一種與大豆百粒重遺傳特征相關的標記位點Sat145及其應用
【技術領域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種與大豆百粒重遺傳特征相關的標記位點Satl45及其應用，屬于 大豆遺傳技術領域。
【背景技術】
[0002] 我國主要糧食作物中，只有大豆的單產(chǎn)低于世界平均水平，約為世界大豆平均單 產(chǎn)的80%左右。我國大豆的單產(chǎn)每畝115kg左右，美國、巴西單產(chǎn)可達180kg。對于大豆產(chǎn) 量的品種培育主要依靠育種者的專業(yè)經(jīng)驗，后期篩選工作周期長。尤其對大豆百粒重的分 子標記研究還停留在比較初級的水平，不能應用于育種實踐。所以提高大豆的單產(chǎn)對我國 大豆生產(chǎn)具有重要意義。
[0003] 控制大豆合適的百粒重是實現(xiàn)大豆高產(chǎn)的有效辦法。但是，目前對可以用于大豆 育種過程中父母本篩選的標記位點的報道較少，對于實現(xiàn)在育種前期對親本或者雜交后代 的百粒重遺傳背景進行選擇的手段和方法還比較有限。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 為解決上述問題，本發(fā)明提供了一種與大豆百粒重遺傳特征相關的標記位點 Sat 145,所采取的的技術方案如下：
[0005] 本發(fā)明的一個目的在于提供一種與大豆百粒重遺傳特征相關的標記位點，其特征 在于，所述標記位點位于大豆〇連鎖群上，緊密連鎖標記為SSR引物Satl45。
[0006] 所述標記位點對應專用引物的核苷酸序列如SEQ ID NO. 1和SEQ ID NO. 2所示。 [0007] 所述標記位點應用于大豆的遺傳育種，具體用于輔助鑒定和篩選大豆的百粒重遺 傳特征。
[0008] 本發(fā)明的另一個目的在于提供一種利用所述標記位點鑒定大豆百粒重遺傳特征 的方法，該方法的步驟如下：
[0009] 1)待測大豆基因組DNA提?。禾崛⌒迈r待測大豆樣品中的基因組DNA ;
[0010] 2)待測大豆基因組DNA擴增：以步驟1)所得的待測大豆樣品基因組DNA為模板， 利用Satl45專用引物進行PCR擴增，所述引物的核苷酸序列如SEQ ID NO. 1和SEQ ID N0. 2 所示；
[0011] 3)擴增產(chǎn)物鑒定：通過SSR電泳檢測步驟2)所獲得的擴增產(chǎn)物，銀染顯影后擴增 產(chǎn)物中含有480bp DNA片段的待測大豆為候選具有增加百粒重遺傳性狀的大豆。
[0012] 所述方法用于鑒定大豆的百粒重遺傳特征。
[0013] 本發(fā)明的另一目的在于提供一種利用所述標記位點篩選大豆百粒重遺傳特征的 方法，該方法的步驟如下：
[0014] 1)待測大豆基因組DNA提取：提取新鮮待測大豆樣品中的基因組DNA ;
[0015] 2)待測大豆基因組DNA擴增：以步驟1)所得的待測大豆樣品基因組DNA為模板， 利用Satl45專用引物進行PCR擴增，所述引物的核苷酸序列如SEQ ID NO. 1和SEQ ID NO. 2 所示；
[0016] 3)擴增產(chǎn)物鑒定：通過SSR電泳檢測步驟2)所獲得的擴增產(chǎn)物，銀染顯影后擴增 產(chǎn)物中含有480bp DNA片段的待測大豆為候選具有增加百粒重遺傳性狀的大豆。
[0017] 所述方法用于篩選大豆的百粒重遺傳特征。
[0018] 所述PCR擴增，共35個循環(huán)，循環(huán)開始前先于95 °C下處理5min，然后進入循環(huán)，所 述循環(huán)的溫度和延伸時間程序是：先94°C 30s，然后60°C 30s，最后72°C lmin，循環(huán)結束 后再于72°C下處理lOmin。
[0019] 具體而言，本發(fā)明提供的SSR標記在鑒定大豆百粒重方面的應用，是根據(jù)大豆SSR 位點設計的引物，利用引物的產(chǎn)物帶型特征對大豆品種進行分子鑒定。
[0020] 本發(fā)明所述大豆百粒重遺傳特征是在251份大豆種質資源和以北豆5號為母本 (父本包括多馬卡?托利薩、坡黃、Harosoy、綠75、中特1號、NOVA、Century、煙黃3號、東 農(nóng)163、杜納吉卡、Amsoy、中豆27、95_5383、艾卡166、大明白豆子、瑞豐2號、Biogedulote、 中黃4號、天鵝蛋ZDD02114和東山69)的遺傳群體中，均得到了證實。
[0021] 本發(fā)明有益效果如下：
[0022] 由于在大豆中與百粒重相關的基因還沒克隆出來，利用標記位點對大豆育種進行 分子輔助選擇是一個比較經(jīng)濟的方法，尤其是對百粒重進行直接選擇。本發(fā)明的方法克服 了常規(guī)育種中因表型選擇易受環(huán)境因素干擾而導致育種效率低等問題，可以利用Satl45 標記的專用引物對大豆百粒重遺傳特性進行早期世代選擇而縮短育種周期，從而較快的篩 選出籽粒合適的大豆材料。本發(fā)明可用于大豆的育種，以提高育種的效率和大豆的產(chǎn)量和 質量。
【附圖說明】
[0023] 圖1為大豆百粒重QTL-致性圖譜。
[0024] 圖2為Sat 145在0連鎖群上的位置。
[0025] 圖3為卡方分析與T-測驗的資源等位基因的分層分析。
[0026] 圖4為等位基因的在資源中效應分析。
[0027] 圖5為關鍵等位基因資源和群體中的變化率；
[0028] (ZY值為資源中的變化率，QT值為群體中的變化率，A表示的驗證群體母本和父本 中含有的某標記的等位基因，B表不驗證關鍵等位基因在群體和未本中的有無）。
[0029] 圖6為標記Satl45在251份資源和遺傳群體中的PCR譜帶特征。
【具體實施方式】
[0030] 下面結合具體實施例對本發(fā)明做進一步說明，但本發(fā)明不受實施例的限制。
[0031] 在以下的實施方案中，除非特別說明，否則所有操作均按照《分子克隆實驗指南》 (第三版）（黃培堂等譯，北京：科學出版社，2002)所提供的方法進行。
[0032] 實施例1
[0033] -、種質資源的選擇
[0034] 選取大豆種質資源251份，針對大豆百粒重的QTL定位和百粒重QTL的元分析結 果，明確30個與百粒重相關的SSR標記位點，驗證30個標記位點在資源中的PCR產(chǎn)物帶型 特征，檢測不同帶型與百粒重之間的相關性。進一步通過遺傳群體驗證標記帶型與百粒重 之間的關系。通過統(tǒng)計學和實驗證明Satl45的PCR產(chǎn)物為480bp時，則大豆種質含有增加 百粒重的遺傳背景。所選取的251份大豆種質資源如下表所示 ：
[0035] 表1 251份大豆種質資源名稱
[0036]
【主權項】
1. 一種與大豆百粒重遺傳特征相關的標記位點，其特征在于，所述標記位點位于大豆 0連鎖群上，緊密連鎖標記為SSR引物Sat 145。
2. 權利要求1所述標記位點，其特征在于，對應專用引物的核苷酸序列如SEQ ID NO. 1 和 SEQ ID NO. 2 所示。
3. 權利要求1和2所述標記位點，應用于大豆的遺傳育種。
4. 權利要求3所述應用，其特征在于，具體用于輔助鑒定和篩選大豆的百粒重遺傳特 征。
5. -種利用權利要求1所述標記位點鑒定大豆百粒重遺傳特征的方法，其特征在于， 步驟如下： 1) 提取新鮮待測大豆樣品中的基因組DNA; 2) 以步驟1)所得的待測大豆樣品基因組DNA為模板，利用Satl45專用引物進行PCR 擴增，所述引物的核苷酸序列如SEQ ID NO. 1和SEQ ID NO. 2所示； 3) 通過SSR電泳檢測步驟2)所獲得的擴增產(chǎn)物，銀染顯影后擴增產(chǎn)物中含有480bp DNA片段的待測大豆為候選具有增加百粒重遺傳性狀的大豆。
6. 權利要求5所述方法，用于鑒定大豆的百粒重遺傳特征。
7. -種利用權利要求1所述標記位點篩選大豆百粒重遺傳特征的方法，其特征在于， 步驟如下： 1) 提取新鮮待測大豆樣品中的基因組DNA; 2) 以步驟1)所得的待測大豆樣品基因組DNA為模板，利用Satl45專用引物進行PCR 擴增，所述引物的核苷酸序列如SEQ ID NO. 1和SEQ ID NO. 2所示； 3) 通過SSR電泳檢測步驟2)所獲得的擴增產(chǎn)物，銀染顯影后擴增產(chǎn)物中含有480bp DNA片段的待測大豆為候選具有增加百粒重遺傳性狀的大豆。
8. 權利要求7所述方法，用于篩選大豆的百粒重遺傳特征。
9. 權利要求5和7所述方法，其特征在于，所述PCR擴增，共35個循環(huán)，循環(huán)開始前先 于95°C下處理5min，然后進入循環(huán)，所述循環(huán)的溫度和延伸時間程序是：先94°C 30s，然后 60°C 30s，最后72°C lmin，循環(huán)結束后再于72°C下處理lOmin。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種與大豆百粒重遺傳特征相關的標記位點Sat145及其應用，屬于大豆遺傳技術領域。本發(fā)明所提供的專用引物是在大豆O連鎖群上，緊密連鎖標記為SSR引物Sat145，引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示。該引物的標記位點為Sat145與大豆百粒重性狀具有極顯著地的相關性。該標記PCR產(chǎn)物的Sat145-3(480 bp)的片段是影響百粒重的主效位點。利用緊密連鎖的分子標記檢測育種群體家系及大豆種質資源，并進行數(shù)理統(tǒng)計分析證實該片段是主效位點，可預測其對百粒重性狀的影響，大大提高了大豆高產(chǎn)育種的選擇效率。
【IPC分類】C12Q1-68, C12N15-11
【公開號】CN104673789
【申請?zhí)枴緾N201410353559
【發(fā)明人】陳慶山, 劉春燕, 辛大偉, 朱榮勝, 胡振幫, 蔣洪蔚, 齊照明, 孫亞男, 韓雪
【申請人】東北農(nóng)業(yè)大學
【公開日】2015年6月3日
【申請日】2014年7月24日