一種從胎盤中提取的低分子量多肽的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及多肽領(lǐng)域，具體涉及了一種從胎盤中提取的低分子量多肽。
【背景技術(shù)】
[0002] 胎盤富含孕育生命所必需的所有原始生命物質(zhì)。目前，胎盤尤其是羊胎盤的藥用 和保健功效越來越受到人們的關(guān)注。就羊胎盤而言，其中含有豐富的蛋白質(zhì)、17種氨基酸、 14種微量元素、磷脂、脂多糖、維生素，還有與免疫功能和機體正常運轉(zhuǎn)相關(guān)的多種活性多 肽，其營養(yǎng)成分天然搭配的比例最接近人體的需求?！侗静菥V目》中即對羊胎盤的功效有所 記載：〃羊胎，母羊腹中的胎獸，性味甘溫，具有益氣補虛，溫中暖下，調(diào)補腎虛、羸瘦之功效 〃?？茖W(xué)家經(jīng)過大量實驗證實，羊胎盤還具有養(yǎng)血安神、豐肌澤膚、延年益壽等功效，是大補 元氣的滋補強壯藥。綜上所述，胎盤的功能特性日益為人們所認識，客觀上也提出了胎盤深 加工的要求。由于胎盤中含有大量人體必需的活性物質(zhì)，因此，從中提取功能性的多肽具有 廣闊的開發(fā)前景。
[0003] 專利文獻CN103784935A公開了一種改良的胎盤多肽的制備方法，包括如下步驟： 收集健康產(chǎn)婦足月分娩的胎盤作為原料冷凍；將凍融后的物料在60±2°C條件下進行病原 微生物滅活處理，并不斷攪拌，以提高滅活效果；對滅活處理后的物料以2000?5000rpm離 心分離10?60分鐘后取上清液，先經(jīng)0. 3?1. 0ym孔徑的膜深層過濾，在用截留分子量 為10000D的超濾膜超濾，獲得超濾液；向超濾液中加入占濾液重量百分比為5?10%的賦 形劑，然后使用〇. 22ym的膜進行除菌過濾后分裝；將分裝后的樣品進行真空冷凍干燥，即 得。
[0004] 然而，現(xiàn)有技術(shù)公開的技術(shù)方案中，需要對胎盤進行凍融，會造成活性物質(zhì)的損 失；沒有經(jīng)過多步酶解，多肽的分子量均一性差，且適用的超濾膜的截留分子量過大，無法 獲得高濃度、高活性的低分子量多肽。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的克服現(xiàn)有技術(shù)的缺陷，提供一種以胎盤為原料，采用混合多步酶解 法制備而成的低分子量多肽，所述多肽具有優(yōu)異的抗衰老功效。
[0006] 本發(fā)明提供了一種低分子量多肽，所述低分子量多肽以胎盤為原料，由包括以下 步驟的方法提取得到：
[0007] 所述低分子量多肽由包括以下步驟的方法制備而成：
[0008] 1)取羊胎盤肉阜和子葉，去除筋膜并清洗后瀝干，切成小塊后經(jīng)組織勻漿機粉碎 成80?200目的勻漿液；
[0009] 2)在步驟1)所得述勻漿液中，加入稀鹽酸溶液和胃蛋白酶，36?38°C反應(yīng)3? 5h；
[0010] 3)將步驟2)產(chǎn)物pH調(diào)至6.0?8.0,加入中性蛋白酶，48?52°C反應(yīng)2?3h;
[0011] 4)將步驟3)產(chǎn)物pH維持在6.0?8.0,加入菠蘿蛋白酶，53?57°C反應(yīng)3?5h， 反應(yīng)結(jié)束后升溫至68?72°C，維持10?20min，使酶滅活；
[0012] 5)將步驟4)產(chǎn)物用0. 4?0. 5ym的濾膜抽濾，再用截留分子量為4?5kD的超 濾膜超濾，所得濾液經(jīng)脫苦脫色、真空濃縮后、噴霧干燥，即得低分子量多肽。
[0013] 本發(fā)明步驟1)中，所述胎盤優(yōu)選為羊的胎盤，由于羊胎盤的資源豐富，且其中營 養(yǎng)成分與人體比較接近，使用安全；清洗胎盤時應(yīng)徹底，防止胎盤表面覆蓋的生物物質(zhì)影響 提取時酶的活性；該步驟中，勻漿時水的加入量為每g固體加入〇. 5?lml水，優(yōu)選為純凈 水。
[0014] 本發(fā)明步驟2)中，所述稀鹽酸與步驟1)所述勻漿液的體積比為5?15 :1，優(yōu)選 為10:1，所述稀鹽酸的質(zhì)量百分比濃度為0. 2?0. 4%，優(yōu)選為0. 3%。
[0015] 本發(fā)明步驟2)中，所述胃蛋白酶的比活為2500?4000U/g，優(yōu)選為3000U/g，其加 入后終濃度為0. 1?0. 3 %，優(yōu)選為0. 2 %。
[0016] 本發(fā)明步驟3)中，所述中性蛋白酶的比活為30000?60000U/g，優(yōu)選為40000U/ g，其加入后終濃度為0. 2?0. 6%，優(yōu)選為0. 4%。
[0017] 本發(fā)明步驟4)中，所述菠蘿蛋白酶的比活為400000?800000U/g，優(yōu)選為 600000U/g，其加入后終濃度為0. 7?1. 3 %，優(yōu)選為1 %。
[0018] 本發(fā)明步驟5)中，所述脫苦脫色具體為：所得濾液中加入活性炭，室溫低速攪拌 1?3h后，優(yōu)選為2h，過濾除去活性炭。
[0019] 作為優(yōu)選方案，本發(fā)明所述低分子量多肽由包括以下步驟的方法制備而成：
[0020] 1)取羊胎盤肉阜和子葉，去除筋膜并清洗后瀝干，切成小塊后經(jīng)組織勻漿機粉碎 成100目的勻漿液；
[0021] 2)在步驟1)所得述勻漿液中，加入稀鹽酸溶液和胃蛋白酶，37°C反應(yīng)4h;所述稀 鹽酸與勻漿液的體積比為10 :1，所述稀鹽酸的質(zhì)量百分比濃度為〇. 3%;所述胃蛋白酶的 比活為3000U/g，其加入后終濃度為0. 2% ;
[0022] 3)將步驟2)產(chǎn)物pH調(diào)至7.0,加入中性蛋白酶，50°C反應(yīng)2. 5h;所述中性蛋白酶 的比活為50000U/g，其加入后終濃度為0. 4% ;
[0023] 4)將步驟3)產(chǎn)物pH維持在7.0,加入菠蘿蛋白酶，55°C反應(yīng)4h，所述菠蘿蛋白酶 的比活為600000U/g，其加入后終濃度為1 % ;反應(yīng)結(jié)束后升溫至70°C，維持15min，使酶滅 活；
[0024] 5)將步驟4)產(chǎn)物用0. 5ym的濾膜抽濾，再用截留分子量為5kD的超濾膜超濾，所 得濾液中加入活性炭，室溫低速攪拌3h后過濾除去活性炭，真空濃縮，噴霧干燥，即得低分 子量多肽。
[0025] 為了保證制備得到的低分子量多肽的活性，除了酶解反應(yīng)對溫度的特別要求外， 本發(fā)明各個步驟的操作溫度均優(yōu)選為〇?4°c。
[0026] 本發(fā)明進一步保護所述低分子量多肽在制備化妝品、食品、保健品、藥品中的應(yīng) 用。
[0027] 與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明提供的技術(shù)方案可以取得顯著的效果。由于低分子量的 肽抗原性差，只能誘導(dǎo)機體產(chǎn)生很弱的免疫反應(yīng)，在不經(jīng)載體偶聯(lián)的情況下即會失去免疫 原性，最大程度地減少多肽的致敏性，使得其應(yīng)用時的安全性大大提高，無異味、不致敏。此 夕卜，本發(fā)明提供的低分子量多肽具有顯著的抗衰老功效，可廣泛應(yīng)用于化妝品、食品、保健 品、藥品中。
【具體實施方式】
[0028] 以下實施例用于說明本發(fā)明，但不用來限制本發(fā)明的范圍。
[0029] 實施例1
[0030] 低分子量多肽按照以下步驟制備而成：
[0031] 1)取800g羊胎盤肉阜和子葉，去除筋膜并清洗后瀝干，切成小塊后經(jīng)組織勻漿機 粉碎成80目的勻漿液100ml;
[0032] 2)在步驟1)所得述勻漿液中，加入稀鹽酸溶液和胃蛋白酶，36°C反應(yīng)3h;所述 稀鹽酸的體積為500ml，所述稀鹽酸的質(zhì)量百分比濃度為0. 2% ;所述胃蛋白酶的比活為 2500U/g，其加入后終濃度為0. 1%;
[0033] 3)將步驟2)產(chǎn)物pH調(diào)至6.0,加入中性蛋白酶，48°C反應(yīng)2h;所述中性蛋白酶的 比活為30000U/g，其加入后終濃度為0. 2%;
[0034] 4)將步驟3)產(chǎn)物pH維持在6. 0,加入菠蘿蛋白酶，53°C反應(yīng)3h，所述菠蘿蛋白酶 的比活為400000U/g，其加入后終濃度為0. 7 % ;反應(yīng)結(jié)束后升溫至68°C，維持lOmin，使酶 滅活；
[0035] 5)將步驟4)產(chǎn)物用0. 4ym的濾膜抽濾，再用截留分子量為4kD的超濾膜超濾，所 得濾液中加入活性炭，室溫低速攪拌lh后過濾除去活性炭，真空濃縮，噴霧干燥，即得低分 子量多肽。
[0036] 實施例2
[0037] 低分子量多肽按照以下步驟制備而成：
[0038] 1)取800g羊胎盤肉阜和子葉，去除筋膜并清洗后瀝干，切成小塊后經(jīng)組織勻漿機 粉碎成100目的勻漿液100ml;
[0039] 2)在步驟1)所得述勻漿液中，加入稀鹽酸溶液和胃蛋白酶，37°C反應(yīng)4h;所述 稀鹽酸的體積為1000ml，所述稀鹽酸的質(zhì)量百分比濃度為0.3%;所述胃蛋白酶的比活為 3000U/g，其加入后終濃度為0. 2%;
[0040] 3)將步驟2)產(chǎn)物pH調(diào)至7.0,加入中性蛋白酶，50°C反應(yīng)2. 5h;所述中性蛋白酶 的比活為50000U/g，其加入后終濃度為0. 4%;
[0041] 4)將步驟3)產(chǎn)物pH維持在7.0,加入菠蘿蛋白酶，55°C反應(yīng)4h，所述菠蘿蛋白