一種硫酸粘菌素的純化方法
【技術領域】
[0001]本發(fā)明涉及藥物的分離純化領域，尤其涉及一種硫酸粘菌素的純化方法。
【背景技術】
[0002]硫酸粘菌素為白色或類白色粉末，味苦，有引濕性。難溶于甲醇或乙醇中，幾乎不溶于醚和氯仿中。硫酸粘菌素是多粘菌素的硫酸鹽，耐熱，消化道不易吸收，排泄迅速，毒性小，無副作用，不易產(chǎn)生耐藥菌株，是最安全的畜禽促生長抗生素之一。硫酸粘菌素是堿性多肽類抗生素，主要用于防治敏感菌的感染和促進畜禽生長，對革蘭氏陰性菌(尤其大腸桿菌、綠膿桿菌、沙門氏菌、嗜血桿菌和變形桿菌等)有強抑制作用，對革蘭氏陽性菌(如金黃葡萄球菌和溶血性鏈球菌外)有抑制作用。
[0003]多粘菌素的分離目前以離子交換法應用最廣(參見顧覺奮主編分離純化工藝原理.中國醫(yī)藥科技出版社，199，296-300)。離子交換法是利用多粘菌素為高價堿性化合物的性質(zhì)，可用羧基陽離子交換樹脂(Na型)進行提取。但是從純化結(jié)果來看，離子交換法生產(chǎn)的硫酸粘菌素，其純度不高，HPLC歸一化法測總組分含量，一般只有70-75%，而歐洲藥典EP6.0的標準為總組分含量不低于79%。
[0004]

【發(fā)明內(nèi)容】

本發(fā)明的目的是提供一種硫酸粘菌素的高效液相色譜系統(tǒng)純化方法。
[0005]本發(fā)明為實現(xiàn)上述發(fā)明目的采用的技術方案如下:一種硫酸粘菌素的純化方法，其特征在于以反相C18為固定相，用鹽溶液、乙腈為流動相，用半制備型高效液相色譜分離純化系統(tǒng)制備出硫酸粘菌素，包括以下步驟:
(1)將硫酸粘菌素粗品溶于流動相中，濃度為:1(T200mg/ml ；
(2)用半制備型高效液相色譜分離純化系統(tǒng)制備硫酸粘菌素；
(3)納濾脫鹽。
[0006]本發(fā)明具有以下技術效果:本發(fā)明采用半制備型高效液相色譜系統(tǒng)，制備出高純度的硫酸粘菌素，工藝簡單，產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定，可回收利用，無污染，實現(xiàn)清潔生產(chǎn)。
[0007]【具體實施方式】:
實施例1
樣品用流動相溶解，濃度為100 mg/ml，采用半制備型高效液相色譜分離純化系統(tǒng)進行制備，色譜柱尺寸為Φ10Χ250 mm，反相C18填料，粒徑為10 um，上樣量40 mg，流動相A為30 mmol/L無水Na2SO4水溶液(pH 2.4)，流動相B為乙腈，等度洗脫，流動相中兩種成分的比例，A/B=80/20。采用的紫外光度檢測器的檢測波長為215nm，收集硫酸粘菌素，40°C旋蒸濃縮后采用實驗室級納濾設備脫鹽，經(jīng)HPLC分析純度> 98.7%。
[0008]實施例2
樣品用流動相溶解，濃度為100 mg/ml，采用半制備型高效液相色譜分離純化系統(tǒng)進行制備，色譜柱尺寸為Φ10Χ250 mm，反相C18填料，粒徑為10 um，上樣量50 mg，流動相A為30 mmol/L無水Na2SO4水溶液(pH 2.4)，流動相B為乙腈，等度洗脫，流動相中兩種成分的比例，A/B=80/20。采用的紫外光度檢測器的檢測波長為215nm，收集硫酸粘菌素，40°C旋蒸濃縮后采用實驗室級納濾設備脫鹽，經(jīng)HPLC分析純度> 98.3%。
[0009]實施例3
樣品用流動相溶解，濃度為100 mg/ml，采用半制備型高效液相色譜分離純化系統(tǒng)進行制備，色譜柱尺寸為Φ10Χ250 mm，反相C18填料，粒徑為10 um，上樣量80 mg，流動相A為30 mmol/L無水Na2SO4水溶液(pH 2.4)，流動相B為乙腈，等度洗脫，流動相中兩種成分的比例，A/B=82/18。采用的紫外光度檢測器的檢測波長為215nm，收集硫酸粘菌素，40°C旋蒸濃縮后采用實驗室級納濾設備脫鹽，經(jīng)HPLC分析純度> 98.0%。
【主權項】
1.一種硫酸粘菌素的純化方法，包括以下步驟: (1)將硫酸粘菌素粗品溶于流動相中，濃度為:1(T200mg/ml ； (2)用半制備型高效液相色譜分離純化系統(tǒng)制備硫酸粘菌素； (3)納濾脫鹽。
2.根據(jù)權利要求1所述的方法，其特征在于，所述的步驟(2)中的用半制備型高效液相色譜分離純化系統(tǒng)制備硫酸粘菌素，具體方法為:以鹽溶液、乙腈的混合物為流動相進行洗脫，色譜柱填料為反相C18填料，填料粒度5?15 um，系統(tǒng)溫度為15?40°C。
3.根據(jù)權利要求2所述的方法，其特征在于，所述的洗脫為等度洗脫。
4.根據(jù)權利要求2所述的方法，其特征在于，所述的系統(tǒng)溫度的最適宜溫度為25°C。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種純化硫酸粘菌素的方法。本發(fā)明采用半制備型高效液相色譜分離純化系統(tǒng)，以反相C18為填料，以鹽溶液、乙腈為流動相。采用本發(fā)明制備硫酸粘菌素，操作簡單，實驗步驟少，成本低，周期短，純度可達98.0%以上。
【IPC分類】C07K7-62, C07K1-20
【公開號】CN104672309
【申請?zhí)枴緾N201310618243
【發(fā)明人】陳銳, 金新亮, 李勝迎
【申請人】江蘇漢邦科技有限公司
【公開日】2015年6月3日
【申請日】2013年11月29日