一種重復(fù)載藥微球及其制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，更具體的是涉及一種重復(fù)載藥微球及其制備方法，特 別是一種具有親水性、生物相容性和可生物降解性高分子材料包裹阿霉素載藥微球及其制 備方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 阿霉素（oxorubicin，Adriamycin)，D0X，是一種廣普的抗腫瘤藥物，對(duì)DNA和RNA 的合成有抑制作用，尤其是對(duì)RNA的抑制作用最強(qiáng)，抗瘤譜較廣，對(duì)多種腫瘤均有作用，是 一種周期非特異性藥物，對(duì)各種生長(zhǎng)周期的腫瘤細(xì)胞都有一定的殺滅作用。主要適用于急 性白血病，對(duì)乳腺癌、肺癌、膀胱癌等癌癥都有一定的療效。D0X的細(xì)胞抑制作用是因?yàn)槠淦?面蒽環(huán)結(jié)構(gòu)插入到核DNA的雙螺旋，從而破壞了DNA的復(fù)制和轉(zhuǎn)錄，尤其是在快速分裂的細(xì) 胞中效果更顯著。然而治療成功非常有限，主要是由于具有劑量依賴性和不可避免的心臟 毒性，后者可以導(dǎo)致加劇的心肌癥而造成充血性心臟衰竭。
[0003] 為了提高藥物利用率并減少阿霉素的毒副作用，可以使之包裹在具有可生物降解 性的高分子材料制備的微球中，從而制成具有緩釋作用的載藥微球，增加藥效，同時(shí)減少給 藥劑量和次數(shù)，降低毒副作用。目前報(bào)道的高分子微球的材料種類(lèi)很多，例如天然材料殼聚 糖、葡聚糖和聚乳酸、聚己內(nèi)酯等。其中由于多糖材料具有親水性、生物相容性和可降解性， 使其在醫(yī)藥領(lǐng)域的應(yīng)用更廣泛。其中，葡聚糖（dextran)，又稱(chēng)右旋糖酐，是一種多糖，是通 過(guò)細(xì)菌從蔗糖產(chǎn)生也可化學(xué)合成。葡聚糖高度水溶，在弱堿和弱酸性條件下是穩(wěn)定的，葡聚 糖結(jié)構(gòu)上含有大量的羥基，使其具有良好的親水性和生物降解性，并且可用于耦合反應(yīng)，葡 聚糖還可為多種體內(nèi)器官中的葡萄糖苷酶(包括葡聚糖酶）降解葡聚糖的這些理化特性以 及其來(lái)源豐富，成本低，使得其作為蛋白質(zhì)和藥物載體非常具有吸引力。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，采用具有良好的生物相容性和可生物降 解性的葡聚糖為原料制備能夠包載親水性藥物阿霉素的多孔微球，并通過(guò)微球表面接枝的 疏水基和有機(jī)溶劑之間的相互作用使得微球再生，提供一種重復(fù)載藥微球及其制備方法。
[0005] 本發(fā)明的技術(shù)目的通過(guò)下述技術(shù)方案予以實(shí)現(xiàn)：
[0006] 重復(fù)載藥微球，以辛基葡聚糖多孔微球?yàn)檩d體，通過(guò)吸附性能吸附親水性藥物阿 霉素制備載藥微球，將藥物釋放完的載藥微球浸泡在有機(jī)溶劑中，通過(guò)微球表面的疏水基 和有機(jī)溶劑之間的相互作用使得微球再生，再次得到具有多孔結(jié)構(gòu)的微球，并測(cè)定微球的 重復(fù)載藥性能。
[0007] 重復(fù)載藥微球的制備方法，按照下述步驟進(jìn)行：
[0008] 步驟1，將葡聚糖溶于去離子水中作為水相，將環(huán)氧氯丙烷和司班溶于液體石蠟中 作為油相；加熱至70°C時(shí)，將水相加入油相中攪拌均勻，然后加入氫氧化鈉水溶液，反應(yīng)2 小時(shí)后升溫至90°C，固化5小時(shí)后停止反應(yīng)，將所得產(chǎn)物過(guò)濾，洗滌，真空抽濾，其中葡聚糖 使用量為5質(zhì)量份，葡聚糖使用量為3質(zhì)量份，環(huán)氧氯丙烷使用量為5-6質(zhì)量份，水相和油 相的體積比為1 :5 ;
[0009] 具體來(lái)說(shuō)，將5g葡聚糖(右旋糖酐）溶于10ml去離子水中攪拌至透明作為水相。 5ml環(huán)氧氯丙烷和3g司班80溶解于50ml液體石錯(cuò)中作為油相。水浴加熱至70°C時(shí)，將油 相加入到三口瓶中進(jìn)行攪拌，然后加入水相進(jìn)一步攪拌均勻。加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)50%的NaOH溶 液3ml，反應(yīng)2小時(shí)后升溫至90°C，固化5小時(shí)后停止反應(yīng)。將所得產(chǎn)物過(guò)濾，洗滌，真空抽 濾。
[0010] 步驟2,將步驟1制備的葡聚糖微球和辛基縮水甘油醚混合，在堿性條件pH為 10-12,溫度為60~80°C下反應(yīng)4~9h制備辛基葡聚糖微球，葡聚糖使用量為1一3質(zhì)量 份，辛基縮水甘油醚使用量為葡聚糖微球質(zhì)量的5%~17. 5%，優(yōu)選10 -15% ;
[0011] 具體來(lái)說(shuō)，將步驟1制備的葡聚糖微球l-3g和5%~17. 5%的辛基縮水甘油醚混 合，在堿性條件（Imol/mL氫氧化鈉水溶液4mL)，溫度為60~80°C下反應(yīng)4~9h制備辛基 葡聚糖微球。
[0012] 步驟3,將步驟2制備的辛基葡聚糖微球浸泡在環(huán)己烷中，通過(guò)辛基和環(huán)己烷的相 互作用以及環(huán)己烷的揮發(fā)，制備辛基葡聚糖多孔微球；
[0013] 具體來(lái)說(shuō)，將步驟2制備的辛基葡聚糖微球浸泡在10~30ml有機(jī)溶劑中，通過(guò)辛 基和有機(jī)溶劑的相互作用以及溶劑的揮發(fā)，制備辛基葡聚糖多孔微球。
[0014] 利用本發(fā)明制備的重復(fù)載藥微球?qū)Π⒚顾剡M(jìn)行重復(fù)載藥，如下：
[0015] 步驟1，將阿霉素溶于去離子水中，配制成濃度為lmg/ml的溶液，再將上述制備的 辛基葡聚糖多孔微球按多孔微球與阿霉素的質(zhì)量比為10:1~2:1，浸泡在阿霉素溶液中， 該體系在轉(zhuǎn)速75rpm，溫度37°C的恒溫振蕩箱中搖動(dòng)12~24h，冷凍干燥得到載阿霉素的辛 基葡聚糖微球；
[0016] 步驟2,稱(chēng)取1~3mg阿霉素載藥微球溶于1~3ml的PBS緩沖溶液中使微球分 散，將其裝到事前溶脹的透析袋中，將透析袋兩端夾緊，將其轉(zhuǎn)移到盛有4~6ml的同樣PBS 的容器中使透析袋完全浸在PBS中，將該體系在轉(zhuǎn)速為75rpm，溫度37°C恒溫振蕩箱中搖 動(dòng)，過(guò)特定時(shí)間間隔后，換上新的同樣的PBS緩沖溶液，測(cè)定換出來(lái)的PBS在485nm處的吸 光度，從而測(cè)定阿霉素載藥微球的藥物釋放行為；
[0017] 將藥物釋放完的載藥微球浸泡在有機(jī)溶劑環(huán)己烷中，微球表面上接枝的辛基在有 機(jī)溶劑中會(huì)得到舒展，從而通過(guò)辛基和有機(jī)溶劑環(huán)己烷之間的相互作用將微球再次拉成多 孔微球，使得微球再生得到辛基葡聚糖多孔微球，再用前述方法制備載藥微球，連續(xù)載藥5 次。
[0018] 在上述方案中，載藥微球釋放藥物后浸泡在有機(jī)溶劑中，有機(jī)溶劑作為再生劑，通 過(guò)疏水基和有機(jī)溶劑之間的相互作用再次得到多孔微球。
[0019] 本發(fā)明在制備載藥微球時(shí)，通過(guò)微球表面接枝的疏水基和有機(jī)溶劑之間的相互作 用制備多孔微球，進(jìn)而克服了在制備多孔微球過(guò)程中由于引入致孔劑而影響微球的孔隙率 從而影響微球的載藥量，并且表面接枝的疏水基在有機(jī)溶劑中舒展而使得微球重新產(chǎn)生大 量的孔，進(jìn)而使得微球再生，并測(cè)定微球的重復(fù)載藥性能，即多孔微球載藥表面接有的疏水 性的辛基在載藥過(guò)程中相當(dāng)于"開(kāi)關(guān)"，賦予多孔微球重復(fù)載藥的性能，即將藥物釋放完的 微球浸泡在有機(jī)溶劑中，辛基在有機(jī)溶劑中能夠再次伸展，從而將微球拉伸成多孔結(jié)構(gòu)，得 到辛基葡聚糖多孔微球。本發(fā)明制備多孔微球所需成本較低，且微球制備工藝簡(jiǎn)單，容易操 作，所得微球具有良好的重復(fù)載藥性能。
【附圖說(shuō)明】
[0020] 圖1為本發(fā)明制備的辛基葡聚糖重復(fù)載藥微球的掃描電鏡圖片（1)，其中a為第一 次載藥前的辛基葡聚糖多孔微球的掃描電鏡圖片，b為微球第一次載藥后的掃描電鏡圖片。
[0021] 圖2為本發(fā)明制備的辛基葡聚糖重復(fù)載藥微球的掃描電鏡圖片（2)，其中a為第二 次載藥前的辛基葡聚糖多孔微球的掃描電鏡圖片，b為微球第二次載藥后的掃描電鏡圖片。
[0022] 圖3為本發(fā)明制備的辛基葡聚糖重復(fù)載藥微球的掃描電鏡圖片（3)，其中a為第三 次載藥前的辛基葡聚糖多孔微球的掃描電鏡圖片，b為微球第三次載藥后的掃描電鏡圖片。
[0023] 圖4為本發(fā)明制備的辛基葡聚糖重復(fù)載藥微球的掃描電鏡圖片（4)，其中a為第四 次載藥前的辛基葡聚糖多孔微球的掃描電鏡圖片，b為微球第四次載藥后的掃描電鏡圖片。
[0024]圖5為本發(fā)明制備的辛基葡聚糖重復(fù)載藥微球的掃描電鏡圖片（5)，其中a為第五 次載藥前的辛基葡聚糖多孔微球的掃描電鏡圖片，b為微球第五次載藥后的掃描電鏡圖片。
[0025] 圖6為本發(fā)明制備的辛基葡聚糖重復(fù)載藥微球連續(xù)5次載藥的孔隙率變化曲線。
【具體實(shí)施方式】
[0026] 以下對(duì)本發(fā)明的實(shí)施例作詳細(xì)說(shuō)明，本實(shí)施方案在本發(fā)明技術(shù)方案為前提下進(jìn)行 實(shí)施，給出了詳細(xì)的實(shí)施方式和過(guò)程，但本發(fā)明保護(hù)范圍不限于下述實(shí)施例。
[0027] 實(shí)施例1
[0028] (1)將5g葡聚糖(右旋糖酐）溶于10ml去離子水中攪拌至透明作為水相。5ml環(huán) 氧氯丙烷和3g司班80溶解于50ml液體石蠟中作為油相。水浴加熱至70°C時(shí)，將油相加入 到三口瓶中進(jìn)行攪拌，然后加入水相進(jìn)一步攪拌均勻。加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)50%的NaOH溶液3ml， 反應(yīng)2小時(shí)后升溫至90°C，固化5小時(shí)后停止反應(yīng)。將所得產(chǎn)物過(guò)濾，洗滌，真空抽濾。
[0029] (2)將（1)制備的干態(tài)葡聚糖微球2g，40ml體積比為3 :1的丙酮與水的混合溶劑 倒入250ml三口瓶中，水浴加熱至60°C，加入3ml辛基縮水甘油醚和NaOH水溶液（3ml )，反 應(yīng)4h，將所得產(chǎn)物過(guò)濾。
[0030] (3)將（2)制備的微球浸泡在環(huán)己烷溶劑中，溶劑揮發(fā)后得到辛基葡聚糖多孔微 球。
[0031] (4)稱(chēng)?。?)得到的干態(tài)辛基葡聚糖多孔微球20mg，將2mg的阿霉素溶解在5ml去 離子水中，再將多孔微球浸泡在阿霉素溶液中，該體系在轉(zhuǎn)速75rpm，溫度37°C的恒溫振蕩 箱中搖動(dòng)24h，冷凍干燥得到載阿霉素的辛基葡聚糖微球。
[0032] (5)稱(chēng)取2mg載藥微球溶于lmlPBS緩沖溶液中使微球分散，將其裝到事前溶脹的 透析袋中，將透析袋兩端夾緊，將其轉(zhuǎn)移到盛有5ml的同樣PBS的容器中使透析袋完全浸在 PBS中，將該體系在轉(zhuǎn)速為75rpm，溫度37°C恒溫振蕩箱中搖動(dòng)，過(guò)特定時(shí)間間隔后，換上新 的同樣的PBS緩沖溶液，測(cè)定換出來(lái)的PBS在485nm處的吸光度，從而測(cè)定阿霉素載藥微球 的藥物釋放行為。
[0033](6)將藥物釋放完的載藥微球浸泡在有機(jī)溶劑環(huán)己烷中使得微球再生，用上述的 方法制備載藥微球并測(cè)定其載藥量，連續(xù)載藥5次。
[0034] 實(shí)施例2
[0035] (1)同實(shí)施例1中的（1)。
[0036] (2)將（1)制備的干態(tài)葡聚糖微球2g，40ml體積比為3 :1的丙酮與水的混合溶劑 倒入250ml三口瓶中，水浴加熱至65°C，加入4ml辛基縮水甘油醚和NaOH水溶液（4ml )，反 應(yīng)5h，將所得產(chǎn)物過(guò)濾。
[0037] (3)將（2)制備的微球浸泡在環(huán)己烷溶劑中，溶劑揮發(fā)后得到辛基葡聚糖多孔微 球。
[0038] (4)稱(chēng)?。?)得到的干態(tài)辛基葡聚糖多孔微球20mg，將5mg的阿霉素溶解在5ml去 離子水中，再將多孔微球浸泡在阿霉素溶液中，該體系在轉(zhuǎn)速75rpm，溫度37°C的恒溫振蕩 箱中搖動(dòng)24h，冷凍干燥得到載阿霉素的辛基葡聚糖微球。
[0039] (5)稱(chēng)取2mg載藥微球溶于lmlPBS緩沖溶液中使微球分散，將其裝到事前溶脹的 透析袋中，將透析袋兩端夾緊，將其轉(zhuǎn)移到盛有5ml的同樣PBS的容器中使透析袋完全浸在 PBS中，將該體系在轉(zhuǎn)速為75rpm，溫度37°C恒溫振蕩箱