用于治療肥胖癥的胰高血糖素/glp-1激動劑的制作方法
【專利說明】用于治療肥胖癥的胰高血糖素/GLP-1激動劑 對以電子方式提交的序列表的引用
[0001] 將與本申請一起以電子方式提交的處于ASCII文本文件形式的序列表的內(nèi)容（名 稱：序列表_ascii.txt ;大小：12. 3千字節(jié)；以及創(chuàng)建日期2013年12月10日）通過引用 以其全文結(jié)合在此。 背景
[0002] 肥胖癥是全世界重大且日益增長的健康問題，并且與許多危及生命的疾病相關(guān)， 這些疾病如心血管疾病、腎臟病、高血壓、中風(fēng)、不育、呼吸功能障礙、和2型糖尿病。
[0003] 胰高血糖素和胰高血糖素樣肽-I (GLP-I)衍生自前胰高血糖素原，前胰高血糖素 原為具有158個氨基酸的前體多肽，其在不同的組織中被加工形成許多種不同的胰高血糖 素原衍生肽，包括胰高血糖素、胰高血糖素樣肽-I (GLP-I)、胰高血糖素樣肽-2 (GLP-2)和 胃泌酸調(diào)節(jié)素（OXM)，它們涉及許多種生理功能，包括葡萄糖穩(wěn)態(tài)、胰島素分泌、胃排空、和 腸道生長，以及調(diào)節(jié)進食。胰高血糖素是具有相應(yīng)于胰高血糖素原的氨基酸33到61 (前胰 高血糖素原的53到81)的29個氨基酸的肽，而GLP-I產(chǎn)生為具有相應(yīng)于胰高血糖素原的 氨基酸72到108 (前胰高血糖素原的92到128)的37個氨基酸的肽。GLP-I (7-36)酰胺或 GLP-I (7-37)酸是GLP-I的生物活性形式，其在GLP-I受體處顯示出基本上等同的活性。
[0004] 胰高血糖素是通過胰臟產(chǎn)生的并且與胰高血糖素受體（"glucR"）相互作用。胰 高血糖素在肝臟中起作用經(jīng)由糖異生和糖原分解而升高血糖。當(dāng)血糖開始下降時，胰高血 糖素發(fā)信號給肝臟以便分解糖原和釋放葡萄糖，從而引起血糖水平朝向正常水平上升。
[0005] GLP-I相比于胰高血糖素具有不同的生物活性。它從腸 L細(xì)胞分泌并且結(jié)合到 GLP-I受體上。它的活性包括刺激胰島素合成和分泌、抑制胰高血糖素分泌、和抑制進食。
[0006] 胰高血糖素和GLP-1，作為它們對應(yīng)的受體的激動劑起作用，已經(jīng)顯示出有效于 減輕體重。在銷售或開發(fā)中的用于治療肥胖癥的某些GLP-I類似物包括，例如，利拉魯肽 (來自諾和諾德公司的VICT0ZA?)和艾塞那肽（來自禮來公司/艾米林生物制藥公司的 Byetta?)〇
[0007] 仍然需要更多的用于有效治療肥胖癥的藥劑，例如具有改進的溶解度、可配制性 (formulatability)、穩(wěn)定性、和有效性的GLP-I/胰高血糖素激動劑肽。 簡要概述
[0008] 本披露提供了包含以下氨基酸序列或其由組成的分離肽： HX2QGTFTSDX10SX12X13LX15X16X17X18AX20X21FX23X24WLX27X28GX30 ； 其中 X2 是 G 或 S，XlO 是 Y 或 K，X12 是 K、E、R、或 S，X13 是 K 或 Y，X15 是 D 或 E。X16 是 S 或 G，X17 是 E、R、Q、或 K，X18 是 R、S、或 A，X20 是 R、K、或 Q，X21 是 D 或 E，X23 是 V 或 I，X24是A或Q，X27是E或V，X28是A或K，并且X30是G或R(SEQ ID N0:4)。在某些方 面，X2 是 S，X15 是 D，X16 是 S，X20 是 R，X21 是 D，X23 是 V，X24 是 A，X28 是 A，并且 X30 是 G (SEQ ID NO: 5)。在某些方面，如果X17是E，則X18是R，并且如果X17是R，則X18是S (SEQ ID NOs: 6 和 7)。在某些方面，XlO 是 Y，X12 是 K，X13 是 K，并且 X27 是 V (SEQ ID NOs: 8 和 9)。在某些方面，X10是K，X13是Y，并且X27是E(SEQIDN0s:10和ll)。在某些方面， X12 是 E (SEQ ID NOs :12 和 13)，可替代地，X12 是 R (SEQ ID NOs :14 和 15)。在某些方面， 該分離肽包含SEQ ID NO: 16或由其組成。在某些方面，該分離肽包含氨基酸序列SEQ ID NOs: 17或氨基酸序列SEQ ID NO: 19或由其組成。在某些方面，該分離肽包含SEQ ID NO: 18 或由其組成。
[0009] 在上述肽的某些實施例中，X30的羧基基團被酰胺化。在其他實施例中，該羧基基 團是是未修飾的酸。
[0010] 在此提供的任何肽可進一步包含一個或多個修飾的氨基酸，例如，添加?；糠郑?例如，修飾可以是在賴氨酸殘基的Ν( ε )基團上的棕櫚酰部分。在某些實施例中，該棕櫚酰 基團通過γ谷氨酸鹽接頭連接到賴氨酸殘基上。已經(jīng)使用了包括β丙氨酸和氨基己酸在 內(nèi)的替代接頭。其他替代接頭是可能的，包括含有短PEG部分例如含有2個或4個PEG單 元的接頭。
[0011] 在不同的實施例中，在此提供的這些分離肽可結(jié)合到胰高血糖素受體、GLP-I受 體、或胰高血糖素受體和GLP-I受體這兩者上。在某些方面，該胰高血糖素受體是人胰高血 糖素受體，和或該GLP-I受體是人GLP-I受體。在某些方面，如在此提供的分離肽以在cAMP 測定1 (如在此所述）中小于10, 〇〇〇pM、小于5000pM、小于2500pM、小于ΙΟΟΟρΜ、小于900pM、 小于800pM、小于700pM、小于600pM、小于500pM、小于400pM、小于300pM、小于200pM、小 于100pM、小于50pM、小于25pM、小于20pM、小于15pM、小于10pM、小于5pM、小于4pM、小于 3pM、或小于2pM的EC50結(jié)合到人胰高血糖素受體上。在某些方面，如在此提供的分離肽 以在cAMP測定1中小于10, 000ρΜ、小于5000pM、小于2500pM、小于1000pM、小于900pM、小 于800pM、小于700pM、小于600pM、小于500pM、小于400pM、小于300pM、小于200pM、小于 100pM、小于50pM、小于25pM、小于20pM、小于15pM、小于10pM、小于5pM、小于4pM、小于3pM、 或小于2pM的EC50結(jié)合到人GLP-I受體上。
[0012] 在某些方面，如在此提供的分離肽是GLP-I活性的激動劑、胰高血糖素活性的激 動劑、或GLP-I活性和胰高血糖素活性這兩者的激動劑。在一些實施例中，如在此提供的分 離肽結(jié)合胰高血糖素受體和GLP-I受體兩者，并且相對于天然配體而言展現(xiàn)出在GLP-I受 體上比胰高血糖素受體上大至少大約2倍的活性。在一個實施例中，該肽在GLPlR上（相 比于GLPl)具有比在胰高血糖素受體上（相對于胰高血糖素）高5到10倍的相對效價。
[0013] 在某些方面，如在此提供的分離肽可進一步包含與該肽相關(guān)的異源部分。在一些 方面，該異源部分是蛋白質(zhì)、肽、蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)域、接頭、有機聚合物、無機聚合物、聚乙二醇 (PEG)、生物素、白蛋白、人血清白蛋白（HSA)、HSA FcRn結(jié)合部分、抗體、抗體的結(jié)構(gòu)域、抗體 片段、單鏈抗體、結(jié)構(gòu)域抗體、白蛋白結(jié)合結(jié)構(gòu)域、酶、配體、受體、結(jié)合肽、非FnIII支架、表 位標(biāo)簽、重組多肽聚合物、細(xì)胞因子、或此類部分的兩種或更多種的任何組合。
[0014] 還提供了包含如在此所述的分離肽、和載體的藥用組合物。進一步提供了包括這 樣的藥用組合物的藥盒。
[0015] 還提供了用于治療或預(yù)防由體重過多引起或其特征為體重過多的疾病或病癥的 方法，其中該方法包括向需要治療的受試者給予有效量的如在此提供的分離肽、或包含這 種肽的組合物。在某些方面，該疾病或病癥可以是肥胖、胰島素抵抗、葡萄糖耐受不良、糖尿 病前期、空腹血糖增加、2型糖尿病、高血壓、血脂異常（或這些代謝危險因素的組合）、胰高 血糖素瘤、心血管疾病，例如充血性心力衰竭、動脈硬化、動脈粥樣硬化、冠心病、或外周動 脈疾病沖風(fēng)、呼吸功能障礙、腎臟病、以及它們的任何組合。根據(jù)該方法，可以通過注射，例 如皮下注射，來給予如在此所述的分離肽。根據(jù)該方法，可以給予該肽每日一次。在某些實 施例中，該受試者是人。
[0016] 還提供了用于治療或預(yù)防由體重過多引起或其特征為體重過多的疾病或病癥的 方法，其中該方法包括向需要治療的受試者給予有效量的如在此提供的分離肽、或包含這 種肽的組合物。根據(jù)該方法，可以通過注射，例如皮下注射，來給予如在此所述的分離肽。根 據(jù)該方法，可以給予該肽每日一次。在某些實施例中，該受試者是人。 附圖/圖簡要說明
[0017] 圖1顯示了在DIO小鼠中在以三個不同的劑量給予胰高血糖素 /GLP-I共激動劑 肽G730之后從第0天開始體重變化的平均百分比，與載體治療以及利拉魯肽治療進行比 較。在不同組中的初始體重分別為：載體組：47. 4±3. 7g ;G73010nmol/kg組：44. 5±2. 2g ; G73020nmol/kg 組：45. 9 ± 3. 6g 和 G73050nmol/kg 組：46. I ± 2. 4g。
[0018] 圖2顯示了在DIO小鼠中在以三個不同的劑量給予胰高血糖素 /GLP-I共激動劑 肽G797之后從第0天開始體重變化的平均百分比，與載體治療以及利拉魯肽治療進行比 較。在不同組中的初始體重分別為：載體組：47. 4±3. 7g ;G7975nmol/kg組：47. 5±1. 2g ; G79720nmol/kg 組：47. 4±2· 2g 和 G79750nmol/kg 組：47. 2±1· 8g。
[0019] 圖3顯示了在DIO小鼠中在以20nmol/kg的劑量給予胰高血糖素 /GLP-I共激 動劑肽G812之后從第0天開始體重變化的平均百分比，與載體治療以及利拉魯肽治療 進行比較。在不同組中的初始體重分別為：載體組：47. 4±3. 7g和G81220nmol/kg組： 49. 2±3. 4g〇
[0020] 圖4是比較針對呈現(xiàn)于圖1、2、和3中的三種胰高血糖素 /G