制備肽/蛋白綴合物的方法和試劑的制作方法
【技術領域】
[0001] 本發(fā)明涉及制備肽/蛋白綴合物的方法和試劑。本發(fā)明還涉及標記和修飾未受保 護的肽和天然蛋白以及制備具有聚乙二醇（PEG)、小分子、探針等的蛋白綴合物的方法。
【背景技術】
[0002] 蛋白標記為研宄諸如免疫染色和免疫定位等細胞內(nèi)蛋白的功能和開發(fā)治療性生 物制品提供了有價值的工具，所述治療性生物制品包括聚乙二醇-蛋白綴合物藥物、抗 體-藥物綴合物（ADC)、和糖-蛋白綴合物疫苗等。天然蛋白標記經(jīng)常涉及在生理條件下在 蛋白的氨基酸的親核側(cè)鏈發(fā)生的綴合化學，其中賴氨酸和半胱氨酸是最常見的標記位點。 在賴氨酸殘基和N-端的伯胺處綴合涉及使用如下所列的?；w作為標記試劑，請參考 http://www. piercenet. com/method/amine-reactive-crosslinker-chemistry〇
【主權(quán)項】
1. 一種由式（1)表示的化合物（1)的制備方法，所述方法包括將由式（2)表示的化合 物⑵與由式⑶表示的化合物⑶反應的步驟：
其中R'表示取代基，并且R表示H或至少一種取代基。
2. 如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述R'為肽殘基和/或蛋白殘基。
3. 如權(quán)利要求2所述的方法，其中所述肽殘基為合成或天然肽殘基。
4. 如權(quán)利要求2所述的方法，其中所述蛋白殘基為天然蛋白殘基或重組蛋白殘基。
5. 如權(quán)利要求4所述的方法，其中所述蛋白殘基為酶殘基或抗體殘基。
6. 如權(quán)利要求2所述的方法，其中所述肽殘基在序列中具有至少一個賴氨酸殘基。
7. 如權(quán)利要求2所述的方法，其中所述肽殘基具有游離N-端。
8. 如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述R選自烷基、環(huán)氧化物基、酰胺基、胺基、酮基、醛 基、磷酸酯基、硫酸酯基、鹵化物、腈基、硝基、疊氮基、硫醇基、羧酸基、炔基、酯基、醚基、烯 烴基或羥基。
9. 如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述化合物（3)選自化合物1~14 :
10. 如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述反應在生理條件下進行，所述生理條件是pH 3-9的水性緩沖液。
11. 如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述化合物（1)是穩(wěn)定的且可分離的。
12. -種由式（1)表示的化合物（1)，
其中R'表示取代基，并且R表示H或至少一種取代基。
13. 如權(quán)利要求12所述的化合物（1)，其中所述R'為肽殘基和/或蛋白殘基。
14. 如權(quán)利要求13所述的化合物（1)，其中所述肽殘基為合成或天然肽殘基。
15. 如權(quán)利要求13所述的化合物（1)，其中所述蛋白殘基為天然蛋白或重組蛋白殘基。
16. 如權(quán)利要求15所述的化合物（1)，其中所述蛋白殘基為酶殘基或抗體殘基。
17. 如權(quán)利要求13所述的化合物（1)，其中所述肽殘基在序列中具有賴氨酸殘基。
18. 如權(quán)利要求12所述的化合物（1)，其中所述R選自烷基、環(huán)氧化物基、酰胺基、胺 基、酮基、醛基、磷酸酯基、硫酸酯基、鹵化物、腈基、硝基、疊氮基、硫醇基、羧酸基、炔基、酯 基、醚基、烯烴基或羥基。
19. 如權(quán)利要求12所述的化合物（1)，其中所述化合物（1)通過將由式（2)表示的化 合物⑵與由式⑶表示的化合物⑶反應而獲得， R ' -NH2
其中R'表示取代基，并且R表示H或至少一種取代基，所述化合物（3)選自化合物1~ 14 ： r?ur\ r?ur\
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20.如權(quán)利要求12所述的化合物（I)，其中所述R與聚乙二醇、肽、藥物、糖、熒光探針、 DNA/RNA或脂質(zhì)連接。
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種肽/蛋白綴合物的制備方法和試劑，所述方法包括將由式(2)表示的化合物(2)與由式(3)表示的化合物(3)反應以得到由式(1)表示的化合物(1)的步驟，其中R’表示取代基，并且R表示H或至少一種取代基。
【IPC分類】C07K1-113, C07K14-765, C12N9-82, C07K16-18
【公開號】CN104877982
【申請?zhí)枴緾N201510236410
【發(fā)明人】李學臣, 童俊凌, 王搢鋌
【申請人】香港大學深圳研究院
【公開日】2015年9月2日
【申請日】2015年5月11日