一種鞣酸加壓素的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及生物制藥領(lǐng)域。更具體地，本發(fā)明涉及稼酸加壓素的制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 稼酸加壓素，是由九個(gè)氨基酸殘基組成的合成多膚，其化學(xué)結(jié)構(gòu) -Phe-L-Gln-L-Asn-L-切s-L-Pr〇-L-Arg-L-Gly (1 -的-二硫鍵稼酸鹽，加壓素的理論分子量 1084. 24。稼酸加壓素為抗利尿激素藥，能促進(jìn)遠(yuǎn)端腎小管及集合管對水分的重吸收而具有 抗利尿作用，其制劑臨床用于治療尿崩癥。
[0003] 目前已上市多膚藥物常見的純化方法大都采用了制備型高效液相色譜法，該法是 獲得高純度多膚目標(biāo)分子的最有效的方法。一般多膚藥物純化制備工藝設(shè)計(jì)是先中低壓色 譜富集目標(biāo)多膚，然后高壓色譜精制，但是考慮到我們目標(biāo)多膚血管緊張素分子量約IkD， 無合適的分子篩凝膠柱（其上樣量小，流速低，處理量小，比較適合分子量大于lOkD蛋白 的脫鹽）或超濾膜選擇。而且中低壓色譜中常用的分離方法有分子篩色譜法、離子交換色 譜法和疏水相互作用色譜法，該些色譜方法中用到的填料的粒徑通常從幾十微米到幾百微 米不等，空隙尺寸多為幾百納米不等，無法得到高純度的目標(biāo)多膚。如果采用高鹽洗脫，后 期處理無法找到合適的脫鹽方案，分離純化效果也有限，樣品損失很大，回收率計(jì)算也較復(fù) 雜，對于后期反相制備很不利。
[0004] 現(xiàn)在還缺乏一種有效的制備多膚鹽原料藥的方法，因此仍然迫切需要開發(fā)新的多 膚鹽的純化工藝。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題在于為了克服現(xiàn)有技術(shù)中稼酸加壓素的制備工藝復(fù) 雜、收率低的缺陷，而提供了一種稼酸加壓素的制備方法。本發(fā)明的稼酸加壓素的制備方法 W稼酸加壓素粗品為起始原料，經(jīng)過高壓反相色譜純化和脫鹽步驟，制備高純度的稼酸加 壓素的方法。
[0006] 發(fā)明人經(jīng)過反復(fù)的研究發(fā)現(xiàn)，目前高壓反相色譜法經(jīng)典純化的填料是硅膠基質(zhì)， 其柱效好，分辨率高，但色譜條件抑2-7耐受較窄；而安捷倫聚合物填料化RP-S為苯己 帰-二己帰基苯（PS-DVB)共聚物，可耐受較寬闊的抑范圍（pH范圍可達(dá)1-14)，并且可用 1M化0H溶液再生，也可W精準(zhǔn)控制孔徑大小與孔徑形態(tài)，使得溶質(zhì)分子無障礙擴(kuò)散，相對 于硅膠基質(zhì)，其增加了有效表面積，能保持很好的柱效和分辨率，且提升了填料的載樣量。
[0007] 本發(fā)明提供了一種稼酸加壓素的制備方法，其包括下述步驟；采用高效液相反相 色譜法將加壓素粗品溶液依次進(jìn)行反相純化、反相脫鹽，即可；高效液相反相色譜法的填料 為苯己帰-二己帰基苯（PS-DVB)共聚物。
[0008] 所述的加壓素粗品溶液較佳地為加壓素粗品溶于體積百分比濃度為5%的己膳水 溶液形成的lOg/L溶液。
[0009] 其中，所述的反相純化的條件優(yōu)選如下；流動相A為體積百分比為0. 1%的H氣己 酸水溶液，流動相B為體積百分比為0. 1 %的H氣己酸己膳溶液，流動相C為所述的加壓素 粗品溶液，流速為180~220血/min (較佳地為200血/min)，檢測波長為220皿；
[0010] 按照下表的條件進(jìn)行在線上樣、洗脫，百分比為體積百分比；
[0011]
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種鞣酸加壓素的制備方法，其包括下述步驟：采用高效液相反相色譜法將加壓素 粗品溶液依次進(jìn)行反相純化、反相脫鹽，即可；高效液相反相色譜法的填料為苯乙烯-二 乙烯基苯共聚物。
2. 如權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述的加壓素粗品溶液為加壓素粗品 溶于體積百分比濃度為5%的乙腈水溶液形成的10g/L溶液。
3. 如權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述的反相純化的條件如下：流動相A 為體積百分比為〇. 1%的三氟乙酸水溶液，流動相B為體積百分比為0. 1%的三氟乙酸乙 腈溶液，流動相C為所述的加壓素粗品溶液，流速為190~210mL/min，檢測波長為220nm ;收集保留時(shí)間為45~95min的洗脫液得到加壓素-三氟乙酸溶液。
4. 如權(quán)利要求4所述的制備方法，其特征在于，所述的反相脫鹽的條件如下：流動相A 為水，流動相B為乙腈，流動相C為0. lmol/L NaOH溶液，流速為180~220mL/min，檢測 波長為220nm ;收集保留時(shí)間為100~155min的洗脫液即可得到加壓素溶液。
5. 如權(quán)利要求5所述的制備方法，其特征在于，在所述的反相純化中，流速為200mL/ min ;在所述的反相脫鹽中，流速為200mL/min。
6. 如權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述的高效液相反相色譜法的裝填條 件如下：填料為安捷倫PLRP-S苯乙烯-二乙烯基苯共聚物，孔徑10nm，粒徑10 μ m，裝柱密 度 0· 33g/mL，柱壓為 650psi。
7. -種加壓素鞣酸鹽的制備方法，其包括下述步驟：將權(quán)利要求1~7中任一項(xiàng)所 述的制備方法得到的加壓素與鞣酸混合，即可。
8. 如權(quán)利要求8所述的制備方法，其特征在于，在所述的混合結(jié)束后，還進(jìn)行減壓濃 縮，冷凍干燥，即可。
9. 如權(quán)利要求9所述的制備方法，其特征在于，所述的減壓濃縮的壓力為-0.15~ -0.05MPa，所述的減壓濃縮的溫度為25~35°C。
10. 由權(quán)利要求8~10中任一項(xiàng)所述的制備方法制得的不含有三氟乙酸的鞣酸加 壓素。
【專利摘要】本發(fā)明闡述一種鞣酸加壓素制備方法。該加壓素的制備方法包括下述步驟：采用高效液相反相色譜法將加壓素粗品溶液依次進(jìn)行反相純化、反相脫鹽，即可；高效液相反相色譜法的填料為苯乙烯-二乙烯基苯(PS-DVB)共聚物。本發(fā)明將反相純化和反相脫鹽聯(lián)用，設(shè)計(jì)出聚合物填料苯乙烯-二乙烯基苯的最新應(yīng)用，可以大批量制備鞣酸加壓素。
【IPC分類】C07K7-16, C07K1-20
【公開號】CN104672308
【申請?zhí)枴緾N201410817217
【發(fā)明人】劉冠男, 李靜潔, 孫延年
【申請人】青島康原藥業(yè)有限公司
【公開日】2015年6月3日
【申請日】2014年12月23日