一種用于質(zhì)譜檢測的蛋白封閉劑及其應(yīng)用的制作方法

文檔序號：11766650閱讀：370來源：國知局

導(dǎo)航： X技術(shù)> 最新專利>有機化合物處理,合成應(yīng)用技術(shù)

本發(fā)明涉及質(zhì)譜檢測領(lǐng)域，特別涉及一種用于質(zhì)譜檢測的蛋白封閉劑及其應(yīng)用。

背景技術(shù)：

蛋白質(zhì)譜技術(shù)就是一種將質(zhì)譜儀用于研究蛋白質(zhì)的技術(shù)。它的基本原理是蛋白質(zhì)經(jīng)過蛋白酶的酶切消化后成肽段混合物，在質(zhì)譜儀中肽段混合物電離形成帶電離子，質(zhì)譜分析器的電場、磁場將具有特定質(zhì)量與電荷比值(即質(zhì)荷比，m/z)的肽段離子分離開來，經(jīng)過檢測器收集分離的離子，確定每個離子的m/z值。經(jīng)過質(zhì)量分析器可分析出每個肽段的m/z，得到蛋白質(zhì)所有肽段的m/z圖譜，即蛋白質(zhì)的一級質(zhì)譜峰圖。離子選擇裝置自動選取強度較大肽段離子進行二級質(zhì)譜分析，輸出選取肽段的二級質(zhì)譜峰圖，通過和理論上蛋白質(zhì)經(jīng)過胰蛋白酶消化后產(chǎn)生的一級質(zhì)譜峰圖和二級質(zhì)譜峰圖進行比對而鑒定蛋白質(zhì)。

然而，由于質(zhì)譜操作中的容器和移液器吸頭等對蛋白質(zhì)具有非特異吸附作用，會把質(zhì)譜的目的蛋白吸附在容器和移液器吸頭的表面，從生物體中提取微量蛋白樣本，往往會有很大的損失。為了盡可能減少蛋白提取的損失，常將容器，吸管，移液器吸頭等進行封閉的處理。目前常用的封閉劑為天然易得的蛋白質(zhì)，這類蛋白能很好的封閉掉非特異吸附位點，從而大大減少目的蛋白的損失。但是，由于這類蛋白封閉劑始終添加在樣本提取純化過程中，假如提取的蛋白用于后續(xù)的質(zhì)譜檢測，那么會造成很大的污染。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

有鑒于此，本發(fā)明提供一種用于質(zhì)譜檢測的蛋白封閉劑，不僅能有效封閉質(zhì)譜檢測環(huán)境中的非特異性的蛋白質(zhì)結(jié)合位點，而且還能不被蛋白水解酶水解，大大避免了質(zhì)譜檢測的污染。

為了實現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明提供以下技術(shù)方案：

本發(fā)明提供了一種用于質(zhì)譜檢測的封閉蛋白，所述封閉蛋白的氨基酸如seqid.no1所示，所述seqid.no1中x為自然界存在的氨基酸，且不屬于精氨酸和賴氨酸。

作為優(yōu)選，所述seqid.no1中x為組氨酸。

本發(fā)明所提供的一種用于質(zhì)譜檢測的封閉蛋白在封閉質(zhì)譜檢測環(huán)境中的非特異性的蛋白質(zhì)結(jié)合位點的應(yīng)用。

作為優(yōu)選，所述的封閉蛋白不被蛋白水解酶水解。

作為優(yōu)選，所述的蛋白水解酶為胰酶。

本發(fā)明還提供了一種用于質(zhì)譜檢測的封閉蛋白的制備方法，包括：

1)構(gòu)建原核表達(dá)載體，所述原核表達(dá)載體包括seqid.no1，得到重組封閉蛋白原核表達(dá)載體，使得重組封閉蛋白原核表達(dá)載體表達(dá)所述封閉蛋白；

2)將所述重組封閉蛋白原核表達(dá)載體整合到原核生物中，使得所述原核生物表達(dá)所述封閉蛋白，收集獲得所述的封閉蛋白。

作為優(yōu)選，所述原核表達(dá)載體含有組氨酸標(biāo)簽。

本發(fā)明還提供了一種用于質(zhì)譜檢測的蛋白封閉劑，包括用于質(zhì)譜檢測的封閉蛋白和緩沖液。

作為優(yōu)選，所述緩沖液為pbs溶液或nacl溶液。

本發(fā)明還提供了一種用于質(zhì)譜檢測的試劑盒，包括：用于質(zhì)譜檢測的蛋白封閉劑和質(zhì)譜檢測試劑。

有鑒于此，本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題在于提供了一種封閉蛋白，該封閉蛋白能把質(zhì)譜檢測環(huán)境中的非特異性的蛋白質(zhì)結(jié)合位點封閉起來，使得檢測的目的蛋白不會吸附在容器、吸管、移液器吸頭的表面，減少了目的蛋白的損失；而且，該封閉蛋白不含精氨酸和賴氨酸，質(zhì)譜檢測的蛋白水解酶不會水解該封閉蛋白，使得質(zhì)譜檢測時蛋白水解酶不會水解封閉蛋白，不會產(chǎn)生目的蛋白以外的多肽片段，顯著增大了質(zhì)譜檢測的準(zhǔn)確性。

附圖說明

為了更清楚地說明本發(fā)明實施例或現(xiàn)有技術(shù)中的技術(shù)方案，下面將對實施例或現(xiàn)有技術(shù)描述中所需要使用的附圖作簡單地介紹。

圖1示本發(fā)明的封閉蛋白與牛血清白蛋白酶解前后的sds-page圖譜；

其中，a為牛血清白蛋白溶液的蛋白條帶；b為胰酶水解后的牛血清白蛋白溶液的蛋白條帶；c為封閉蛋白溶液的蛋白條帶；d為胰酶水解后的封閉蛋白的蛋白條帶。

具體實施方式

本發(fā)明公開了本發(fā)明提供一種用于質(zhì)譜檢測的蛋白封閉劑，不僅能有效封閉質(zhì)譜檢測環(huán)境中的非特異性的蛋白質(zhì)結(jié)合位點，而且還能不被蛋白水解酶水解，大大避免了質(zhì)譜檢測的污染，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以借鑒本文內(nèi)容，適當(dāng)改進工藝參數(shù)實現(xiàn)。特別需要指出的是，所有類似的替換和改動對本領(lǐng)域技術(shù)人員來說是顯而易見的，它們都被視為包括在本發(fā)明。本發(fā)明的方法及應(yīng)用已經(jīng)通過較佳實施例進行了描述，相關(guān)人員明顯能在不脫離本發(fā)明內(nèi)容、精神和范圍內(nèi)對本文所述的方法和應(yīng)用進行改動或適當(dāng)變更與組合，來實現(xiàn)和應(yīng)用本發(fā)明技術(shù)。

本發(fā)明提供的一種用于質(zhì)譜檢測的蛋白封閉劑，其中所用原料及試劑均可由市場購得。

下面結(jié)合實施例，進一步闡述本發(fā)明：

實施例1

用于質(zhì)譜檢測的封閉蛋白的制備，具體方法如下：

根據(jù)seqidno.1的蛋白質(zhì)序列人工合成對應(yīng)的封閉蛋白dna序列。將封閉蛋白dna序列重組到商業(yè)的原核表達(dá)載體(pet系列載體)中，得到重組封閉蛋白原核表達(dá)載體(pet-bsamut-his)，pet-bsamut-his載體含有6個his蛋白標(biāo)簽用于純化，將pet-bsamut-his載體整合在大腸桿菌中大量表達(dá)封閉蛋白。表達(dá)出來bsamut-his蛋白后，用ni離子柱子純化。得到高純度的封閉蛋白(bsamut-his蛋白)，該封閉蛋白不含賴氨酸及精氨酸。

將純化后的封閉蛋白與pbs混合，獲得用于質(zhì)譜檢測的蛋白封閉劑。

實施例2

將實施例1獲得的用于質(zhì)譜檢測的封閉蛋白進行蛋白酶酶解驗證，具體操作如下：

試驗組為實施例1的用于質(zhì)譜檢測的封閉蛋白；對照組為牛血清白蛋白。用胰酶水解試驗組與對照組的蛋白，胰酶水解的條件按常規(guī)條件進行。水解前后分別進行sds-page驗證。

從圖1可知，a為牛血清白蛋白溶液的蛋白條帶；b為胰酶水解后的牛血清白蛋白溶液的蛋白條帶；c為封閉蛋白溶液的蛋白條帶；d為胰酶水解后的封閉蛋白的蛋白條帶，c和d的蛋白條帶說明封閉蛋白無法被胰酶水解，因此，實施例的封閉蛋白在對質(zhì)譜環(huán)境進行封閉后，蛋白水解酶不會作用封閉蛋白，不會對質(zhì)譜數(shù)據(jù)造成污染。

以上所述僅是本發(fā)明的優(yōu)選實施方式，應(yīng)當(dāng)指出，對于本技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來說，在不脫離本發(fā)明原理的前提下，還可以做出若干改進和潤飾，這些改進和潤飾也應(yīng)視為本發(fā)明的保護范圍。

sequencelisting

<110>廣州輝駿生物科技有限公司

<120>一種用于質(zhì)譜檢測的蛋白封閉劑及其應(yīng)用

<130>mp1708653

<160>1

<170>patentinversion3.5

<210>1

<211>607

<212>prt

<213>人工序列

<222>(2)..(2)