本發(fā)明涉及具有替代凝血因子viii(fviii)的輔因子功能的活性的多特異性抗原結(jié)合分子及其藥物制劑。本發(fā)明還涉及重鏈和輕鏈之間的締合受到調(diào)節(jié)的抗原結(jié)合分子,其中重鏈和輕鏈之間的締合受到調(diào)節(jié)的抗原結(jié)合分子的產(chǎn)生方法以及用于調(diào)節(jié)抗原結(jié)合分子的重鏈和輕鏈之間的締合的方法。
背景技術(shù):
1、血友病a是由凝血因子viii(fviii)功能的遺傳性降低或缺乏引起的出血異常。針對出血,一般向血友病a患者施用fviii制劑(按需施用)。在近些年,fviii制劑還被預(yù)防性地施用以預(yù)防出血事件(預(yù)防性的施用;非專利文獻(xiàn)1和2)。fviii制劑在血液中的半衰期約為12至16小時。因此,為了持續(xù)預(yù)防,將fviii制劑一周三次施用于患者(非專利文獻(xiàn)3和4)。在按需施用中,還在必要時定期額外施用fviii制劑以預(yù)防再出血。此外,fviii制劑在靜脈內(nèi)施用。因此,強(qiáng)烈需要比fviii制劑具有更少負(fù)擔(dān)的藥劑。
2、偶爾,在血友病患者中產(chǎn)生抗fviii抗體(抑制劑)。這種抑制劑抵消了fviii制劑的效果。對于已經(jīng)產(chǎn)生抑制劑的患者(抑制劑患者)的出血,施用旁路制劑。它們的作用機(jī)制不依賴于fviii功能,即通過活化的凝血因子ix(fixa)催化凝血因子x(fx)活化的功能。因此,在一些情況下,旁路制劑不能充分阻止出血。因此,強(qiáng)烈需要不受抑制劑存在影響并且可以功能性替代fviii的藥劑。
3、作為解決這些問題的手段,替代fviii的功能的雙特異性抗體及其用途已被報道(專利文獻(xiàn)1、2、3和4)。針對fixa和fx的雙特異性抗體可以通過將這兩個因子彼此靠近放置以表現(xiàn)出fviii輔因子功能替代活性來替代fviii的功能(非專利文獻(xiàn)5)。據(jù)報道,抗體的fviii輔因子功能替代活性可通過優(yōu)化對fixa和fx的親和力及取向而改善(非專利文獻(xiàn)6)。另外,已知抗體的fviii輔因子功能替代活性受igg同種型、二硫鍵模式、鉸鏈區(qū)的氨基酸序列以及在fc區(qū)中糖鏈的存在或不存在的影響(非專利文獻(xiàn)7)。據(jù)報道,為這些抗體之一的具有高fviii輔因子功能替代活性的ace910(艾美賽珠單抗,emicizumab)在血友病的猴模型中表現(xiàn)出止血效果(非專利文獻(xiàn)8和9)。此外,在對健康受試者的臨床試驗中,證實ace910(艾美賽珠單抗)實現(xiàn)優(yōu)異的藥代動力學(xué)(長半衰期)和耐受性(非專利文獻(xiàn)10),并且在有或沒有抑制劑的血友病a患者的臨床試驗中,與ace910(艾美賽珠單抗)施用前相比,ace910(艾美賽珠單抗)施用顯著減少了出血率(非專利文獻(xiàn)11)。
4、如上所述,在臨床試驗中,針對ace910(艾美賽珠單抗)觀察到減少出血率的效果。但是,在使用fviii缺乏血漿的體外凝血酶生成測定中,通過ace910(艾美賽珠單抗)對凝血酶生成的最大量(峰高)的改善效果低于fviii的正常水平存在下生成的量,其為100u/dl(非專利文獻(xiàn)8)。因此,期望進(jìn)一步增強(qiáng)藥物功效。此外,考慮到對血友病a患者的便利性,需要具有fviii輔因子功能替代活性的雙特異性抗體,其可以通過比活性的提高等進(jìn)一步降低施用劑量。
5、通常,在某些情況下,抗體藥物充當(dāng)抗原以誘導(dǎo)抗抗體(ada)產(chǎn)生(非專利文獻(xiàn)12)。由于對于具有ada(抗ace910(艾美賽珠單抗)獨特型抗體)出現(xiàn)的血友病患者,ace910(艾美賽珠單抗)的連續(xù)施用變得困難,因此需要可以施用于此類患者的具有fviii輔因子功能替代活性的雙特異性抗體。
6、ace910(艾美賽珠單抗)是通過將許多氨基酸取代引入先導(dǎo)抗體hbs1從多個方面進(jìn)行優(yōu)化的雙特異性抗體。先導(dǎo)抗體hbs1是通過人源化雙特異性抗體獲得的,所述雙特異性抗體通過動物免疫獲取,其識別fix和/或fixa,以及fx。ace910(艾美賽珠單抗)具有高的fviii輔因子功能替代活性(非專利文獻(xiàn)6和專利文獻(xiàn)4)。然而,為了增強(qiáng)藥物功效和改善比活性,需要替代fviii的功能的雙特異性抗體,該抗體具有比ace910(艾美賽珠單抗)更高的最大活性(最大fviii輔因子功能替代活性),并且可以在低于ace910(艾美賽珠單抗)的濃度下表現(xiàn)出fviii輔因子功能替代活性。然而,至今,從濃度和最大活性的觀點來看,沒有關(guān)于與ace910(艾美賽珠單抗)相比,具有顯著高的fviii輔因子功能替代活性的雙特異性抗體的報道(專利文獻(xiàn)4和5)。
7、先前已經(jīng)報道了幾種方法作為用于制備具有人恒定區(qū)的igg型雙特異性抗體(具有人恒定區(qū)的igg型抗體,在一個臂上對抗原a具有結(jié)合特異性,且在另一個臂上對抗原b具有結(jié)合特異性)的方法。通常,igg型雙特異性抗體由兩種類型的h鏈(即針對抗原a的h鏈和針對抗原b的h鏈)和兩種類型的l鏈(即針對抗原a的l鏈和針對抗原b的l鏈)組成。當(dāng)表達(dá)此類igg型雙特異性抗體時,由于表達(dá)了兩種類型的h鏈和兩種類型的l鏈,作為h2l2的組合,十種類型的組合是可能的。在這些中,有一種類型的組合具有所需的結(jié)合特異性(在一個臂上具有對抗原a的結(jié)合特異性,且在另一個臂上具有對抗原b的結(jié)合特異性的igg)。因此,為了獲取所需的雙特異性抗體,有必要從十種類型的抗體中純化一種類型的目標(biāo)抗體,這效率極低且困難。
8、已經(jīng)報道了用于解決該問題的方法,所述方法涉及通過在igg?h鏈的ch3區(qū)中取代氨基酸來優(yōu)先分泌具有針對抗原a的h鏈和針對抗原b的h鏈的異源組合的igg(專利文獻(xiàn)6、7、8和9,以及非專利文件13和14)。在這些方法中,已經(jīng)報道了使用以“杵(knob)”和“臼(hole)”的形式的物理障礙的方法,以及使用電荷排斥的那些方法。
9、還已經(jīng)報道了用于有效地獲得所需分子的方法,所述方法使用共同的l鏈,其中針對抗原a的l鏈和針對抗原b的l鏈存在于同一氨基酸序列上(專利文獻(xiàn)10和11)。然而,由于使用共同的l鏈有大大降低抗原親和力的可能,因此這不一定是最佳方法。因此,為了雙特異性抗體以高親和力結(jié)合至兩種抗原,優(yōu)選僅針對抗原a的l鏈和h鏈締合,以及僅針對抗原b的l鏈和h鏈締合。此外,已經(jīng)報道了允許針對每種抗原的h鏈和l鏈與可變區(qū)無關(guān)地締合的方法,該方法包括在恒定區(qū)ch1和cl結(jié)構(gòu)域中,而不是在可變區(qū)中取代氨基酸(專利文獻(xiàn)7、12和13)。然而,該方法對于有效地產(chǎn)生目標(biāo)雙特異性抗體還有許多待改進(jìn)之處。
10、[引用列表]
11、[專利文獻(xiàn)]
12、[專利文獻(xiàn)1]wo?2005/035754
13、[專利文獻(xiàn)2]wo?2005/035756
14、[專利文獻(xiàn)3]wo?2006/109592
15、[專利文獻(xiàn)4]wo?2012/067176
16、[專利文獻(xiàn)5]wo?2017/110980
17、[專利文獻(xiàn)6]wo?1996/027011
18、[專利文獻(xiàn)7]wo?2006/106905
19、[專利文獻(xiàn)8]wo?2009/089004
20、[專利文獻(xiàn)9]wo?2010/129304
21、[專利文獻(xiàn)10]wo?98/050431
22、[專利文獻(xiàn)11]wo?2006/109592
23、[專利文獻(xiàn)12]wo?2007/147901
24、[專利文獻(xiàn)13]wo?2013/065708
25、[非專利文獻(xiàn)]
26、[非專利文獻(xiàn)1]blood?58,1-13(1981)
27、[非專利文獻(xiàn)2]nature?312,330-337(1984)
28、[非專利文獻(xiàn)3]nature?312,337-342(1984)
29、[非專利文獻(xiàn)4]biochim.biophys.acta?871,268-278(1986)
30、[非專利文獻(xiàn)5]nat?med.2012oct;18(10):1570-4.
31、[非專利文獻(xiàn)6]plos?one.2013;8(2):e57479.
32、[非專利文獻(xiàn)7]mabs.2015;7(1):120-8.
33、[非專利文獻(xiàn)8]j?thromb?haemost.2014feb;12(2):206-213.
34、[非專利文獻(xiàn)9]blood.2014nov?13;124(20):3165-71.
35、[非專利文獻(xiàn)10]blood.2016,vol.127,13
36、[非專利文獻(xiàn)11]new?eng?j?med?2016,374;21,2044-2053
37、[非專利文獻(xiàn)12]self/nonself?volume?1,2010-issue?4
38、[非專利文獻(xiàn)13]protein?engineering.1996,vol.9:617-621
39、[非專利文獻(xiàn)14]nature?biotechnology.1998,vol.16:677-681
技術(shù)實現(xiàn)思路
0、發(fā)明概述
1、[本發(fā)明要解決的問題]
2、鑒于上述情況實現(xiàn)了本發(fā)明。本發(fā)明的目的是提供具有凝血因子viii(fviii)輔因子功能替代活性的多特異性抗原結(jié)合分子及含有作為活性成分的所述分子的藥物制劑。
3、此外,鑒于上述情況實現(xiàn)了本發(fā)明。本發(fā)明的另一目的是提供其中重鏈和輕鏈之間的締合受到調(diào)節(jié)的抗體,其中重鏈和輕鏈之間的締合受到調(diào)節(jié)的抗體的產(chǎn)生方法,以及用于控制抗體的重鏈和輕鏈之間的締合的方法。
4、[解決問題的手段]
5、為了獲得具有高比活性和最大fviii輔因子功能替代活性的雙特異性抗體,本發(fā)明人從人抗體文庫獲得了具有不同于ace910(艾美賽珠單抗)的序列的新型輕鏈,其具有fviii輔因子功能替代活性,并制備了雙特異性抗體,其中已在輕鏈和ace910(艾美賽珠單抗)重鏈的多個位點引入了氨基酸取代。然后,他們發(fā)現(xiàn)凝血因子ix(fix)活化抑制活性隨fviii輔因子功能替代活性的增加而增加。
6、作為專門研究的結(jié)果,本發(fā)明人成功地發(fā)現(xiàn)了雙特異性抗體,其fix活化抑制活性不升高并且其fviii輔因子功能替代活性升高。
7、此外,本發(fā)明人選擇重鏈恒定區(qū)ch1和輕鏈恒定區(qū)(cl)作為要進(jìn)行締合調(diào)節(jié)的重鏈和輕鏈區(qū),并且對ch1和cl之間的締合的調(diào)節(jié)進(jìn)行了專門研究。結(jié)果,本發(fā)明人成功地發(fā)現(xiàn),通過用彼此靜電排斥的氨基酸殘基取代存在于ch1和cl之間界面的特定氨基酸殘基,可以抑制不希望的ch1和cl締合,并且與通過使用僅向ch3中引入杵和臼的上述修飾相比,可以更有效地形成異源分子。
8、本發(fā)明基于這些發(fā)現(xiàn),并具體提供以下[1]至[25]內(nèi)容:
9、[1]具有替代凝血因子viii的功能的功能的多特異性抗原結(jié)合分子,其中所述分子包含與凝血因子ix和/或活化的凝血因子ix結(jié)合的第一抗原結(jié)合位點,以及與凝血因子x結(jié)合的第二抗原結(jié)合位點,
10、其中所述第一抗原結(jié)合位點包含重鏈可變結(jié)構(gòu)域和輕鏈可變結(jié)構(gòu)域,
11、其中所述重鏈可變結(jié)構(gòu)域(q499)包括包含seq?id?no:1的氨基酸序列的hvr-h1,包含seq?id?no:2的氨基酸序列的hvr-h2,以及包含seq?id?no:3的氨基酸序列的hvr-h3,且
12、所述輕鏈可變結(jié)構(gòu)域(qnk131)包括包含seq?id?no:162的氨基酸序列的hvr-l1,包含seq?id?no:163的氨基酸序列的hvr-l2,以及包含seq?id?no:164的氨基酸序列的hvr-l3,且
13、其中所述第二抗原結(jié)合位點包含重鏈可變結(jié)構(gòu)域和輕鏈可變結(jié)構(gòu)域,
14、其中所述重鏈可變結(jié)構(gòu)域(j327)包括包含seq?id?no:4的氨基酸序列的hvr-h1,包含seq?id?no:5的氨基酸序列的hvr-h2,以及包含seq?id?no:6的氨基酸序列的hvr-h3,且
15、所述輕鏈可變結(jié)構(gòu)域(jnl095)包括包含seq?id?no:165的氨基酸序列的hvr-l1,包含seq?id?no:166的氨基酸序列的hvr-l2,以及包含seq?id?no:167的氨基酸序列的hvr-l3;
16、其中在至少一個hvr中,一個或更多個氨基酸殘基被其他氨基酸取代,缺失或插入;
17、[2][1]所述的多特異性抗原結(jié)合分子,其中:
18、在所述第一抗原結(jié)合位點的重鏈可變結(jié)構(gòu)域中,根據(jù)kabat編號,選自在位置31、34、97、98、100、100a、100b和100e處的氨基酸殘基中的至少一個氨基酸殘基被另一個氨基酸取代或缺失,
19、在所述第一抗原結(jié)合位點的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域中,根據(jù)kabat編號,選自在位置26、27、30、31、32、53、55、92、93、95和96處的氨基酸殘基中的至少一個氨基酸殘基被另一個氨基酸取代或插入,
20、在所述第二抗原結(jié)合位點的重鏈可變結(jié)構(gòu)域中,根據(jù)kabat編號,選自在位置31、51、56、57、59、61、62、65和102處的氨基酸殘基中的至少一個氨基酸殘基被另一個氨基酸取代,
21、在所述第二抗原結(jié)合位點的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域中,根據(jù)kabat編號,選自在位置24、26、27、29、30、31、32、50、92、94、95、95a和96處的氨基酸殘基中的至少一個氨基酸殘基被取代或缺失;
22、[3][1]或[2]所述的多特異性抗原結(jié)合分子,其中:
23、在所述第一抗原結(jié)合位點的重鏈可變結(jié)構(gòu)域中,在位置31處的氨基酸殘基為組氨酸,在位置34處的氨基酸殘基為丙氨酸,在位置97處的氨基酸殘基為天冬氨酸,在位置98處的氨基酸殘基為絲氨酸,在位置100處的氨基酸殘基為天冬氨酸或谷氨酸,在位置100a處的氨基酸殘基為天冬氨酸或缺失,在位置100b處的氨基酸殘基為丙氨酸或組氨酸,或在位置100e處的氨基酸殘基為組氨酸或異亮氨酸,所述位置根據(jù)kabat編號;
24、在所述第一抗原結(jié)合位點的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域中,在位置26處的氨基酸殘基為蘇氨酸,在位置27處的氨基酸殘基為精氨酸,在位置30處的氨基酸殘基為精氨酸,在位置31處的氨基酸殘基為精氨酸,在位置32處的氨基酸殘基為天冬氨酸或谷氨酸,在位置53處的氨基酸殘基為精氨酸,在位置55處的氨基酸殘基為谷氨酸,在位置92處的氨基酸殘基為精氨酸,在位置93處的氨基酸殘基為絲氨酸或天冬氨酸,在位置95處的氨基酸殘基為脯氨酸,或在位置96處的氨基酸殘基為甘氨酸,所述位置根據(jù)kabat編號;
25、在所述第二抗原結(jié)合位點的重鏈可變結(jié)構(gòu)域中,在位置31處的氨基酸殘基為天冬酰胺、谷氨酰胺或組氨酸,在位置51處的氨基酸殘基為絲氨酸,在位置56處的氨基酸殘基為蘇氨酸或精氨酸,在位置57處的氨基酸殘基為纈氨酸,在位置59處的氨基酸殘基為絲氨酸,在位置61處的氨基酸殘基為精氨酸,在位置62處的氨基酸殘基為賴氨酸,在位置65處的氨基酸殘基為天冬酰胺或谷氨酰胺,或在位置102處的氨基酸殘基為纈氨酸,所述位置根據(jù)kabat編號;且
26、在所述第二抗原結(jié)合位點的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域中,在位置24處的氨基酸殘基為蘇氨酸,在位置26處的氨基酸殘基為谷氨酸,在位置27處的氨基酸殘基為谷氨酰胺,在位置29處的氨基酸殘基為絲氨酸,在位置30處的氨基酸殘基為谷氨酰胺、絲氨酸或谷氨酸,在位置31處的氨基酸殘基為精氨酸,在位置32處的氨基酸殘基為谷氨酰胺或谷氨酸,在位置50處的氨基酸殘基為谷氨酰胺,在位置92處的氨基酸殘基為丙氨酸,在位置94處的氨基酸殘基為天冬氨酸,在位置95處的氨基酸殘基為天冬氨酸或丙氨酸,在位置95a處的氨基酸殘基為酪氨酸或缺失,或在位置96處的氨基酸殘基為蘇氨酸,所述位置根據(jù)kabat編號;
27、[4][1]至[3]中任一項所述的多特異性抗原結(jié)合分子,其中所述第一抗原結(jié)合位點包含重鏈可變結(jié)構(gòu)域和輕鏈可變結(jié)構(gòu)域,其中所述重鏈可變結(jié)構(gòu)域包括:
28、1)包含seq?id?no:168的氨基酸序列的hvr-h1,包含seq?id?no:169的氨基酸序列的hvr-h2,以及包含seq?id?no:170的氨基酸序列的hvr-h3(qh01),;
29、2)包含seq?id?no:171的氨基酸序列的hvr-h1,包含seq?id?no:172的氨基酸序列的hvr-h2,以及包含seq?id?no:173的氨基酸序列的hvr-h3(qh02),;
30、3)包含seq?id?no:174的氨基酸序列的hvr-h1,包含seq?id?no:175的氨基酸序列的hvr-h2,以及包含seq?id?no:176的氨基酸序列的hvr-h3(qh03);
31、4)包含seq?id?no:177的氨基酸序列的hvr-h1,包含seq?id?no:178的氨基酸序列的hvr-h2,以及包含seq?id?no:179的氨基酸序列的hvr-h3(qh04);
32、5)包含seq?id?no:180的氨基酸序列的hvr-h1,包含seq?id?no:181的氨基酸序列的hvr-h2,以及包含seq?id?no:182的氨基酸序列的hvr-h3(qh06);或
33、6)包含seq?id?no:183的氨基酸序列的hvr-h1,包含seq?id?no:184的氨基酸序列的hvr-h2,以及包含seq?id?no:185的氨基酸序列的hvr-h3(qh07);且
34、所述輕鏈可變結(jié)構(gòu)域包括:
35、1)包含seq?id?no:186的氨基酸序列的hvr-l1,包含seq?id?no:187的氨基酸序列的hvr-l2,以及包含seq?id?no:188的氨基酸序列的hvr-l3(ql21);
36、2)包含seq?id?no:189的氨基酸序列的hvr-l1,包含seq?id?no:190的氨基酸序列的hvr-l2,以及包含seq?id?no:191的氨基酸序列的hvr-l3(ql22);
37、3)包含seq?id?no:192的氨基酸序列的hvr-l1,包含seq?id?no:193的氨基酸序列的hvr-l2,以及包含seq?id?no:194的氨基酸序列的hvr-l3(ql23);
38、4)包含seq?id?no:195的氨基酸序列的hvr-l1,包含seq?id?no:196的氨基酸序列的hvr-l2,以及包含seq?id?no:197的氨基酸序列的hvr-l3(ql24);
39、5)包含seq?id?no:198的氨基酸序列的hvr-l1,包含seq?id?no:199的氨基酸序列的hvr-l2,以及包含seq?id?no:200的氨基酸序列的hvr-l3(ql25);
40、6)包含seq?id?no:201的氨基酸序列的hvr-l1,包含seq?id?no:202的氨基酸序列的hvr-l2,以及包含seq?id?no:203的氨基酸序列的hvr-l3(ql26);
41、7)包含seq?id?no:204的氨基酸序列的hvr-l1,包含seq?id?no:205的氨基酸序列的hvr-l2,以及包含seq?id?no:206的氨基酸序列的hvr-l3(ql28);
42、8)包含seq?id?no:207的氨基酸序列的hvr-l1,包含seq?id?no:208的氨基酸序列的hvr-l2,以及包含seq?id?no:209的氨基酸序列的hvr-l3(ql29);
43、9)包含seq?id?no:210的氨基酸序列的hvr-l1,包含seq?id?no:211的氨基酸序列的hvr-l2,以及包含seq?id?no:212的氨基酸序列的hvr-l3(ql30);
44、10)包含seq?id?no:213的氨基酸序列的hvr-l1,包含seq?id?no:214的氨基酸序列的hvr-l2,以及包含seq?id?no:215的氨基酸序列的hvr-l3(ql31);
45、11)包含seq?id?no:216的氨基酸序列的hvr-l1,包含seq?id?no:217的氨基酸序列的hvr-l2,以及包含seq?id?no:218的氨基酸序列的hvr-l3(ql32);或
46、12)包含seq?id?no:219的氨基酸序列的hvr-l1,包含seq?id?no:220的氨基酸序列的hvr-l2,以及包含seq?id?no:221的氨基酸序列的hvr-l3(ql33),且
47、其中所述第二抗原結(jié)合位點包含重鏈可變結(jié)構(gòu)域和輕鏈可變結(jié)構(gòu)域,其中所述重鏈可變結(jié)構(gòu)域包括:
48、1)包含seq?id?no:222的氨基酸序列的hvr-h1,包含seq?id?no:223的氨基酸序列的hvr-h2,以及包含seq?id?no:224的氨基酸序列的hvr-h3(jh01);
49、2)包含seq?id?no:225的氨基酸序列的hvr-h1,包含seq?id?no:226的氨基酸序列的hvr-h2,以及包含seq?id?no:227的氨基酸序列的hvr-h3(jh02);
50、3)包含seq?id?no:228的氨基酸序列的hvr-h1,包含seq?id?no:229的氨基酸序列的hvr-h2,以及包含seq?id?no:230的氨基酸序列的hvr-h3(jh03);
51、4)包含seq?id?no:231的氨基酸序列的hvr-h1,包含seq?id?no:232的氨基酸序列的hvr-h2,以及包含seq?id?no:233的氨基酸序列的hvr-h3(jh04);
52、5)包含seq?id?no:234的氨基酸序列的hvr-h1,包含seq?id?no:235的氨基酸序列的hvr-h2,以及包含seq?id?no:236的氨基酸序列的hvr-h3(jh05);
53、6)包含seq?id?no:237的氨基酸序列的hvr-h1,包含seq?id?no:238的氨基酸序列的hvr-h2,以及包含seq?id?no:239的氨基酸序列的hvr-h3(jh06);
54、7)包含seq?id?no:240的氨基酸序列的hvr-h1,包含seq?id?no:241的氨基酸序列的hvr-h2,以及包含seq?id?no:242的氨基酸序列的hvr-h3(jh07);
55、8)包含seq?id?no:243的氨基酸序列的hvr-h1,包含seq?id?no:244的氨基酸序列的hvr-h2,以及包含seq?id?no:245的氨基酸序列的hvr-h3(jh08);
56、9)包含seq?id?no:246的氨基酸序列的hvr-h1,包含seq?id?no:247的氨基酸序列的hvr-h2,以及包含seq?id?no:248的氨基酸序列的hvr-h3(jh09);
57、10)包含seq?id?no:249的氨基酸序列的hvr-h1,包含seq?id?no:250的氨基酸序列的hvr-h2,以及包含seq?id?no:251的氨基酸序列的hvr-h3(jh10);或
58、11)包含seq?id?no:252的氨基酸序列的hvr-h1,包含seq?id?no:253的氨基酸序列的hvr-h2,以及包含seq?id?no:254的氨基酸序列的hvr-h3(jh11),且
59、所述輕鏈可變結(jié)構(gòu)域包括:
60、1)包含seq?id?no:255的氨基酸序列的hvr-l1,包含seq?id?no:256的氨基酸序列的hvr-l2,以及包含seq?id?no:257的氨基酸序列的hvr-l3(jl01);
61、2)包含seq?id?no:258的氨基酸序列的hvr-l1,包含seq?id?no:259的氨基酸序列的hvr-l2,以及包含seq?id?no:260的氨基酸序列的hvr-l3(jl02);
62、3)包含seq?id?no:261的氨基酸序列的hvr-l1,包含seq?id?no:262的氨基酸序列的hvr-l2,以及包含seq?id?no:263的氨基酸序列的hvr-l3(jl03);
63、4)包含seq?id?no:264的氨基酸序列的hvr-l1,包含seq?id?no:265的氨基酸序列的hvr-l2,以及包含seq?id?no:266的氨基酸序列的hvr-l3(jl04);
64、5)包含seq?id?no:267的氨基酸序列的hvr-l1,包含seq?id?no:268的氨基酸序列的hvr-l2,以及包含seq?id?no:269的氨基酸序列的hvr-l3(jl05);
65、6)包含seq?id?no:270的氨基酸序列的hvr-l1,包含seq?id?no:271的氨基酸序列的hvr-l2,以及包含seq?id?no:272的氨基酸序列的hvr-l3(jl06);
66、7)包含seq?id?no:273的氨基酸序列的hvr-l1,包含seq?id?no:274的氨基酸序列的hvr-l2,以及包含seq?id?no:275的氨基酸序列的hvr-l3(jl07);
67、8)包含seq?id?no:276的氨基酸序列的hvr-l1,包含seq?id?no:277的氨基酸序列的hvr-l2,以及包含seq?id?no:278的氨基酸序列的hvr-l3(jl08);
68、9)包含seq?id?no:279的氨基酸序列的hvr-l1,包含seq?id?no:280的氨基酸序列的hvr-l2,以及包含seq?id?no:281的氨基酸序列的hvr-l3(jl09);
69、10)包含seq?id?no:282的氨基酸序列的hvr-l1,包含seq?id?no:283的氨基酸序列的hvr-l2,以及包含seq?id?no:284的氨基酸序列的hvr-l3(jl10);或
70、11)包含seq?id?no:285的氨基酸序列的hvr-l1,包含seq?id?no:286的氨基酸序列的hvr-l2,以及包含seq?id?no:287的氨基酸序列的hvr-l3(jl11);
71、[5][1]所述的多特異性抗原結(jié)合分子,其中所述第一抗原結(jié)合位點包含seq?idno:45(q499)的重鏈可變結(jié)構(gòu)域和seq?id?no:13(qnk131)的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域,且所述第二抗原結(jié)合位點包含seq?id?no:46(j327)的重鏈可變結(jié)構(gòu)域和seq?id?no:31(jnl095)的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域,
72、其中在至少一個重鏈可變結(jié)構(gòu)域或輕鏈可變結(jié)構(gòu)域中,一個或更多個氨基酸殘基被其他氨基酸取代,缺失或插入;
73、[6][5]所述的多特異性抗原結(jié)合分子,其中:
74、在所述第一抗原結(jié)合位點的重鏈可變結(jié)構(gòu)域中,根據(jù)kabat編號,選自在位置31、34、39、97、98、100、100a、100b和100e處的氨基酸殘基中的至少一個氨基酸殘基被另一個氨基酸取代或缺失,
75、在所述第一抗原結(jié)合位點的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域中,根據(jù)kabat編號,選自在位置26、27、30、31、32、38、45、53、55、60、70、76、79、80、83、85、92、93、95和96處的氨基酸殘基中的至少一個氨基酸殘基被另一個氨基酸取代或插入,
76、在所述第二抗原結(jié)合位點的重鏈可變結(jié)構(gòu)域中,根據(jù)kabat編號,選自在位置28、31、39、51、56、57、59、61、62、65、67、73、82b和102處的氨基酸殘基中的至少一個氨基酸殘基被另一個氨基酸取代,且
77、在所述第二抗原結(jié)合位點的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域中,根據(jù)kabat編號,選自在位置3、8、15、24、26、27、29、30、31、32、38、48、49、50、79、92、94、95、95a和96處的氨基酸殘基中的至少一個氨基酸殘基被另一個氨基酸取代或缺失;
78、[7][5]或[6]所述的多特異性抗原結(jié)合分子,其中:
79、在所述第一抗原結(jié)合位點的重鏈可變結(jié)構(gòu)域中,在位置31處的氨基酸殘基為組氨酸,在位置34處的氨基酸殘基為丙氨酸,在位置39處的氨基酸殘基為谷氨酸,在位置97處的氨基酸殘基為天冬氨酸,在位置98處的氨基酸殘基為絲氨酸,在位置100處的氨基酸殘基為天冬氨酸或谷氨酸,在位置100a處的氨基酸殘基為天冬氨酸或缺失,在位置100b處的氨基酸殘基為丙氨酸或組氨酸,或在位置100e處的氨基酸殘基為組氨酸或異亮氨酸,所述位置根據(jù)kabat編號,
80、在所述第一抗原結(jié)合位點的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域中,在位置26處的氨基酸殘基為蘇氨酸,在位置27處的氨基酸殘基為精氨酸,在位置30處的氨基酸殘基為精氨酸,在位置31處的氨基酸殘基為精氨酸,在位置32處的氨基酸殘基為天冬氨酸或谷氨酸,在位置38處的氨基酸殘基為賴氨酸,在位置45處的氨基酸殘基為谷氨酸,在位置53處的氨基酸殘基為精氨酸,在位置55處的氨基酸殘基為谷氨酸,在位置60處的氨基酸殘基為天冬氨酸,在位置70處的氨基酸殘基為天冬氨酸,在位置76處的氨基酸殘基為天冬酰胺,在位置79處的氨基酸殘基為谷氨酸,在位置80處的氨基酸殘基為脯氨酸或丙氨酸,在位置83處的氨基酸殘基為甲硫氨酸或丙氨酸,在位置85處的氨基酸殘基為蘇氨酸,在位置92處的氨基酸殘基為精氨酸,在位置93處的氨基酸殘基為絲氨酸或天冬氨酸,在位置95處的氨基酸殘基為脯氨酸,或在位置96處的氨基酸殘基為甘氨酸,所述位置根據(jù)kabat編號,
81、在所述第二抗原結(jié)合位點的重鏈可變結(jié)構(gòu)域中,在位置28處的氨基酸殘基為谷氨酸,在位置31處的氨基酸殘基為天冬酰胺,谷氨酰胺或組氨酸,在位置39處的氨基酸殘基為賴氨酸,在位置51處的氨基酸殘基為絲氨酸,在位置56處的氨基酸殘基為蘇氨酸或精氨酸,在位置57處的氨基酸殘基為纈氨酸,在位置59處的氨基酸殘基為絲氨酸,在位置61處的氨基酸殘基為精氨酸,在位置62處的氨基酸殘基為賴氨酸,在位置65處的氨基酸殘基為天冬酰胺或谷氨酰胺,在位置67處的氨基酸殘基為亮氨酸,在位置73處的氨基酸殘基為異亮氨酸,在位置82b處的氨基酸殘基為谷氨酸,或在位置102處的氨基酸殘基為纈氨酸,所述位置根據(jù)kabat編號,且
82、在所述第二抗原結(jié)合位點的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域中,在位置3處的氨基酸殘基為谷氨酸,在位置8處的氨基酸殘基為脯氨酸,在位置15處的氨基酸殘基為亮氨酸,在位置24處的氨基酸殘基為蘇氨酸,在位置26處的氨基酸殘基為谷氨酸,在位置27處的氨基酸殘基為谷氨酰胺,在位置29處的氨基酸殘基為絲氨酸,在位置30處的氨基酸殘基為谷氨酰胺,絲氨酸或谷氨酸,在位置31處的氨基酸殘基為精氨酸,在位置32處的氨基酸殘基為谷氨酰胺或谷氨酸,在位置38處的氨基酸殘基為谷氨酸,在位置48處的氨基酸殘基為異亮氨酸,在位置49處的氨基酸殘基為酪氨酸,在位置50處的氨基酸殘基為谷氨酰胺,在位置79處的氨基酸殘基為谷氨酸,在位置92處的氨基酸殘基為丙氨酸,在位置94處的氨基酸殘基為天冬氨酸,在位置95處的氨基酸殘基為天冬氨酸或丙氨酸,在位置95a處的氨基酸殘基為酪氨酸或缺失,或在位置96處的氨基酸殘基為蘇氨酸,所述位置根據(jù)kabat編號;
83、[8][1]至[7]中任一項所述的多特異性抗原結(jié)合分子,其中
84、所述第一抗原結(jié)合位點包括:
85、重鏈可變結(jié)構(gòu)域(qh),其包含seq?id?no:56、seq?id?no:57、seq?id?no:58、seqid?no:59、或seq?id?no:60的氨基酸序列,以及輕鏈可變結(jié)構(gòu)域(ql),其包含seq?id?no:61、seq?id?no:62、seq?id?no:63、seq?id?no:64、seq?id?no:65、seq?id?no:66、seq?idno:67、seq?id?no:68、seq?id?no:69、seq?id?no:70、seq?id?no:71或seq?id?no:72的氨基酸序列;以及
86、所述第二抗原結(jié)合位點包括:
87、重鏈可變結(jié)構(gòu)域(jh),其包含seq?id?no:73、seq?id?no:74、seq?id?no:75、seqid?no:76、seq?id?no:77、seq?id?no:78、seq?id?no:79、seq?id?no:80、seq?id?no:81、seqid?no:82或seq?id?no:83的氨基酸序列,以及
88、輕鏈可變結(jié)構(gòu)域(jl),其包含seq?id?no:84、seq?id?no:85、seq?idno:86、seq?idno:87、seq?id?no:88、seq?id?no:89、seq?id?no:90、seq?id?no:91、seq?id?no:92、seq?idno:93或seq?id?no:94的氨基酸序列;
89、[9][1]至[8]中任一項所述的多特異性抗原結(jié)合分子,其中所述第一抗原結(jié)合位點包括包含以下(1)或(2)中闡述的氨基酸序列的恒定區(qū),且所述第二抗原結(jié)合位點包括包含以下(1)或(2)中闡述的氨基酸序列的恒定區(qū),所述恒定區(qū)與第一抗原結(jié)合位點所包括的恒定區(qū)不同:
90、(1)作為重鏈恒定區(qū)的seq?id?no:119和作為輕鏈恒定區(qū)的seq?id?no:100;
91、(2)作為重鏈恒定區(qū)的seq?id?no:118和作為輕鏈恒定區(qū)的seq?id?no:102;
92、[10][1]至[9]中任一項所述的多特異性抗原結(jié)合分子,其為多特異性抗體或雙特異性抗體;
93、[11]雙特異性抗體,其包含與凝血因子ix和/或活化的凝血因子ix結(jié)合的第一抗體重鏈和第一抗體輕鏈,以及與凝血因子x結(jié)合的第二抗體重鏈和第二抗體輕鏈,其中所述雙特異性抗體為以下(a)至(v)中的任一種:
94、(a)雙特異性抗體(qh01/ql21//jh01/jl01),其包括包含seq?id?no:120的氨基酸序列的第一抗體重鏈,包含seq?id?no:126的氨基酸序列的第一抗體輕鏈,包含seq?id?no:138的氨基酸序列的第二抗體重鏈,以及包含seq?id?no:149的氨基酸序列的第二抗體輕鏈;
95、(b)雙特異性抗體(qh02/ql22//jh01/jl01),其包括包含seq?id?no:121的氨基酸序列的第一抗體重鏈,包含seq?id?no:127的氨基酸序列的第一抗體輕鏈,包含seq?id?no:138的氨基酸序列的第二抗體重鏈,以及包含seq?id?no:149的氨基酸序列的第二抗體輕鏈;
96、(c)雙特異性抗體(qh03/ql23//jh02/jl02),其包括包含seq?id?no:122的氨基酸序列的第一抗體重鏈,包含seq?id?no:128的氨基酸序列的第一抗體輕鏈,包含seq?id?no:139的氨基酸序列的第二抗體重鏈,以及包含seq?id?no:150的氨基酸序列的第二抗體輕鏈;
97、(d)雙特異性抗體(qh03/ql24//jh02/jl02),其包括包含seq?id?no:122的氨基酸序列的第一抗體重鏈,包含seq?id?no:129的氨基酸序列的第一抗體輕鏈,包含seq?id?no:139的氨基酸序列的第二抗體重鏈,以及包含seq?id?no:150的氨基酸序列的第二抗體輕鏈;
98、(e)雙特異性抗體(qh02/ql22//jh03/jl03),其包括包含seq?id?no:121的氨基酸序列的第一抗體重鏈,包含seq?id?no:127的氨基酸序列的第一抗體輕鏈,包含seq?id?no:140的氨基酸序列的第二抗體重鏈,以及包含seq?id?no:151的氨基酸序列的第二抗體輕鏈;
99、(f)雙特異性抗體(qh02/ql22//jh04/jl04),其包括包含seq?id?no:121的氨基酸序列的第一抗體重鏈,包含seq?id?no:127的氨基酸序列的第一抗體輕鏈,包含seq?id?no:141的氨基酸序列的第二抗體重鏈,以及包含seq?id?no:152的氨基酸序列的第二抗體輕鏈;
100、(g)雙特異性抗體(qh02/ql22//jh02/jl02),其包括包含seq?id?no:121的氨基酸序列的第一抗體重鏈,包含seq?id?no:127的氨基酸序列的第一抗體輕鏈,包含seq?id?no:139的氨基酸序列的第二抗體重鏈,以及包含seq?id?no:150的氨基酸序列的第二抗體輕鏈;
101、(h)雙特異性抗體(qh04/ql25//jh02/jl02),其包括包含seq?id?no:123的氨基酸序列的第一抗體重鏈,包含seq?id?no:130的氨基酸序列的第一抗體輕鏈,包含seq?id?no:139的氨基酸序列的第二抗體重鏈,以及包含seq?id?no:150的氨基酸序列的第二抗體輕鏈;
102、(i)雙特異性抗體(qh04/ql26//jh02/jl02),其包括包含seq?id?no:123的氨基酸序列的第一抗體重鏈,包含seq?id?no:131的氨基酸序列的第一抗體輕鏈,包含seq?id?no:139的氨基酸序列的第二抗體重鏈,以及包含seq?id?no:150的氨基酸序列的第二抗體輕鏈;
103、(j)雙特異性抗體(qh04/ql26//jh05/jl05),其包括包含seq?id?no:123的氨基酸序列的第一抗體重鏈,包含seq?id?no:131的氨基酸序列的第一抗體輕鏈,包含seq?id?no:142的氨基酸序列的第二抗體重鏈,以及包含seq?id?no:153的氨基酸序列的第二抗體輕鏈;
104、(k)雙特異性抗體(qh04/ql28//jh05/jl05),其包括包含seq?id?no:123的氨基酸序列的第一抗體重鏈,包含seq?id?no:132的氨基酸序列的第一抗體輕鏈,包含seq?id?no:142的氨基酸序列的第二抗體重鏈,以及包含seq?id?no:153的氨基酸序列的第二抗體輕鏈;
105、(l)雙特異性抗體(qh04/ql28//jh06/jl06),其包括包含seq?id?no:123的氨基酸序列的第一抗體重鏈,包含seq?id?no:132的氨基酸序列的第一抗體輕鏈,包含seq?id?no:143的氨基酸序列的第二抗體重鏈,以及包含seq?id?no:154的氨基酸序列的第二抗體輕鏈;
106、(m)雙特異性抗體(qh04/ql29//jh05/jl05),其包括包含seq?id?no:123的氨基酸序列的第一抗體重鏈,包含seq?id?no:133的氨基酸序列的第一抗體輕鏈,包含seq?id?no:142的氨基酸序列的第二抗體重鏈,以及包含seq?id?no:153的氨基酸序列的第二抗體輕鏈;
107、(n)雙特異性抗體(qh04/ql29//jh06/jl06),其包括包含seq?id?no:123的氨基酸序列的第一抗體重鏈,包含seq?id?no:133的氨基酸序列的第一抗體輕鏈,包含seq?id?no:143的氨基酸序列的第二抗體重鏈,以及包含seq?id?no:154的氨基酸序列的第二抗體輕鏈;
108、(o)雙特異性抗體(qh06/ql30//jh07/jl07),其包括包含seq?id?no:124的氨基酸序列的第一抗體重鏈,包含seq?id?no:134的氨基酸序列的第一抗體輕鏈,包含seq?id?no:144的氨基酸序列的第二抗體重鏈,以及包含seq?id?no:155的氨基酸序列的第二抗體輕鏈;
109、(p)雙特異性抗體(qh04/ql31//jh08/jl08),其包括包含seq?id?no:123的氨基酸序列的第一抗體重鏈,包含seq?id?no:135的氨基酸序列的第一抗體輕鏈,包含seq?id?no:145的氨基酸序列的第二抗體重鏈,以及包含seq?id?no:156的氨基酸序列的第二抗體輕鏈;
110、(q)雙特異性抗體(qh06/ql32//jh07/jl07),其包括包含seq?id?no:124的氨基酸序列的第一抗體重鏈,包含seq?id?no:136的氨基酸序列的第一抗體輕鏈,包含seq?id?no:144的氨基酸序列的第二抗體重鏈,以及包含seq?id?no:155的氨基酸序列的第二抗體輕鏈;
111、(r)雙特異性抗體(qh06/ql32//jh09/jl09),其包括包含seq?id?no:124的氨基酸序列的第一抗體重鏈,包含seq?id?no:136的氨基酸序列的第一抗體輕鏈,包含seq?id?no:146的氨基酸序列的第二抗體重鏈,以及包含seq?id?no:157的氨基酸序列的第二抗體輕鏈;
112、(s)雙特異性抗體(qh06/ql30//jh10/jl10),其包括包含seq?id?no:124的氨基酸序列的第一抗體重鏈,包含seq?id?no:134的氨基酸序列的第一抗體輕鏈,包含seq?id?no:147的氨基酸序列的第二抗體重鏈,以及包含seq?id?no:158的氨基酸序列的第二抗體輕鏈;
113、(t)雙特異性抗體(qh07/ql33//jh11/jl11),其包括包含seq?id?no:125的氨基酸序列的第一抗體重鏈,包含seq?id?no:137的氨基酸序列的第一抗體輕鏈,包含seq?id?no:148的氨基酸序列的第二抗體重鏈,以及包含seq?id?no:159的氨基酸序列的第二抗體輕鏈;
114、(u)雙特異性抗體,其結(jié)合與由(a)至(t)中的任一種抗體識別的凝血因子ix和/或活化的凝血因子ix的表位和凝血因子x的表位相同的表位;
115、(v)雙特異性抗體,其競爭結(jié)合由(a)至(t)中的任一種抗體識別的凝血因子ix和/或活化的凝血因子ix的表位和凝血因子x的表位;
116、[12]抗原結(jié)合分子,其中重鏈和輕鏈之間的締合受到調(diào)節(jié),其中所述抗原結(jié)合分子的重鏈和輕鏈中的選自由以下(a)至(c)中所示的氨基酸殘基的組組成的群組中的一組或兩組或更多組的氨基酸殘基是彼此靜電排斥的氨基酸殘基:
117、(a)在重鏈恒定區(qū)(ch1)中根據(jù)eu編號在位置175處的氨基酸殘基,以及在輕鏈恒定區(qū)(cl)中根據(jù)kabat編號在位置180處的氨基酸殘基,
118、(b)在ch1中根據(jù)eu編號在位置175處的氨基酸殘基,以及在cl中根據(jù)kabat編號在位置131處的氨基酸殘基,
119、(c)在ch1中根據(jù)eu編號在位置147和175處的氨基酸殘基,以及在cl中根據(jù)kabat編號在位置131和180處的氨基酸殘基;
120、[13][12]所述的抗原結(jié)合分子,其中在重鏈可變區(qū)和輕鏈可變區(qū)之間形成界面的另外兩個或更多個氨基酸殘基是彼此靜電排斥的氨基酸殘基;
121、[14][13]所述的抗原結(jié)合分子,其中所述彼此靜電排斥的氨基酸殘基是選自由以下(a)或(b)中所示的氨基酸殘基的組組成的群組中的一或兩組氨基酸殘基:
122、(a)在重鏈可變區(qū)中根據(jù)kabat編號在位置39處的氨基酸殘基,以及在輕鏈可變區(qū)中根據(jù)kabat編號在位置38處的氨基酸殘基,
123、(b)在重鏈可變區(qū)中根據(jù)kabat編號在位置45處的氨基酸殘基,以及在輕鏈可變區(qū)中根據(jù)kabat編號在位置44處的氨基酸殘基;
124、[15][12]至[14]中任一項所述的抗原結(jié)合分子,其中所述彼此靜電排斥的氨基酸殘基是選自以下(x)或(y)中的一組中包括的氨基酸殘基:
125、(x)谷氨酸(e),天冬氨酸(d),
126、(y)賴氨酸(k),精氨酸(r),組氨酸(h);
127、[16][12]至[15]中任一項所述的抗原結(jié)合分子,其為雙特異性抗體;
128、[17]重鏈和輕鏈之間的締合受到調(diào)節(jié)的抗原結(jié)合分子的產(chǎn)生方法,其中所述方法包括以下步驟(1)至(3):
129、(1)修飾編碼重鏈恒定區(qū)(ch1)和輕鏈恒定區(qū)(cl)的核酸,使得選自由以下(a)至(c)中所示的氨基酸殘基的組組成的群組中的一組或兩組或更多組的氨基酸殘基彼此靜電排斥:
130、(a)在ch1中根據(jù)eu編號在位置175處的氨基酸殘基,以及在cl中根據(jù)kabat編號在位置180處的氨基酸殘基,
131、(b)在ch1中根據(jù)eu編號在位置175處的氨基酸殘基,以及在cl中根據(jù)kabat編號在位置131處的氨基酸殘基,
132、(c)在ch1中根據(jù)eu編號在位置147和175處的氨基酸殘基,以及在cl中根據(jù)kabat編號在位置131和180處的氨基酸殘基;
133、(2)將修飾的核酸引入宿主細(xì)胞,并培養(yǎng)宿主細(xì)胞使得表達(dá)核酸;
134、(3)從宿主細(xì)胞的培養(yǎng)物中收集抗原結(jié)合分子;
135、[18]調(diào)節(jié)抗原結(jié)合分子中的重鏈和輕鏈之間的締合的方法,其中所述方法包括修飾核酸,使得選自由以下(a)至(c)中所示的氨基酸殘基的組組成的群組中的一組或兩組或更多組的氨基酸殘基是彼此靜電排斥的氨基酸殘基:
136、(a)在ch1中根據(jù)eu編號在位置175處的氨基酸殘基,以及在cl中根據(jù)kabat編號在位置180處的氨基酸殘基,
137、(b)在ch1中根據(jù)eu編號在位置175處的氨基酸殘基,以及在cl中根據(jù)kabat編號在位置131處的氨基酸殘基,
138、(c)在ch1中根據(jù)eu編號在位置147和175處的氨基酸殘基,以及在cl中根據(jù)kabat編號在位置131和180處的氨基酸殘基;
139、[19]分離的核酸,其編碼[1]至[9]中任一項所述的多特異性抗原結(jié)合分子,[10]所述的多特異性抗體,[10]、[11]或[16]所述的雙特異性抗體,或[12]至[15]中任一項所述的抗原結(jié)合分子;
140、[20]包含[19]所述的核酸的宿主細(xì)胞;
141、[21]產(chǎn)生多特異性抗原結(jié)合分子、多特異性抗體、雙特異性抗體或抗原結(jié)合分子的方法,其中所述方法包括培養(yǎng)[20]所述的宿主細(xì)胞,使得產(chǎn)生多特異性抗原結(jié)合分子、多特異性抗體、雙特異性抗體或抗原結(jié)合分子;
142、[22]藥物制劑,其包含[1]至[9]中任一項所述的多特異性抗原結(jié)合分子,[10]所述的多特異性抗體,[10]、[11]或[16]所述的雙特異性抗體,或[12]至[15]中任一項所述的抗原結(jié)合分子,以及藥學(xué)上可接受的載體;
143、[23][22]所述的藥物制劑,其用于預(yù)防和/或治療出血,涉及出血的疾病,或由出血引起的疾??;
144、[24][23]所述的藥物制劑,其中所述出血,涉及出血的疾病或由出血引起的疾病是由于凝血因子viii和/或活化的凝血因子viii的活性的降低或缺乏而形成和/或進(jìn)展的疾病;
145、[25][24]所述的藥物制劑,其中由于凝血因子viii和/或活化的凝血因子viii的活性的降低或缺乏而形成和/或進(jìn)展的疾病是血友病a,出現(xiàn)針對凝血因子viii和/或活化的凝血因子viii的抑制劑的疾病,獲得性血友病,或血管性血友病(von?willebranddisease)。
146、此外,本發(fā)明涉及以下內(nèi)容:
147、[26][1]至[9]中任一項所述的多特異性抗原結(jié)合分子,[10]所述的多特異性抗體,[10]、[11]或[16]所述的雙特異性抗體,或[12]至[15]中任一項所述的抗原結(jié)合分子,其用作藥物;
148、[27][1]至[9]中任一項所述的多特異性抗原結(jié)合分子,[10]所述的多特異性抗體,或[10]或[11]所述的雙特異性抗體,其用于預(yù)防和/或治療出血,涉及出血的疾病,或由出血引起的疾?。?/p>
149、[28][1]至[9]中任一項所述的多特異性抗原結(jié)合分子,[10]所述的多特異性抗體,或[10]或[11]所述的雙特異性抗體,其用于替代fviii的輔因子功能;
150、[29][1]至[9]中任一項所述的多特異性抗原結(jié)合分子,[10]所述的多特異性抗體,或[10]或[11]所述的雙特異性抗體,在制備用于治療出血,涉及出血的疾病,或由出血引起的疾病的藥物中的用途;
151、[30][1]至[9]中任一項所述的多特異性抗原結(jié)合分子,[10]所述的多特異性抗體,或[10]或[11]所述的雙特異性抗體,在制備用于替代fviii的輔因子功能的藥物中的用途;
152、[31]治療具有出血、涉及出血的疾病或由出血引起的疾病的個體的方法,其中所述方法包括向所述個體施用有效量的[1]至[9]中任一項所述的多特異性抗原結(jié)合分子,[10]所述的多特異性抗體,或[10]或[11]所述的雙特異性抗體;和
153、[32]在個體中替代fviii的輔因子功能的方法,其中所述方法包括步驟:向個體施用有效量的[1]至[9]中任一項所述的多特異性抗原結(jié)合分子,[10]所述的多特異性抗體,或[10]或[11]所述的雙特異性抗體用于替代fviii的輔因子功能。
154、此外,本發(fā)明涉及以下內(nèi)容:
155、[33][17]所述的抗原結(jié)合分子的產(chǎn)生方法,其包括在步驟(1)中,修飾核酸的步驟,使得所述彼此靜電排斥的氨基酸殘基是選自以下(x)或(y)中的任一群組中包括的氨基酸殘基:
156、(x)谷氨酸(e)和天冬氨酸(d);和
157、(y)賴氨酸(k),精氨酸(r),和組氨酸(h);
158、[34][17]或[33]所述的抗原結(jié)合分子的產(chǎn)生方法,其進(jìn)一步包括在步驟(1)中,修飾核酸的步驟,使得在重鏈可變區(qū)和輕鏈可變區(qū)之間形成界面的兩個或更多個氨基酸殘基是彼此靜電排斥的氨基酸殘基;
159、[35][34]的抗原結(jié)合分子的產(chǎn)生方法,其中所述彼此靜電排斥的氨基酸殘基是選自由以下(a)或(b)中所示的氨基酸殘基的組組成的群組中的任意一組氨基酸殘基:
160、(a)在重鏈可變區(qū)中根據(jù)kabat編號在位置39處的氨基酸殘基,以及在輕鏈可變區(qū)中根據(jù)kabat編號在位置38處的氨基酸殘基;和
161、(b)在重鏈可變區(qū)中根據(jù)kabat編號在位置45處的氨基酸殘基,以及在輕鏈可變區(qū)中根據(jù)kabat編號在位置44處的氨基酸殘基;
162、[36][34]或[35]的抗原結(jié)合分子的產(chǎn)生方法,其中所述彼此靜電排斥的氨基酸殘基是選自以下(x)或(y)中的一組中包括的氨基酸殘基:
163、(x)谷氨酸(e)和天冬氨酸(d);和
164、(y)賴氨酸(k),精氨酸(r),和組氨酸(h);
165、[37][18]的方法,其中所述彼此靜電排斥的氨基酸殘基是選自以下(x)或(y)中的一組中包括的氨基酸殘基:
166、(x)谷氨酸(e)和天冬氨酸(d);和
167、(y)賴氨酸(k),精氨酸(r),和組氨酸(h);
168、[38][18]或[37]的方法,其中在重鏈可變區(qū)和輕鏈可變區(qū)之間形成界面的另外兩個或更多個氨基酸殘基是彼此靜電排斥的氨基酸殘基;
169、[39][38]的方法,其中所述彼此靜電排斥的氨基酸殘基是選自由以下(a)或(b)中所示的氨基酸殘基的組組成的群組中的任意一組氨基酸殘基:
170、(a)在重鏈可變區(qū)中根據(jù)kabat編號在位置39處的氨基酸殘基,以及在輕鏈可變區(qū)中根據(jù)kabat編號在位置38處的氨基酸殘基;和
171、(b)在重鏈可變區(qū)中根據(jù)kabat編號在位置45處的氨基酸殘基,以及在輕鏈可變區(qū)中根據(jù)kabat編號在位置44處的氨基酸殘基;和
172、[40][38]或[39]的方法,其中所述彼此靜電排斥的氨基酸殘基是選自以下(x)或(y)中的一組中包括的氨基酸殘基:
173、(x)谷氨酸(e)和天冬氨酸(d);和
174、(y)賴氨酸(k),精氨酸(r),和組氨酸(h)。
175、此外,本發(fā)明涉及以下內(nèi)容:
176、[41][1]至[7]中任一項的多特異性抗原結(jié)合分子,其為以下(a)至(v)中的任一種:
177、(a)多特異性抗原結(jié)合分子(qh01/ql21//jh01/jl01),其包括包含seq?id?no:56的氨基酸序列的第一抗體重鏈可變結(jié)構(gòu)域,包含seq?id?no:61的氨基酸序列的第一抗體輕鏈可變結(jié)構(gòu)域,包含seq?id?no:73的氨基酸序列的第二抗體重鏈可變結(jié)構(gòu)域,以及包含seqid?no:84的氨基酸序列的第二抗體輕鏈可變結(jié)構(gòu)域;
178、(b)多特異性抗原結(jié)合分子(qh02/ql22//jh01/jl01),其包括包含seq?id?no:57的氨基酸序列的第一抗體重鏈可變結(jié)構(gòu)域,包含seq?id?no:62的氨基酸序列的第一抗體輕鏈可變結(jié)構(gòu)域,包含seq?id?no:73的氨基酸序列的第二抗體重鏈可變結(jié)構(gòu)域,以及包含seqid?no:84的氨基酸序列的第二抗體輕鏈可變結(jié)構(gòu)域;
179、(c)多特異性抗原結(jié)合分子(qh03/ql23//jh02/jl02),其包括包含seq?id?no:58的氨基酸序列的第一抗體重鏈可變結(jié)構(gòu)域,包含seq?id?no:63的氨基酸序列的第一抗體輕鏈可變結(jié)構(gòu)域,包含seq?id?no:74的氨基酸序列的第二抗體重鏈可變結(jié)構(gòu)域,以及包含seqid?no:85的氨基酸序列的第二抗體輕鏈可變結(jié)構(gòu)域;
180、(d)多特異性抗原結(jié)合分子(qh03/ql24//jh02/jl02),其包括包含seq?id?no:58的氨基酸序列的第一抗體重鏈可變結(jié)構(gòu)域,包含seq?id?no:64的氨基酸序列的第一抗體輕鏈可變結(jié)構(gòu)域,包含seq?id?no:74的氨基酸序列的第二抗體重鏈可變結(jié)構(gòu)域,以及包含seqid?no:85的氨基酸序列的第二抗體輕鏈可變結(jié)構(gòu)域;
181、(e)多特異性抗原結(jié)合分子(qh02/ql22//jh03/jl03),其包括包含seq?id?no:57的氨基酸序列的第一抗體重鏈可變結(jié)構(gòu)域,包含seq?id?no:62的氨基酸序列的第一抗體輕鏈可變結(jié)構(gòu)域,包含seq?id?no:75的氨基酸序列的第二抗體重鏈可變結(jié)構(gòu)域,以及包含seqid?no:86的氨基酸序列的第二抗體輕鏈可變結(jié)構(gòu)域;
182、(f)多特異性抗原結(jié)合分子(qh02/ql22//jh04/jl04),其包括包含seq?id?no:57的氨基酸序列的第一抗體重鏈可變結(jié)構(gòu)域,包含seq?id?no:62的氨基酸序列的第一抗體輕鏈可變結(jié)構(gòu)域,包含seq?id?no:76的氨基酸序列的第二抗體重鏈可變結(jié)構(gòu)域,以及包含seqid?no:87的氨基酸序列的第二抗體輕鏈可變結(jié)構(gòu)域;
183、(g)多特異性抗原結(jié)合分子(qh02/ql22//jh02/jl02),其包括包含seq?id?no:57的氨基酸序列的第一抗體重鏈可變結(jié)構(gòu)域,包含seq?id?no:62的氨基酸序列的第一抗體輕鏈可變結(jié)構(gòu)域,包含seq?id?no:74的氨基酸序列的第二抗體重鏈可變結(jié)構(gòu)域,以及包含seqid?no:85的氨基酸序列的第二抗體輕鏈可變結(jié)構(gòu)域;
184、(h)多特異性抗原結(jié)合分子(qh04/ql25//jh02/jl02),其包括包含seq?id?no:59的氨基酸序列的第一抗體重鏈可變結(jié)構(gòu)域,包含seq?id?no:65的氨基酸序列的第一抗體輕鏈可變結(jié)構(gòu)域,包含seq?id?no:74的氨基酸序列的第二抗體重鏈可變結(jié)構(gòu)域,以及包含seqid?no:85的氨基酸序列的第二抗體輕鏈可變結(jié)構(gòu)域;
185、(i)多特異性抗原結(jié)合分子(qh04/ql26//jh02/jl02),其包括包含seq?id?no:59的氨基酸序列的第一抗體重鏈可變結(jié)構(gòu)域,包含seq?id?no:66的氨基酸序列的第一抗體輕鏈可變結(jié)構(gòu)域,包含seq?id?no:74的氨基酸序列的第二抗體重鏈可變結(jié)構(gòu)域,以及包含seqid?no:85的氨基酸序列的第二抗體輕鏈可變結(jié)構(gòu)域;
186、(j)多特異性抗原結(jié)合分子(qh04/ql26//jh05/jl05),其包括包含seq?id?no:59的氨基酸序列的第一抗體重鏈可變結(jié)構(gòu)域,包含seq?id?no:66的氨基酸序列的第一抗體輕鏈可變結(jié)構(gòu)域,包含seq?id?no:77的氨基酸序列的第二抗體重鏈可變結(jié)構(gòu)域,以及包含seqid?no:88的氨基酸序列的第二抗體輕鏈可變結(jié)構(gòu)域;
187、(k)多特異性抗原結(jié)合分子(qh04/ql28//jh05/jl05),其包括包含seq?id?no:59的氨基酸序列的第一抗體重鏈可變結(jié)構(gòu)域,包含seq?id?no:67的氨基酸序列的第一抗體輕鏈可變結(jié)構(gòu)域,包含seq?id?no:77的氨基酸序列的第二抗體重鏈可變結(jié)構(gòu)域,以及包含seqid?no:88的氨基酸序列的第二抗體輕鏈可變結(jié)構(gòu)域;
188、(l)多特異性抗原結(jié)合分子(qh04/ql28//jh06/jl06),其包括包含seq?id?no:59的氨基酸序列的第一抗體重鏈可變結(jié)構(gòu)域,包含seq?id?no:67的氨基酸序列的第一抗體輕鏈可變結(jié)構(gòu)域,包含seq?id?no:78的氨基酸序列的第二抗體重鏈可變結(jié)構(gòu)域,以及包含seqid?no:89的氨基酸序列的第二抗體輕鏈可變結(jié)構(gòu)域;
189、(m)多特異性抗原結(jié)合分子(qh04/ql29//jh05/jl05),其包括包含seq?id?no:59的氨基酸序列的第一抗體重鏈可變結(jié)構(gòu)域,包含seq?id?no:68的氨基酸序列的第一抗體輕鏈可變結(jié)構(gòu)域,包含seq?id?no:77的氨基酸序列的第二抗體重鏈可變結(jié)構(gòu)域,以及包含seqid?no:88的氨基酸序列的第二抗體輕鏈可變結(jié)構(gòu)域;
190、(n)多特異性抗原結(jié)合分子(qh04/ql29//jh06/jl06),其包括包含seq?id?no:59的氨基酸序列的第一抗體重鏈可變結(jié)構(gòu)域,包含seq?id?no:68的氨基酸序列的第一抗體輕鏈可變結(jié)構(gòu)域,包含seq?id?no:78的氨基酸序列的第二抗體重鏈可變結(jié)構(gòu)域,以及包含seqid?no:89的氨基酸序列的第二抗體輕鏈可變結(jié)構(gòu)域;
191、(o)多特異性抗原結(jié)合分子(qh06/ql30//jh07/jl07),其包括包含seq?id?no:60的氨基酸序列的第一抗體重鏈可變結(jié)構(gòu)域,包含seq?id?no:69的氨基酸序列的第一抗體輕鏈可變結(jié)構(gòu)域,包含seq?id?no:79的氨基酸序列的第二抗體重鏈可變結(jié)構(gòu)域,以及包含seqid?no:90的氨基酸序列的第二抗體輕鏈可變結(jié)構(gòu)域;
192、(p)多特異性抗原結(jié)合分子(qh04/ql31//jh08/jl08),其包括包含seq?id?no:59的氨基酸序列的第一抗體重鏈可變結(jié)構(gòu)域,包含seq?id?no:70的氨基酸序列的第一抗體輕鏈可變結(jié)構(gòu)域,包含seq?id?no:80的氨基酸序列的第二抗體重鏈可變結(jié)構(gòu)域,以及包含seqid?no:91的氨基酸序列的第二抗體輕鏈可變結(jié)構(gòu)域;
193、(q)多特異性抗原結(jié)合分子(qh06/ql32//jh07/jl07),其包括包含seq?id?no:60的氨基酸序列的第一抗體重鏈可變結(jié)構(gòu)域,包含seq?id?no:71的氨基酸序列的第一抗體輕鏈可變結(jié)構(gòu)域,包含seq?id?no:79的氨基酸序列的第二抗體重鏈可變結(jié)構(gòu)域,以及包含seqid?no:90的氨基酸序列的第二抗體輕鏈可變結(jié)構(gòu)域;
194、(r)多特異性抗原結(jié)合分子(qh06/ql32//jh09/jl09),其包括包含seq?id?no:60的氨基酸序列的第一抗體重鏈可變結(jié)構(gòu)域,包含seq?id?no:71的氨基酸序列的第一抗體輕鏈可變結(jié)構(gòu)域,包含seq?id?no:81的氨基酸序列的第二抗體重鏈可變結(jié)構(gòu)域,以及包含seqid?no:92的氨基酸序列的第二抗體輕鏈可變結(jié)構(gòu)域;
195、(s)多特異性抗原結(jié)合分子(qh06/ql30//jh10/jl10),其包括包含seq?id?no:60的氨基酸序列的第一抗體重鏈可變結(jié)構(gòu)域,包含seq?id?no:69的氨基酸序列的第一抗體輕鏈可變結(jié)構(gòu)域,包含seq?id?no:82的氨基酸序列的第二抗體重鏈可變結(jié)構(gòu)域,以及包含seqid?no:93的氨基酸序列的第二抗體輕鏈可變結(jié)構(gòu)域;
196、(t)多特異性抗原結(jié)合分子(qh07/ql33//jh11/jl11),其包括包含seq?id?no:105的氨基酸序列的第一抗體重鏈可變結(jié)構(gòu)域,包含seq?id?no:72的氨基酸序列的第一抗體輕鏈可變結(jié)構(gòu)域,包含seq?id?no:83的氨基酸序列的第二抗體重鏈可變結(jié)構(gòu)域,以及包含seqid?no:94的氨基酸序列的第二抗體輕鏈可變結(jié)構(gòu)域;
197、(u)多特異性抗原結(jié)合分子,其結(jié)合與由(a)至(t)中的任一種抗體識別的凝血因子ix和/或活化的凝血因子ix的表位和凝血因子x的表位相同的表位;和
198、(v)多特異性抗原結(jié)合分子,其競爭結(jié)合由(a)至(t)中的任一種抗體識別的凝血因子ix和/或活化的凝血因子ix的表位和凝血因子x的表位;和
199、[42]雙特異性抗體,其包含與凝血因子ix和/或活化的凝血因子ix結(jié)合的第一抗體重鏈可變結(jié)構(gòu)域和第一抗體輕鏈可變結(jié)構(gòu)域,以及與凝血因子x結(jié)合的第二抗體重鏈可變結(jié)構(gòu)域和第二抗體輕鏈可變結(jié)構(gòu)域,其中所述雙特異性抗體為以下(a)至(v)中的任一種:
200、(a)雙特異性抗體(qh01/ql21//jh01/jl01),其包括包含seq?id?no:56的氨基酸序列的第一抗體重鏈可變結(jié)構(gòu)域,包含seq?id?no:61的氨基酸序列的第一抗體輕鏈可變結(jié)構(gòu)域,包含seq?id?no:73的氨基酸序列的第二抗體重鏈可變結(jié)構(gòu)域,以及包含seq?id?no:84的氨基酸序列的第二抗體輕鏈可變結(jié)構(gòu)域;
201、(b)雙特異性抗體(qh02/ql22//jh01/jl01),其包括包含seq?id?no:57的氨基酸序列的第一抗體重鏈可變結(jié)構(gòu)域,包含seq?id?no:62的氨基酸序列的第一抗體輕鏈可變結(jié)構(gòu)域,包含seq?id?no:73的氨基酸序列的第二抗體重鏈可變結(jié)構(gòu)域,以及包含seq?id?no:84的氨基酸序列的第二抗體輕鏈可變結(jié)構(gòu)域;
202、(c)雙特異性抗體(qh03/ql23//jh02/jl02),其包括包含seq?id?no:58的氨基酸序列的第一抗體重鏈可變結(jié)構(gòu)域,包含seq?id?no:63的氨基酸序列的第一抗體輕鏈可變結(jié)構(gòu)域,包含seq?id?no:74的氨基酸序列的第二抗體重鏈可變結(jié)構(gòu)域,以及包含seq?id?no:85的氨基酸序列的第二抗體輕鏈可變結(jié)構(gòu)域;
203、(d)雙特異性抗體(qh03/ql24//jh02/jl02),其包括包含seq?id?no:58的氨基酸序列的第一抗體重鏈可變結(jié)構(gòu)域,包含seq?id?no:64的氨基酸序列的第一抗體輕鏈可變結(jié)構(gòu)域,包含seq?id?no:74的氨基酸序列的第二抗體重鏈可變結(jié)構(gòu)域,以及包含seq?id?no:85的氨基酸序列的第二抗體輕鏈可變結(jié)構(gòu)域;
204、(e)雙特異性抗體(qh02/ql22//jh03/jl03),其包括包含seq?id?no:57的氨基酸序列的第一抗體重鏈可變結(jié)構(gòu)域,包含seq?id?no:62的氨基酸序列的第一抗體輕鏈可變結(jié)構(gòu)域,包含seq?id?no:75的氨基酸序列的第二抗體重鏈可變結(jié)構(gòu)域,以及包含seq?id?no:86的氨基酸序列的第二抗體輕鏈可變結(jié)構(gòu)域;
205、(f)雙特異性抗體(qh02/ql22//jh04/jl04),其包括包含seq?id?no:57的氨基酸序列的第一抗體重鏈可變結(jié)構(gòu)域,包含seq?id?no:62的氨基酸序列的第一抗體輕鏈可變結(jié)構(gòu)域,包含seq?id?no:76的氨基酸序列的第二抗體重鏈可變結(jié)構(gòu)域,以及包含seq?id?no:87的氨基酸序列的第二抗體輕鏈可變結(jié)構(gòu)域;
206、(g)雙特異性抗體(qh02/ql22//jh02/jl02),其包括包含seq?id?no:57的氨基酸序列的第一抗體重鏈可變結(jié)構(gòu)域,包含seq?id?no:62的氨基酸序列的第一抗體輕鏈可變結(jié)構(gòu)域,包含seq?id?no:74的氨基酸序列的第二抗體重鏈可變結(jié)構(gòu)域,以及包含seq?id?no:85的氨基酸序列的第二抗體輕鏈可變結(jié)構(gòu)域;
207、(h)雙特異性抗體(qh04/ql25//jh02/jl02),其包括包含seq?id?no:59的氨基酸序列的第一抗體重鏈可變結(jié)構(gòu)域,包含seq?id?no:65的氨基酸序列的第一抗體輕鏈可變結(jié)構(gòu)域,包含seq?id?no:74的氨基酸序列的第二抗體重鏈可變結(jié)構(gòu)域,以及包含seq?id?no:85的氨基酸序列的第二抗體輕鏈可變結(jié)構(gòu)域;
208、(i)雙特異性抗體(qh04/ql26//jh02/jl02),其包括包含seq?id?no:59的氨基酸序列的第一抗體重鏈可變結(jié)構(gòu)域,包含seq?id?no:66的氨基酸序列的第一抗體輕鏈可變結(jié)構(gòu)域,包含seq?id?no:74的氨基酸序列的第二抗體重鏈可變結(jié)構(gòu)域,以及包含seq?id?no:85的氨基酸序列的第二抗體輕鏈可變結(jié)構(gòu)域;
209、(j)雙特異性抗體(qh04/ql26//jh05/jl05),其包括包含seq?id?no:59的氨基酸序列的第一抗體重鏈可變結(jié)構(gòu)域,包含seq?id?no:66的氨基酸序列的第一抗體輕鏈可變結(jié)構(gòu)域,包含seq?id?no:77的氨基酸序列的第二抗體重鏈可變結(jié)構(gòu)域,以及包含seq?id?no:88的氨基酸序列的第二抗體輕鏈可變結(jié)構(gòu)域;
210、(k)雙特異性抗體(qh04/ql28//jh05/jl05),其包括包含seq?id?no:59的氨基酸序列的第一抗體重鏈可變結(jié)構(gòu)域,包含seq?id?no:67的氨基酸序列的第一抗體輕鏈可變結(jié)構(gòu)域,包含seq?id?no:77的氨基酸序列的第二抗體重鏈可變結(jié)構(gòu)域,以及包含seq?id?no:88的氨基酸序列的第二抗體輕鏈可變結(jié)構(gòu)域;
211、(l)雙特異性抗體(qh04/ql28//jh06/jl06),其包括包含seq?id?no:59的氨基酸序列的第一抗體重鏈可變結(jié)構(gòu)域,包含seq?id?no:67的氨基酸序列的第一抗體輕鏈可變結(jié)構(gòu)域,包含seq?id?no:78的氨基酸序列的第二抗體重鏈可變結(jié)構(gòu)域,以及包含seq?id?no:89的氨基酸序列的第二抗體輕鏈可變結(jié)構(gòu)域;
212、(m)雙特異性抗體(qh04/ql29//jh05/jl05),其包括包含seq?id?no:59的氨基酸序列的第一抗體重鏈可變結(jié)構(gòu)域,包含seq?id?no:68的氨基酸序列的第一抗體輕鏈可變結(jié)構(gòu)域,包含seq?id?no:77的氨基酸序列的第二抗體重鏈可變結(jié)構(gòu)域,以及包含seq?id?no:88的氨基酸序列的第二抗體輕鏈可變結(jié)構(gòu)域;
213、(n)雙特異性抗體(qh04/ql29//jh06/jl06),其包括包含seq?id?no:59的氨基酸序列的第一抗體重鏈可變結(jié)構(gòu)域,包含seq?id?no:68的氨基酸序列的第一抗體輕鏈可變結(jié)構(gòu)域,包含seq?id?no:78的氨基酸序列的第二抗體重鏈可變結(jié)構(gòu)域,以及包含seq?id?no:89的氨基酸序列的第二抗體輕鏈可變結(jié)構(gòu)域;
214、(o)雙特異性抗體(qh06/ql30//jh07/jl07),其包括包含seq?id?no:60的氨基酸序列的第一抗體重鏈可變結(jié)構(gòu)域,包含seq?id?no:69的氨基酸序列的第一抗體輕鏈可變結(jié)構(gòu)域,包含seq?id?no:79的氨基酸序列的第二抗體重鏈可變結(jié)構(gòu)域,以及包含seq?id?no:90的氨基酸序列的第二抗體輕鏈可變結(jié)構(gòu)域;
215、(p)雙特異性抗體(qh04/ql31//jh08/jl08),其包括包含seq?id?no:59的氨基酸序列的第一抗體重鏈可變結(jié)構(gòu)域,包含seq?id?no:70的氨基酸序列的第一抗體輕鏈可變結(jié)構(gòu)域,包含seq?id?no:80的氨基酸序列的第二抗體重鏈可變結(jié)構(gòu)域,以及包含seq?id?no:91的氨基酸序列的第二抗體輕鏈可變結(jié)構(gòu)域;
216、(q)雙特異性抗體(qh06/ql32//jh07/jl07),其包括包含seq?id?no:60的氨基酸序列的第一抗體重鏈可變結(jié)構(gòu)域,包含seq?id?no:71的氨基酸序列的第一抗體輕鏈可變結(jié)構(gòu)域,包含seq?id?no:79的氨基酸序列的第二抗體重鏈可變結(jié)構(gòu)域,以及包含seq?id?no:90的氨基酸序列的第二抗體輕鏈可變結(jié)構(gòu)域;
217、(r)雙特異性抗體(qh06/ql32//jh09/jl09),其包括包含seq?id?no:60的氨基酸序列的第一抗體重鏈可變結(jié)構(gòu)域,包含seq?id?no:71的氨基酸序列的第一抗體輕鏈可變結(jié)構(gòu)域,包含seq?id?no:81的氨基酸序列的第二抗體重鏈可變結(jié)構(gòu)域,以及包含seq?id?no:92的氨基酸序列的第二抗體輕鏈可變結(jié)構(gòu)域;
218、(s)雙特異性抗體(qh06/ql30//jh10/jl10),其包括包含seq?id?no:60的氨基酸序列的第一抗體重鏈可變結(jié)構(gòu)域,包含seq?id?no:69的氨基酸序列的第一抗體輕鏈可變結(jié)構(gòu)域,包含seq?id?no:82的氨基酸序列的第二抗體重鏈可變結(jié)構(gòu)域,以及包含seq?id?no:93的氨基酸序列的第二抗體輕鏈可變結(jié)構(gòu)域;
219、(t)雙特異性抗體(qh07/ql33//jh11/jl11),其包括包含seq?id?no:105的氨基酸序列的第一抗體重鏈可變結(jié)構(gòu)域,包含seq?id?no:72的氨基酸序列的第一抗體輕鏈可變結(jié)構(gòu)域,包含seq?id?no:83的氨基酸序列的第二抗體重鏈可變結(jié)構(gòu)域,以及包含seq?id?no:94的氨基酸序列的第二抗體輕鏈可變結(jié)構(gòu)域;
220、(u)雙特異性抗體,其結(jié)合與由(a)至(t)中的任一種抗體識別的凝血因子ix和/或活化的凝血因子ix的表位和凝血因子x的表位相同的表位;和
221、(v)雙特異性抗體,其競爭結(jié)合由(a)至(t)中的任一種抗體識別的凝血因子ix和/或活化的凝血因子ix的表位和凝血因子x的表位。