶內(nèi)接入活化菌種，31～33℃振蕩培養(yǎng)12～18h，得OD值為0.3～0.8的菌株活化液,置于4℃冰箱冷藏備用，即得溫敏型谷氨酸生產(chǎn)菌種的種子培養(yǎng)液。本發(fā)明取得的優(yōu)點和積極效果是：1、本發(fā)明方法在發(fā)酵過程中，用磷酸替代發(fā)酵培養(yǎng)基的磷酸鹽，之后再用堿性物質(zhì)中和發(fā)酵培養(yǎng)的pH值，一方面可以克服磷酸鹽完全溶于水需要的時間較長，容易造成發(fā)酵培養(yǎng)基的混合不均勻，縮短發(fā)酵培養(yǎng)基的配制時間，提高生產(chǎn)效率；另一方面可以提高比產(chǎn)酸速率，縮短發(fā)酵周期，促進(jìn)菌體產(chǎn)酸，從而降低生產(chǎn)成本，提高產(chǎn)酸率及糖酸轉(zhuǎn)化率，最終產(chǎn)酸水平得到了顯著提升，可提高15％左右，提高了谷氨酸得率和糖酸轉(zhuǎn)化率，具有廣闊的工業(yè)應(yīng)用前景。2、本發(fā)明方法在與現(xiàn)有生產(chǎn)工藝相比不增加任何額外設(shè)備和人力投入的情況下，大幅提高了L-谷氨酸的產(chǎn)酸率(190g/L以上)和轉(zhuǎn)化率(68％以上)，整個工藝過程操作簡便，生產(chǎn)成本較低，十分適合于工業(yè)化生產(chǎn)。3、本發(fā)明方法通過工藝革新，適當(dāng)調(diào)節(jié)發(fā)酵液的原料配比，用等摩爾磷酸代替溫敏型菌種發(fā)酵工藝中的磷酸鹽制備發(fā)酵培養(yǎng)基，為培養(yǎng)基提供磷源，并利用分別利用氫氧化鈉、碳酸鈉、氫氧化鉀、氨水中和磷酸鉀對發(fā)酵培養(yǎng)基進(jìn)行中和調(diào)節(jié)培養(yǎng)基的pH值，以達(dá)到提高產(chǎn)酸、降低成本的目的。4、本發(fā)明方法中因等質(zhì)量的磷酸比磷酸鹽有效成分含量高，等摩爾的有效成分成本低，為了降低生產(chǎn)成本，用磷酸代替磷酸鹽。等摩爾當(dāng)量的磷酸替代磷酸鹽，由于磷酸是強酸，培養(yǎng)基配制完成后pH為2.4—2.8，不適合谷氨酸發(fā)酵的需要，同時在此pH條件下滅菌對培養(yǎng)基的營養(yǎng)成分破壞也較大，故必須在配料時采用適當(dāng)?shù)膲A性物質(zhì)予以中和，以保證生產(chǎn)需要。具體實施方式下面結(jié)合實施例，對本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)的描述，但本發(fā)明的實施方式不限于此，不能以下述實施例來限定本發(fā)明的保護范圍。下述實施實例中所使用的實驗方法如無特殊說明，均為常規(guī)方法；所使用的材料、試劑等，如無特殊說明，均可從商業(yè)途徑得到。本發(fā)明磷酸用于溫敏型菌種發(fā)酵生產(chǎn)谷氨酸的方法，是用磷酸代替溫敏型菌種發(fā)酵工藝中的磷酸鹽制備發(fā)酵培養(yǎng)基，發(fā)酵生產(chǎn)谷氨酸。采用本發(fā)明所述的磷酸代替磷酸鹽制備的培養(yǎng)基發(fā)酵生產(chǎn)谷氨酸的操作方法和工藝控制條件，若不特加說明，均與用磷酸鹽的發(fā)酵培養(yǎng)基發(fā)酵生產(chǎn)谷氨酸的公知操縱方法和工藝控制條件一致。本發(fā)明中所使用的微生物菌株為溫敏型谷氨酸生產(chǎn)菌。對照實施例：一種磷酸鹽用于溫敏型菌種發(fā)酵生產(chǎn)谷氨酸的方法，其發(fā)酵培養(yǎng)的工藝步驟及條件如下：(1)配料：按照配比，將各種原料稱良好，溶解完全配成6L發(fā)酵培養(yǎng)基；發(fā)酵培養(yǎng)基的原料配比如下：水解糖55～60g/L，玉米漿20～25g/L，糖蜜15～18g/L，豆粕水解液1.0～2.1g/L，NaH2PO40.98～3.7g/L，MgSO4·7H2O1～2.1g/L，MnSO4·7H2O0.008～0.01g/L，F(xiàn)eSO4·7H2O0.055～0.085g/L，KCl5～7g/L，蘇氨酸0.08～0.15g/L，消泡劑0.031～0.035g/L，用氫氧化鈉中和調(diào)節(jié)使發(fā)酵培養(yǎng)基的pH為6.8～7.0。(2)滅菌：將配好的發(fā)酵培養(yǎng)基滅菌，溫度108～110℃，維持時間8～10分鐘，滅菌好的培養(yǎng)基在發(fā)酵內(nèi)降溫至33℃等待接種；(3)將OD值為0.3～0.8的溫敏型谷氨酸生產(chǎn)菌種的種子培養(yǎng)液按種子培養(yǎng)液：發(fā)酵培養(yǎng)基的體積比為10～15％比例接入發(fā)酵培養(yǎng)基中；發(fā)酵溫度控制在32～40℃；補充氮源至pH為6.8～7.0，控制通氣量為2～10L/min；發(fā)酵周期為24～28h，即得谷氨酸。發(fā)酵結(jié)束后測定發(fā)酵液中的谷氨酸含量，并計算產(chǎn)酸率及轉(zhuǎn)化率。其中，所述溫敏型谷氨酸生產(chǎn)菌種的種子培養(yǎng)液的制備步驟如下：(1)菌種活化：取斜面保藏菌種1～2環(huán)接種于裝有種子培養(yǎng)基的斜面試管中，31～33℃恒溫靜置培養(yǎng)24h；(2)種子培養(yǎng)：將己滅菌的裝有100～200mL種子培養(yǎng)基的三角瓶內(nèi)接入活化菌種，31～33℃振蕩培養(yǎng)12～18h，得OD值為0.3～0.8的菌株活化液,，置于4℃冰箱冷藏備用。實施例1：一種磷酸用于溫敏型菌種發(fā)酵生產(chǎn)谷氨酸的方法，其發(fā)酵培養(yǎng)的工藝步驟及條件如下：(1)配料：按照配比，將各種原料稱良好，溶解完全配成6L發(fā)酵培養(yǎng)基；發(fā)酵培養(yǎng)基的原料配比如下：水解糖55～60g/L，玉米漿20～25g/L，糖蜜15～18g/L，豆粕水解液1.0～2.1g/L，H3PO40.8～3g/L，MgSO4·7H2O1～2.1g/L，MnSO4·7H2O0.008～0.01g/L，F(xiàn)eSO4·7H2O0.055～0.085g/L，KCl5～7g/L，蘇氨酸0.08～0.15g/L，消泡劑0.031～0.035g/L，用氫氧化鈉中和調(diào)節(jié)使發(fā)酵培養(yǎng)基的pH為6.8～7.0。(2)滅菌：將配好的發(fā)酵培養(yǎng)基滅菌、溫度108～110℃，維持時間8～10分鐘，滅菌好的培養(yǎng)基在發(fā)酵內(nèi)降溫至33℃等待接種；(3)將OD值為0.3～0.8的溫敏型谷氨酸生產(chǎn)菌種的種子培養(yǎng)液按種子培養(yǎng)液：發(fā)酵培養(yǎng)基的體積比為10～15％比例接入發(fā)酵培養(yǎng)基中；發(fā)酵溫度控制在32～40℃；補充氮源至pH為6.8～7.0，控制通氣量為2～10L/min；發(fā)酵周期為24～28h，即得谷氨酸。發(fā)酵結(jié)束后測定發(fā)酵液中的谷氨酸含量，并計算產(chǎn)酸率及轉(zhuǎn)化率。其中，所述溫敏型谷氨酸生產(chǎn)菌種的種子培養(yǎng)液的制備步驟如下：(1)菌種活化：取斜面保藏菌種1～2環(huán)接種于裝有種子培養(yǎng)基的斜面試管中，31～33℃恒溫靜置培養(yǎng)24h，得活化菌種；(2)種子培養(yǎng)：將己滅菌的裝有100～200mL種子培養(yǎng)基的三角瓶內(nèi)接入活化菌種，31～33℃振蕩培養(yǎng)12～18h，得OD值為0.3～0.8的菌株活化液,，置于4℃冰箱冷藏備用，即得溫敏型谷氨酸生產(chǎn)菌種的種子培養(yǎng)液。實施例2：一種磷酸用于溫敏型菌種發(fā)酵生產(chǎn)谷氨酸的方法，其發(fā)酵培養(yǎng)的工藝步驟及條件如下：(1)配料：按照配比，將各種原料稱良好，溶解完全配成6L發(fā)酵培養(yǎng)基；發(fā)酵培養(yǎng)基的原料配比如下：水解糖55～60g/L，玉米漿20～25g/L，糖蜜15～18g/L，豆粕水解液1.0～2.1g/L，H3PO40.8～3g/L，MgSO4·7H2O1～2.1g/L，MnSO4·7H2O0.008～0.01g/L，F(xiàn)eSO4·7H2O0.055～0.085g/L，KCl5～7g/L，蘇氨酸0.08～0.15g/L，消泡劑0.031～0.035g/L，用碳酸鈉中和調(diào)節(jié)使發(fā)酵培養(yǎng)基的pH為6.8～7.0。(2)滅菌：將配好的發(fā)酵培養(yǎng)基滅菌、溫度108～110℃，維持時間8～10分鐘，滅菌好的培養(yǎng)基在發(fā)酵內(nèi)降溫至33℃等待接種；(3)將OD值為0.3～0.8的溫敏型谷氨酸生產(chǎn)菌種的種子培養(yǎng)液按種子培養(yǎng)液：發(fā)酵培養(yǎng)基的體積比為10～15％比例接入發(fā)酵培養(yǎng)基中；發(fā)酵溫度控制在32～40℃；補充氮源至pH為6.8～7.0，控制通氣量為2～10L/min；發(fā)酵周期為24～28h，即得谷氨酸。發(fā)酵結(jié)束后測定發(fā)酵液中的谷氨酸含量，并計算產(chǎn)酸率及轉(zhuǎn)化率。其中，所述溫敏型谷氨酸生產(chǎn)菌種的種子培養(yǎng)液的制備步驟如下：(1)菌種活化：取斜面保藏菌種1～2環(huán)接種于裝有種子培養(yǎng)基的斜面試管中，31～33℃恒溫靜置培養(yǎng)24h，得活化菌種；(2)種子培養(yǎng)：將己滅菌的裝有100～200mL種子培養(yǎng)基的三角瓶內(nèi)接入活化菌種，31～33℃振蕩培養(yǎng)12～18h，得OD值為0.3～0.8的菌株活化液,，置于4℃冰箱冷藏備用，即得溫敏型谷氨酸生產(chǎn)菌種的種子培養(yǎng)液。實施例3：一種磷酸用于溫敏型菌種發(fā)酵生產(chǎn)谷氨酸的方法，其發(fā)酵培養(yǎng)的工藝步驟及條件如下：(1)配料：按照配比，將各種原料稱良好，溶解完全配成6L發(fā)酵培養(yǎng)基；發(fā)酵培養(yǎng)基的原料配比如下：水解糖50～65g/L，玉米漿15～30g/L，糖蜜10～18g/L，豆粕水解液1.0～2.1g/L，H3PO40.8～4g/L，MgSO4·7H2O1.0～2.1g/L，MnSO4·7H2O0.064～0.01g/L，F(xiàn)eSO4·7H2O0.055～0.085g/L，KCl2～7g/L，蘇氨酸0.08～0.15g/L，消泡劑0.031～0.035g/L，用氨水中和磷酸使發(fā)酵培養(yǎng)基的pH為6.5～7.2。(2)滅菌：將配好的發(fā)酵培養(yǎng)基滅菌、溫度108～110℃，維持時間8～10分鐘，滅菌好的培養(yǎng)基在發(fā)酵內(nèi)降溫至33℃等待接種；(3)將OD值為0.3～0.8的溫敏型谷氨酸生產(chǎn)菌種的種子培養(yǎng)液按種子培養(yǎng)液：發(fā)酵培養(yǎng)基的體積比為10～15％比例接入發(fā)酵培養(yǎng)基中；發(fā)酵溫度控制在32～40℃；補充氮源至pH為6.8～7.0，控制通氣量為2～10L/min；發(fā)酵周期為24～28h，即得谷氨酸。發(fā)酵結(jié)束后測定發(fā)酵液中的谷氨酸含量，并計算產(chǎn)酸率及轉(zhuǎn)化率。其中，所述溫敏型谷氨酸生產(chǎn)菌種的種子培養(yǎng)液的制備方法的步驟如下：(1)菌種活化：取斜面保藏菌種1～2環(huán)接種于裝有種子培養(yǎng)基的斜面試管中，31～33℃恒溫靜置培養(yǎng)24h，得活化菌種；(2)種子培養(yǎng)：將己滅菌的裝有100～200mL種子培養(yǎng)基的三角瓶內(nèi)接入活化菌種，31～33℃振蕩培養(yǎng)12～18h，得OD值為0.3～0.8的菌株活化液,，置于4℃冰箱冷藏備用，即得溫敏型谷氨酸生產(chǎn)菌種的種子培養(yǎng)液。實施例4：一種磷酸用于溫敏型菌種發(fā)酵生產(chǎn)谷氨酸的方法，其發(fā)酵培養(yǎng)的工藝步驟及條件如下：(1)配料：按照配比，將各種原料稱良好，溶解完全配成6L發(fā)酵培養(yǎng)基；發(fā)酵培養(yǎng)基的原料配比如下：水解糖50～65g/L，玉米漿15～30g/L，糖蜜10～18g/L，豆粕水解液1.0～2.1g/L，H3PO40.8～4g/L，MgSO4·7H2O1.0～2.1g/L，MnSO4·7H2O0.064～0.01g/L，F(xiàn)eSO4·7H2O0.055～0.085g/L，KCl2～7g/L，蘇氨酸0.08～0.15g/L，消泡劑0.031～0.035g/L，用氫氧化鉀中和磷酸使發(fā)酵培養(yǎng)基的pH為6.5～7.2。(2)滅菌：將配好的發(fā)酵培養(yǎng)基滅菌、溫度108～110℃，維持時間8～10分鐘，滅菌好的培養(yǎng)基在發(fā)酵內(nèi)降溫至33℃等待接種；(3)將OD值為0.3～0.8的溫敏型谷氨酸生產(chǎn)菌種的種子培養(yǎng)液按種子培養(yǎng)液：發(fā)酵培養(yǎng)基的體積比為10～15％比例接入發(fā)酵培養(yǎng)基中；發(fā)酵溫度控制在32～40℃；補充氮源至pH為6.8～7.0，控制通氣量為2～10L/min；發(fā)酵周期為24～28h，即得谷氨酸。發(fā)酵結(jié)束后測定發(fā)酵液中的谷氨酸含量，并計算產(chǎn)酸率及轉(zhuǎn)化率。其中，所述溫敏型谷氨酸生產(chǎn)菌種的種子培養(yǎng)液的制備步驟如下：(1)菌種活化：取斜面保藏菌種1～2環(huán)接種于裝有種子培養(yǎng)基的斜面試管中，31～33℃恒溫靜置培養(yǎng)24h，得活化菌種；(2)種子培養(yǎng)：將己滅菌的裝有100～200mL種子培養(yǎng)基的三角瓶內(nèi)接入活化菌種，31～33℃振蕩培養(yǎng)12～18h，得OD值為0.3～0.8的菌株活化液,，置于4℃冰箱冷藏備用，即得溫敏型谷氨酸生產(chǎn)菌種的種子培養(yǎng)液。本發(fā)明實施例實驗結(jié)果對比如下表所示：表1實施例實驗結(jié)果表指標(biāo)對照組實施例1實施例2實施例3實施例4谷氨酸(％)18.019.4519.5319.0019.66轉(zhuǎn)化率(％)6568.5668.3268.7468.10表2產(chǎn)品質(zhì)量對比情況表序號指標(biāo)名稱行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)本發(fā)明方法1含量％(谷氨酸干基計)95982旋光度[a]D20℃/HCl溶液31.330.83透光率(％)30384SO42-(％)0.350.2注：以實施例1為例表3谷氨酸生產(chǎn)工藝指標(biāo)對比表序號指標(biāo)名稱公知技術(shù)本發(fā)明方法1發(fā)酵溫度(℃)32-38.532-402發(fā)酵周期(h)26-3024-283產(chǎn)酸(g/L)1801904糖酸轉(zhuǎn)化率(％)6568從各種替代方案的實驗結(jié)果可以看出：替代組的發(fā)酵水平與對照組相比發(fā)酵產(chǎn)酸率與糖酸轉(zhuǎn)化率均有所提高，培養(yǎng)基配方中的無機鹽可以使用含有同樣元素、價格便宜的其他無機鹽，根據(jù)等摩爾當(dāng)量的關(guān)系換算后配制培養(yǎng)基，以降低原材料成本。采用實施例2，可在目前的磷酸氫二鈉溶液儲罐中，將碳酸鈉和磷酸稀釋適當(dāng)倍數(shù)后中和，由于中和反應(yīng)會產(chǎn)生大量的二氧化碳，有可能會跑料，需要加強操作管理。采用實施例3，可將磷酸稀釋適當(dāng)倍數(shù)后置于目前的磷酸氫二鈉溶液儲罐中，將液氨管線連接到磷酸氫二鈉溶液儲罐或配料罐，用液氨中和使每批培養(yǎng)基配后pH達(dá)到5.5-6.2(不能直接調(diào)到7.0，否則滅菌時會使氨溢出，造成浪費)，接種前再將pH調(diào)節(jié)到需要值。此法簡便易行，可操作性強?？傊?，從生產(chǎn)工藝角度講，上述4種方案均可行；從降低原材料成本角度講，具體選擇哪一種方案，要根據(jù)相應(yīng)原料價格來決定。如若90％含量的氫氧化鉀價格低于6000元/噸，實施例4也是可行的。每一種原材料的價格，是隨著市場變化的，因此，具體采用何種堿性物質(zhì)來中和磷酸用于發(fā)酵生產(chǎn)谷氨酸，可以根據(jù)市場行情及實際情況進(jìn)行適當(dāng)?shù)恼{(diào)整。當(dāng)前第1頁1 2 3