信號傳導(dǎo)及轉(zhuǎn)錄激活因子抑制多肽及其應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及信號傳導(dǎo)及轉(zhuǎn)錄激活因子抑制多肽及其應(yīng)用，具體涉及具有抑制信號傳導(dǎo)及轉(zhuǎn)錄激活因子，預(yù)防和治療乳腺癌術(shù)后癌癥的復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移的多肽。
【背景技術(shù)】
[0002]女性乳腺是由皮膚、纖維組織、乳腺腺體和脂肪組成的，乳腺癌是發(fā)生在乳腺腺上皮組織的惡性腫瘤。乳腺癌中99%發(fā)生在女性，男性僅占1%。目前乳腺癌已成為威脅女性身心健康的常見腫瘤。
[0003]乳腺并不是維持人體生命活動的重要器官，原位乳腺癌并不致命；但由于乳腺癌細(xì)胞喪失了正常細(xì)胞的特性，細(xì)胞之間連接松散，容易脫落。癌細(xì)胞一旦脫落，游離的癌細(xì)胞可以隨血液或淋巴液播散全身，形成轉(zhuǎn)移，危及生命。如何消滅某種癌癥的遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移或防止復(fù)發(fā)，是癌癥治療方法中不可缺少的組成部分，也是目前正在探討的治療乳腺癌熱點問題。
[0004]信號傳導(dǎo)及轉(zhuǎn)錄激活因子(STAT)是一種重要的核轉(zhuǎn)錄因子。細(xì)胞因子與受體結(jié)合后激活JAK，再進(jìn)一步激活STAT。研究發(fā)現(xiàn)，STAT3在多種腫瘤組織中異常表達(dá)和激活，并與腫瘤的增殖、分化、細(xì)胞凋亡、血管生成、浸潤轉(zhuǎn)移和免疫逃避密切相關(guān)。STAT3蛋白的活性形式在多種腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移過程中起著重要的作用。因此，抑制信號傳導(dǎo)及轉(zhuǎn)錄激活因子，能夠抑制信號傳導(dǎo)及轉(zhuǎn)錄激活因子與VEGFR3的結(jié)合，抑制成熟的淋巴管形成，從而抑制乳腺癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移，可以預(yù)防和治療乳腺癌術(shù)后癌癥的復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移。
[0005]目前，沒有成熟開發(fā)的信號傳導(dǎo)及轉(zhuǎn)錄激活因子抑制多肽問世，用于預(yù)防和治療乳腺癌術(shù)后癌癥的復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]發(fā)明目的
本發(fā)明提供全新的序列，該序列為信號傳導(dǎo)及轉(zhuǎn)錄激活因子拮抗劑，對乳腺癌具有很好的療效。
[0007]技術(shù)方案
信號傳導(dǎo)及轉(zhuǎn)錄激活因子抑制多肽，其特征在于其序列為QLKNLYKDEANPSWPPTEQ。
[0008]信號傳導(dǎo)及轉(zhuǎn)錄激活因子抑制多肽在預(yù)防和治療乳腺癌術(shù)后癌癥的復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移藥物中的應(yīng)用。
[0009]有益效果利用固相合成法化學(xué)合成信號傳導(dǎo)及轉(zhuǎn)錄激活因子抑制多肽，該多肽具有全新的序列，該多肽可體外抑制信號傳導(dǎo)及轉(zhuǎn)錄激活因子，預(yù)防和治療乳腺癌術(shù)后癌癥的復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移。我們發(fā)現(xiàn)的信號傳導(dǎo)及轉(zhuǎn)錄激活因子抑制多肽可以同時抑制乳腺癌細(xì)胞增殖活力，并在體內(nèi)試驗中提高荷瘤小鼠生存率，具有潛在的新藥開發(fā)價值。
【具體實施方式】
[0010]實施例1
信號傳導(dǎo)及轉(zhuǎn)錄激活因子抑制多肽乳腺癌細(xì)胞MCF-7遷移的作用。
[0011]采用劃痕實驗。先用marker筆在24孔板背后，用直尺比著，均勻得劃橫線，大約每隔0.5~lcm—道，橫穿過孔。每孔穿過3條線；將成對數(shù)生長的MCF-7細(xì)胞，以1.0X105加入24孔培養(yǎng)板中，培養(yǎng)24h。第二天用10 μ I槍頭比著直尺，垂直于背后的橫線劃痕，以劃痕和背后橫線的交叉點為固定觀察位點；實驗孔、陽性藥物對照孔分別加入不同濃度的實驗藥物信號傳導(dǎo)及轉(zhuǎn)錄激活因子抑制多肽(上海生工合成)和陽性對照藥物長春新堿；空白組加入相同體積的溶劑，每孔設(shè)五個復(fù)孔；放入37°C、5%C02培養(yǎng)箱,培養(yǎng)。按0,6,12,24,36小時，拍照；測量O，6，12，24，36h劃痕寬度。以不同的時間點，記錄每孔三個固定位置處劃痕寬度的變化，即為細(xì)胞遷移距離。按照公式計算遷移率(migrat1n rate，MR):遷移率(MR)=(實驗第η小時的劃痕寬度一實驗第O小時的劃痕寬度)X 100%/實驗第O小時的劃痕寬度。結(jié)果，隨信號傳導(dǎo)及轉(zhuǎn)錄激活因子抑制多肽濃度增加，遷移抑制率逐漸下降，說明信號傳導(dǎo)及轉(zhuǎn)錄激活因子抑制多肽能夠抑制乳腺癌細(xì)胞MCF-7遷移，抑制率為66.3%。
[0012]實施例2
信號傳導(dǎo)及轉(zhuǎn)錄激活因子抑制多肽對體外培養(yǎng)人乳腺癌細(xì)胞的生長和存活I(lǐng)C50。
[0013]采用MTT比色法。將對數(shù)生長的人乳腺癌細(xì)胞，以1.0X 15加入96孔培養(yǎng)板中，培養(yǎng)24h，實驗孔、陽性藥物對照孔分別加入不同濃度的實驗藥物信號傳導(dǎo)及轉(zhuǎn)錄激活因子抑制多肽(上海生工合成)和陽性對照藥物紫杉醇；空白組加入相同體積的溶劑。每孔設(shè)五個復(fù)孔，培養(yǎng)48h，分別在0h、2h、8h、14h、20h、24h、36h、，48h每孔加入MTT，作用4h后，加入DMS0，孵育30min，在酶標(biāo)儀620nm處測定吸光度A值，按公式人乳腺癌細(xì)胞生長抑制率=(1-實驗組吸光值/對照組吸光值)X 100%。計算出實驗藥物的IC50為108.76 μ Mo
[0014]實施例3
用腫瘤模型檢測信號傳導(dǎo)及轉(zhuǎn)錄激活因子抑制多肽的體內(nèi)活力。
[0015]建立MCF-7腫瘤模型，陽性對照藥物紫杉醇；空白組加入相同體積的溶劑，實驗組多肽(上海生工合成)設(shè)3個劑量:0.75、1.5、3 μ M mg/Kg。21天后，觀察小鼠存活數(shù)量，計算存活率。結(jié)果顯示，信號傳導(dǎo)及轉(zhuǎn)錄激活因子抑制多肽可有效地保護(hù)小白鼠，提高荷瘤小鼠的生存率，生存率達(dá)到49.2%。
【主權(quán)項】
1.信號傳導(dǎo)及轉(zhuǎn)錄激活因子抑制多肽，其特征在于其序列為QLKNLYKDEANPSWPPTEQ。
2.如權(quán)利要求1所述的信號傳導(dǎo)及轉(zhuǎn)錄激活因子抑制多肽在預(yù)防和治療乳腺癌術(shù)后癌癥的復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移藥物中的應(yīng)用。
【專利摘要】本發(fā)明涉及藥物領(lǐng)域，具體涉及具有抑制信號傳導(dǎo)及轉(zhuǎn)錄激活因子，預(yù)防和治療乳腺癌術(shù)后癌癥的復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移的多肽。其序列為QLKNLYKDEANPSWPPTEQ是全新的序列，它們可以在體外抑制乳腺癌細(xì)胞的增殖和遷移，并在體內(nèi)試驗中提高荷瘤小鼠生存率，具有潛在的新藥開發(fā)價值。
【IPC分類】C07K7-08, A61K38-10, A61P35-00
【公開號】CN104693280
【申請?zhí)枴緾N201510157199
【發(fā)明人】羅瑞雪
【申請人】蘇州普羅達(dá)生物科技有限公司
【公開日】2015年6月10日
【申請日】2015年4月6日