濃度為2500mg/l;然后從^號(hào)試管取4毫升A2碘伏液加到A3號(hào)試管，其有效碘的濃 度為1250mg/l;-次操作至A1(l號(hào)試管，依此類推八4號(hào)試管有效碘的濃度為625mg/l45號(hào) 試管有效碘的濃度為312. 5mg/l;八6號(hào)試管有效碘的濃度為156. 25mg/l;A7號(hào)試管有效碘 的濃度為78. 13mg/l;A8號(hào)試管有效碘的濃度約為39. 06mg/l;A9號(hào)試管有效碘的濃度約為 19. 53mg/l;A1(I號(hào)試管有效碘的濃度為9. 77mg/l;An號(hào)試管不加消毒液，只是4毫升蒸餾水 作為陽性對(duì)照；
[0046] 各濃度溶葡萄球菌酶的制備：取9個(gè)無菌試管分別編號(hào)ai~a9，用注射器把編號(hào) a2~a9的試管各加入4毫升蒸餾水，取4毫升溶葡萄球菌酶原液加入a:號(hào)試管中，所述葡 萄球菌酶原液中溶葡萄球菌酶的濃度為1000U/L;再取4毫升所述溶葡萄球菌酶原液加入 a2號(hào)試管混勻得到a2溶葡萄球菌酶溶液，其濃度為500U/L;然后取4毫升所述a2溶葡萄球 菌酶溶液加到a3號(hào)試管中得到a3溶葡萄球菌酶溶液，其溶葡萄球菌酶的濃度為250U/L;依 次操作至a8號(hào)試管，依此類推a4號(hào)試管溶葡萄球菌酶的濃度為125U/L;a5號(hào)試管溶葡萄球 菌酶的濃度為62. 50U/L仿6號(hào)試管溶葡萄球菌酶的濃度為31. 25U/L;a7號(hào)試管溶葡萄球菌 酶濃度為15. 63U/L;a8號(hào)試管溶葡萄球菌酶的濃度，為7. 80U/L;a9號(hào)試管只加入4毫升 蒸餾水不含消毒液作為陽性對(duì)照；
[0047] 各濃度含氯消毒液的制備：取11個(gè)無菌試管并編號(hào)&~Bn，首先制備有效氯 為5000.Omg/1作為原液，用注射器把B2~Bn的試管各加入4毫升蒸餾水，取4毫升濃度 為5000.Omg/1有效氯原液加入81號(hào)試管中，有效氯的濃度為5000mg/l;再取4毫升加入 B2號(hào)試管混勻得到B2含氯消毒液，其有效氯的濃度為2500mg/l;然后取4毫升所述B2含 氯消毒液加到所述B3號(hào)試管混勻的到B3含氯消毒液，其有效氯的濃度為1250mg/l;依次 操作至B1(l號(hào)試管，依此類推B4號(hào)試管中有效氯的濃度為625mg/l;B5號(hào)試管中有效氯的 濃度為312. 5mg/l;B6號(hào)試管中有效氯的濃度為156. 25mg/l;B7號(hào)試管中有效氯的濃度為 78. 13mg/l;B8號(hào)試管中有效氯的濃度為39. 06mg/l;B9號(hào)試管中有效氯的濃度為19. 53mg/ 1 ;B1(I號(hào)試管中有效氯的濃度為9.77mg/l;11號(hào)試管只加入4毫升蒸餾水，不含消毒液作為 陽性對(duì)照；
[0048] 以所述制備好的含干擾劑的金黃色葡萄球菌的菌懸液為原代，取樣接種所需培養(yǎng) 基斜面，然后分別同所述配置好的各濃度碘伏、含氯消毒劑及溶葡萄球菌復(fù)合酶作用，所述 碘伏的作用時(shí)間為〇. 5min，所述含氯消毒劑的作用時(shí)間為5min，所述溶葡萄球菌復(fù)合酶的 作用時(shí)間為6min;然后立刻轉(zhuǎn)入含有相應(yīng)的中和劑的肉湯管中中和10分鐘，中和后轉(zhuǎn)種計(jì) 數(shù)平皿，再?gòu)母髯缘挠?jì)數(shù)平皿上取亞致死量的金黃色葡萄球菌，重復(fù)上述步驟至20代，比 較所述20代亞致死量金黃色葡萄球菌的抗藥性得到所述亞致死量金黃色葡萄球菌對(duì)消毒 劑的抗藥性變化。
[0049] 在測(cè)定所述亞致死量金黃色葡萄球菌對(duì)消毒劑的抗藥性變化的同時(shí)，采用K-B紙 片試驗(yàn)法，分別連續(xù)觀察記錄所述三種消毒液的亞致死量1-20代的金黃色葡萄細(xì)菌對(duì)抗 生素藥敏的變化，所述抗生素為以下幾種之一：青霉素、紅霉素、萬古霉素、慶大霉素、利福 平、左氧氟沙星、頭孢西丁、SMZ-CO;
[0050] 分別用無菌棉簽蘸取所述1-20代亞致死量的金黃色葡萄球菌的菌懸液，在試管 內(nèi)壁液面上方旋轉(zhuǎn)緊壓，將多余的菌液擠去，然后在每個(gè)M-H培養(yǎng)基平板瓊脂表面上均勻 涂抹接種3次，每次旋轉(zhuǎn)平板60°C，以確保接種菌的均勻分布，最后沿著平板內(nèi)緣涂抹一 周，干燥5分鐘；然后在平板上貼放選取的直徑5_抗菌藥物紙片，使其緊貼平板表面，每個(gè) 平皿貼4張，蓋好平皿，置于35-37°C培養(yǎng)18-20h，用游標(biāo)卡尺量取抑菌圈，記錄每次藥敏結(jié) 果，結(jié)果判定根據(jù)臨床微生物標(biāo)準(zhǔn)化操作；連續(xù)做20代試驗(yàn)；
[0051] (3)敏感性恢復(fù)實(shí)驗(yàn)：選取經(jīng)消毒劑亞致死量篩選的第20代金黃色葡萄球菌作 為原代菌，用接種環(huán)蘸取典型的菌落，接種到血液增菌肉湯管中培養(yǎng)24h為一代；用所述接 種環(huán)蘸取培養(yǎng)好的血液增菌肉湯菌懸液，接種到分離平皿中，置于35°C-37°C培養(yǎng)18-24h; 用所述接種環(huán)蘸取所述分離平皿中的典型菌落接種到營(yíng)養(yǎng)瓊脂斜面上，35°C-37°C培養(yǎng) 18-24h得到菌苔；質(zhì)量分?jǐn)?shù)為3%的磷酸鹽緩沖液洗下菌苔，振蕩均勻并經(jīng)無菌脫脂棉過 濾制備成所述血液增菌肉湯菌懸液；按照所述步驟（3)進(jìn)行藥物敏感試驗(yàn)，記錄每次藥敏 結(jié)果，連續(xù)重復(fù)傳代從第20代到第40代；
[0052] 所述增菌肉湯管中含有血液增菌肉湯，其組分為：蛋白胨10.Og/L;牛肉浸出粉 3.Og/L;氯化鈉5.Og/L;葡萄糖1.Og/L;枸橡酸鈉3.Og/L;磷酸氫二鉀2gg/L;對(duì)氨基 苯甲酸0.05g/L;硫酸鎂2.4g/L;酚紅0.024g/L;其余為蒸餾水；血液增菌肉湯pH值為 7. 4±0. 1 ;經(jīng)121°C滅菌15min和35°C24h無菌試驗(yàn)備用。
[0053] (4)根據(jù)所述步驟（2)、（3)和（4)的測(cè)定結(jié)果，找出所述亞致死量金黃色葡萄球 菌對(duì)所述消毒劑的抗藥性及其對(duì)所述抗生素的耐藥性的變化規(guī)律及聯(lián)系。
[0054] 本實(shí)施例測(cè)得的結(jié)果如下：
[0055] 消毒劑對(duì)不同傳代細(xì)菌殺滅效果變化：
[0056] 經(jīng)對(duì)原代至20代金黃色葡萄球菌殺滅效果觀察顯示，有效碘濃度在39. 06mg/L~ 9. 77mg/L范圍內(nèi)，均作用0? 5min;有效氯在19. 53mg/L~9. 77mg/L范圍內(nèi)，均作用5min; 對(duì)不同傳代數(shù)的金黃色葡萄球菌殺滅率雖有波動(dòng)，但沒有降低趨勢(shì)，具體結(jié)果見表1。
[0057] 表1兩種化學(xué)消毒劑對(duì)不同傳代數(shù)金黃色葡萄球菌殺滅效果
[0058]
[0059]
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種同時(shí)測(cè)定亞致死量金黃色葡萄球菌抗藥性和耐藥性的方法，其特征在于，包括 如下步驟： (1) 制備含干擾劑的金黃色葡萄球菌的菌懸液； (2) 配制不同種類不同濃度的消毒劑對(duì)所述含干擾劑的金黃色葡萄球菌的菌懸液進(jìn)行 殺菌試驗(yàn)并測(cè)定每一代亞致死量金黃色葡萄球菌的抗藥性；同時(shí)測(cè)定所述每一代亞致死量 金黃色葡萄球菌對(duì)抗生素的耐藥性；連續(xù)做20代； (3) 敏感性恢復(fù)實(shí)驗(yàn)：選取經(jīng)消毒劑亞致死量篩選的第20代金黃色葡萄球菌作為原代 菌，接種到血液增菌肉湯管中培養(yǎng)并制備成血液增菌肉湯菌懸液，將所述血液增菌肉湯菌 懸液進(jìn)行藥物敏感試驗(yàn)；重復(fù)上述步驟至第40代。 (4) 根據(jù)所述步驟（2)、（3)和（4)的測(cè)定結(jié)果，找出所述亞致死量金黃色葡萄球菌對(duì) 所述消毒劑的抗藥性及其對(duì)所述抗生素的耐藥性的變化規(guī)律及聯(lián)系。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述同時(shí)測(cè)定亞致死量金黃色葡萄球菌抗藥性和耐藥性的方法，其 特征在于，所述步驟（1)具體包括如下步驟： 將所述金黃色葡萄球菌經(jīng)過增菌培養(yǎng)和分離培養(yǎng)，經(jīng)分離培養(yǎng)后將所述金黃色葡萄球 菌分成單個(gè)細(xì)菌，并使其獨(dú)立分裂繁殖形成單獨(dú)菌落；用接種針挑取所述分離培養(yǎng)得到的 典型菌落接種到營(yíng)養(yǎng)瓊脂斜面，在35-37?條件下培養(yǎng)24h形成菌苔；用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為3%磷 酸鹽緩沖液洗下所述菌苔，經(jīng)振蕩均勻并經(jīng)無菌脫脂棉過濾后得到濾液，用無菌水稀釋所 述濾液制備成濃度為〇. 5麥?zhǔn)蠘?biāo)準(zhǔn)的菌懸液；將所述菌懸液與干擾劑溶液做對(duì)倍稀釋配成 IOml的濃度為7. 5 X 107cfu/ml含有干擾劑的菌懸液備用，所述干擾劑溶液時(shí)由