本發(fā)明涉及了一種槲皮素制備方法，尤其是涉及了一種高純度槲皮素制備方法。
背景技術：
：槲皮素(quercetin)，又名櫟精，槲皮黃素，meletin，sophretin，分子式c15h10o7，分子量302.23。二水合物為黃色針狀結晶，在95～97℃成為無水物，熔點314℃(分解)。能溶于冷乙醇(1∶290)，易溶于熱乙醇(1∶23)，可溶于甲醇、乙酸乙酯、冰醋酸、吡啶、丙酮等，幾乎不溶于水、苯、乙醚、氯仿、石油醚等。溶于冰醋酸，堿性水溶液呈黃色，乙醇溶液味很苦。槲皮素廣泛存在于自然界中，其英文名“quercetin”最早出現(xiàn)于1857年，其來源于“quercetum”，意為櫟樹林，是一種天然的生長素極性運輸抑制劑。結構式如下：槲皮素具有較好的祛痰、止咳作用，并有一定的平喘作用，此外還有降低血壓、減少毛細血管脆性增強其抵抗力、降血脂、擴張冠狀動脈、增加冠脈血流量的作用。槲皮素能顯著抑制致癌劑、離體惡性細胞、艾氏腹水癌細胞dna、rna和蛋白質合成與生長。對各種因素誘導的血小板聚集均有明顯抑制作用，可抑制5-羥色胺的釋放作用。槲皮素導入親水性基團能增加其水溶性，更有利于吸收，從而增強藥理作用，如槲皮素氧乙酸賴氨酸鹽的水溶性增加，臨床試驗證明，其可用于治療出血性疾病、循環(huán)障礙、動脈粥樣硬化等。槲皮素可以阻斷雄激素對激素依賴型的人類前列腺癌細胞的作用，雄激素的作用被阻斷后，前列腺癌細胞的生長會延緩或停止。洋蔥、蘋果、紅酒、綠茶中含有大量的槲皮素，前列腺癌患者可以多食用。在美國，槲皮素治療前列腺癌已是非處方藥，但在中國，還沒批準該藥物作為前列腺治療藥物。槲皮素用于治療慢性支氣管炎，對冠心病及高血壓患者也有輔助治療作用。槲皮素也可用于其它行業(yè)。作為抗氧化劑，主要用于油脂、飲料、冷飲、肉類加工制品；基于醫(yī)藥保健品對產品質量的高要求，因此開發(fā)一種制備高純度槲皮素的方法具有很強的現(xiàn)實意義。由于槲皮素本身的性質特點，使得制備高純度槲皮素具有較高的難度，目前市售的槲皮素一般純度在95％左右，尚不能很好滿足醫(yī)藥保健品的要求。技術實現(xiàn)要素：為了解決
背景技術：
中存在的問題，本發(fā)明提出了一種高純度槲皮素制備方法。為達到上述目的，本發(fā)明的技術方案是采用柱色譜方法進行提純制備，色譜柱中所裝填料為聚合物色譜填料。聚合物色譜填料是指以苯乙烯、甲基丙烯酸酯及苯乙烯和甲基丙烯酸酯共聚物為基質，通過對粒徑大小、形貌、粒徑分布、比表面積、孔徑結構及表面功能基團等的精確控制，粒徑小于100um，孔徑低于的色譜填料。優(yōu)選的，具體實施采用色譜填料unipstm10-300。具體方法步驟是：1)配制樣品溶液：取槲皮素粗品，加入一定量的熱水并充分攪拌，再加入一定量的堿性溶劑并充分攪拌，溶解后過濾備用；加入熱水和堿性溶劑能夠使得槲皮素粗品快速溶解。2)色譜分離過程：將色譜填料裝填在色譜柱后，用去離子水沖洗，平衡后將步驟1)獲得的樣品用泵注射入色譜柱內上樣，上樣后用去離子水洗脫，收集各個洗脫液并進行純度檢測，將純度大于99％的槲皮素洗脫液合并，用酸沉淀槲皮素，過濾后清洗，最后干燥得到高純度槲皮素產品。所述步驟1)中所槲皮素濃度為10-30mg/ml，優(yōu)選上樣液濃度為15mg/ml。所述步驟1)中加入的熱水溫度是70℃，相對于槲皮素粗品的加入質量比是60:1。所述步驟1)中的堿性溶劑為氫氧化鈉或者氫氧化鉀溶液，所配制溶液ph為8-10，堿性溶劑相對于熱水的體積比為1:8。所述步驟2)中的色譜填料為聚合物色譜填料，骨架為聚苯乙烯-二乙烯基苯，親水修飾的聚苯乙烯-二乙烯基苯和聚丙烯酸酯材質，填料粒徑為30-100微米。具體實施可采用如蘇州納微科技有限公司生產的unipsn，unips系列色譜填料。在步驟2)中所用的酸為鹽酸、甲酸、三氟乙酸等可揮發(fā)性酸。具體實施可采用1:1的鹽酸，加入量以調節(jié)ph至2-3為準本發(fā)明獨特地采用柱色譜制備高純度槲皮素，包括將色譜填料裝入色譜柱成為固定相，使用去離子水做流動相，把含有待分離或分析含槲皮素粗品的溶液流過該色譜柱，然后再把吸附在固定相上的待分離或分析的槲皮素洗脫下來，由此能夠獲得高純度的槲皮素。采用本發(fā)明技術方案的有益效果是：本發(fā)明使用柱色譜方法時可以使用去離子水做流動相的對樣品進行分離，具有極好的選擇性，一次操作就可得到99％以上純度的槲皮素。本發(fā)明所使用的色譜填料具有機械強度高，獨特的表面等優(yōu)點，且其流動相為去離子水，與常規(guī)方法所用有機溶劑相比更加經濟，環(huán)保，且本方法操作簡便、重復性好，適用高純度槲皮素的工業(yè)化制備，具有較高的經濟效益和應用價值。本發(fā)明與現(xiàn)有工藝相比，具有操作簡單，效率高，重現(xiàn)性好，容易工業(yè)化生產，環(huán)境污染小等優(yōu)點。具體實施方式下面通過實施例更詳細地說明本發(fā)明。但是本發(fā)明的范圍并不限于這些實施例。本發(fā)明的實施例如下：本發(fā)明實施例中針對槲皮素純度均采用高效液相色譜法檢測。實施例一1)配制樣品溶液：稱取槲皮素粗品5.0g，加入70℃熱水250ml并充分攪拌，同時滴加1mnaoh溶液至溶液ph為8，溶解后趁熱過濾備用。2)色譜分離過程：將色譜填料unipstm10-300裝填在36mm*460mm色譜柱中，用去離子水沖洗1l，之后將步驟1)所配制的樣品用泵注射入色譜柱內，流速10ml/min，上樣結束后繼續(xù)用去離子水洗脫1l，將洗脫液按50ml每管收集，并檢測其中的槲皮素純度，結果如下表：然后將純度大于99％的槲皮素洗脫液合并，用1:1鹽酸沉淀槲皮素，至ph為2-3，之后靜置過濾，用去離子水清洗，最后在75℃烘箱干燥12小時得到產品2.7g。本實施例產品進行檢測純度，純度是99.692％。實施例二1)配制樣品溶液：稱取槲皮素粗品5.0g，加入70℃熱水250ml并充分攪拌，同時滴加1mnaoh溶液至溶液ph為10，溶解后趁熱過濾備用。2)色譜分離過程：將色譜填料unipstm10-300裝填在36mm*460mm色譜柱中，用去離子水沖洗1l，之后將步驟1)所配制的樣品用泵注射入色譜柱內，流速10ml/min，上樣結束后繼續(xù)用去離子水洗脫1l，將洗脫液按50ml每管收集，并檢測其中的槲皮素純度，結果如下表：然后經檢測后將純度大于99％的槲皮素洗脫液合并，用1:1鹽酸沉淀槲皮素，至ph為2-3，之后靜置過濾，用去離子水清洗，最后在75℃烘箱干燥12小時即可得到產品2.8g。本實施例產品進行檢測純度，純度是99.535％。實施例三1)配制樣品溶液：稱取槲皮素粗品5.0g，加入70℃熱水250ml并充分攪拌，同時滴加1mnaoh溶液至溶液ph為9，溶解后趁熱過濾備用。2)色譜分離過程：將色譜填料unipstm10-300裝填在36mm*460mm色譜柱中，用去離子水沖洗1l，之后將1)所配制的樣品用泵注射入色譜柱內，流速10ml/min，上樣結束后繼續(xù)用去離子水洗脫1l，將洗脫液按50ml每管收集，并檢測其中的槲皮素純度，結果如下表：編號2468101214161820純度(％)97.67298.80299.28599.42999.70499.87899.94599.95199.39094.782然后經檢測后將純度大于99％的槲皮素洗脫液合并，用1:1鹽酸沉淀槲皮素，至ph為2-3，之后靜置過濾，用去離子水清洗，最后在75℃烘箱干燥12小時即可得到產品3.1g。本實施例產品進行檢測純度，純度是99.780％。實施例四1)配制樣品溶液：稱取槲皮素粗品5.0g，加入70℃熱水250ml并充分攪拌，同時滴加1mnaoh溶液至溶液ph為9，溶解后趁熱過濾備用。2)色譜分離過程：將色譜填料unipstm10-300裝填在36mm*460mm色譜柱中，用去離子水沖洗1l，之后將1)所配制的樣品用泵注射入色譜柱內，流速10ml/min，上樣結束后繼續(xù)用去離子水洗脫1l，將洗脫液按50ml每管收集，并檢測其中的槲皮素純度，結果如下表：然后經檢測后將純度大于99％的槲皮素洗脫液合并，用1:1鹽酸沉淀槲皮素，至ph為2-3，之后靜置過濾，用去離子水清洗，最后在75℃烘箱干燥12小時即可得到產品2.5g。本實施例產品進行檢測純度，純度是99.532％。實施例五1)配制樣品溶液：稱取槲皮素粗品110.0g，加入70℃熱水6000ml并充分攪拌，同時滴加1mnaoh溶液至溶液ph為9，溶解后趁熱過濾備用。2)色譜分離過程：將色譜填料unipstm10-300裝填在16cm*60cm色譜柱中，用去離子水沖洗24l，之后將1)所配制的樣品用泵注射入色譜柱內，流速200ml/min，上樣結束后繼續(xù)用去離子水洗脫24l，將洗脫液按1000ml每份收集，并檢測其中的槲皮素純度，結果如下：然后經檢測后將純度大于99％的槲皮素洗脫液合并，用1:1鹽酸沉淀槲皮素，至ph為2-3，之后靜置過濾，用去離子水清洗，最后在75℃烘箱干燥12小時即可得到產品75g。本實施例產品進行檢測純度，純度是99.692％。當前第1頁12