本發(fā)明屬于小核酸藥物領(lǐng)域，本發(fā)明的目的在于提供一種新型的雙鏈sirna、其綴合物及其用途。本發(fā)明還提供了所述雙鏈sirna及其綴合物在制備用于治療和/或預(yù)防乙型肝炎疾病的藥物中的用途。另外，本發(fā)明還涉及一種新型的化合物，以及所述化合物在dna核苷酸固相合成的原料、寡核苷酸藥物的合成原料、sirna藥物的合成原料、sirna藥物研究、基因功能研究和/或全基因庫的篩選方面的應(yīng)用(用途)，尤其是在用作本發(fā)明所述雙鏈sirna藥物的合成原料的用途。并且，本發(fā)明還涉及一種新型的核苷酸殘基，以及其在用于sirna藥物研究、基因功能研究和/或全基因庫的篩選方面的應(yīng)用，以及在作為寡聚核苷酸嵌入基團(tuán)的應(yīng)用。

背景技術(shù)：

1、乙型病毒性肝炎(又稱乙型肝炎或乙肝)是嚴(yán)重威脅全球的一類傳染病，目前全球公認(rèn)的兩大類乙肝治療藥物為干擾素和核苷類似物，但是這兩類藥物存在使用后容易產(chǎn)生耐藥性或使用受限等多種弊端，如干擾素容易產(chǎn)生不良反應(yīng)、核苷類藥物存在耐藥性和停藥后復(fù)發(fā)問題。因此，若能從基因水平沉默病毒的基因表達(dá)，阻斷hbv的生成和復(fù)制，由此從根本上降低病毒復(fù)制和對肝細(xì)胞的侵染，無疑將是最為理想的乙肝治療手段。小干擾核酸，即小干擾rna或短干擾rna(small?interfering?rna，sirna)可基于rna干擾(rnainterference，rnai)這一機(jī)制，以序列特異性的方式抑制或阻斷任何感興趣的目的基因(例如引發(fā)如癌癥等疾病的基因)的表達(dá)，從而達(dá)到治療疾病的目的。

2、rna干擾(rna?interference，rnai)是由雙鏈rna(double-stranded?rna，dsrna)分子在mrna水平關(guān)閉同源基因的表達(dá)或使該基因表達(dá)沉默的現(xiàn)象。rna干擾技術(shù)又被形象地稱為基因敲低(knock-down)或基因沉默(gene?silencing)，是一種典型的轉(zhuǎn)錄后基因調(diào)控方法，又稱轉(zhuǎn)錄后基因沉默(post-transcriptional?gene?silencing，ptgs)。最早有關(guān)rna干擾的報(bào)道出現(xiàn)在1990年，由兩個(gè)不同的研究小組同時(shí)報(bào)道了轉(zhuǎn)基因植物中的rna干擾現(xiàn)象，之后又在線蟲、果蠅、斑馬魚和小鼠等幾乎所有真核生物中觀察到了rna干擾現(xiàn)象。1999年，hamilton和baulcombe在發(fā)生rna干擾的植物中檢測到了長度為21-25個(gè)核苷酸的rna片段，這些rna片斷被證明是rna干擾所必需的，被稱為小干擾核酸(sirna)。雙鏈sirna與細(xì)胞源性的相關(guān)酶和蛋白質(zhì)形成rna誘導(dǎo)的沉默復(fù)合體(rna-induced?silencingcomplex，risc)。在rna干擾過程中，雙鏈sirna中的正義鏈被排除出復(fù)合體，反義鏈指導(dǎo)risc結(jié)合到靶mrna的同源位點(diǎn)，然后由復(fù)合物中的核糖核酸酶iii降解靶mrna，從而關(guān)閉靶基因的表達(dá)。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、本發(fā)明的目的在于提供一種新型的雙鏈sirna、其綴合物、其鹽及它們的用途，具體涉及本發(fā)明所述雙鏈sirna及其綴合物在制備用于治療和/或預(yù)防乙型肝炎疾病的藥物中的用途。另外，本發(fā)明還涉及一種新型的化合物，以及所述化合物在dna核苷酸固相合成的原料、sirna藥物的合成原料、sirna藥物研究、基因功能研究和/或全基因庫的篩選方面的用途，尤其是在作為本發(fā)明所述雙鏈sirna藥物的合成原料的用途。并且，本發(fā)明還涉及一種新型的核苷酸殘基，以及其在sirna藥物研究、基因功能研究和/或全基因庫的篩選方面的用途，以及作為寡聚核苷酸嵌入基團(tuán)的應(yīng)用。本發(fā)明所述雙鏈sirna及其綴合物對hbv具有較高的基因表達(dá)抑制活性和/或較低的毒性。

2、一方面，本發(fā)明涉及一種雙鏈sirna、其綴合物或其鹽，其中，所述雙鏈sirna包括一條正義鏈和一條反義鏈，且所述雙鏈sirna包含一個(gè)或多個(gè)y，所述y為所述雙鏈sirna中的每一個(gè)核苷酸和y各自獨(dú)立地是經(jīng)修飾的或未修飾的。任選地，所述y可以在所述雙鏈sirna的任意位置。

3、在本發(fā)明的所述雙鏈sirna、其綴合物或其鹽的一些實(shí)施例中，其中，所述雙鏈sirna包含1、2、3、4、5、6、7、8、9或10個(gè)y。

4、在本發(fā)明的所述雙鏈sirna、其綴合物或其鹽的一些實(shí)施例中，其中，所述雙鏈sirna包含1、2、3、4或5個(gè)y。

5、在本發(fā)明的所述雙鏈sirna、其綴合物或其鹽的一些實(shí)施例中，其中，所述反義鏈包含如5’-ugugaagcgaagugcacacuu-3’(seq?id?no:40)所示的序列，或在如seq?id?no:40所示序列中使用y替換了一個(gè)或多個(gè)核苷酸殘基的序列；其中，所述反義鏈中的每一個(gè)核苷酸和y各自獨(dú)立地是經(jīng)修飾的或未修飾的，所述反義鏈的長度不超過23個(gè)核苷酸，其中所述y具有本發(fā)明所述的含義。任選地，所述y替換發(fā)生在如seq?id?no:40所示的序列的任意位置。

6、在本發(fā)明的所述雙鏈sirna、其綴合物或其鹽的一些實(shí)施例中，其中，所述正義鏈包含如5’-gugugcacuucgcuucaca-3’(seq?id?no:20)所示的序列，或在如seq?id?no:20所示序列中使用y替換了一個(gè)或多個(gè)核苷酸殘基的序列，其中，所述正義鏈中的每一個(gè)核苷酸和y各自獨(dú)立地是經(jīng)修飾的或未修飾的，所述正義鏈的長度不超過23個(gè)核苷酸。任選地，所述y替換發(fā)生在如seq?id?no：20所示的序列的任意位置。

7、在本發(fā)明的所述雙鏈sirna、其綴合物或其鹽的一些實(shí)施例中，所述雙鏈sirna中的正義鏈或反義鏈的70％、75％、80％、85％、90％或95％以上的核苷酸和y都是經(jīng)修飾的。

8、在本發(fā)明的所述雙鏈sirna、其綴合物或其鹽的一些實(shí)施例中，所述雙鏈sirna中的正義鏈和反義鏈的70％、75％、80％、85％、90％或95％以上的核苷酸和y都是經(jīng)修飾的。

9、在本發(fā)明的所述雙鏈sirna，其綴合物或其鹽的一些實(shí)施例中，所述雙鏈sirna中的每一個(gè)核苷酸和y都是經(jīng)修飾的。

10、在本發(fā)明的所述雙鏈sirna、其綴合物或其鹽的一些實(shí)施例中，其中所述修飾選自以下中的至少之一：2’-甲氧基修飾、2’-甲氧基乙基修飾、2’-氟代修飾、硫代磷酸酯基連接、2’-脫氧修飾、2’-氨基修飾、鎖核酸修飾、解鎖核酸修飾、乙二醇核酸修飾和5’-乙烯基磷酸酯修飾。

11、在本發(fā)明的所述雙鏈sirna、其綴合物或其鹽的一些實(shí)施例中，其中，所述正義鏈包含在如seq?id?no:20所示的序列中使用y替換了0個(gè)、1個(gè)、2個(gè)、3個(gè)、4個(gè)或5個(gè)核苷酸殘基的序列，其中所述正義鏈中的每一個(gè)核苷酸和y各自獨(dú)立地是經(jīng)修飾的或未修飾的。

12、在本發(fā)明的所述雙鏈sirna、其綴合物或其鹽的一些實(shí)施例中，所述正義鏈包含在如seq?id?no:20所示的序列中使用y替換了1個(gè)核苷酸殘基的序列。

13、在本發(fā)明的所述雙鏈sirna，其綴合物或其鹽的一些實(shí)施例中，其中，反義鏈包含在如seq?id?no：40所示的序列中使用y替換了0個(gè)、1個(gè)、2個(gè)、3個(gè)、4個(gè)或5個(gè)核苷酸殘基的序列，其中所述反義鏈的每一個(gè)核苷酸和y各自獨(dú)立地是經(jīng)修飾的或未修飾的。在本發(fā)明的所述雙鏈sirna、其綴合物或其鹽的一些實(shí)施例中，其中，所述反義鏈包含在如seq?id?no:40所示的序列中使用y替換了1個(gè)核苷酸殘基的序列。

14、在本發(fā)明的所述雙鏈sirna，其綴合物或其鹽的一些實(shí)施例中，其中，所述y替換發(fā)生在如seq?id?no:20所示序列的5’端的第1位～第19位(即所述y替換任選地發(fā)生在seq?idno:20所示序列5’端的第1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18或19位)。

15、在本發(fā)明的所述雙鏈sirna，其綴合物或其鹽的一些實(shí)施例中，其中，所述y替換發(fā)生在如seq?id?no:40所示序列的5’端的第1位～第21位(即所述y替換任選地發(fā)生在seq?idno:40所示序列5’端的第1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20或21位)。

16、在本發(fā)明的所述雙鏈sirna、其綴合物或其鹽的一些實(shí)施例中，其中，所述正義鏈包含如5’-g●u●gugcacuucgcuucaca-3’(seq?id?no:19)所示的序列中使用y替換了0個(gè)、1個(gè)、2個(gè)、3個(gè)、4個(gè)或5個(gè)核苷酸殘基的序列，其中，所述正義鏈的每一個(gè)核苷酸和y各自獨(dú)立地是經(jīng)修飾的或未修飾的，所述y替換發(fā)生在如seq?id?no:19所示序列的5’端的第1位～第19位(即所述y替換任選地發(fā)生在如seq?id?no:19所示序列5’端的第1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18或19位)，所述正義鏈的長度不超過23個(gè)核苷酸。

17、在本發(fā)明的所述雙鏈sirna、其綴合物或鹽的一些實(shí)施例中，其中，所述反義鏈包含如5’-u●g●ugaagcgaagugcacac●u●u-3’(seq?id?no:36)所示的序列中使用y替換了0個(gè)、1個(gè)、2個(gè)、3個(gè)、4個(gè)或5個(gè)核苷酸殘基的序列，其中，所述反義鏈的每一個(gè)核苷酸和y各自獨(dú)立地是經(jīng)修飾的或未修飾的，所述y替換發(fā)生在所述反義鏈seq?id?no:36的5’端的第1～第21位(即所述y替換任選地發(fā)生在如seq?id?no:36所示序列5’端的第1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18或19位)，所述反義鏈的長度不超過23個(gè)核苷酸。

18、在本發(fā)明的所述雙鏈sirna、其綴合物或鹽的一些實(shí)施例中，其中，所述反義鏈包含在如5’-u●g●uga(agn)gcgaagugcacac●u●u-3’(seq?id?no:33)所示的序列中使用y替換了0個(gè)、1個(gè)、2個(gè)、3個(gè)、4個(gè)或5個(gè)核苷酸殘基的序列，其中，反義鏈的每一個(gè)核苷酸和y各自獨(dú)立地是經(jīng)修飾的或未修飾的，所述y替換發(fā)生在如seq?id?no:33所示序列5’端的第1～第21位((即所述y替換任選地發(fā)生在如seq?id?no:33所示序列5’端的第1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18或19位))，所述反義鏈的長度不超過23個(gè)核苷酸。

19、如無特別說明，在本發(fā)明上下文中，大寫字母c、g、u、a表示天然核苷酸的堿基組成；小寫字母c、g、u、a分別表示其相應(yīng)大寫字母所代表的核苷酸上的核糖2位被甲氧基修飾；大寫字母下面的下劃線??表示該字母所代表的核苷酸上的核糖2位被氟修飾；agn為腺苷-乙二醇核酸；間隔號“●”表示與間隔號“●”左右相鄰的兩個(gè)核苷酸殘基之間為硫代磷酸酯基連接；y為

20、在本發(fā)明的所述雙鏈sirna，其綴合物或鹽的一些實(shí)施例中，所述正義鏈包含以下核苷酸序列之一：

21、seq?id?no:1、seq?id?no:2、seq?id?no:3、seq?id?no:4、seq?id?no:5、seq?idno:6、seq?id?no:7、seq?id?no:8、seq?id?no:9、seq?id?no:10、seq?id?no:11、seq?id?no:12、seq?id?no:13、seq?id?no:14、seq?id?no:15、seq?id?no:16、seq?id?no:17、seq?idno:18、seq?id?no:19和seq?id?no:21；

22、所述正義鏈的長度不超過23個(gè)核苷酸。

23、在本發(fā)明的所述雙鏈sirna，其綴合物或鹽的一些實(shí)施例中，所述反義鏈包含以下核苷酸序列中的之一：

24、

25、seq?id?no:22、seq?id?no:23、seq?id?no:24、seq?id?no:25、seq?id?no:26、seqid?no:27、seq?id?no:28、seq?id?no:29、seq?id?no:30、seq?id?no:31、seq?id?no:32、seqid?no:33、seq?id?no:34、seq?id?no:35、seq?id?no:36、seq?id?no:37、seq?id?no:38和seq?id?no:39；

26、所述反義鏈的長度不超過23個(gè)核苷酸。

27、在本發(fā)明的所述雙鏈sirna，其綴合物或鹽的一些實(shí)施例中，其中，所述雙鏈sirna包含以下之一：

28、具有包含seq?id?no:15所示的核苷酸序列的正義鏈和具有包含seq?id?no:25所示的核苷酸序列的反義鏈，所述正義鏈和反義鏈的長度各自獨(dú)立地不超過23個(gè)核苷酸；

29、具有包含seq?id?no:17所示的核苷酸序列的正義鏈和具有包含seq?id?no:25所示的核苷酸序列的反義鏈，所述正義鏈和反義鏈的長度各自獨(dú)立地不超過23個(gè)核苷酸；

30、具有包含seq?id?no:15所示的核苷酸序列的正義鏈和具有包含seq?id?no:26所示的核苷酸序列的反義鏈，所述正義鏈和反義鏈的長度各自獨(dú)立地不超過23個(gè)核苷酸；

31、具有包含seq?id?no:16所示的核苷酸序列的正義鏈和具有包含seq?id?no:26所示的核苷酸序列的反義鏈，所述正義鏈和反義鏈的長度各自獨(dú)立地不超過23個(gè)核苷酸；

32、具有包含seq?id?no:17所示的核苷酸序列的正義鏈和具有包含seq?id?no:26所示的核苷酸序列的反義鏈，所述正義鏈和反義鏈的長度各自獨(dú)立地不超過23個(gè)核苷酸；

33、具有包含seq?id?no:15所示的核苷酸序列的正義鏈和具有包含seq?id?no:27所示的核苷酸序列的反義鏈，所述正義鏈和反義鏈的長度各自獨(dú)立地不超過23個(gè)核苷酸；

34、具有包含seq?id?no:16所示的核苷酸序列的正義鏈和具有包含seq?id?no:27所示的核苷酸序列的反義鏈，所述正義鏈和反義鏈的長度各自獨(dú)立地不超過23個(gè)核苷酸；

35、具有包含seq?id?no:17所示的核苷酸序列的正義鏈和具有包含seq?id?no:27所示的核苷酸序列的反義鏈，所述正義鏈和反義鏈的長度各自獨(dú)立地不超過23個(gè)核苷酸；

36、具有包含seq?id?no:16所示的核苷酸序列的正義鏈和具有包含seq?id?no:28所示的核苷酸序列的反義鏈，所述正義鏈和反義鏈的長度各自獨(dú)立地不超過23個(gè)核苷酸；

37、具有包含seq?id?no:17所示的核苷酸序列的正義鏈和具有包含seq?id?no:28所示的核苷酸序列的反義鏈，所述正義鏈和反義鏈的長度各自獨(dú)立地不超過23個(gè)核苷酸；或

38、具有包含seq?id?no:18所示的核苷酸序列的正義鏈和具有包含seq?id?no:28所示的核苷酸序列的反義鏈，所述正義鏈和反義鏈的長度各自獨(dú)立地不超過23個(gè)核苷酸。

39、在本發(fā)明的所述雙鏈sirna，其綴合物或其鹽的一些實(shí)施例中，雙鏈sirna或其綴合物選自本發(fā)明說明書表1中的s1至s143、s146、s147和s150之一。在本發(fā)明的所述雙鏈sirna、其綴合物或其鹽的一些實(shí)施例中，所述雙鏈sirna綴合物包含所述雙鏈sirna和綴合基團(tuán)，即，所述雙鏈sirna綴合物為所述雙鏈sirna與綴合基團(tuán)綴合后的綴合物，其中所述綴合基團(tuán)包括但不限于l-96或daw40007-4，所述l-96和daw40007-4的結(jié)構(gòu)分別為：

40、

41、在本發(fā)明的所述雙鏈sirna、其綴合物或其鹽的一些實(shí)施例中，所述綴合基團(tuán)與雙鏈sirna的正義鏈的3’末端或5’末端綴合。

42、在本發(fā)明的所述雙鏈sirna、其綴合物或其鹽的一些實(shí)施例中，所述綴合基團(tuán)與雙鏈sirna的正義鏈的3’末端綴合。

43、在本發(fā)明的所述雙鏈sirna、其綴合物或其鹽的一些實(shí)施例中，所述雙鏈sirna通過磷酸酯基團(tuán)、硫代磷酸酯基團(tuán)或磷酸基團(tuán)與所述綴合基團(tuán)鏈接。

44、另一方面，本發(fā)明還涉及一種核苷酸殘基y，其結(jié)構(gòu)為：

45、另一方面，本發(fā)明還涉及一種化合物，其具有如式(i)所示的結(jié)構(gòu)，或如式(i)所示的化合物的立體異構(gòu)體、互變異構(gòu)體或可接受的鹽，

46、

47、r1為甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基或叔丁基，所述各甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基或叔丁基獨(dú)立地任選地被1、2、3或4個(gè)選自氘、羥基、氰基、f、cl、br、i、甲氧基、乙氧基、1-丙氧基和2-丙氧基的取代基所取代；

48、z和y1各自獨(dú)立地為h、氘、羥基保護(hù)基團(tuán)、hoc(＝o)(ch2)jc(＝o)-、m-c(＝o)(ch2)jc(＝o)-、磷酸酯基基團(tuán)、硫代磷酸酯基團(tuán)、亞磷酸酰胺基基團(tuán)或氫磷酸鹽基團(tuán)；

49、m為固相支持體，優(yōu)選為羥基或氨基功能化的固相支持體，更優(yōu)選為樹脂或cpg，進(jìn)一步優(yōu)選為大孔樹脂或cpg，更進(jìn)一步為優(yōu)選胺甲基樹脂、羥基樹脂或-nhcpg；

50、r為-nhr2或-n＝ch-nrarb；

51、r2為氨基保護(hù)基團(tuán)；

52、各ra和rb獨(dú)立地為h或氨基保護(hù)基團(tuán)，或ra、rb和與它們所連接的n原子一起形成5-6個(gè)環(huán)原子組成的雜環(huán)基，所述各5-6個(gè)環(huán)原子組成的雜環(huán)基獨(dú)立地任選地被1、2、3或4個(gè)選自氘、羥基、氰基、f、cl、br、i、甲基、乙基、正丙基、異丙基、甲氧基、乙氧基、1-丙氧基和2-丙氧基的取代基所取代；

53、其中，各j獨(dú)立地為1、2、3、4或5。

54、在本發(fā)明所述化合物的一些實(shí)施例中，z和y1各自獨(dú)立地為h、氘、芐氧基羰基、4-硝基芐氧基羰基、4-溴芐氧基羰基、4-甲氧基芐氧基羰基、聯(lián)苯基甲氧基羰基、2,2,2-三氯乙氧基羰基、2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基羰基、烯丙氧羰基、氯乙?；?、三氟乙酰基、甲氧基乙酰基、苯氧基乙酰基、苯甲酰基、2,2,2-三氯乙基、2-三甲基甲硅烷基乙基、1,1-二甲基-2-丙烯基、3-甲基-3-丁烯基、烯丙基、對甲氧基芐基二苯甲基、四氫呋喃基、甲氧基甲基、甲基硫代甲基、芐氧基甲基、2,2,2-三氯乙氧基甲基、2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基甲基、甲磺酰基、對甲苯磺?；?、c1-12烷基、c1-12烷基c(＝o)-、c1-12烷硅基、c6-10芳基c1-6烷基、hoc(＝o)(ch2)jc(＝o)-、m-c(＝o)(ch2)jc(＝o)-、三苯基甲基、mmtr、dmtr、4’,4’,4’-三甲氧基三苯甲基、其中，各j、m、x、rx、ry、rc和rd具有本發(fā)明所述的含義。

55、在本發(fā)明所述化合物的一些實(shí)施例中，z和y1各自獨(dú)立地為h、氘、芐氧基羰基、4-硝基芐氧基羰基、4-溴芐氧基羰基、4-甲氧基芐氧基羰基、聯(lián)苯基甲氧基羰基、2,2,2-三氯乙氧基羰基、2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基羰基、烯丙氧羰基、氯乙?；⑷阴；⒓籽趸阴；?、苯氧基乙?；?、苯甲酰基、2,2,2-三氯乙基、2-三甲基甲硅烷基乙基、1,1-二甲基-2-丙烯基、3-甲基-3-丁烯基、烯丙基、對甲氧基芐基二苯甲基、四氫呋喃基、甲氧基甲基、甲基硫代甲基、芐氧基甲基、2,2,2-三氯乙氧基甲基、2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基甲基、甲磺酰基、對甲苯磺酰基、c1-10烷基、c1-10烷基c(＝o)-、c1-10烷硅基、c6-10芳基c1-4烷基、hoc(＝o)(ch2)jc(＝o)-、m-c(＝o)(ch2)jc(＝o)-、三苯基甲基、mmtr、dmtr、4’,4’,4’-三甲氧基三苯甲基、其中，各j、m、x、rx、ry、rc和rd具有本發(fā)明所述的含義。

56、在本發(fā)明所述化合物的一些實(shí)施例中，z和y1各自獨(dú)立地為h、氘、芐氧基羰基、4-硝基芐氧基羰基、4-溴芐氧基羰基、4-甲氧基芐氧基羰基、聯(lián)苯基甲氧基羰基、2,2,2-三氯乙氧基羰基、2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基羰基、烯丙氧羰基、氯乙?；?、三氟乙?；⒓籽趸阴；?、苯氧基乙酰基、苯甲酰基、2,2,2-三氯乙基、2-三甲基甲硅烷基乙基、1,1-二甲基-2-丙烯基、3-甲基-3-丁烯基、烯丙基、對甲氧基芐基二苯甲基、四氫呋喃基、甲氧基甲基、甲基硫代甲基、芐氧基甲基、2,2,2-三氯乙氧基甲基、2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基甲基、甲磺酰基、對甲苯磺?；1-8烷基、c1-8烷基c(＝o)-、c1-8烷硅基、苯基c1-3烷基、hoc(＝o)(ch2)jc(＝o)-、m-c(＝o)(ch2)jc(＝o)-、三苯基甲基、mmtr、dmtr、4’,4’,4’-三甲氧基三苯甲基、其中，各j、m、x、rx、ry、rc和rd具有本發(fā)明所述的含義。

57、在本發(fā)明所述化合物的一些實(shí)施例中，z和y1各自獨(dú)立地為h、氘、芐氧基羰基、4-硝基芐氧基羰基、4-溴芐氧基羰基、4-甲氧基芐氧基羰基、聯(lián)苯基甲氧基羰基、2,2,2-三氯乙氧基羰基、2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基羰基、烯丙氧羰基、氯乙?；?、三氟乙?；?、甲氧基乙?；?、苯氧基乙?；⒈郊柞；?,2,2-三氯乙基、2-三甲基甲硅烷基乙基、1,1-二甲基-2-丙烯基、3-甲基-3-丁烯基、烯丙基、對甲氧基芐基二苯甲基、四氫呋喃基、甲氧基甲基、甲基硫代甲基、芐氧基甲基、2,2,2-三氯乙氧基甲基、2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基甲基、甲磺酰基、對甲苯磺?；?、c1-6烷基、c1-6烷基c(＝o)-、c1-6烷硅基、芐基、苯乙基、hoc(＝o)(ch2)jc(＝o)-、m-c(＝o)(ch2)jc(＝o)-、三苯基甲基、mmtr、dmtr、4’,4’,4’-三甲氧基三苯甲基、其中，各j、m、x、rx、ry、rc和rd具有本發(fā)明所述的含義。

58、在本發(fā)明所述化合物的一些實(shí)施例中，x為cl或br。

59、在本發(fā)明所述化合物的一些實(shí)施例中，各rx和ry獨(dú)立地為羥基保護(hù)基團(tuán)。

60、在本發(fā)明所述化合物的一些實(shí)施例中，各rc和rd獨(dú)立地為h或氨基保護(hù)基團(tuán)；或rc、rd和與它們所連接的n原子一起形成5-6個(gè)環(huán)原子組成的雜環(huán)基，所述5-6個(gè)環(huán)原子組成的雜環(huán)基獨(dú)立地任選地被1、2、3或4個(gè)選自氘、羥基、氰基、f、cl、br、i、甲基、乙基、丙基、甲氧基、乙氧基、1-丙氧基和2-丙氧基的取代基所取代。

61、在本發(fā)明所述化合物的一些實(shí)施例中，r2為9-芴基甲氧基羰基、芐氧基羰基、4-硝基芐氧基羰基、4-溴芐氧基羰基、4-甲氧基芐氧基羰基、聯(lián)苯基甲氧基羰基、2,2,2-三氯乙氧基羰基、2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基羰基、烯丙氧羰基、氯乙?；⑷阴；?、甲氧基乙酰基、苯氧基乙酰基、苯甲?；?、甲基、叔丁基、2-三甲基甲硅烷基乙基、1,1-二甲基-2-丙烯基、3-甲基-3-丁烯基、烯丙基、芐基、對甲氧基芐基二苯甲基、三苯甲基、四氫呋喃基、甲氧基甲基、甲基硫代甲基、芐氧基甲基、2,2,2-三氯乙氧基甲基、2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基甲基、甲磺?；?、對甲苯磺?；⑷谆坠柰榛?、三乙基甲硅烷基、三異丙基甲硅烷基、c1-6烷氧基或r3c(＝o)-，其中，r3具有本發(fā)明所述的含義。

62、在本發(fā)明所述化合物的一些實(shí)施例中，各ra和rb獨(dú)立地為獨(dú)立地為h、甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、叔丁基、甲氧基、乙氧基、1-丙氧基、2-丙氧基、9-芴基甲氧基羰基、芐氧基羰基、4-硝基芐氧基羰基、4-溴芐氧基羰基、4-甲氧基芐氧基羰基、聯(lián)苯基甲氧基羰基、2,2,2-三氯乙氧基羰基、2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基羰基、烯丙氧羰基、氯乙?；⑷阴；⒓籽趸阴；?、苯氧基乙?；?、苯甲?；?、2-三甲基甲硅烷基乙基、1,1-二甲基-2-丙烯基、3-甲基-3-丁烯基、烯丙基、芐基、對甲氧基芐基二苯甲基、三苯甲基、四氫呋喃基、甲氧基甲基、甲基硫代甲基、芐氧基甲基、2,2,2-三氯乙氧基甲基、2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基甲基、甲磺?；?、對甲苯磺酰基、三甲基甲硅烷基、三乙基甲硅烷基、三異丙基甲硅烷基或r4c(＝o)-，或ra、rb和與它們所連接的n原子一起形成吡咯烷基、嗎啉基、哌啶基或哌嗪基，所述吡咯烷基、嗎啉基、哌啶基和哌嗪基各自獨(dú)立地任選地被1、2、3或4個(gè)選自氘、羥基、氰基、f、cl、br、i、甲氧基、乙氧基、1-丙氧基和2-丙氧基的取代基所取代，其中，r4具有本發(fā)明所述的含義。

63、在本發(fā)明所述化合物的一些實(shí)施例中，各r3和r4獨(dú)立地為c1-6烷基、鹵代c1-6烷基、c1-6烷氧基、苯基、鹵素取代的苯基、c1-6烷基苯基或芐基。

64、在本發(fā)明所述化合物的一些實(shí)施例中，各r3和r4獨(dú)立地為c1-4烷基、鹵代c1-4烷基、c1-4烷氧基、苯基、鹵素取代的苯基、c1-4烷基苯基或芐基。

65、在本發(fā)明所述化合物的一些實(shí)施例中，各r3和r4獨(dú)立地為甲基、乙基、正丙基、異丙基、三氟甲基、二氟甲基、一氟甲基、三氯甲基、二氯甲基、一氯甲基、2,2,2-三氯乙基、甲氧基、乙氧基、1-丙氧基、2-丙氧基、1-丁氧基、2-甲基-l-丙氧基、2-丁氧基、叔丁氧基、苯基、鹵素取代的苯基、c1-3烷基苯基或芐基。

66、在本發(fā)明所述化合物的一些實(shí)施例中，各rx和ry獨(dú)立地為芐氧基羰基、4-硝基芐氧基羰基、4-溴芐氧基羰基、4-甲氧基芐氧基羰基、聯(lián)苯基甲氧基羰基、2,2,2-三氯乙氧基羰基、2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基羰基、烯丙氧羰基、氯乙酰基、三氟乙?；?、甲氧基乙酰基、苯氧基乙酰基、苯甲?；?,2,2-三氯乙基、2-三甲基甲硅烷基乙基、1,1-二甲基-2-丙烯基、3-甲基-3-丁烯基、烯丙基、對甲氧基芐基二苯甲基、四氫呋喃基、甲氧基甲基、甲基硫代甲基、芐氧基甲基、2,2,2-三氯乙氧基甲基、2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基甲基、甲磺?；?、對甲苯磺?；?、氰基c1-6烷基、c1-6烷基、c1-6烷基c(＝o)-、c1-6烷硅基、苯基、鹵素取代的苯基、芐基或苯乙基。

67、在本發(fā)明所述化合物的一些實(shí)施例中，各rx和ry獨(dú)立地為芐氧基羰基、4-硝基芐氧基羰基、4-溴芐氧基羰基、4-甲氧基芐氧基羰基、聯(lián)苯基甲氧基羰基、2,2,2-三氯乙氧基羰基、2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基羰基、烯丙氧羰基、氯乙?；⑷阴；⒓籽趸阴；?、苯氧基乙酰基、苯甲酰基、2,2,2-三氯乙基、2-三甲基甲硅烷基乙基、1,1-二甲基-2-丙烯基、3-甲基-3-丁烯基、烯丙基、對甲氧基芐基二苯甲基、四氫呋喃基、甲氧基甲基、甲基硫代甲基、芐氧基甲基、2,2,2-三氯乙氧基甲基、2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基甲基、甲磺?；?、對甲苯磺酰基、cnch2-、cn(ch2)2-、cnch(ch3)2ch2-、cn(ch2)3-、cnch(ch3)2ch2ch2-、甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、叔丁基、、c1-4烷基c(＝o)-、c1-4烷硅基、苯基、鹵素取代的苯基、芐基或苯乙基。

68、在本發(fā)明所述化合物的一些實(shí)施例中，各rc和rd獨(dú)立地為甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、叔丁基、甲氧基、乙氧基、1-丙氧基、2-丙氧基、9-芴基甲氧基羰基、芐氧基羰基、4-硝基芐氧基羰基、4-溴芐氧基羰基、4-甲氧基芐氧基羰基、聯(lián)苯基甲氧基羰基、2,2,2-三氯乙氧基羰基、2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基羰基、烯丙氧羰基、氯乙?；?、三氟乙酰基、甲氧基乙?；⒈窖趸阴；?、苯甲?；?、2-三甲基甲硅烷基乙基、1,1-二甲基-2-丙烯基、3-甲基-3-丁烯基、烯丙基、芐基、對甲氧基芐基二苯甲基、三苯甲基、四氫呋喃基、甲氧基甲基、甲基硫代甲基、芐氧基甲基、2,2,2-三氯乙氧基甲基、2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基甲基、甲磺?；?、對甲苯磺酰基、三甲基甲硅烷基、三乙基甲硅烷基、三異丙基甲硅烷基或r4c(＝o)-，或rc、rd與它們所連接的n原子一起形成吡咯烷基、嗎啉基、哌啶基或哌嗪基，所述吡咯烷基、嗎啉基、哌啶基和哌嗪基各自獨(dú)立地任選地被1、2、3或4個(gè)選自氘、羥基、氰基、f、cl、br、i、甲氧基、乙氧基、1-丙氧基和2-丙氧基的取代基所取代。

69、在本發(fā)明所述化合物的一些實(shí)施例中，本發(fā)明所述化合物具有如式(ii)所示的結(jié)構(gòu)，

70、

71、在本發(fā)明的另一方面，本發(fā)明還涉及一種藥物組合物，其包含本發(fā)明所述的雙鏈sirna、其綴合物或其鹽，和藥學(xué)上可接受的載體。

72、在本發(fā)明的另一方面，本發(fā)明還涉及本發(fā)明所述的雙鏈sirna綴合物、其綴合物和本發(fā)明所述所述的藥物組合物在制備用于治療和/或預(yù)防乙型肝炎疾病的藥物中的用途。

73、在本發(fā)明的另一方面，本發(fā)明還涉及本發(fā)明所述的核苷酸殘基在作為用于sirna的藥物研究、基因功能研究和/或全基因庫的篩選方面的應(yīng)用，所述核苷酸殘基的結(jié)構(gòu)為：

74、在本發(fā)明所述的核苷酸殘基應(yīng)用的一些實(shí)施例中，所述sirna藥物為本發(fā)明所述的雙鏈sirna藥物。

75、在本發(fā)明的另一方面，本發(fā)明還涉及本發(fā)明所述的化合物在dna核苷酸固相合成的原料、寡核苷酸藥物的合成原料、sirna藥物的合成原料、sirna藥物研究、基因功能研究和/或全基因庫的篩選方面的應(yīng)用。

76、在本發(fā)明的再一方面，本發(fā)明還涉及本發(fā)明所述的核苷酸殘基作為寡聚核苷酸嵌入基團(tuán)的應(yīng)用，其中，所述寡聚核苷酸是含有10～50個(gè)核苷酸或核苷酸堿基對的核苷酸序列，且所述寡聚核苷酸能夠抑制或阻斷基因的表達(dá)，所述核苷酸殘基的結(jié)構(gòu)為：

77、在本發(fā)明所述的核苷酸殘基作為寡聚核苷酸嵌入基團(tuán)的應(yīng)用的一些實(shí)施例中，其中，所述基因?yàn)閔bv基因。

78、在本發(fā)明所述的核苷酸殘基作為寡聚核苷酸嵌入基團(tuán)的應(yīng)用的一些實(shí)施例中，其中，所述寡聚核苷酸為sirna。

79、在本發(fā)明所述的核苷酸殘基作為寡聚核苷酸嵌入基團(tuán)的應(yīng)用的一些實(shí)施例中，其中，所述sirna包括正義鏈和反義鏈。

80、在本發(fā)明所述的核苷酸殘基作為寡聚核苷酸嵌入基團(tuán)的應(yīng)用的一些實(shí)施例中，其中，所述核苷酸殘基僅嵌入到所述sirna的正義鏈上。

81、在本發(fā)明所述的核苷酸殘基作為寡聚核苷酸嵌入基團(tuán)的應(yīng)用的一些實(shí)施例中，其中，所述核苷酸殘基僅嵌入到所述sirna的反義鏈上。

82、在本發(fā)明所述的核苷酸殘基作為寡聚核苷酸嵌入基團(tuán)的應(yīng)用的一些實(shí)施例中，其中，所述核苷酸殘基嵌入到所述sirna的正義鏈和反義鏈上。

83、在本發(fā)明所述的核苷酸殘基作為寡聚核苷酸嵌入基團(tuán)的應(yīng)用的一些實(shí)施例中，其中，所述sirna的正義鏈包含如seq?id?no:19所示的序列。

84、在本發(fā)明所述的核苷酸殘基作為寡聚核苷酸嵌入基團(tuán)的應(yīng)用的一些實(shí)施例中，其中，所述sirna的反義鏈包含如seq?id?no:36或seq?id?no:33所示的序列。

85、本發(fā)明詳細(xì)說明書

86、定義和一般術(shù)語

87、在本發(fā)明中，術(shù)語“包含”或“包括”為開放式表達(dá)，即包括本發(fā)明所指明的內(nèi)容，但并不排除其他方面的內(nèi)容。

88、在本發(fā)明中，術(shù)語“小干擾rna(small?interfering?rna；sirna)”是一類長度為17到30個(gè)核苷酸的雙鏈rna分子，包含正義鏈和反義鏈。sirna通過形成沉默復(fù)合體(rna-induced?silencing?complex，risc)，介導(dǎo)risc途徑的rna轉(zhuǎn)錄物靶向切割。具體地，sirna通過已知的rna干擾(rnai)過程指導(dǎo)mrna序列的特異性降解，抑制mrna翻譯成氨基酸和轉(zhuǎn)化為蛋白質(zhì)。例如，sirna可調(diào)節(jié)(例如抑制)乙肝病毒在細(xì)胞中的表達(dá)。

89、在本發(fā)明中，術(shù)語“反義鏈(或稱引導(dǎo)鏈)”是指包括與靶序列(如乙肝病毒的mrna中一段序列)基本上互補(bǔ)的區(qū)域的sirna鏈?！罢x鏈(或稱隨從鏈)”是指含有與反義鏈基本上互補(bǔ)的區(qū)域的sirna鏈。本發(fā)明所述雙鏈sirna中的反義鏈或正義鏈中的含有一個(gè)或多個(gè)(例如，2、3、4或5個(gè))核苷酸殘基y，所述y具有本發(fā)明所述的結(jié)構(gòu)。

90、術(shù)語“基本上互補(bǔ)”是指完全互補(bǔ)或至少部分互補(bǔ)，例如反義鏈與靶序列完全互補(bǔ)或至少部分互補(bǔ)。在部分互補(bǔ)的情況下，錯(cuò)配可以存在于分子的內(nèi)部或末端區(qū)域內(nèi)，其中，最耐受的錯(cuò)配存在于末端區(qū)域內(nèi)，例如在sirna任一鏈的5’-和/或3’-末端的5、4、3或2個(gè)核苷酸內(nèi)部。

91、需要說明的是，反義鏈與mrna的“至少部分基本上互補(bǔ)”是指反義鏈具有與感興趣的mrna(例如編碼乙肝病毒的mrna)的一個(gè)連續(xù)部分基本互補(bǔ)的多核苷酸?；蛘?，如果一種多核苷酸與編碼乙肝病毒的mrna的部分基本上非間斷互補(bǔ)，則該反義鏈與所述乙肝病毒的mrna的至少一部分互補(bǔ)。

92、在本發(fā)明中，術(shù)語“靶序列”是指在編碼乙肝病毒基因的轉(zhuǎn)錄期間形成的mrna分子的核苷酸序列的連續(xù)部分，包括為初級轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物的rna加工產(chǎn)物的mrna。

93、本公開中，雙鏈sirna類似物是指核糖核酸分子的復(fù)合體，其具有雙鏈結(jié)構(gòu)，包含兩條反向平行的且基本上互補(bǔ)的核酸鏈，其相對于靶rna具有“正義”和“反義”定向。在本公開中，“互補(bǔ)”具有本領(lǐng)域技術(shù)人員周知的含義，即，在雙鏈核酸分子中，一條鏈的堿基與另一條鏈上的堿基以互補(bǔ)的方式相配對。嘌吟堿基腺嘌吟(a)始終與嘧啶堿基尿嘧啶(u)相配對；嘌呤堿基鳥嘌呤(g)始終與嘧啶堿基胞嘧啶(c)相配對。每個(gè)堿基對都包括一個(gè)嘌呤和一個(gè)嘧啶。當(dāng)一條鏈上的腺嘌呤始終與另一條鏈上的尿嘧啶配對，以及鳥嘌呤始終與胞嘧啶配對時(shí)，兩條鏈被認(rèn)為是彼此相互補(bǔ)的，以及從其互補(bǔ)鏈的序列中可以推斷出該鏈的序列。

94、在本發(fā)明中，術(shù)語“抑制乙型肝炎病毒基因的表達(dá)”包括任何水平的乙型肝炎病毒(簡稱乙肝病毒)基因的抑制，例如，乙肝病毒基因表達(dá)的至少部分抑制，如抑制至少約20％、至少約25％、至少約30％、至少約35％、至少約40％、至少約45％、至少約50％、至少約55％、至少約60％、至少約65％、至少約70％、至少約75％、至少約80％、至少約85％、至少約90％、至少約91％、至少約92％、至少約93％、至少約94％、至少約95％、至少約96％、至少約97％、至少約98％或至少約99％。其中，可以基于與乙肝病毒基因表達(dá)相關(guān)的任何變量的水平來評價(jià)乙肝病毒基因的表達(dá)，例如，乙肝病毒的mrna水平或乙肝病毒蛋白水平?？梢酝ㄟ^與對照水平相比，這些變量中一個(gè)或多個(gè)的絕對或相對水平的降低來評價(jià)抑制。對照水平可以是本領(lǐng)域中利用的任何類型的對照水平，例如，給藥前的基線水平，或從未處理或用對照(如，僅用緩沖劑的對照或無活性劑對照)處理的相似受試者、細(xì)胞或樣品測定的水平。

95、在本發(fā)明中，“藥物組合物”可指用于疾病的治療，也可用于細(xì)胞的體外培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)。用于疾病的治療時(shí)，術(shù)語“藥物組合物”通常是指單位劑量形式，并且可以通過制藥領(lǐng)域中熟知的方法的任何一種進(jìn)行制備。所有的方法包括使活性成分與構(gòu)成一種或多種附屬成分的輔料相結(jié)合的步驟。通常，通過均勻并充分地使活性雙鏈sirna與液體輔料、細(xì)碎固體輔料或這兩者相結(jié)合，制備組合物。

96、本發(fā)明所述的sirna含有核苷酸基團(tuán)作為基本結(jié)構(gòu)單元，本領(lǐng)域技術(shù)人員公知，所述核苷酸基團(tuán)含有磷酸基團(tuán)、核糖基團(tuán)和堿基，在此不再贅述。所述sirna中的每個(gè)核苷酸各自獨(dú)立地為修飾或未修飾的核苷酸，優(yōu)先為未修飾的核苷酸。本發(fā)明的雙鏈sirna含有正義鏈和反義鏈。

97、本發(fā)明所述“嵌入”表示嵌入基團(tuán)與序列中至少一個(gè)核苷酸殘基相連接，包括在序列中使用嵌入基團(tuán)(如y)替換了一個(gè)核苷酸殘基。

98、本發(fā)明所述“嵌入基團(tuán)”為天然核苷酸堿基的類似物的殘基，不同于任何公開專利的天然核苷酸堿基，將其引入核酸序列后，可使序列具備一定功能(如帶來不可預(yù)料的活性)。如本發(fā)明所述y，其作為嵌入基團(tuán)嵌入寡聚核苷酸序列中后，能夠抑制基因的表達(dá)，進(jìn)而產(chǎn)生不可預(yù)料的活性。

99、本發(fā)明所述“寡聚核苷酸嵌入基團(tuán)”是指所述嵌入基團(tuán)與寡聚核苷酸中至少一個(gè)核苷酸殘基相連接，包括在寡聚核苷酸中使用嵌入基團(tuán)(如y)替換了一個(gè)核苷酸殘基。

100、本發(fā)明所述y嵌入的序列是指所述序列中存在至少一個(gè)核苷酸殘基與y相連接，包括如在序列中使用y替換了一個(gè)核苷酸殘基的序列。本發(fā)明所述y嵌入的序列還可以任選被修飾，如甲氧基修飾、氟代修飾和硫代磷酸酯基連接等。本發(fā)明所述y嵌入的序列包括但不限于：y嵌入的sirna、y嵌入的正義鏈和y嵌入的反義鏈。

101、本發(fā)明所述的綴合基團(tuán)包括藥學(xué)上可接受的綴合基團(tuán)，一般來說，藥學(xué)上可接受的綴合基團(tuán)包含藥學(xué)上可接受的靶向分子和任選的接頭(linker)。示例性的綴合基團(tuán)、接頭、靶向分子的種類可參見wo2015006740a2和cn114555188a的公開內(nèi)容。示例性的綴合基團(tuán)包括但不限于本發(fā)明所述的l96、nag37或daw40007-4。

102、除非另有說明，“綴合”是指兩個(gè)或多個(gè)各自具有特定功能的化學(xué)部分之間以共價(jià)連接的方式彼此連接；相應(yīng)地，“綴合物”是指該各個(gè)化學(xué)部分之間通過共價(jià)連接而形成的化合物。

103、本發(fā)明所述雙鏈sirna綴合物是雙鏈sirna和藥學(xué)上可接受的綴合基團(tuán)連接形成的化合物，并且雙鏈sirna和藥學(xué)上可接受的綴合基團(tuán)共價(jià)連接。

104、在本發(fā)明中，術(shù)語“藥學(xué)上可接受的”是指物質(zhì)或組合物必須與包含制劑的其它成分和/或用其治療的哺乳動(dòng)物化學(xué)上和/或毒理學(xué)上相容。優(yōu)選地，本發(fā)明所述的“藥學(xué)上可接受的”是指聯(lián)邦監(jiān)管機(jī)構(gòu)或國家政府批準(zhǔn)的或美國藥典或其他一般認(rèn)可藥典上列舉的在動(dòng)物中、特別是人體中使用的。

105、在本發(fā)明中，術(shù)語“藥學(xué)上可接受的輔料”均可包括任何溶劑、固體賦形劑、稀釋劑或其他液體賦形劑等等，適合于特有的目標(biāo)劑型。除了任何常規(guī)的輔料與本發(fā)明的雙鏈sirna或其綴合物或其鹽不相容的范圍，例如所產(chǎn)生的任何不良的生物效應(yīng)或與藥學(xué)上可接受的組合物的任何其他組分以有害的方式產(chǎn)生的相互作用，它們的用途也是本發(fā)明所考慮的范圍。

106、在本文中，術(shù)語“治療”是指用于獲得期望的藥理學(xué)和/或生理學(xué)效果。所述效果就完全或部分預(yù)防疾病或其癥狀而言可以是預(yù)防性的，和/或就部分或完全治愈疾病和/或疾病導(dǎo)致的不良作用而言可以是治療性的。本文使用的“治療”涵蓋哺乳動(dòng)物、特別是人的疾病，包括：(a)在容易患病但是尚未確診得病的個(gè)體中預(yù)防疾病或病癥發(fā)生；(b)抑制疾病，例如阻滯疾病發(fā)展；或(c)緩解疾病，例如減輕與疾病相關(guān)的癥狀。本文使用的“治療”涵蓋將藥物、rnai試劑或sirna給予個(gè)體以治療、治愈、緩解、改善、減輕或抑制個(gè)體的疾病的任何用藥，包括但不限于將含本文所述rnai試劑、sirna或sirna綴合物的藥物給予有需要的個(gè)體。

107、如無特別說明，在本發(fā)明上下文中，大寫字母c、g、u、a表示天然核苷酸的堿基組成；小寫字母c、g、u、a分別表示其相應(yīng)大寫字母所代表的核苷酸上的核糖2位被甲氧基修飾；大寫字母下面的下劃線??表示該字母所代表的核苷酸上的核糖2位被氟修飾；間隔號“●”表示與間隔號“●”左右相鄰的兩個(gè)核苷酸殘基之間為硫代磷酸酯基連接，如核苷酸殘基之間無“●”，則表示核苷酸殘基之間是通過磷酸酯基鏈接例如，“g●u"表示g和u殘基之間通過硫代磷酸酯基連接，“gu"表示g和u殘基之間通過磷酸酯基連接；agn為腺苷-乙二醇核酸(glycol?nucleic?acid，gna，)；雙鏈sirna中的y表示其中，本發(fā)明所述的核糖2位被氟修飾是指核糖2位的羥基被f替換；所述的核糖2位被甲氧基修飾是指核糖2位的羥基被甲氧基替換。

108、在本發(fā)明上下文中，bz表示苯甲?；?；mmtr表示4’-甲氧基三苯甲基；dmtr表示4’,4’-二甲氧基三苯基甲基。

109、本發(fā)明中，“磷酸酯基團(tuán)”、“磷酸酯基”、“磷酸酯鍵”可互換使用，包括磷酸一酯基、磷酸二酯基或磷酸三酯基?！傲虼姿狨セ鶊F(tuán)”中的“磷酸酯基團(tuán)”也具有同樣的含義。若無特別說明，天然核苷酸間磷酸酯基為磷酸二酯基。如無特殊說明，本發(fā)明所述的y替換了一或多個(gè)核苷酸殘基的序列，是指1個(gè)y對應(yīng)替換1個(gè)核苷酸殘基，而非1個(gè)y替換2個(gè)或以上核苷酸殘基，如果是替換2個(gè)核苷酸殘基則應(yīng)當(dāng)是2個(gè)y分別替換2個(gè)核苷酸殘基。如，反義鏈包含在如seq?id?no：40所示的序列中使用y替換了0個(gè)、1個(gè)、2個(gè)、3個(gè)、4個(gè)或5個(gè)核苷酸殘基的序列，則應(yīng)當(dāng)是表示，反義鏈包含在如seq?id?no：40所示的序列中使用0個(gè)、1個(gè)、2個(gè)、3個(gè)、4個(gè)或5個(gè)y分別替換了0個(gè)、1個(gè)、2個(gè)、3個(gè)、4個(gè)或5個(gè)核苷酸殘基的序列。

110、術(shù)語“氧代”指＝o基團(tuán)。例如，碳原子與氧原子通過雙鍵連接，其中形成酮或醛。

111、如本文所使用，“化學(xué)修飾”或“修飾”意指當(dāng)與天然存在的對應(yīng)物相比時(shí)具有化學(xué)差異的結(jié)構(gòu)，包括經(jīng)化學(xué)手段的所有改變，例如化學(xué)部分的添加或去除，或以一個(gè)化學(xué)部分取代另一個(gè)化學(xué)部分。

112、本發(fā)明化合物可以是不對稱的，例如，具有一個(gè)或多個(gè)立體異構(gòu)體。除非另有說明，所有立體異構(gòu)體都包括，如對映異構(gòu)體和非對映異構(gòu)體。本發(fā)明含有不對稱碳原子的化合物可以以光學(xué)活性純的形式或外消旋形式被分離出來。光學(xué)活性純的形式可以從外消旋混合物拆分，或通過使用手性原料或手性試劑合成。

113、可以通過手性合成或手性試劑或者其他常規(guī)技術(shù)制備光學(xué)活性的(r)-和(s)-異構(gòu)體以及d和l異構(gòu)體。如果想得到本發(fā)明某化合物的一種對映體，可以通過不對稱合成或者具有手性助劑的衍生作用來制備，其中將所得非對映體混合物分離，并且輔助基團(tuán)裂開以提供純的所需對映異構(gòu)體。或者，當(dāng)分子中含有堿性官能團(tuán)(如氨基)或酸性官能團(tuán)(如羧基)時(shí)，與適當(dāng)?shù)墓鈱W(xué)活性的酸或堿形成非對映異構(gòu)體的鹽，然后通過本領(lǐng)域所公知的常規(guī)方法進(jìn)行非對映異構(gòu)體拆分，然后回收得到純的對映體。此外，對映異構(gòu)體和非對映異構(gòu)體的分離通常是通過使用色譜法完成的，所述色譜法采用手性固定相，并任選地與化學(xué)衍生法相結(jié)合(例如由胺生成氨基甲酸鹽)。

114、本發(fā)明還包括一些與本文中記載的那些相同的，但一個(gè)或多個(gè)原子被原子量或質(zhì)量數(shù)不同于自然中通常發(fā)現(xiàn)的原子量或質(zhì)量數(shù)的原子置換的同位素標(biāo)記的本發(fā)明化合物?？山Y(jié)合到本發(fā)明化合物的同位素的實(shí)例包括氫、碳、氮、氧、磷、硫、氟、碘和氯的同位素，諸如分別為2h、3h、11c、13c、14c、13n、15n、15o、17o、18o、31p、32p、35s、18f、123i、125i和36cl等。

115、除另有說明，當(dāng)一個(gè)位置被特別地指定為氘(d)時(shí)，該位置應(yīng)理解為具有大于氘的天然豐度(其為0.015％)至少1000倍的豐度的氘(即，至少10％的氘摻入)。示例中化合物的具有大于氘的天然豐度可以是至少1000倍的豐度的氘、至少2000倍的豐度的氘、至少3000倍的豐度的氘、至少4000倍的豐度的氘、至少5000倍的豐度的氘、至少6000倍的豐度的氘或更高豐度的氘。本發(fā)明還包括各種氘化形式的式(i)化合物。與碳原子連接的各個(gè)可用的氫原子可獨(dú)立地被氘原子替換。本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠參考相關(guān)文獻(xiàn)合成氘化形式的式(i)化合物。在制備氘化形式的式(i)化合物時(shí)可使用市售的氘代起始物質(zhì)，或可使用常規(guī)技術(shù)采用氘代試劑合成，氘代試劑包括但不限于氘代硼烷、三氘代硼烷四氫呋喃溶液、氘代氫化鋰鋁、氘代碘乙烷和氘代碘甲烷等。

116、本發(fā)明所述的綴合基團(tuán)可以增強(qiáng)治療劑向諸如人或動(dòng)物的對象內(nèi)特定靶位置(例如，特定器官或組織)的遞送。在本發(fā)明的一些實(shí)施方式中，所述綴合基團(tuán)可以增強(qiáng)表達(dá)抑制性雙鏈sirna的靶向遞送。在本發(fā)明的一些實(shí)施方式中，所述綴合基團(tuán)可以增強(qiáng)表達(dá)抑制性雙鏈sirna向肝臟的遞送。

117、本發(fā)明所述的綴合基團(tuán)可以直接或間接地連接至化合物，諸如治療劑，例如，表達(dá)抑制性寡聚核苷酸，例如，表達(dá)抑制性寡聚核苷酸的3’或5’末端。在本發(fā)明的一些實(shí)施方式中，表達(dá)抑制性寡聚核苷酸包括一個(gè)或多個(gè)修飾的核苷酸。在本發(fā)明的一些實(shí)施方式中，表達(dá)抑制性寡聚核苷酸是rnai試劑，諸如包含正義鏈和反義鏈的雙鏈sirna試劑。在本發(fā)明的一些實(shí)施方式中，本發(fā)明所公開的綴合基團(tuán)連接至雙鏈sirna試劑的正義鏈的3’末端。在一些實(shí)施方式中，本發(fā)明所公開的綴合基團(tuán)經(jīng)由磷酸酯、硫代磷酸酯或膦酸酯基團(tuán)在雙鏈sirna試劑正義鏈3’末端與表達(dá)抑制性寡聚核苷酸試劑連接。

118、本發(fā)明中立體化學(xué)的定義和慣例的使用通常參考以下文獻(xiàn)：s.p.parker,ed.,mcgraw-hill?dictionary?of?chemical?terms(1984)mcgraw-hill?book?company,newyork；and?eliel,e.and?wilen,s.,"stereochemistry?of?organic?compounds",johnwiley&sons,inc.,new?york,1994.本發(fā)明的化合物可以包含不對稱中心或手性中心，因此存在不同的立體異構(gòu)體。本發(fā)明的化合物所有的立體異構(gòu)形式，包括但絕不限于，非對映異構(gòu)體，對映異構(gòu)體，阻轉(zhuǎn)異構(gòu)體，和它們的混合物，如外消旋混合物，組成了本發(fā)明的一部分。很多有機(jī)化合物都以光學(xué)活性形式存在，即它們有能力旋轉(zhuǎn)平面偏振光的平面。在描述光學(xué)活性化合物時(shí)，前綴d、l或r、s用來表示分子手性中心的絕對構(gòu)型。前綴d、l或(+)、(-)用來命名化合物平面偏振光旋轉(zhuǎn)的符號，(-)或l是指化合物是左旋的，前綴(+)或d是指化合物是右旋的。這些立體異構(gòu)體的化學(xué)結(jié)構(gòu)是相同的，但是它們的立體結(jié)構(gòu)不一樣。特定的立體異構(gòu)體可以是對映體，異構(gòu)體的混合物通常稱為對映異構(gòu)體混合物。50：50的對映體混合物被稱為外消旋混合物或外消旋體，這可能導(dǎo)致化學(xué)反應(yīng)過程中沒有立體選擇性或立體定向性。術(shù)語“外消旋混合物”和“外消旋體”是指等摩爾的兩個(gè)對映異構(gòu)體的混合物，缺乏光學(xué)活性。

119、術(shù)語“互變異構(gòu)體”或“互變異構(gòu)的形式”是指不同能量的結(jié)構(gòu)的同分異構(gòu)體可以通過低能壘互相轉(zhuǎn)化。例如質(zhì)子互變異構(gòu)體(即質(zhì)子轉(zhuǎn)移的互變異構(gòu)體)包括通過質(zhì)子遷移的互變，如酮-烯醇和亞胺-烯胺的同分異構(gòu)化作用。

120、術(shù)語“組合物”表示含有一種或多種本文所述化合物或其生理學(xué)上可藥用的鹽或前體的藥物與其他化學(xué)組分的混合物，以及其他組分例如生理學(xué)可藥用的載體和賦形劑。組合物的目的是促進(jìn)對生物體的給藥，利于活性成分的吸收進(jìn)而發(fā)揮生物活性。

121、術(shù)語“可藥用賦形劑”或“藥學(xué)上可接受的賦形劑”包括但不限于任何已經(jīng)被美國食品和藥物管理局批準(zhǔn)對于人類或家畜動(dòng)物使用可接受的任何助劑、載體、賦形劑、助流劑、甜味劑、稀釋劑、防腐劑、染料/著色劑、增香劑、表面活性劑、潤濕劑、分散劑、助懸劑、穩(wěn)定劑、等滲劑、溶劑或乳化劑。

122、如無特殊說明，本發(fā)明的“化合物”、“配體”、“核酸綴合物”、“雙鏈sirna綴合物”、“雙鏈sirna”、“核酸”均可獨(dú)立地以鹽、混合鹽或非鹽(例如游離酸或游離堿)的形式存在。當(dāng)以鹽或混合鹽的形式存在時(shí)，其可為藥學(xué)上可接受的鹽。

123、術(shù)語“可接受的鹽”包括可接受的酸加成鹽和藥學(xué)上可接受的堿加成鹽。“可接受的酸加成鹽”是指能夠保留游離堿的生物有效性而無其它副作用的，與無機(jī)酸或有機(jī)酸所形成的鹽。無機(jī)酸鹽包括但不限于鹽酸鹽、氫溴酸鹽、硫酸鹽、硝酸鹽、磷酸鹽等；有機(jī)酸鹽包括但不限于甲酸鹽、乙酸鹽、2,2-二氯乙酸鹽、三氟乙酸鹽、丙酸鹽、己酸鹽、辛酸鹽、癸酸鹽、十一碳烯酸鹽、乙醇酸鹽、葡糖酸鹽、乳酸鹽、癸二酸鹽、己二酸鹽、戊二酸鹽、丙二酸鹽、草酸鹽、馬來酸鹽、琥珀酸鹽、富馬酸鹽、酒石酸鹽、檸檬酸鹽、棕櫚酸鹽、硬脂酸鹽、油酸鹽、肉桂酸鹽、月桂酸鹽、蘋果酸鹽、谷氨酸鹽、焦谷氨酸鹽、天冬氨酸鹽、苯甲酸鹽、甲磺酸鹽、苯磺酸鹽、對甲苯磺酸鹽、海藻酸鹽、抗壞血酸鹽、水楊酸鹽、4-氨基水楊酸鹽、萘二磺酸鹽等。這些鹽可通過本領(lǐng)域已知的方法制備。

124、“藥學(xué)上可接受的堿加成鹽”是指能夠保持游離酸的生物有效性而無其它副作用的、與無機(jī)堿或有機(jī)堿所形成的鹽。衍生自無機(jī)堿的鹽包括但不限于鈉鹽、鉀鹽、鋰鹽、銨鹽、鈣鹽、鎂鹽、鐵鹽、鋅鹽、銅鹽、錳鹽、鋁鹽等。優(yōu)選的無機(jī)鹽為銨鹽、鈉鹽、鉀鹽、鈣鹽及鎂鹽，優(yōu)選鈉鹽。衍生自有機(jī)堿的鹽包括但不限于以下的鹽：伯胺類、仲胺類及叔胺類，被取代的胺類，包括天然的被取代胺類、環(huán)狀胺類及堿性離子交換樹脂，例如氨、異丙胺、三甲胺、二乙胺、三乙胺、三丙胺、乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、二甲基乙醇胺、2-二甲氨基乙醇、2-二乙氨基乙醇、二環(huán)己胺、賴氨酸、精氨酸、組氨酸、咖啡因、普魯卡因、膽堿、甜菜堿、乙二胺、葡萄糖胺、甲基葡萄糖胺、可可堿、嘌呤、哌嗪、哌啶、n-乙基哌啶、聚胺樹脂等。優(yōu)選的有機(jī)堿包括異丙胺、二乙胺、乙醇胺、三甲胺、二環(huán)己基胺、膽堿及咖啡因。這些鹽可通過本領(lǐng)域已知的方法制備。

125、像本發(fā)明所描述的，本發(fā)明的化合物可以任選地被一個(gè)或多個(gè)取代基所取代，如上面的通式化合物，或者像實(shí)施例里面特殊的例子，子類，和本發(fā)明所包含的一類化合物。一般而言，術(shù)語“取代的”，表示所給結(jié)構(gòu)中的一個(gè)或多個(gè)氫原子被具體取代基所取代。除非其他方面表明，一個(gè)任選的取代基團(tuán)可以有一個(gè)取代基在基團(tuán)各個(gè)可取代的位置進(jìn)行取代。當(dāng)所給出的結(jié)構(gòu)式中不止一個(gè)位置能被選自具體基團(tuán)的一個(gè)或多個(gè)取代基所取代，那么取代基可以相同或不同地在各個(gè)位置取代。

126、另外，需要說明的是，除非以其他方式明確指出，在本文中通篇采用的描述方式“各…和…獨(dú)立地為”、“…和…各自獨(dú)立地為”和“…和…分別獨(dú)立地為”可以互換，應(yīng)做廣義理解，其既可以是指在不同基團(tuán)中，相同符號之間所表達(dá)的具體選項(xiàng)之間互相不影響，也可以表示在相同的基團(tuán)中，相同符號之間所表達(dá)的具體選項(xiàng)之間互相不影響。

127、在本發(fā)明中，術(shù)語“任選地”、“任選的”或“任選”通常是指隨后所述的事件或狀況可以但未必發(fā)生，并且該描述包括其中發(fā)生該事件或狀況的情況，以及其中未發(fā)生該事件或狀況的情況。

128、在本說明書的各部分，本發(fā)明公開化合物的取代基按照基團(tuán)種類或范圍公開。特別指出，本發(fā)明包括這些基團(tuán)種類和范圍的各個(gè)成員的每一個(gè)獨(dú)立的次級組合。例如，術(shù)語“c1-6烷基”特別指獨(dú)立公開的甲基、乙基、c3烷基、c4烷基、c5烷基和c6烷基。

129、本發(fā)明使用的術(shù)語“烷基”包括1-20個(gè)碳原子飽和直鏈或支鏈的單價(jià)烴基，其中烷基可以獨(dú)立任選地被一個(gè)或多個(gè)本發(fā)明所描述的取代基所取代。其中一些實(shí)施例是，烷基基團(tuán)含有1-12個(gè)碳原子，另外一些實(shí)施例是，烷基基團(tuán)含有1-10個(gè)碳原子，另外一些實(shí)施例是，烷基基團(tuán)含有1-8個(gè)碳原子，另外一些實(shí)施例是，烷基基團(tuán)含有1-6個(gè)碳原子，另外一些實(shí)施例是，烷基基團(tuán)含有1-4個(gè)碳原子，另外一些實(shí)施例是，烷基基團(tuán)含有1-3個(gè)碳原子。烷基基團(tuán)更進(jìn)一步的實(shí)例包括，但并不限于，甲基(me，-ch3)、乙基(et，-ch2ch3)、正丙基(n-pr，-ch2ch2ch3)、異丙基(i-pr，-ch(ch3)2)、正丁基(n-bu，-ch2ch2ch2ch3)、2-甲基丙基或異丁基(i-bu，-ch2ch(ch3)2)、1-甲基丙基或仲丁基(s-bu，-ch(ch3)ch2ch3)、叔丁基(t-bu，-c(ch3)3)、正戊基(-ch2ch2ch2ch2ch3)、2-戊基(-ch(ch3)ch2ch2ch3)、3-戊基(-ch(ch2ch3)2)、2-甲基-2-丁基(-c(ch3)2ch2ch3)、3-甲基-2-丁基(-ch(ch3)ch(ch3)2)、3-甲基-1-丁基(-ch2ch2ch(ch3)2)、2-甲基-1-丁基(-ch2ch(ch3)ch2ch3)、正己基(-ch2ch2ch2ch2ch2ch3)、2-己基(-ch(ch3)ch2ch2ch2ch3)、3-己基(-ch(ch2ch3)(ch2ch2ch3))、2-甲基-2-戊基(-c(ch3)2ch2ch2ch3)、3-甲基-2-戊基(-ch(ch3)ch(ch3)ch2ch3)、4-甲基-2-戊基(-ch(ch3)ch2ch(ch3)2)、3-甲基-3-戊基(-c(ch3)(ch2ch3)2)、2-甲基-3-戊基(-ch(ch2ch3)ch(ch3)2)、2,3-二甲基-2-丁基(-c(ch3)2ch(ch3)2)、3,3-二甲基-2-丁基(-ch(ch3)c(ch3)3)、正庚基、正辛基、正壬基、正葵基，等等。

130、術(shù)語“烷氧基”表示烷基基團(tuán)通過氧原子與分子其余部分相連，其中烷基基團(tuán)具有如本發(fā)明所述的含義。除非另外詳細(xì)說明，所述烷氧基基團(tuán)含有1-12個(gè)碳原子。在一些實(shí)施方案中，烷氧基基團(tuán)含有1-8個(gè)碳原子；在另一些實(shí)施方案中，烷氧基基團(tuán)含有1-6個(gè)碳原子；在另一些實(shí)施方案中，烷氧基基團(tuán)含有1-4個(gè)碳原子；在又一些實(shí)施方案中，烷氧基基團(tuán)含有1-3個(gè)碳原子。所述烷氧基基團(tuán)可以任選地被一個(gè)或多個(gè)本發(fā)明描述的取代基所取代。

131、烷氧基基團(tuán)的實(shí)例包括，但并不限于，甲氧基(meo、-och3)、乙氧基(eto,-och2ch3)、1-丙氧基(n-pro,n-丙氧基,-och2ch2ch3)、2-丙氧基(i-pro,i-丙氧基,-och(ch3)2)、1-丁氧基(n-buo,n-丁氧基,-och2ch2ch2ch3)、2-甲基-l-丙氧基(i-buo,i-丁氧基,-och2ch(ch3)2)、2-丁氧基(s-buo,s-丁氧基,-och(ch3)ch2ch3)、2-甲基-2-丙氧基(t-buo,t-丁氧基,-oc(ch3)3)、1-戊氧基(n-戊氧基,-och2ch2ch2ch2ch3)、2-戊氧基(-och(ch3)ch2ch2ch3)、3-戊氧基(-och(ch2ch3)2)、2-甲基-2-丁氧基(-oc(ch3)2ch2ch3)，3-甲基-2-丁氧基(-och(ch3)ch(ch3)2)、3-甲基-l-丁氧基(-och2ch2ch(ch3)2)、2-甲基-l-丁氧基(-och2ch(ch3)ch2ch3)等等。

132、術(shù)語“烯基”表示含有2-12個(gè)碳原子，或2-8個(gè)碳原子，或2-6個(gè)碳原子，或2-4個(gè)碳原子的直鏈或支鏈的一價(jià)、二價(jià)或多價(jià)烴基，其中至少有一個(gè)位置的c-c為sp2雙鍵，其中烯基的基團(tuán)可以獨(dú)立地未被取代或被一個(gè)或多個(gè)本發(fā)明所描述的取代基所取代，包括有“順”、“反”或"z"、"e"異構(gòu)體，其中具體的實(shí)例包括，但并不限于，乙烯基(-ch＝ch2)，丙烯基(-ch＝chch3)、烯丙基(-ch2ch＝ch2)等等，其中所述烯基基團(tuán)可以獨(dú)立地未被取代或被一個(gè)或多個(gè)本發(fā)明所描述的取代基所取代。

133、術(shù)語“m-m1個(gè)環(huán)原子組成的”表示所述環(huán)狀基團(tuán)由m-m1個(gè)環(huán)原子所組成，所述的環(huán)原子包括碳原子和/或o、n、s、p等雜原子。例如，“3-6個(gè)環(huán)原子組成的雜環(huán)基”代表其包括3、4、5或6個(gè)環(huán)原子組成的單雜環(huán)基。

134、術(shù)語“雜環(huán)基”是指包含3-12個(gè)環(huán)原子的，非芳香族的飽和或部分不飽和的單環(huán)、雙環(huán)或三環(huán)體系，其中至少一個(gè)環(huán)原子選自氮、硫或氧原子。其中，所述雜環(huán)基基團(tuán)可以任選地被一個(gè)或多個(gè)本發(fā)明描述的取代基所取代。除非另外說明，雜環(huán)基可以是碳基或氮基，且-ch2-基團(tuán)可以任選地被-c(＝o)-或-c(＝s)-替代。環(huán)的硫原子可以任選地被氧化成s-氧化物。環(huán)的氮原子可以任選地被氧化成n-氧化物。在一些實(shí)施方案中，雜環(huán)基為3-12個(gè)環(huán)原子組成的雜環(huán)基，在一些實(shí)施方案中，雜環(huán)基為5-10個(gè)環(huán)原子組成的雜環(huán)基，在一些實(shí)施方案中，雜環(huán)基為3-6個(gè)環(huán)原子組成的雜環(huán)基，在一些實(shí)施方案中，雜環(huán)基為4-6個(gè)環(huán)原子組成的雜環(huán)基，在一些實(shí)施方案中，雜環(huán)基為5-6個(gè)環(huán)原子組成的雜環(huán)基，在另一些實(shí)施方案中，雜環(huán)基為4個(gè)原子組成的雜環(huán)基，是指包含4個(gè)環(huán)原子的單價(jià)或多價(jià)的，飽和或部分不飽和的，非芳香性的單環(huán)，其中至少一個(gè)環(huán)原子選自氮、硫和氧原子。在另一些實(shí)施方案中，雜環(huán)基為5個(gè)原子組成的雜環(huán)基，是指包含5個(gè)環(huán)原子的單價(jià)或多價(jià)的，飽和或部分不飽和的，非芳香性的單環(huán)，其中至少一個(gè)環(huán)原子選自氮、硫和氧原子。在另一些實(shí)施方案中，雜環(huán)基為6個(gè)原子組成的雜環(huán)基，是指包含6個(gè)環(huán)原子的單價(jià)或多價(jià)的，飽和或部分不飽和的，非芳香性的單環(huán)，其中至少一個(gè)環(huán)原子選自氮、硫和氧原子?！半s環(huán)基”同樣也包括雜環(huán)基團(tuán)與飽和或部分不飽和環(huán)或雜環(huán)稠合所形成的基團(tuán)。雜環(huán)的實(shí)例包括，但并不限于，吡咯烷基、四氫呋喃基、二氫呋喃基、四氫噻吩基、四氫吡喃基、二氫吡喃基、四氫噻喃基、哌啶基、嗎啉基、硫代嗎啉基、噻噁烷基、哌嗪基、高哌嗪基、氮雜環(huán)丁基、氧雜環(huán)丁基、硫雜環(huán)丁基、高哌啶基、環(huán)氧丙基、氮雜環(huán)庚基、氧雜環(huán)庚基、硫雜環(huán)庚基、氧氮雜卓基、二氮雜卓基、硫氮雜卓基、2-吡咯啉基、3-吡咯啉基、二氫吲哚基、2h-吡喃基、4h-吡喃基、二氧雜環(huán)己基、1,3-二氧戊基、吡唑啉基、二噻烷基、二噻茂烷基、二氫噻吩基、吡唑烷基咪唑啉基、咪唑烷基、1,2,3,4-四氫異喹啉基、3-氮雜雙環(huán)[3.1.0]己基、3-氮雜雙環(huán)[4.1.0]庚基、氮雜雙環(huán)[2.2.2]己基、3h-吲哚基喹嗪基和n-吡啶基尿素。雜環(huán)基團(tuán)的實(shí)例還包括，1,1-二氧代硫代嗎啉基，其中環(huán)上碳原子被氧代(＝o)取代的實(shí)例實(shí)例包括，但不限于嘧啶二酮基、1,2,4-噻二唑-5(4h)-酮基，1,2,4-噁二唑-5(4h)-酮基，1h-1,2,4-三唑-5(4h)-酮基等，其中環(huán)上碳原子被基團(tuán)＝s所取代的實(shí)例包括，但不限于1,2,4-噁二唑-5(4h)-硫酮基，1,3,4-噁二唑-2(3h)-硫酮基等。

135、術(shù)語“雜原子”表示一個(gè)或多個(gè)o、s、n、p和si，包括n、s和p任何氧化態(tài)的形式；伯、仲、叔胺和季銨鹽的形式；或者雜環(huán)中氮原子上的氫被取代的形式，例如，n(像3,4-二氫-2h-吡咯基中的n)，nh(像吡咯烷基中的nh)或nr(像n-取代的吡咯烷基中的nr，其中，r表示本發(fā)明所述的取代基)。

136、術(shù)語“烷硅基”和“烷基硅基”表示甲硅基(-sih3)基團(tuán)中的氫原子分別獨(dú)立地被1個(gè)、2個(gè)或3個(gè)烷基基團(tuán)所取代。其中，一些實(shí)施方案是，烷基硅基是1個(gè)、2個(gè)或3個(gè)c1-12烷基連接到硅原子上形成的較低級的烷基硅基基團(tuán)。在另一些實(shí)施方案中，烷硅基是1個(gè)、2個(gè)或3個(gè)c1-9烷基連接到硅原子上形成的較低級的烷基硅基基團(tuán)。在另一些實(shí)施方案中，烷硅基是1個(gè)、2個(gè)或3個(gè)c1-6烷基連接到硅原子上形成的較低級的烷基硅基基團(tuán)。在另一些實(shí)施方案中，烷硅基是1個(gè)、2個(gè)或3個(gè)c1-4烷基連接到硅原子上形成的較低級的烷基硅基基團(tuán)。還在另外一些實(shí)施方案中，烷硅基是1個(gè)、2個(gè)或3個(gè)c1-3烷基連接到硅原子上形成的較低級的烷基硅基基團(tuán)。合適的烷硅基基團(tuán)可以是單烷基硅基、二烷基硅基或三烷基硅基，烷硅基的實(shí)例包括，但并不限于，三甲基硅基(-si(ch3)3)、三乙基硅基(-si(ch2ch3)3)、三正丙基硅基(-si(ch2ch2ch3)3)等等。

137、術(shù)語“羥基保護(hù)基”是指一個(gè)不穩(wěn)定的化學(xué)部分，它在一個(gè)或多個(gè)合成程序過程中保護(hù)羥基基團(tuán)不發(fā)生不希望的反應(yīng)。在該一個(gè)或多個(gè)合成程序后，該羥基保護(hù)基可被選擇性地去除。本領(lǐng)域中已知的羥基保護(hù)基總體上描述于t.h.格林(greene)和p.g.m.伍茲(wuts)，有機(jī)合成中的保護(hù)基(protective?groups?in?organic?synthesis)，第3版，約翰威利父子公司(john?wiley&sons)，紐約(1999)中。本發(fā)明羥基保護(hù)基的例子包括但不限于c1-12烷基、芐氧基羰基、4-硝基芐氧基羰基、4-溴芐氧基羰基、4-甲氧基芐氧基羰基、甲氧羰基、叔-丁氧基羰基、異丙氧基羰基、聯(lián)苯基甲氧基羰基、2,2,2-三氯乙氧基羰基、2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基羰基、2-糠基氧基羰基、烯丙氧羰基、乙?；?ac或-c(o)ch3)、甲酰基、氯乙酰基、三氟乙?；⒓籽趸阴；⒈窖趸阴；?、苯甲?；?bz或-c(o)c6h5)、c1-10烷基(甲基，叔丁基等)、2,2,2-三氯乙基、2-三甲基甲硅烷基乙基、1,1-二甲基-2-丙烯基、3-甲基-3-丁烯基、烯丙基、c6-10芳基c1-4烷基(如芐基，苯乙基等)、對甲氧基芐基二苯甲基、三苯甲基(triphenylmethyl或trityl)、四氫呋喃基、甲氧基甲基、甲基硫代甲基、芐氧基甲基、2,2,2-三氯乙氧基甲基、2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基甲基、甲磺?；妆交酋；?、c1-10烷硅基(如三甲基甲硅烷基(tms或-si(ch3)3))、三乙基甲硅烷基、三異丙基甲硅烷基、mmtr、dmtr或4’,4’,4’-三甲氧基三苯甲基等。

138、術(shù)語“氨基保護(hù)基”是指在合成程序過程中保護(hù)氨基基團(tuán)不發(fā)生不希望的反應(yīng)的不穩(wěn)定化學(xué)部分。在該一個(gè)或多個(gè)合成程序后，如此處所述的氨基保護(hù)基可被選擇性地去除。本領(lǐng)域中已知的氨基保護(hù)基總體上描述于t.h.格林(greene)和p.g.m.伍茲(wuts)，有機(jī)合成中的保護(hù)基(protective?groups?in?organic?synthesis)，第3版，約翰威利父子公司(john?wiley&sons)，紐約(1999)中。氨基保護(hù)基的實(shí)例包括但不限于乙?；?、叔丁氧基羰基、9-芴基甲氧基羰基以及芐氧基羰基等。

139、術(shù)語“固相支持體”具體表示在其上可發(fā)生寡核苷酸合成的任何顆粒、珠或表面。例如無機(jī)固相支持體和有機(jī)固相支持體，均可選擇用于在本發(fā)明實(shí)施例中。無機(jī)固相支持體優(yōu)選地選自硅膠和可控微孔玻璃珠(controlled-pore?glass，簡稱cpg)。有機(jī)固相支持體為樹脂，優(yōu)選大孔樹脂，更優(yōu)選高度交聯(lián)的聚苯乙烯、tentagel(由低交聯(lián)的聚苯乙烯基質(zhì)組成的接枝共聚物，聚乙二醇(peg或poe)接枝于其上)、聚乙烯乙酸酯(pva)、波羅斯(poros)-聚苯乙烯/二乙烯基苯的共聚物、氨基聚乙二醇和纖維素等。本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施例利用基于cpg的固相支持體。許多其他可購買的固相支持體均屬于本發(fā)明。