多粘菌素脂質(zhì)體及其制備工藝的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種多粘菌素脂質(zhì)體及其制備工藝，將多粘菌素包裹于脂質(zhì)體中，以膽固醇與磷脂為穩(wěn)定劑，制備的多粘菌素脂質(zhì)體制劑，劑型為液體制劑或凍干粉。其穩(wěn)定性顯著提高，可以很好的滿足臨床應(yīng)用需求。按照本發(fā)明方法生產(chǎn)的多粘菌素脂質(zhì)體粒徑小、包封率高且生產(chǎn)可行性強(qiáng)，為研制一種新型多粘菌素制劑提供了新的思路。
【專利說(shuō)明】多粘菌素脂質(zhì)體及其制備工藝
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及醫(yī)藥制劑領(lǐng)域，具體涉及一種用于治療綠膿桿菌及其它假單胞菌引起的創(chuàng)面、尿路以及眼、耳、氣管等部位感染的多粘菌素脂質(zhì)體及其制備工藝。
【背景技術(shù)】
[0002]多粘菌素(Polymyxin)，是一種從多粘芽孢桿菌培養(yǎng)液中獲得的堿性多肽類抗生素，包括多粘菌素B (Polymyxin B,又稱硫酸多粘菌素B,見(jiàn)圖1)和多粘菌素E (PolymyxinE，又稱硫酸粘菌素，見(jiàn)圖2)，二者的抗菌譜和用途較相似，在20世紀(jì)60年代被用于治療革蘭氏陰性桿菌的感染。多粘菌素的抗菌譜較窄，僅對(duì)革蘭氏陰性需氧菌具有較強(qiáng)抗菌活性，其抗菌譜包括鮑曼不動(dòng)桿菌、銅綠假單胞菌、大腸埃希菌、腸桿屬菌、克雷伯菌屬、志賀菌屬、沙門菌屬、流感桿菌等，與其他抗生素藥物相比，多粘菌素對(duì)多數(shù)革蘭氏陰性菌特別是不動(dòng)桿菌屬、大腸埃希菌敏感率較高。
[0003]多粘菌素于20世紀(jì)70年代批準(zhǔn)上市，20世紀(jì)80年代，因其毒性反應(yīng)以及新抗菌藥物的問(wèn)世，該藥幾乎被臨床棄用，近年來(lái)，MDR革蘭氏陰性菌臨床分離率上升明顯，其耐藥性高，對(duì)許多抗菌藥物天然耐藥、對(duì)原有效藥物的耐藥性上升迅速，甚至出現(xiàn)泛耐藥菌株，臨床治療困難、病死率高，促使人們重新認(rèn)識(shí)到多粘菌素的重要作用，使其再次受到關(guān)注。靜脈注射多粘菌素在治療MDR革蘭氏陰性菌感染(包括肺炎、菌血癥、假體關(guān)節(jié)、尿路感染)，特別是MDR銅綠假單胞菌、嗜麥芽窄食單胞菌和鮑曼不動(dòng)桿菌引起的嚴(yán)重感染的治療中都發(fā)揮了重要作用。
[0004]多粘菌素的局部刺激性和毒性較大，不良反應(yīng)多見(jiàn)，在常規(guī)劑量時(shí)不良反應(yīng)發(fā)生率可達(dá)25%。其不良反應(yīng)包括腎毒性，神經(jīng)毒性，過(guò)敏反應(yīng)，其他:白細(xì)胞減少和肝毒性，靜脈給藥偶見(jiàn)靜脈炎，肌注易引起局部疼痛。由于多粘菌素的不良反應(yīng)發(fā)生率較高，在開(kāi)發(fā)制劑時(shí)，必須考慮可降低不良反應(yīng)、提高藥物生物利用度的劑型。
[0005]脂質(zhì)體(Liposome)是一種具有祀向給藥功能的新型藥物載體,直徑25~1000nm不等。脂質(zhì)體是利用磷脂雙分子層膜所形成的囊泡包裹藥物分子而形成的制劑。由于生物體質(zhì)膜的基本結(jié)構(gòu)也是磷脂雙分子層膜，脂質(zhì)體具有與生物體細(xì)胞相類似的結(jié)構(gòu)，因此有很好的生物相容性。主要特點(diǎn)是可提高藥物的溶解性和穩(wěn)定性，改善藥物性質(zhì)和靶向性，延長(zhǎng)藥物作用時(shí)間，增加療效，降低毒副反應(yīng)等。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]本發(fā)明目的在于:提供一種多粘菌素脂質(zhì)體，以利于增加療效，降低其不良反應(yīng)，增加患者用藥的順應(yīng)性。
[0007]本發(fā)明的再一目的在于:提供一種上述多粘菌素脂質(zhì)體的制備方法。
[0008]本發(fā)明目的通過(guò) 下述技術(shù)方案實(shí)現(xiàn):一種多粘菌素脂質(zhì)體，包括多粘菌素，每1000mL制劑的原輔料配方為:
多粘菌素 I~10 g磷脂5~300 g
膽固醇 0.1~200 g 抗氧化劑 0.1~200 mg 賦形劑 10~200 g 緩沖液 500~800 mL,
用注射用水定容至1000 mL，用堿性試劑調(diào)節(jié)pH至4.5~6.5，其中，
所述的多粘菌素為多粘菌素B，硫酸多粘菌素B或其他生理上可接受的多粘菌素B的鹽；或者為多粘菌素E，硫酸多粘菌素E，多粘菌素E甲磺酸鈉或其他生理上可接受的多粘菌素E的鹽；
所述的多粘菌素和磷脂的重量比例為1:5~1:50，膽固醇和磷脂的重量比例為1:50 ~1:1。
[0009]在上述方案基礎(chǔ)上，所述的磷脂選自蛋黃卵磷脂、氫化蛋黃卵磷脂、大豆卵磷脂、氫化大豆卵磷脂、鞘磷脂、磷脂酰乙醇胺、二肉豆蘧酰磷脂酰膽堿、二棕櫚酰磷脂酰膽堿、二硬酯酰磷脂酰膽堿、二油酰磷脂酰膽堿、二月桂酰磷脂酰膽堿中的一種或幾種。
[0010]在上述方案基礎(chǔ)上，所述的抗氧化劑選自維生素E、維生素C、亞硫酸鈉、亞硫酸氫鈉或檸檬酸中的一種或幾種。
[0011]在上述方案基礎(chǔ)上，所述的賦形劑選自蔗糖、甘露醇、海藻糖、麥芽糖或乳糖中的一種或幾種。
[0012]在上述方案基礎(chǔ)上，所述的堿性試劑為氫氧化鈉，碳酸鈉，碳酸氫鈉，枸櫞酸鈉或酒石酸鈉中的一種或幾種。
[0013]在上述方案基礎(chǔ)上，所述的緩沖系統(tǒng)可以是磷酸鹽、琥珀酸鹽、檸檬酸鹽、酒石酸鹽中的一種或幾種，濃度為0.01~0.15 Mo
[0014]其中，所述的多粘菌素脂質(zhì)體劑型是液體制劑或凍干粉針。
[0015]本發(fā)明還提供了一種多粘菌素脂質(zhì)體的生產(chǎn)工藝，包含以下步驟:
(1)制備多層脂質(zhì)體:根據(jù)配方選取磷脂、膽固醇和抗氧化劑溶于氯仿或甲醇-氯仿混合溶液；用減壓蒸發(fā)法或噴霧干燥法將溶劑除去，形成脂質(zhì)膜或脂質(zhì)粉末；配制緩沖劑，加入賦形劑溶解，用該溶液水化脂質(zhì)膜或脂質(zhì)粉末，水化溫度在30~80°C之間，必要時(shí)用攪拌或高速分散使脂質(zhì)水化完全，得多室脂質(zhì)體；
(2)勻化脂質(zhì)體:水化完全后用高壓均質(zhì)機(jī)勻化脂質(zhì)體至所需要的粒徑和均勻度，或通過(guò)擠壓設(shè)備把多層脂質(zhì)體在一定壓力下通過(guò)相應(yīng)孔徑的微孔膜來(lái)達(dá)到；脂質(zhì)體的平均粒徑控制在100~200 nm ；
(3)制備多粘菌素脂質(zhì)體:在30-80°C條件下將多粘菌素溶液加入到步驟(2)的空白脂質(zhì)體溶液中，使用堿性試劑調(diào)節(jié)pH至4.5~6.5，經(jīng)30~80°C恒溫水浴孵育10~60 min后，冷卻至室溫；
(4)游離藥物的去除:采用透析或者超濾去除游離藥物；
(5)定容、除菌、分裝、保存:用注射用水定容，經(jīng)0.22 μ m微孔濾膜除菌，分裝即得成品，成品可在2~8°C下保存或者凍干保存至使用；
其中， 所述的生產(chǎn)工藝中脂質(zhì)體復(fù)溶后平均粒徑在80~150 nm之間，藥物包封率>
90%。[0016]其中，所述生產(chǎn)工藝步驟(3)中產(chǎn)品的最終pH范圍以為5.0~5.5為最佳。
[0017]本發(fā)明的優(yōu)越性在于:提供的多粘菌素脂質(zhì)體利于增加療效，降低其不良反應(yīng)，增加了患者用藥的順應(yīng)性。制備方法容易實(shí)現(xiàn)，操控性好。
【專利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0018]圖1為硫酸多粘囷素B結(jié)構(gòu)圖；
圖2硫酸粘囷素結(jié)構(gòu)圖。
【具體實(shí)施方式】
[0019]下面實(shí)施例用于進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明，但并不以任何形式限制本發(fā)明所涉及的內(nèi)容。
[0020]實(shí)施例1:
制劑處方(100 mL):
硫酸多粘菌素B100 mg
氫化大豆磷脂酰膽 堿2 g
膽固醇500 mg
α -生育酹12 mg
蔗糖10 g
磷酸鹽緩沖液80 mL
碳酸鈉調(diào)節(jié)pH至5.0-5.5
注射用水定容至100 mL
制劑工藝如下:
將氫化大豆磷脂酰膽堿、膽固醇和α-生育酚分別溶于氯仿中，混合均勻后，將溶液轉(zhuǎn)移至旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)瓶中旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)成膜，抽真空除去溶劑。用含有蔗糖的125 mM, pH 3.0的磷酸鹽緩沖液80 mL在65 土 51:下水化1.5-2 h，即得多層脂質(zhì)體。將上述多層脂質(zhì)體溶液經(jīng)高壓均質(zhì)機(jī)15000-20000 psi均質(zhì)，獲得平均粒徑為104 土 10 nm的空白脂質(zhì)體。在65± 5°C，攪拌下加入硫酸多粘菌素B水溶液，慢慢加入碳酸鈉溶液將pH調(diào)至5.8，在65 土5V條件下恒溫水浴孵育20 min，冷卻至室溫，透析除去游離的多硫酸粘菌素B，測(cè)定中間體含量，定容，經(jīng)0.22 μ m微孔濾膜除菌、分裝、2-8°C保存或凍干保存，復(fù)溶后獲得平均粒徑114 土 12 nm，包封率約為95%的載藥脂質(zhì)體。
[0021]實(shí)施例2:
制劑處方(100 mL):
硫酸多粘菌素B150 mg
二硬酯酰磷脂酰膽堿4 g
膽固醇250 mg
海藻糖20 g
檸檬酸緩沖液80 mL
碳酸氫鈉調(diào)節(jié)pH至5.0-5.5
注射用水定容至100 mL制劑工藝如下:
將注射用二硬酯酰磷脂酰膽堿和膽固醇，分別溶于氯仿中，混合均勻后，將溶液置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)瓶中旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)成膜，抽真空去除溶劑。用含有海藻糖的100 mM, pH 3.0的檸檬酸緩沖液在65 土 51:下水化1.5-2 h，即得多層脂質(zhì)體。將上述多層脂質(zhì)體溶液經(jīng)高壓微射流均質(zhì)機(jī)10000-15000 psi均質(zhì)，獲得平均粒徑為84 土 8nm的空白脂質(zhì)體。在65 土 5°C，攪拌下加入硫酸多粘菌素B水溶液，慢慢加入碳酸氫鈉溶液將pH值調(diào)至5.8，在65 土 5°C條件下恒溫水浴孵育20 min，冷卻至室溫，超濾除去游離的多硫酸粘菌素B，測(cè)定中間體含量，定容，經(jīng)0.22 μ m微孔膜除菌、分裝、2-8°C保存或凍干保存，復(fù)溶后獲得平均粒徑為102土 10 nm，包封率約為94%的載藥脂質(zhì)體。
[0022]實(shí)施例3:
制劑處方(100 mL):
硫酸多粘菌素B200 mg
二棕櫚酰磷脂酰膽堿5 g
膽固醇250 mg
海藻糖10 g
麥芽糖10 g
酒石酸緩沖液80 mL
碳酸鈉調(diào)節(jié)pH至5.0-5.5
注射用水定容至100 mL
制劑工藝如下:
將二棕櫚酰磷脂酰膽堿和膽固醇，分別溶于氯仿中，混合均勻后，將溶液置于噴霧干燥機(jī)中噴霧成粉末。用含有海藻糖的125 mM,pH 3.0的酒石酸緩沖液中在65 土 5°C下水化1.5-2 h，即得多層脂質(zhì)體。將上述含有多層脂質(zhì)體溶液在45 土 5°C下經(jīng)擠出儀均化，獲得平均粒徑為94 土 8 nm空白脂質(zhì)體。在65 土 5°C，攪拌下加入硫酸多粘菌素B水溶液，定容，使用碳酸鈉溶液將pH值調(diào)至5.8，65 土 5°C條件下恒溫水浴孵育20 min，冷卻至室溫，超濾除去游離的硫酸多粘菌素B，經(jīng)0.22 μ m微孔膜除菌、分裝、2-8°C保存或凍干保存，復(fù)溶后獲得平均粒徑106 土 11 nm，包封率約為95%的載藥脂質(zhì)體。
[0023]實(shí)施例4
制劑處方(1000 mL)
硫酸多粘菌素B5g
氫化蛋黃卵磷脂200 g
磷脂酰乙醇胺100 g
膽固醇50 g
維生素E4 mg
乳糖100 g
0.1M磷酸鹽緩沖液750 mL
氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH至5.0-5.5
注射用水定容至1000 mL
制劑工藝如下:將二棕櫚酰磷脂酰膽堿、膽固醇和維生素E分別溶于氯仿中，混合均勻后，將溶液置于噴霧干燥機(jī)中噴霧成粉末。用含有乳糖的125 mM,pH 3.0的酒石酸緩沖液中在65 土 5°C下水化1.5-2 h，即得多層脂質(zhì)體。將上述含有多層脂質(zhì)體溶液在45 土 5°C下經(jīng)擠出儀均化，得到平均粒徑為94 土 8nm的空白脂質(zhì)體。在65 土 5°C，攪拌下加入硫酸多粘菌素B水溶液，測(cè)定中間體含量，定容，使用碳酸鈉溶液將PH值調(diào)至5.8，65 土 5°C條件下恒溫水浴孵育20 min，冷卻至室溫，超濾除去游離的硫酸多粘菌素B，經(jīng)0.22 μ m微孔濾膜除菌、分裝、2-8°C保存或凍干保存，復(fù)溶后獲得平均粒徑106 土 11 nm，包封率約95%的載藥脂質(zhì)體。
[0024]實(shí)施例5
制劑處方(1000 mL)
多粘菌素E8g
二油酰磷脂酰膽堿100 g
膽固醇200 g
亞硫酸氫鈉2 mg
鹿糖50 g
海藻糖50 g
檸檬酸鹽緩沖液600 mL
碳酸氫鈉調(diào)節(jié)pH至5.0-5.5
注射用水定容至1000 mL
制劑工藝如下:
將二棕櫚酰磷脂酰膽堿、膽固醇和亞硫酸氫鈉分別溶于氯仿中，混合均勻后，將溶液置于噴霧干燥機(jī)中噴霧成粉末。用含有蔗糖的125 mM, pH 3.0的酒石酸緩沖液中在65 土5°C下水化1.5-2 h，即得多層脂質(zhì)體。將上述含有多層脂質(zhì)體溶液在45 土 5°C下經(jīng)擠出儀均化，得平均粒徑為94 土 8 nm的空白脂質(zhì)體。在65 土 5°C，攪拌下加入硫酸多粘菌素B水溶液，測(cè)定中間體含量，定容，使用碳酸鈉溶液將pH值調(diào)至5.8，65 土 5°C條件下恒溫水浴孵育20 min，冷卻至室溫，超濾除去游離的硫酸多粘菌素B，經(jīng)0.22 ym微孔濾膜除菌、分裝、2-8°C保存或凍干保存，復(fù)溶后獲得平均粒徑106 土 11 nm，包封率約為95%的載藥脂質(zhì)體。
【權(quán)利要求】
1.一種多粘菌素脂質(zhì)體，包括多粘菌素，每1000 mL制劑的原輔料配方為: 多粘菌素 I~10 g 磷脂5~300 g 膽固醇 0.1~200 g 抗氧化劑 0.1~200 mg 賦形劑 10~200 g 緩沖液 500~800 mL， 用注射用水定容至1000 mL，用堿性試劑調(diào)節(jié)pH至4.5~6.5，其中， 所述的多粘菌素為多粘菌素B，硫酸多粘菌素B或其他生理上可接受的多粘菌素B的鹽；或者為多粘菌素E，硫酸多粘菌素E，多粘菌素E甲磺酸鈉或其他生理上可接受的多粘菌素E的鹽； 所述的多粘菌素和磷脂的重量比例為1:5~1:50，膽固醇和磷脂的重量比例為1:50 ~1:1。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的多粘菌素脂質(zhì)體，其特征在于:所述的磷脂為蛋黃卵磷脂、氫化蛋黃卵磷脂、大豆卵磷脂、氫化大豆卵磷脂、鞘磷脂、磷脂酰乙醇胺、二肉豆蘧酰磷脂酰膽堿、二棕櫚酰磷脂酰膽堿、二硬酯酰磷脂酰膽堿、二油酰磷脂酰膽堿、二月桂酰磷脂酰膽堿中的一種或幾種，磷 脂酰膽堿的含量在80~99%之間。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的多粘菌素脂質(zhì)體，其特征在于:所述的抗氧化劑為維生素E、維生素C、亞硫酸鈉、亞硫酸氫鈉或檸檬酸中的一種或幾種。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的多粘菌素脂質(zhì)體，其特征在于:所述的賦形劑為蔗糖、甘露醇、海藻糖、麥芽糖或乳糖中的一種或幾種。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的多粘菌素脂質(zhì)體，其特征在于緩沖系統(tǒng)可以是磷酸鹽、琥珀酸鹽、丁二酸鹽、檸檬酸鹽、甘氨酸鹽、乳糖酸鈉、甘氨酸、酒石酸鹽、丁二酸、檸檬酸、乳糖酸、組氨酸中的一種或幾種，濃度為0.01M~0.15M。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的多粘菌素脂質(zhì)體，其特征在于堿性試劑選自氫氧化鈉，碳酸鈉，碳酸氫鈉，枸櫞酸鈉或酒石酸鈉中的一種或幾種。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的多粘菌素脂質(zhì)體，其特征在于:多粘菌素為多粘菌素E，硫酸多粘菌素E，多粘菌素E甲磺酸鈉或其他生理上可接受的多粘菌素E的鹽。
8.根據(jù)權(quán)利要求1至7任一項(xiàng)所述的多粘菌素脂質(zhì)體的制劑，其特征在于:其劑型是液體制劑或凍干粉針。
9.針對(duì)權(quán)利要求1至7任一項(xiàng)所述的多粘菌素脂質(zhì)體的制備方法，其特征在于包含以下步驟: (1)按配方量制備多層脂質(zhì)體:先磷脂、膽固醇和抗氧化劑溶于氯仿或甲醇-氯仿混合溶液中；用減壓蒸發(fā)法或噴霧干燥法將溶劑除去，形成脂質(zhì)膜或脂質(zhì)粉末；配制緩沖劑，加入賦形劑溶解，用該溶液水化脂質(zhì)混合物，水化溫度在30~80°C之間，攪拌或高速分散使脂質(zhì)水化完全，得多層脂質(zhì)體； (2)勻化脂質(zhì)體:水化完全后用高壓均質(zhì)機(jī)勻化脂質(zhì)體至所需要的粒徑和均勻度，或者通過(guò)擠壓設(shè)備把多層脂質(zhì)體在加壓條件下通過(guò)相應(yīng)孔徑的微孔膜，將所述脂質(zhì)體的平均粒徑控制在< 150nm ；(3)制備多粘菌素脂質(zhì)體:在30~80°C條件下將多粘菌素溶液加入到步驟(2)的空白脂質(zhì)體溶液中，使用堿性試劑調(diào)節(jié)pH至4.5~6.5，經(jīng)30~80°C恒溫水浴孵育10~60min后,冷卻至室溫； (4)去除游離藥物:采用透析或者超濾去除游離藥物； (5)定容、除菌、分裝、保存:用注射用水定容，經(jīng)0.22 μ m微孔濾膜除菌，分裝即得成品，成品在2~8°C下保存或者凍干保存至使用。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的多粘菌素脂質(zhì)體的制備方法，其特征在于:該脂質(zhì)體復(fù)溶后平均粒徑η在80≤η≤150 nm之間，藥物包封率≥90%, pH范圍為5.0~5.5。
【文檔編號(hào)】A61P31/04GK103735508SQ201310732380
【公開(kāi)日】2014年4月23日 申請(qǐng)日期:2013年12月27日 優(yōu)先權(quán)日:2013年12月27日
【發(fā)明者】陳玉雙, 鄭玉林 申請(qǐng)人:上海新亞藥業(yè)有限公司