技術(shù)領(lǐng)域：

本發(fā)明涉及一種魚類新品種的選育方法，尤其涉及一種新品種半滑舌鰨的分子選育方法。

背景技術(shù)：
：

半滑舌鰨是我國海水養(yǎng)殖的主導(dǎo)魚類之一，具有個(gè)體大、生長(zhǎng)快、肉味鮮美等特點(diǎn)，經(jīng)濟(jì)價(jià)值很高。目前常用的育種方法以種內(nèi)雜交和群體選育為主，由于在育種前不了解選育親本的遺傳信息，同時(shí)種內(nèi)雜交隨機(jī)性大，選育優(yōu)良品種的概率低，群體選育容易使親本近親交配，會(huì)出現(xiàn)種質(zhì)退化現(xiàn)象，以致出現(xiàn)了孵化率、出苗率降低、生長(zhǎng)速度減慢、抗逆性差等性狀退化現(xiàn)象，使半滑舌鰨經(jīng)濟(jì)性狀和生產(chǎn)性能下降。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
：

本發(fā)明的目的是為解決目前半滑舌鰨養(yǎng)殖和培育過程中，種內(nèi)雜交方法隨機(jī)性大，選育優(yōu)良品種的概率低，群體選育方法存在易產(chǎn)生近親交配，出現(xiàn)種質(zhì)退化，導(dǎo)致經(jīng)濟(jì)性狀和生產(chǎn)性能下降的問題，針對(duì)上述問題提供的一種新品種半滑舌鰨的選育方法。

本發(fā)明的目的可以通過如下措施來達(dá)到：新品種半滑舌鰨的分子選育方法，其特征在于新品種半滑舌鰨按以下步驟選育：

一、根據(jù)新品種的設(shè)計(jì)需求，挑選表型性狀符合要求的半滑舌鰨作為親本，表型性狀挑選公式為，公式中xn為親本的表型性狀測(cè)定值，為半滑舌鰨群體表型性狀的平均值，s為半滑舌鰨群體表型性狀的標(biāo)準(zhǔn)差；

二、檢測(cè)分析親本間的遺傳組成，a.提取親本基因組dna；b.用20對(duì)微衛(wèi)星標(biāo)記引物對(duì)親本基因組dna分別進(jìn)行pcr擴(kuò)增；c.將pcr擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行凝膠電泳檢測(cè)，獲得產(chǎn)物條帶圖片；d.利用凝膠圖像分析軟件，將pcr擴(kuò)增產(chǎn)物電泳條帶圖片轉(zhuǎn)化成數(shù)字信息數(shù)據(jù)；e.將數(shù)字信息數(shù)據(jù)導(dǎo)入遺傳分析軟件，計(jì)算獲得親本間的遺傳組成；

三、根據(jù)遺傳組成，選擇親本間的遺傳距離0.7～1.0作為“閾值”范圍進(jìn)行配組，親本分成2個(gè)或2個(gè)以上繁殖群體；

四、繁殖群體內(nèi)親本自由組合交配，生產(chǎn)、培育子代半滑舌鰨至性成熟；

五、以子代半滑舌鰨為新一代親本，重復(fù)操作步驟一至四，直到達(dá)到新品種半滑舌鰨性狀的設(shè)計(jì)要求，即得到新品種半滑舌鰨。

為了進(jìn)一步實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的目的，所述的第二步驟的步驟a中提取親本基因組dna采用常規(guī)酚-氯仿抽提的方法或者使用基因組dna純化試劑盒。

為了進(jìn)一步實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的目的，所述的第二步驟的步驟b中每對(duì)微衛(wèi)星標(biāo)記引物的pcr擴(kuò)增反應(yīng)總體積為15l，包括10.8l反應(yīng)緩沖液、100ng親本個(gè)體基因組dna、0.6μl微衛(wèi)星標(biāo)記上下游引物、0.5utaqdna聚合酶和余量的滅菌超純水；其中反應(yīng)緩沖液含有終濃度10mmol/ltris-cl（ph8.3）、50mmol/lkcl、1.5mmol/lmgcl2、200μmol/ldntp和余量的超純水。

為了進(jìn)一步實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的目的，所述的第二步驟的步驟b中pcr擴(kuò)增反應(yīng)程序?yàn)椋?4℃預(yù)變性3分鐘；94℃變性30秒，58℃復(fù)性30秒，72℃延伸30秒，循環(huán)25次；最后72℃延伸5分鐘。

為了進(jìn)一步實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的目的，所述的第二步驟的步驟c中pcr擴(kuò)增產(chǎn)物凝膠電泳檢測(cè)過程為：pcr擴(kuò)增產(chǎn)物先使用8%非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳2-3小時(shí)，之后將凝膠染色10分鐘，然后顯色5-10分鐘，將凝膠掃描或照相獲得產(chǎn)物條帶圖片。

為了進(jìn)一步實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的目的，所述的染色用染色液為0.1%硝酸銀溶液，所述的顯色用顯色液每升含有20g的naoh、0.4g的na2co3和4ml的甲醛溶液。

為了進(jìn)一步實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的目的，所述的第二步驟的步驟b中選用的20對(duì)微衛(wèi)星標(biāo)記引物的序列為：

微衛(wèi)星標(biāo)記引物（1）上游引物：gggagtcaacaaccaaacca

下游引物：cactcgcaaagactgaggtg

微衛(wèi)星標(biāo)記引物（2）上游引物：actgcgtccaaactgaggag

下游引物：cattccccactcactgtcct

微衛(wèi)星標(biāo)記引物（3）上游引物：tcctgtgggaggagaggaga

下游引物：acacacctgcacacaccagt

微衛(wèi)星標(biāo)記引物（4）上游引物：ccatccgagaccttcagtgt

下游引物：acctgctcctcctctgtgag

微衛(wèi)星標(biāo)記引物（5）上游引物：acaaagctgcgttcctatcg

下游引物：ggatcctgcctttggtttct

微衛(wèi)星標(biāo)記引物（6）上游引物：atcgaggaggatctgtgtgg

下游引物：gcgtgagatgcaagaaaaca

微衛(wèi)星標(biāo)記引物（7）上游引物：tgcagcgcacattacctaac

下游引物：ggcacgctgaagctttaca

微衛(wèi)星標(biāo)記引物（8）上游引物：cgttgccatcacacaatttc

下游引物：caacgtgcatcgtgtctctt

微衛(wèi)星標(biāo)記引物（9）上游引物：tgtgaagtcatgtggttctg

下游引物：tgagttggttgtatgtcctg

微衛(wèi)星標(biāo)記引物（10）上游引物：ggctgcctacaaacctcaac

下游引物：gaggactcagatgcacacga

微衛(wèi)星標(biāo)記引物（11）上游引物：gtttccttcctttcattcct

下游引物：gaaatggacgtctgtgattt

微衛(wèi)星標(biāo)記引物（12）上游引物：cacaaaattgctgcttgcat

下游引物：aacactccaaccccaggtaa

微衛(wèi)星標(biāo)記引物（13）上游引物：ctgccgtgatcttcacaaaa

下游引物：tccactgggacaagaaaaca

微衛(wèi)星標(biāo)記引物（14）上游引物：ctgtgaccctcctcctgct

下游引物：ctccatgctgccagtgttt

微衛(wèi)星標(biāo)記引物（15）上游引物：aaagaggcgtgtcatcggtt

下游引物：cccaatcgctcaagaaatcc

微衛(wèi)星標(biāo)記引物（16）上游引物：taccacgctgccttcaaatg

下游引物：ttcaccactgttctgctccac

微衛(wèi)星標(biāo)記引物（17）上游引物：gacgaaggtttttgaatggtta

下游引物：gtgaggcacaggcttttgga

微衛(wèi)星標(biāo)記引物（18）上游引物：tccgacccacagttgtatca

下游引物：taaacagatctgctgcagtgagt

微衛(wèi)星標(biāo)記引物（19）上游引物：tcatcagcccagttcaaagt

下游引物：ctacctctgcttcagctgtg

微衛(wèi)星標(biāo)記引物（20）上游引物：tctttaccgagaatctccctcc

下游引物：aaagggcctaccgaaagaat。

為了進(jìn)一步實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的目的，所述的第二步驟的步驟d中使用的凝膠圖像分析軟件為gel-proanalyzer（version4.0）。

為了進(jìn)一步實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的目的，所述的第二步驟的步驟e中使用的遺傳分析軟件為“基于遺傳背景的分子育種軟件1.0”。

本發(fā)明同已有技術(shù)相比可產(chǎn)生如下積極效果：本發(fā)明解決了目前半滑舌鰨養(yǎng)殖和培育過程中，種內(nèi)雜交方法隨機(jī)性大，選育優(yōu)良品種的概率低，群體選育方法存在易產(chǎn)生近親交配，出現(xiàn)種質(zhì)退化，導(dǎo)致經(jīng)濟(jì)性狀和生產(chǎn)性能下降的問題，本發(fā)明方法在選育新品種半滑舌鰨的過程中，始終檢測(cè)各代親本的繁殖譜系，以各代親本遺傳距離0.7～1.0作為“閾值”范圍進(jìn)行配組，從而既能避免近親交配，又能按照所設(shè)定的方向選擇半滑舌鰨新品種的性狀，顯著提高其經(jīng)濟(jì)性狀和生產(chǎn)性能，增加優(yōu)良新品種的出現(xiàn)概率。

具體實(shí)施方式：下面對(duì)本發(fā)明的具體實(shí)施方式做詳細(xì)說明：

具體實(shí)施方式一：本實(shí)施方式新品種半滑舌鰨按以下步驟選育：一、根據(jù)新品種的設(shè)計(jì)需求，挑選表型性狀符合要求的半滑舌鰨作為親本；二、檢測(cè)分析親本間的遺傳組成；三、根據(jù)遺傳組成，選擇親本間遺傳距離0.7～1.0作為“閾值”范圍進(jìn)行配組，親本分成2個(gè)或2個(gè)以上繁殖群體；四、繁殖群體內(nèi)親本自由組合交配，生產(chǎn)、培育子代半滑舌鰨至性成熟；五、以子代半滑舌鰨為新一代親本，重復(fù)操作步驟一至四，直到達(dá)到新品種半滑舌鰨性狀的設(shè)計(jì)要求，即得到新品種半滑舌鰨。

本實(shí)施方式可根據(jù)具體需要進(jìn)行設(shè)計(jì)，如選擇培育生長(zhǎng)速度快、體重、體厚、不可量化的表型性狀進(jìn)行挑選。

具體實(shí)施方式二：本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式一的不同點(diǎn)是：步驟一中表型性狀挑選公式為，公式中xn為親本的表型性狀測(cè)定值，為半滑舌鰨群體表型性狀的平均值，s為半滑舌鰨群體表型性狀的標(biāo)準(zhǔn)差，2倍s表示選擇強(qiáng)度中等，本實(shí)施方式保留小于表型性狀平均值+2倍標(biāo)準(zhǔn)差和大于表型性狀平均值-2倍標(biāo)準(zhǔn)差的半滑舌鰨個(gè)體。其他步驟及參數(shù)與實(shí)施方式一相同。

具體實(shí)施方式三：本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式一的不同點(diǎn)是：步驟二中檢測(cè)分析親本間的遺傳組成：a.提取親本基因組dna；b.用20對(duì)微衛(wèi)星標(biāo)記引物對(duì)親本基因組dna分別進(jìn)行pcr擴(kuò)增；c.將pcr擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行凝膠電泳檢測(cè)，獲得產(chǎn)物條帶圖片；d.利用凝膠圖像分析軟件，將pcr擴(kuò)增產(chǎn)物電泳條帶圖片轉(zhuǎn)化成數(shù)字信息數(shù)據(jù)；e.將數(shù)字信息數(shù)據(jù)導(dǎo)入遺傳分析軟件，計(jì)算獲得親本間遺傳信息。其他步驟及參數(shù)與實(shí)施方式一相同。

本實(shí)施方式中要對(duì)被檢測(cè)分析遺傳組成的親本個(gè)體進(jìn)行標(biāo)記，可采用外部標(biāo)記如掛牌標(biāo)記、內(nèi)部標(biāo)記如pit射頻標(biāo)記或分池飼養(yǎng)等方法。

具體實(shí)施方式四：本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式三的不同點(diǎn)是：步驟a中提取親本基因組dna可以采用常規(guī)酚-氯仿抽提的方法或者使用基因組dna純化試劑盒。其他步驟及參數(shù)與實(shí)施方式三相同。

具體實(shí)施方式五：本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式三的不同點(diǎn)是：步驟b中每對(duì)微衛(wèi)星標(biāo)記引物的pcr擴(kuò)增反應(yīng)總體積為15l，包括10.8l反應(yīng)緩沖液、100ng親本個(gè)體基因組dna、0.6μl微衛(wèi)星標(biāo)記上下游引物、0.5utaqdna聚合酶和余量的滅菌超純水；其中反應(yīng)緩沖液由終濃度10mmol/ltris-cl（ph8.3）、50mmol/lkcl、1.5mmol/lmgcl2、200μmol/ldntp和余量的超純水組成。其他步驟及參數(shù)與實(shí)施方式三相同。

具體實(shí)施方式六：本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式三的不同點(diǎn)是：步驟b中pcr擴(kuò)增反應(yīng)程序?yàn)椋?4℃預(yù)變性3分鐘；94℃變性30秒，58℃復(fù)性30秒，72℃延伸30秒，循環(huán)25次；最后72℃延伸5分鐘。其他步驟及參數(shù)與實(shí)施方式三相同。

具體實(shí)施方式七：本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式三的不同點(diǎn)是：步驟c中pcr擴(kuò)增產(chǎn)物凝膠電泳檢測(cè)過程包括，產(chǎn)物先使用8%非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳2-3小時(shí)，之后將凝膠染色10分鐘，然后顯色5-10分鐘，將凝膠掃描或照相獲得產(chǎn)物條帶圖片。其他步驟及參數(shù)與實(shí)施方式三相同。

具體實(shí)施方式八：本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式七的不同點(diǎn)是：步驟c中染色用染色液為0.1%硝酸銀溶液，所述的顯色用顯色液每升含有20g的naoh、0.4g的na2co3和4ml的甲醛溶液。其他步驟及參數(shù)與實(shí)施方式七相同。

具體實(shí)施方式九：本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式三的不同點(diǎn)是：步驟b中選用的20對(duì)微衛(wèi)星標(biāo)記引物的序列如下，其他步驟及參數(shù)與實(shí)施方式三相同：

微衛(wèi)星標(biāo)記引物（1）上游引物：gggagtcaacaaccaaacca

下游引物：cactcgcaaagactgaggtg

微衛(wèi)星標(biāo)記引物（2）上游引物：actgcgtccaaactgaggag

下游引物：cattccccactcactgtcct

微衛(wèi)星標(biāo)記引物（3）上游引物：tcctgtgggaggagaggaga

下游引物：acacacctgcacacaccagt

微衛(wèi)星標(biāo)記引物（4）上游引物：ccatccgagaccttcagtgt

下游引物：acctgctcctcctctgtgag

微衛(wèi)星標(biāo)記引物（5）上游引物：acaaagctgcgttcctatcg

下游引物：ggatcctgcctttggtttct

微衛(wèi)星標(biāo)記引物（6）上游引物：atcgaggaggatctgtgtgg

下游引物：gcgtgagatgcaagaaaaca

微衛(wèi)星標(biāo)記引物（7）上游引物：tgcagcgcacattacctaac

下游引物：ggcacgctgaagctttaca

微衛(wèi)星標(biāo)記引物（8）上游引物：cgttgccatcacacaatttc

下游引物：caacgtgcatcgtgtctctt

微衛(wèi)星標(biāo)記引物（9）上游引物：tgtgaagtcatgtggttctg

下游引物：tgagttggttgtatgtcctg

微衛(wèi)星標(biāo)記引物（10）上游引物：ggctgcctacaaacctcaac

下游引物：gaggactcagatgcacacga

微衛(wèi)星標(biāo)記引物（11）上游引物：gtttccttcctttcattcct

下游引物：gaaatggacgtctgtgattt

微衛(wèi)星標(biāo)記引物（12）上游引物：cacaaaattgctgcttgcat

下游引物：aacactccaaccccaggtaa

微衛(wèi)星標(biāo)記引物（13）上游引物：ctgccgtgatcttcacaaaa

下游引物：tccactgggacaagaaaaca

微衛(wèi)星標(biāo)記引物（14）上游引物：ctgtgaccctcctcctgct

下游引物：ctccatgctgccagtgttt

微衛(wèi)星標(biāo)記引物（15）上游引物：aaagaggcgtgtcatcggtt

下游引物：cccaatcgctcaagaaatcc

微衛(wèi)星標(biāo)記引物（16）上游引物：taccacgctgccttcaaatg

下游引物：ttcaccactgttctgctccac

微衛(wèi)星標(biāo)記引物（17）上游引物：gacgaaggtttttgaatggtta

下游引物：gtgaggcacaggcttttgga

微衛(wèi)星標(biāo)記引物（18）上游引物：tccgacccacagttgtatca

下游引物：taaacagatctgctgcagtgagt

微衛(wèi)星標(biāo)記引物（19）上游引物：tcatcagcccagttcaaagt

下游引物：ctacctctgcttcagctgtg

微衛(wèi)星標(biāo)記引物（20）上游引物：tctttaccgagaatctccctcc

下游引物：aaagggcctaccgaaagaat

具體實(shí)施方式十：本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式三的不同點(diǎn)是：步驟d中使用的凝膠圖像分析軟件為gel-proanalyzer（version4.0）。其他步驟及參數(shù)與實(shí)施方式三相同。

具體實(shí)施方式十一：本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式三的不同點(diǎn)是：步驟e中使用的遺傳分析軟件為“基于遺傳背景的分子育種軟件1.0”。其他步驟及參數(shù)與實(shí)施方式三相同。

具體實(shí)施方式十二：本實(shí)施方式半滑舌鰨新品種按以下步驟選育：

步驟一，根據(jù)生長(zhǎng)速度快、體重大的新品種設(shè)計(jì)要求，對(duì)海陽市黃海水產(chǎn)有限公司的3000尾半滑舌鰨親魚進(jìn)行表型性狀挑選，挑選公式為，公式中xn為親本的表型性狀測(cè)定值，為半滑舌鰨群體表型性狀的平均值，s為半滑舌鰨群體表型性狀的標(biāo)準(zhǔn)差，2倍s表示選擇強(qiáng)度中等，本實(shí)施方式保留小于表型性狀平均值+2倍標(biāo)準(zhǔn)差和大于表型性狀平均值-2倍標(biāo)準(zhǔn)差的半滑舌鰨個(gè)體作為親本。

步驟二，檢測(cè)分析親本間的遺傳組成：

a.提取親本基因組dna

對(duì)被檢測(cè)分析遺傳信息的親本個(gè)體進(jìn)行標(biāo)記，并對(duì)應(yīng)個(gè)體編號(hào)剪取0.5cm×0.5cm大小的尾鰭（約0.05g），置于4℃保溫盒內(nèi)備用，用于提取基因組dna；使用基因組dna純化試劑盒（takara，codeno.9765）提取親本基因組dna。

b.用20對(duì)微衛(wèi)星標(biāo)記引物對(duì)親本基因組dna分別進(jìn)行pcr擴(kuò)增

每對(duì)微衛(wèi)星標(biāo)記引物的pcr擴(kuò)增反應(yīng)總體積為15l，包括10.8l反應(yīng)緩沖液、100ng親本個(gè)體基因組dna、0.6μl微衛(wèi)星標(biāo)記上下游引物、0.5utaqdna聚合酶和余量的滅菌超純水；其中反應(yīng)緩沖液由終濃度10mmol/ltris-cl（ph8.3）、50mmol/lkcl、1.5mmol/lmgcl2、200μmol/ldntp和余量的超純水組成。pcr擴(kuò)增反應(yīng)程序?yàn)椋?4℃預(yù)變性3分鐘；94℃變性30秒，58℃復(fù)性30秒，72℃延伸30秒，循環(huán)25次；最后72℃延伸5分鐘。選用的20對(duì)微衛(wèi)星標(biāo)記引物的序列如下：

微衛(wèi)星標(biāo)記引物（1）上游引物：gggagtcaacaaccaaacca

下游引物：cactcgcaaagactgaggtg

微衛(wèi)星標(biāo)記引物（2）上游引物：actgcgtccaaactgaggag

下游引物：cattccccactcactgtcct

微衛(wèi)星標(biāo)記引物（3）上游引物：tcctgtgggaggagaggaga

下游引物：acacacctgcacacaccagt

微衛(wèi)星標(biāo)記引物（4）上游引物：ccatccgagaccttcagtgt

下游引物：acctgctcctcctctgtgag

微衛(wèi)星標(biāo)記引物（5）上游引物：acaaagctgcgttcctatcg

下游引物：ggatcctgcctttggtttct

微衛(wèi)星標(biāo)記引物（6）上游引物：atcgaggaggatctgtgtgg

下游引物：gcgtgagatgcaagaaaaca

微衛(wèi)星標(biāo)記引物（7）上游引物：tgcagcgcacattacctaac

下游引物：ggcacgctgaagctttaca

微衛(wèi)星標(biāo)記引物（8）上游引物：cgttgccatcacacaatttc

下游引物：caacgtgcatcgtgtctctt

微衛(wèi)星標(biāo)記引物（9）上游引物：tgtgaagtcatgtggttctg

下游引物：tgagttggttgtatgtcctg

微衛(wèi)星標(biāo)記引物（10）上游引物：ggctgcctacaaacctcaac

下游引物：gaggactcagatgcacacga

微衛(wèi)星標(biāo)記引物（11）上游引物：gtttccttcctttcattcct

下游引物：gaaatggacgtctgtgattt

微衛(wèi)星標(biāo)記引物（12）上游引物：cacaaaattgctgcttgcat

下游引物：aacactccaaccccaggtaa

微衛(wèi)星標(biāo)記引物（13）上游引物：ctgccgtgatcttcacaaaa

下游引物：tccactgggacaagaaaaca

微衛(wèi)星標(biāo)記引物（14）上游引物：ctgtgaccctcctcctgct

下游引物：ctccatgctgccagtgttt

微衛(wèi)星標(biāo)記引物（15）上游引物：aaagaggcgtgtcatcggtt

下游引物：cccaatcgctcaagaaatcc

微衛(wèi)星標(biāo)記引物（16）上游引物：taccacgctgccttcaaatg

下游引物：ttcaccactgttctgctccac

微衛(wèi)星標(biāo)記引物（17）上游引物：gacgaaggtttttgaatggtta

下游引物：gtgaggcacaggcttttgga

微衛(wèi)星標(biāo)記引物（18）上游引物：tccgacccacagttgtatca

下游引物：taaacagatctgctgcagtgagt

微衛(wèi)星標(biāo)記引物（19）上游引物：tcatcagcccagttcaaagt

下游引物：ctacctctgcttcagctgtg

微衛(wèi)星標(biāo)記引物（20）上游引物：tctttaccgagaatctccctcc

下游引物：aaagggcctaccgaaagaat

c.將pcr擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行凝膠電泳檢測(cè)，獲得產(chǎn)物條帶圖片

pcr擴(kuò)增產(chǎn)物先使用8%非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳2-3小時(shí)，之后將凝膠染色（染色液為0.1%硝酸銀溶液）10分鐘，然后顯色（顯色液每升含有20g的naoh、0.4g的na2co3和4ml的甲醛溶液）5-10分鐘，將凝膠掃描或照相獲得產(chǎn)物條帶圖片。

d.利用凝膠圖像分析軟件，將pcr擴(kuò)增產(chǎn)物電泳條帶圖片轉(zhuǎn)化成數(shù)字信息數(shù)據(jù)

使用凝膠圖像分析軟件gel-proanalyzer（version4.0）將pcr擴(kuò)增產(chǎn)物電泳條帶圖片轉(zhuǎn)化成表格形式的數(shù)字信息數(shù)據(jù)。

e.將數(shù)字信息數(shù)據(jù)導(dǎo)入遺傳分析軟件，計(jì)算獲得親本間遺傳組成

使用遺傳分析軟件“基于遺傳背景的分子育種軟件1.0”進(jìn)行遺傳參數(shù)的分析和計(jì)算，獲得親本間的遺傳組成。雌性群體的有效等位基因數(shù)(ne)為1.792~5.686，平均為3.578；雄性群體ne為1.471~6.116，平均為3.508。雌性群體的觀測(cè)雜合度(ho)為0.418~0.835，平均為0.606；雄性群體為0.28~0.798，平均為0.548。雌性群體的期望雜合度(he)為0.444~0.822，平均為0.696；雄性群體為0.321~0.839，平均為0.655。雌、雄親本個(gè)體間的遺傳距離，在0.254~1.959之間，平均值為0.890。

步驟三，根據(jù)親本間的遺傳組成，選擇親本間的遺傳距離0.7～1.0作為“閾值”范圍進(jìn)行配組，將雌雄親本分成2個(gè)或2個(gè)以上繁殖群體，即繁殖群體內(nèi)任意一對(duì)雌雄親本的個(gè)體間的遺傳距離都在0.7～1.0之間。。

步驟四，繁殖群體內(nèi)親本自由組合交配，生產(chǎn)、培育子代半滑舌鰨至性成熟。

步驟五，以子代半滑舌鰨為新一代親本，重復(fù)操作步驟一至四，直到子代半滑舌鰨群體成為生長(zhǎng)速度快、體重大的新品種半滑舌鰨。

本實(shí)施方式得到1個(gè)新品種半滑舌鰨。

將海陽市黃海水產(chǎn)有限公司的另外300尾半滑舌鰨作為對(duì)照組，與本實(shí)施方式獲得的1個(gè)新品種半滑舌鰨進(jìn)行對(duì)比，在養(yǎng)殖條件相同的情況下，本實(shí)施方式獲得的1個(gè)新品種半滑舌鰨的生長(zhǎng)速度比對(duì)照組平均快26.23%，本實(shí)施方式獲得的1個(gè)新品種半滑舌鰨的體重比對(duì)照組平均重27.43%。

序列表

<110>海陽市黃海水產(chǎn)有限公司

中國水產(chǎn)科學(xué)研究院黑龍江水產(chǎn)研究所

<120>新品種半滑舌鰨的分子選育方法

<160>40

<210>1

<211>20

<212>dna

<213>人工序列

<220>

<223>微衛(wèi)星標(biāo)記引物（1）的上游引物

<400>1

gggagtcaacaaccaaacca20

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<212>dna

<213>人工序列

<220>

<223>微衛(wèi)星標(biāo)記引物（1）的下游引物

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cactcgcaaagactgaggtg20

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<212>dna

<213>人工序列

<220>

<223>微衛(wèi)星標(biāo)記引物（2）的上游引物

<400>3

actgcgtccaaactgaggag20

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<211>20

<212>dna

<213>人工序列

<220>

<223>微衛(wèi)星標(biāo)記引物（2）的下游引物

<400>4

cattccccactcactgtcct20

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<212>dna

<213>人工序列

<220>

<223>微衛(wèi)星標(biāo)記引物（3）的上游引物

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tcctgtgggaggagaggaga20

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<212>dna

<213>人工序列

<220>

<223>微衛(wèi)星標(biāo)記引物（3）的下游引物

<400>6

acacacctgcacacaccagt20

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<211>20

<212>dna

<213>人工序列

<220>

<223>微衛(wèi)星標(biāo)記引物（4）的上游引物

<400>7

ccatccgagaccttcagtgt20

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<212>dna

<213>人工序列

<220>

<223>微衛(wèi)星標(biāo)記引物（4）的下游引物

<400>8

acctgctcctcctctgtgag20

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<212>dna

<213>人工序列

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<223>微衛(wèi)星標(biāo)記引物（5）的上游引物

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acaaagctgcgttcctatcg20

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<213>人工序列

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ggatcctgcctttggtttct20

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<212>dna

<213>人工序列

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atcgaggaggatctgtgtgg20

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<213>人工序列

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<213>人工序列

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tgcagcgcacattacctaac20

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<212>dna

<213>人工序列

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<213>人工序列

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<213>人工序列

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<213>人工序列

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<212>dna

<213>人工序列

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tgagttggttgtatgtcctg20

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<213>人工序列

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<213>人工序列

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<223>微衛(wèi)星標(biāo)記引物（10）的下游引物

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gaggactcagatgcacacga20

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<213>人工序列

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gtttccttcctttcattcct20

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<213>人工序列

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gaaatggacgtctgtgattt20

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<213>人工序列

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cacaaaattgctgcttgcat20

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<213>人工序列

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<223>微衛(wèi)星標(biāo)記引物（12）的下游引物

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aacactccaaccccaggtaa20

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<213>人工序列

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ctgccgtgatcttcacaaaa20

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<213>人工序列

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tccactgggacaagaaaaca20

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<213>人工序列

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<213>人工序列

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<213>人工序列

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<213>人工序列

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<213>人工序列

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<213>人工序列

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gacgaaggtttttgaatggtta22

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<211>20

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<213>人工序列

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<223>微衛(wèi)星標(biāo)記引物（17）的下游引物

<400>34

gtgaggcacaggcttttgga20

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<211>20

<212>dna

<213>人工序列

<220>

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tccgacccacagttgtatca20

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ctacctctgcttcagctgtg20

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<220>

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aaagggcctaccgaaagaat20

序列表

<110>海陽市黃海水產(chǎn)有限公司

中國水產(chǎn)科學(xué)研究院黑龍江水產(chǎn)研究所

<120>新品種半滑舌鰨的分子選育方法

<160>40

<210>1

<211>20

<212>dna

<213>人工序列

<220>

<223>微衛(wèi)星標(biāo)記引物（1）的上游引物

<400>1

gggagtcaacaaccaaacca20

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<213>人工序列

<220>

<223>微衛(wèi)星標(biāo)記引物（1）的下游引物

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cattccccactcactgtcct20

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tcctgtgggaggagaggaga20

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<223>微衛(wèi)星標(biāo)記引物（4）的上游引物

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<213>人工序列

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<213>人工序列

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tgcagcgcacattacctaac20

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<213>人工序列

<220>

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cgttgccatcacacaatttc20

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caacgtgcatcgtgtctctt20

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<211>20

<212>dna

<213>人工序列

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<223>微衛(wèi)星標(biāo)記引物（9）的上游引物

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tgtgaagtcatgtggttctg20

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<211>20

<212>dna

<213>人工序列

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<223>微衛(wèi)星標(biāo)記引物（9）的下游引物

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tgagttggttgtatgtcctg20

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<213>人工序列

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<223>微衛(wèi)星標(biāo)記引物（10）的上游引物

<400>19

ggctgcctacaaacctcaac20

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<213>人工序列

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<223>微衛(wèi)星標(biāo)記引物（10）的下游引物

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gaggactcagatgcacacga20

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<213>人工序列

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<223>微衛(wèi)星標(biāo)記引物（11）的上游引物

<400>21

gtttccttcctttcattcct20

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<211>20

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<213>人工序列

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<213>人工序列

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cacaaaattgctgcttgcat20

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<213>人工序列

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<400>24

aacactccaaccccaggtaa20

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<213>人工序列

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<213>人工序列

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<213>人工序列

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<400>28

ctccatgctgccagtgttt19

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<213>人工序列

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<223>微衛(wèi)星標(biāo)記引物（15）的上游引物

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aaagaggcgtgtcatcggtt20

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<212>dna

<213>人工序列

<220>

<223>微衛(wèi)星標(biāo)記引物（15）的下游引物

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cccaatcgctcaagaaatcc20

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<212>dna

<213>人工序列

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<223>微衛(wèi)星標(biāo)記引物（16）的上游引物

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taccacgctgccttcaaatg20

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<213>人工序列

<220>

<223>微衛(wèi)星標(biāo)記引物（16）的下游引物

<400>32

ttcaccactgttctgctccac21

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<213>人工序列

<220>

<223>微衛(wèi)星標(biāo)記引物（17）的上游引物

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gacgaaggtttttgaatggtta22

<210>34

<211>20

<212>dna

<213>人工序列

<220>

<223>微衛(wèi)星標(biāo)記引物（17）的下游引物

<400>34

gtgaggcacaggcttttgga20

<210>35

<211>20

<212>dna

<213>人工序列

<220>

<223>微衛(wèi)星標(biāo)記引物（18）的上游引物

<400>35

tccgacccacagttgtatca20

<210>36

<211>23

<212>dna

<213>人工序列

<220>

<223>微衛(wèi)星標(biāo)記引物（18）的下游引物

<400>36

taaacagatctgctgcagtgagt23

<210>37

<211>20

<212>dna

<213>人工序列

<220>

<223>微衛(wèi)星標(biāo)記引物（19）的上游引物

<400>37

tcatcagcccagttcaaagt20

<210>38

<211>20

<212>dna

<213>人工序列

<220>

<223>微衛(wèi)星標(biāo)記引物（19）的下游引物

<400>38

ctacctctgcttcagctgtg20

<210>39

<211>22

<212>dna

<213>人工序列

<220>

<223>微衛(wèi)星標(biāo)記引物（20）的上游引物

<400>39

tctttaccgagaatctccctcc22

<210>40

<211>20

<212>dna

<213>人工序列

<220>

<223>微衛(wèi)星標(biāo)記引物（20）的下游引物

<400>40

aaagggcctaccgaaagaat20