物質(zhì)結(jié)合用固相載體的冷凍干燥體、制造方法以及容器的制造方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001 ] 本發(fā)明涉及物質(zhì)結(jié)合用固相載體的冷凍干燥體、用于使物質(zhì)含有液中的物質(zhì)與物質(zhì)結(jié)合用固相載體結(jié)合的容器和含有物質(zhì)結(jié)合用固相載體的冷凍干燥體的制造方法。
【背景技術(shù)】
[0002]近年來，由于基因的利用技術(shù)的發(fā)展，基因診斷、基因治療等利用基因的醫(yī)療備受注目。另外，在農(nóng)業(yè)和畜牧業(yè)領(lǐng)域也開發(fā)有很多使用基因鑒別品種、改良品種的方法。作為利用基因的技術(shù)，PCR(Polymerase Chain React1n:聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng))等技術(shù)得到了廣泛普及。如今，PCR在生物體物質(zhì)的信息解析中成為了必不可少的技術(shù)。PCR是通過對(duì)含有作為擴(kuò)增對(duì)象的核酸(靶核酸)和試劑的溶液(反應(yīng)液)實(shí)施熱循環(huán)以擴(kuò)增靶核酸的方法。作為PCR的熱循環(huán)，普遍的是以2個(gè)梯度或者3個(gè)梯度的溫度實(shí)施熱循環(huán)。
[0003]另一方面，對(duì)于醫(yī)療現(xiàn)場(chǎng)中診斷以流感為代表的感染病的現(xiàn)狀是使用免疫層析試劑盒等簡(jiǎn)易檢查試劑盒是主流。但是在這樣的簡(jiǎn)易檢查中，有時(shí)精度不夠，需求可實(shí)現(xiàn)更高檢查精度的PCR用于感染病的診斷。另外，由于醫(yī)療機(jī)構(gòu)的普通門診患者等的診察時(shí)間受限的關(guān)系，需將檢查所花費(fèi)的時(shí)間限制在短時(shí)間內(nèi)。因此，例如流感的檢查現(xiàn)狀是犧牲檢查的精度而通過簡(jiǎn)易的免疫層析試劑盒等的檢查來實(shí)現(xiàn)短時(shí)間化?；谶@樣的實(shí)際情況，在醫(yī)療領(lǐng)域，為了能夠利用可實(shí)現(xiàn)更高精度的PCR進(jìn)行檢查，需要縮短反應(yīng)所需時(shí)間。
[0004]專利文獻(xiàn)I中，作為短時(shí)間內(nèi)實(shí)施在PCR的反應(yīng)前進(jìn)行的核酸的提取操作的方法，記載了使核酸與具有磁性的微珠粘接并使用磁鐵進(jìn)行操作的方法。
[0005]專利文獻(xiàn)1:日本特開2009 - 207459號(hào)公報(bào)

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]磁性粒子等核酸結(jié)合用固相載體，通常靜置時(shí)因其磁性等而凝聚。因此，在用于PCR等之前需要使核酸結(jié)合用固相載體在液體內(nèi)分散。
[0007]本發(fā)明的目的在于提供一種省去用于使物質(zhì)結(jié)合用固相載體分散的操作而以更短時(shí)間使物質(zhì)與物質(zhì)結(jié)合用固相載體結(jié)合的容器。
[0008]本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方式涉及的物質(zhì)結(jié)合用固相載體的冷凍干燥體的特征在于，物質(zhì)結(jié)合用固相載體與添加劑一起被冷凍干燥。上述物質(zhì)結(jié)合用固相載體優(yōu)選為磁性粒子。上述添加劑可以是海藻糖、蔗糖、聚乙烯吡咯烷酮、羧甲基纖維素、糊精、葡聚糖、聚乙二醇、環(huán)糊精或者麥芽糊精。
[0009]本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方式涉及的用于使物質(zhì)含有液中的物質(zhì)與物質(zhì)結(jié)合用固相載體結(jié)合的容器的特征在于，容器內(nèi)具備物質(zhì)結(jié)合用固相載體與添加劑一起被冷凍干燥而成的冷凍干燥體。該容器可以具有投入上述物質(zhì)含有液的開口部、用于過濾從上述開口部投入的上述物質(zhì)含有液的過濾部、用于使通過上述過濾部的上述物質(zhì)含有液與上述冷凍干燥體接觸的接觸部、以及用于使在上述接觸部與上述冷凍干燥體接觸的上述物質(zhì)含有液向上述容器外流出的流出部。
[0010]本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方式涉及的含有物質(zhì)結(jié)合用固相載體的冷凍干燥體的制造方法的特征在于，將物質(zhì)結(jié)合用固相載體與添加劑一起冷凍干燥。上述物質(zhì)結(jié)合用固相載體優(yōu)選為磁性粒子。上述添加劑可以是海藻糖、蔗糖、聚乙烯吡咯烷酮、羧甲基纖維素、糊精、葡聚糖、聚乙二醇、環(huán)糊精或者麥芽糊精。
【附圖說明】
[0011]圖1是實(shí)施方式涉及的容器的截面示意圖。
[0012]圖2是示意地表示實(shí)施方式涉及的容器中的圖1的A的截面的截面圖。
[0013]圖3是示意地表示實(shí)施方式涉及的容器中的圖1的B的截面的截面圖。
[0014]圖4A?圖4E是表示使用實(shí)施方式涉及的容器的核酸提取方法的示意圖。
[0015]圖5A?圖5E是表示使用實(shí)施方式涉及的容器的蛋白質(zhì)的精制方法的示意圖。
【具體實(shí)施方式】
[0016]以下對(duì)本發(fā)明的實(shí)施方式進(jìn)行說明。以下說明的實(shí)施方式是說明本發(fā)明的例子的實(shí)施方式。本發(fā)明不受以下的實(shí)施方式的任何限定，包括在不變更本發(fā)明的主旨的范圍內(nèi)實(shí)施的各種變形方式。應(yīng)予說明，并不能限定為以下說明的構(gòu)成的全部均為本發(fā)明的必須構(gòu)成要素。
[0017]圖1是本實(shí)施方式的用于使物質(zhì)含有液中的物質(zhì)與物質(zhì)結(jié)合用固相載體接觸的容器的截面示意圖。應(yīng)予說明，本說明書中“物質(zhì)”是指例如DNA、RNA等核酸，蛋白質(zhì)等。
[0018]本發(fā)明涉及的容器100具有過濾器設(shè)置部112、冷凍干燥體114、凹部118和流出口 110。過濾器設(shè)置部112例如是開有直徑數(shù)毫米或一邊數(shù)毫米的孔的塑料板。優(yōu)選在過濾器設(shè)置部112設(shè)置細(xì)網(wǎng)眼過濾器和粗網(wǎng)眼過濾器這2層過濾器。
[0019]細(xì)網(wǎng)眼過濾器設(shè)置在粗網(wǎng)眼過濾器的后段。細(xì)網(wǎng)眼過濾器和粗網(wǎng)眼過濾器只要具有物質(zhì)能夠通過的大小的孔即可。例如，可將粗網(wǎng)眼過濾器的孔設(shè)為50?200 μ m，將細(xì)網(wǎng)眼過濾器的孔設(shè)為10?30 μπι。粗網(wǎng)眼過濾器和細(xì)網(wǎng)眼過濾器的材質(zhì)沒有特別限定，例如，可以使用聚丙烯、聚乙烯、聚苯乙烯、硝基纖維素、玻璃纖維制作。應(yīng)予說明，在本實(shí)施方式中，為了抑制過濾器堵塞設(shè)置了粗網(wǎng)眼過濾器和細(xì)網(wǎng)眼過濾這2層，但也可以僅設(shè)置I層。另外，根據(jù)物質(zhì)含有液中的混入物的量可以不設(shè)置過濾器。
[0020]將物質(zhì)含有液從開口部106投入容器100內(nèi)時(shí)，物質(zhì)含有液被2層過濾器過濾，從物質(zhì)含有液除去細(xì)胞、病毒等的殘?jiān)?。通過過濾器的孔的物質(zhì)含有液與冷凍干燥體114接觸，溶解冷凍干燥體。然后，物質(zhì)含有液中的物質(zhì)與冷凍干燥體114中的物質(zhì)結(jié)合用固相載體結(jié)合。從由此得到的結(jié)合有物質(zhì)的載體，例如可根據(jù)后面敘述的物質(zhì)提取方法分離出物質(zhì)。容器100的材質(zhì)沒有特別限定，可以是由高分子構(gòu)成的塑料或金屬等。圖2是示意地表示圖1的A的容器的截面。如圖2所示，過濾器設(shè)置部112的孔116優(yōu)選設(shè)置在面的一部分使得通過孔116的物質(zhì)含有液流向冷凍干燥體114，但過濾器設(shè)置部112的孔也可以設(shè)置在整體，通過將部分開有孔116的塑料片等夾持在過濾器設(shè)置部112與過濾器之間，使得物質(zhì)含有液流向冷凍干燥體114。
[0021]冷凍干燥體114是將添加劑和物質(zhì)結(jié)合用固相載體冷凍干燥而成的。使物質(zhì)結(jié)合用固相載體分散在加有添加劑的液體中，在其分散的狀態(tài)下冷凍干燥而成。該冷凍干燥體114中物質(zhì)結(jié)合用固相載體以分散的狀態(tài)存在。作為與物質(zhì)結(jié)合用固相載體一起被冷凍干燥的添加劑，只要是在冷凍干燥后保持物質(zhì)結(jié)合用固相載體的分散狀態(tài)且與水接觸時(shí)容易溶解的物質(zhì)即可，例如，可以使用海藻糖、蔗糖、聚乙烯吡咯烷酮、羧甲基纖維素、糊精、葡聚糖、聚乙二醇、環(huán)糊精或者麥芽糊精等。與物質(zhì)結(jié)合用固相載體一起被冷凍干燥的添加劑的向液體中的添加量只要是冷凍干燥后確保物質(zhì)結(jié)合用固相載體的分散狀態(tài)的量即可，例如，優(yōu)選向10 μ I的液體中添加200?2000 μ g的海藻糖。物質(zhì)結(jié)合用固相載體只要是能夠在表面進(jìn)行結(jié)合的物質(zhì)即可，例如可舉出二氧化硅粒子、聚合物粒子、磁性粒子等一直以來公知的物質(zhì)，但優(yōu)選使用磁性粒子。
[0022]圖3是示意地表示實(shí)施方式涉及的容器中的圖1的B的截面的截面圖。凹部118是使物質(zhì)含有液與冷凍干燥體114接觸的部分。凹部118是在容器100的底面119呈洼地狀的部位。在凹部118粘接有冷凍干燥體114，另外，形成有流出口 110。通過過濾器的物質(zhì)含有液在底面119沿凹部118流動(dòng)，通過流出口 110向容器外流出。
[0023](核酸的提取方法)
[0024]接下來，參照?qǐng)D4對(duì)使用本實(shí)施方式涉及的容器100提取核酸的方法進(jìn)行說明。圖4是表示使用實(shí)施方式涉及的容器的核酸提取方法的示意圖。
[0025]首先，對(duì)核酸提取方法中使用的容器100、瓶200和核酸提取用設(shè)備400進(jìn)行說明。
[0026]瓶200的上部具有開口部220。在本