本發(fā)明涉及抗體制備，特別涉及抗人pax8蛋白的兔單克隆抗體、抗體偶聯(lián)物及其應(yīng)用。

背景技術(shù)：

1、成對(duì)盒(pax)蛋白是一個(gè)轉(zhuǎn)錄因子家族，在動(dòng)物發(fā)育中起著不同的重要作用?，F(xiàn)已在人和其他哺乳動(dòng)物細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)了9種pax蛋白(pax1-9)，它們存在一個(gè)氨基末端成對(duì)結(jié)構(gòu)域(paired?domain)，該結(jié)構(gòu)域包括兩個(gè)螺旋-轉(zhuǎn)角-螺旋基序，具有dna結(jié)合活性。根據(jù)是否存在一個(gè)羧基末端同源結(jié)構(gòu)域和一個(gè)中央八肽結(jié)構(gòu)域，pax蛋白分為四個(gè)結(jié)構(gòu)相異的亞家族(i-iv)。亞家族i(pax1和9)包含八肽結(jié)構(gòu)域，但缺乏同源結(jié)構(gòu)域；亞家族ii(pax2、5和8)包含八肽結(jié)構(gòu)域和一個(gè)截短的同源結(jié)構(gòu)域；亞家族iii(pax3和7)包含八肽結(jié)構(gòu)域和一個(gè)完整的同源結(jié)構(gòu)域；亞家族iv(pax4和6)包含一個(gè)完整的同源結(jié)構(gòu)域，但缺乏八肽結(jié)構(gòu)域。pax蛋白定位于細(xì)胞核，是一類與胚胎早期發(fā)育與組織定向分化有關(guān)的轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子，可調(diào)節(jié)負(fù)責(zé)胚胎成型和器官形成的轉(zhuǎn)錄網(wǎng)絡(luò)；多個(gè)成員在發(fā)育成熟后仍然有表達(dá)，而且呈現(xiàn)出一定的組織與細(xì)胞表達(dá)特異性。因此pax蛋白家族是分子病理中一組比較有價(jià)值的分子標(biāo)記物，導(dǎo)致pax基因異常表達(dá)的基因突變與許多癌癥亞型有關(guān)，其中亞家族ii和iii的成員被發(fā)現(xiàn)是腫瘤進(jìn)展的潛在調(diào)節(jié)因子。

2、pax8蛋白作為甲狀腺細(xì)胞特有基因表達(dá)所必需的轉(zhuǎn)錄因子，在調(diào)節(jié)甲狀腺特異性基因表達(dá)譜中發(fā)揮著關(guān)鍵作用，有助于維持甲狀腺細(xì)胞的特殊功能。研究發(fā)現(xiàn)，pax-8基因突變與甲狀腺發(fā)育不良、甲狀腺濾泡癌和非典型甲狀腺濾泡腺瘤有關(guān)。此外，pax8在腎臟、米勒管衍生組織(宮頸、輸卵管和子宮內(nèi)膜)和男性生殖組織(精囊和附睪)等的發(fā)育中發(fā)揮重要作用。同時(shí)pax8也在不同類型惡性腫瘤中陽(yáng)性表達(dá)，如甲狀腺癌、腎癌、上皮性卵巢癌、子宮內(nèi)膜癌等?；趐ax8的表達(dá)特征，研究表明pax8對(duì)于甲狀腺、腎臟、米勒管來(lái)源的等來(lái)源的原發(fā)腫瘤及轉(zhuǎn)移性腫瘤是一項(xiàng)敏感、特異的標(biāo)志物，在相關(guān)疾病的病理診斷中具有重要意義。

3、目前臨床上常用免疫組織化學(xué)(ihc)法檢測(cè)病理組織樣本中特異蛋白的表達(dá)狀況，然而ihc的核心為特異性結(jié)合蛋白的單克隆抗體，其性能的優(yōu)劣直接決定著整個(gè)檢測(cè)的靈敏度和特異性。因此，開發(fā)特異性強(qiáng)、抗干擾能力好的人pax8蛋白單克隆抗體已成為亟待解決的問題。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)中抗人pax8蛋白抗體的特異性和抗干擾能力差、難以用于免疫學(xué)檢測(cè)等問題，本發(fā)明提供了抗人pax8蛋白的兔單克隆抗體和抗體偶聯(lián)物，并進(jìn)一步提供了該兔單克隆抗體和抗體偶聯(lián)物在制備人pax8蛋白免疫檢測(cè)試劑盒中的應(yīng)用以及相關(guān)的免疫檢測(cè)試劑盒。為實(shí)現(xiàn)前述目的，本發(fā)明具體通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)：

2、本發(fā)明第一方面提供了一種抗人pax8蛋白的兔單克隆抗體，包括輕鏈可變區(qū)和重鏈可變區(qū)，所述輕鏈可變區(qū)上互補(bǔ)決定區(qū)cdr1、cdr2和cdr3的氨基酸序列分別如seq?idno.3、seq?id?no.4、seq?id?no.5所示；所述重鏈可變區(qū)上互補(bǔ)決定區(qū)cdr1、cdr2和cdr3的氨基酸序列分別如seq?id?no.8、seq?id?no.9和seq?id?no.10所示。

3、進(jìn)一步地，所述輕鏈可變區(qū)的氨基酸序列seq?id?no.2所示，所述重鏈可變區(qū)的氨基酸序列如seq?id?no.7所示。

4、進(jìn)一步地，所述兔單克隆抗體的輕鏈的氨基酸序列如seq?id?no.1所示，重鏈的氨基酸序列如seq?id?no.6所示。

5、進(jìn)一步地，所述兔單克隆抗體為全長(zhǎng)抗體或其抗原結(jié)合區(qū)域；所述抗原結(jié)合區(qū)域選自fab片段、f(ab)2片段、fv片段、(fv)2片段、scfv片段和sc(fv)2片段中的至少一種。

6、本發(fā)明第二方面提供了一種抗體偶聯(lián)物，包含如上所述的抗人pax8蛋白的兔單克隆抗體，以及與所述兔單克隆抗體連接的檢測(cè)標(biāo)記。

7、本發(fā)明第三方面提供了一種核酸分子、包含所述核酸分子的重組載體或宿主細(xì)胞，所述核酸分子用于編碼如上所述的抗人pax8蛋白的兔單克隆抗體。

8、進(jìn)一步地，所述重組載體為哺乳動(dòng)物表達(dá)載體pbr322，所述宿主細(xì)胞為人腎上皮細(xì)胞。

9、本發(fā)明第四方面提供了如上所述的抗人pax8蛋白的兔單克隆抗體或抗體偶聯(lián)物在制備人pax8蛋白免疫檢測(cè)試劑盒中的應(yīng)用。

10、本發(fā)明第五方面提供了一種人pax8蛋白免疫檢測(cè)試劑盒，所述試劑盒包括如上所述的抗人pax8蛋白的兔單克隆抗體或抗體偶聯(lián)物。

11、進(jìn)一步地，所述試劑盒為免疫組織化學(xué)試劑盒。

12、本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)及積極效果為：

13、本發(fā)明的抗人pax8蛋白的兔單克隆抗體可以特異性識(shí)別細(xì)胞/組織表面的天然pax8蛋白，具有良好的特異性和高的親和性，用于免疫組織化學(xué)染色時(shí)，陽(yáng)性染色明顯，背景干凈，基本無(wú)非特異性染色，且靈敏度和特異度均可高達(dá)100％，具有特異性高、可靠性良好、抗干擾能力強(qiáng)、分析靈敏度高和檢測(cè)準(zhǔn)確性好等優(yōu)點(diǎn)，有利于避免假陽(yáng)性和假陰性結(jié)果，適用于多種細(xì)胞/組織等病理樣本中pax8蛋白的免疫檢測(cè)。

技術(shù)特征：

1.一種抗人pax8蛋白的兔單克隆抗體，其特征在于，包括輕鏈可變區(qū)和重鏈可變區(qū)，所述輕鏈可變區(qū)上互補(bǔ)決定區(qū)cdr1、cdr2和cdr3的氨基酸序列分別如seq?id?no.3、seq?idno.4、seq?id?no.5所示；所述重鏈可變區(qū)上互補(bǔ)決定區(qū)cdr1、cdr2和cdr3的氨基酸序列分別如seq?id?no.8、seq?id?no.9和seq?id?no.10所示。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的抗人pax8蛋白的兔單克隆抗體，其特征在于，所述輕鏈可變區(qū)的氨基酸序列seq?id?no.2所示，所述重鏈可變區(qū)的氨基酸序列如seq?id?no.7所示。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的抗人pax8蛋白的兔單克隆抗體，其特征在于，所述兔單克隆抗體輕鏈的氨基酸序列如seq?id?no.1所示，重鏈的氨基酸序列如seq?id?no.6所示。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的抗人pax8蛋白的兔單克隆抗體，其特征在于，所述兔單克隆抗體為全長(zhǎng)抗體或其抗原結(jié)合區(qū)域；所述抗原結(jié)合區(qū)域選自fab片段、f(ab)2片段、fv片段、(fv)2片段、scfv片段和sc(fv)2片段中的至少一種。

5.一種抗體偶聯(lián)物，其特征在于，包含如權(quán)利要求1-4任一項(xiàng)所述的抗人pax8蛋白的兔單克隆抗體，以及與所述兔單克隆抗體連接的檢測(cè)標(biāo)記。

6.一種核酸分子、包含所述核酸分子的重組載體或宿主細(xì)胞，其特征在于，所述核酸分子編碼如權(quán)利要求1-4任一項(xiàng)所述的抗人pax8蛋白的兔單克隆抗體。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的核酸分子、包含所述核酸分子的重組載體或宿主細(xì)胞，其特征在于，所述重組載體為pbr322，所述宿主細(xì)胞為人腎上皮細(xì)胞。

8.如權(quán)利要求1-4任一項(xiàng)所述的抗人pax8蛋白的兔單克隆抗體、或如權(quán)利要求5所述的抗體偶聯(lián)物在制備人pax8蛋白免疫檢測(cè)試劑盒中的應(yīng)用。

9.一種人pax8蛋白免疫檢測(cè)試劑盒，其特征在于，包含如權(quán)利要求1-4任一項(xiàng)所述的抗人pax8蛋白的兔單克隆抗體、或如權(quán)利要求5所述的抗體偶聯(lián)物。

10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的人pax8蛋白免疫檢測(cè)試劑盒，其特征在于，所述試劑盒為免疫組織化學(xué)試劑盒。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明屬于抗體制備技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及抗人PAX8蛋白的兔單克隆抗體、抗體偶聯(lián)物及其應(yīng)用。所述兔單克隆抗體輕鏈可變區(qū)上互補(bǔ)決定區(qū)CDR1?3的氨基酸序列分別如SEQ?ID?NO.3?5所示，重鏈可變區(qū)上互補(bǔ)決定區(qū)CDR1?3的氨基酸序列分別如SEQ?ID?NO.8?10所示。本發(fā)明的抗人PAX8蛋白抗體可以特異性識(shí)別細(xì)胞/組織表面的天然PAX8蛋白，用于免疫組織化學(xué)染色時(shí)，陽(yáng)性染色明顯，背景干凈，基本無(wú)非特異性染色，且靈敏度和特異度均可高達(dá)100％，具有特異性高、可靠性良好、抗干擾能力強(qiáng)、分析靈敏度高和檢測(cè)準(zhǔn)確性好等優(yōu)點(diǎn)，有利于避免假陽(yáng)性和假陰性結(jié)果。

技術(shù)研發(fā)人員：溫秀芳,吳海,王靜,胡文娟,程瑤,景攀
受保護(hù)的技術(shù)使用者：武漢愛博泰克生物科技有限公司
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2024/11/14