1-11位或第12-22位連續(xù)核苷酸、 或者SEQ ID NO:2或其互補(bǔ)序列中第1-11位或第12-22位連續(xù)核苷酸。
12. 根據(jù)權(quán)利要求10或11所述檢測(cè)樣品中轉(zhuǎn)基因玉米事件DBN9978的DNA存在的方 法，其特征在于，所述探針包括SEQ ID NO: 1或其互補(bǔ)序列、SEQ ID NO:2或其互補(bǔ)序列、SEQ ID N0:6或其互補(bǔ)序列、或者SEQ ID N0:7或其互補(bǔ)序列。
13. 根據(jù)權(quán)利要求10-12任一項(xiàng)所述檢測(cè)樣品中轉(zhuǎn)基因玉米事件DBN9978的DNA存在 的方法，其特征在于，至少一個(gè)所述探針用至少一種熒光基團(tuán)標(biāo)記。
14. 一種檢測(cè)樣品中轉(zhuǎn)基因玉米事件DBN9978的DNA存在的方法，其特征在于，包括： 使待檢測(cè)樣品與標(biāo)記物核酸分子接觸，所述標(biāo)記物核酸分子包括SEQIDNO:3或其互 補(bǔ)序列中至少11個(gè)連續(xù)的核苷酸、或者SEQIDN0:4或其互補(bǔ)序列中至少11個(gè)連續(xù)的核 苷酸； 使所述待檢測(cè)樣品和所述標(biāo)記物核酸分子在嚴(yán)格雜交條件下雜交； 檢測(cè)所述待檢測(cè)樣品和所述標(biāo)記物核酸分子的雜交情況，進(jìn)而通過(guò)標(biāo)記物輔助育種分 析以確定昆蟲(chóng)抗性和/或除草劑耐受性與標(biāo)記物核酸分子在遺傳學(xué)上是連鎖的。
15. 根據(jù)權(quán)利要求14所述檢測(cè)樣品中轉(zhuǎn)基因玉米事件DBN9978的DNA存在的方法，其 特征在于，所述標(biāo)記物核酸分子包括SEQ ID NO: 1或其互補(bǔ)序列中第1-11位或第12-22位 連續(xù)核苷酸、或者SEQ ID NO:2或其互補(bǔ)序列中第1-11位或第12-22位連續(xù)核苷酸。
16. 根據(jù)權(quán)利要求14或15所述檢測(cè)樣品中轉(zhuǎn)基因玉米事件DBN9978的DNA存在的方 法，其特征在于，所述標(biāo)記物核酸分子包括SEQ ID NO: 1或其互補(bǔ)序列、SEQ ID NO:2或其 互補(bǔ)序列、SEQ ID NO:6或其互補(bǔ)序列、或者SEQ ID NO: 7或其互補(bǔ)序列。
17. -種DNA檢測(cè)試劑盒，其特征在于，包括至少一個(gè)DNA分子，所述DNA分子包括SEQ ID N0:3的同源序列或其互補(bǔ)序列中至少11個(gè)連續(xù)的核苷酸、或者SEQ ID N0:4的同源序 列或其互補(bǔ)序列中至少11個(gè)連續(xù)的核苷酸，其可以作為對(duì)于轉(zhuǎn)基因玉米事件DBN9978或其 后代具有特異性的DNA引物或探針。
18. 根據(jù)權(quán)利要求17所述DNA檢測(cè)試劑盒，其特征在于，所述DNA分子包括SEQ ID NO: 1或其互補(bǔ)序列中第1-11位或第12-22位連續(xù)核苷酸、或者SEQ ID NO: 2或其互補(bǔ)序列 中第1-11位或第12-22位連續(xù)核苷酸。
19. 根據(jù)權(quán)利要求17或18所述DNA檢測(cè)試劑盒，其特征在于，所述DNA分子包括SEQ ID NO: 1的同源序列或其互補(bǔ)序列、SEQ ID N0:2的同源序列或其互補(bǔ)序列、SEQ ID N0:6 的同源序列或其互補(bǔ)序列、或者SEQ ID N0:7的同源序列或其互補(bǔ)序列。
20. -種植物細(xì)胞，其特征在于，包含編碼昆蟲(chóng)抗性CrylAb蛋白的核酸序列、編碼草甘 膦除草劑耐受性EPSPS蛋白的核酸序列和特定區(qū)域的核酸序列，所述特定區(qū)域的核酸序列 包括 SEQ ID N0:1、SEQ ID N0:2、SEQ ID N0:6 或 SEQ ID N0:7 所示的序列。
21. -種保護(hù)玉米植物免于昆蟲(chóng)侵襲的方法，其特征在于，包括在靶昆蟲(chóng)的膳食中提 供至少一種轉(zhuǎn)基因玉米植物細(xì)胞，所述轉(zhuǎn)基因玉米植物細(xì)胞在其基因組中包含選自SEQ ID N0:1、SEQ ID N0:2、SEQ ID N0:3、SEQ ID N0:4、SEQ ID N0:5、SEQ ID N0:6和 SEQ ID N0:7 所示序列中至少一種核酸序列，攝食所述轉(zhuǎn)基因玉米植物細(xì)胞的靶昆蟲(chóng)被抑制進(jìn)一步攝食 所述玉米植物。
22. -種保護(hù)玉米植物免受由除草劑引起的損傷的方法，其特征在于，包括將含有有效 劑量草甘膦除草劑施加到種植至少一種轉(zhuǎn)基因玉米植物的大田中，所述轉(zhuǎn)基因玉米植物在 其基因組中包含選自 SEQ ID N0:1、SEQ ID N0:2、SEQ ID N0:3、SEQ ID N0:4、SEQ ID N0:5、 SEQ ID N0:6和SEQ ID N0:7所示序列中至少一種核酸序列，所述轉(zhuǎn)基因玉米植物具有對(duì)草 甘膦除草劑的耐受性。
23. -種控制種植玉米植物的大田中雜草的方法，其特征在于，包括將含有有效劑量草 甘膦除草劑施加到種植至少一種轉(zhuǎn)基因玉米植物的大田中，所述轉(zhuǎn)基因玉米植物在其基因 組中包含選自 SEQ ID N0:1、SEQ ID N0:2、SEQ ID N0:3、SEQ ID N0:4、SEQ ID N0:5、SEQ ID NO:6和SEQ ID NO:7所示序列中至少一種核酸序列，所述轉(zhuǎn)基因玉米植物具有對(duì)草甘膦 除草劑的耐受性。
24. -種培養(yǎng)對(duì)昆蟲(chóng)具有抗性的玉米植物的方法，其特征在于，包括： 種植至少一粒玉米種子，所述玉米種子的基因組中包括編碼昆蟲(chóng)抗性CrylAb蛋白的 核酸序列和特定區(qū)域的核酸序列； 使所述玉米種子長(zhǎng)成玉米植株； 用靶昆蟲(chóng)侵襲所述玉米植株，收獲與其他不具有特定區(qū)域的核酸序列的植株相比具有 減弱的植物損傷的植株； 所述特定區(qū)域的核酸序列選自 SEQ ID N0:1、SEQ ID N0:2、SEQ ID N0:3、SEQ ID N0:4、 SEQ ID NO: 5、SEQ ID NO:6和SEQ ID NO: 7所示序列中至少一種核酸序列。
25. -種培養(yǎng)對(duì)草甘膦除草劑具有耐受性的玉米植物的方法，其特征在于，包括： 種植至少一粒玉米種子，所述玉米種子的基因組中包括編碼草甘膦除草劑耐受性 EPSPS蛋白的核酸序列和特定區(qū)域的核酸序列； 使所述玉米種子長(zhǎng)成玉米植株； 用有效劑量草甘膦除草劑噴灑所述玉米植株，收獲與其他不具有特定區(qū)域的核酸序列 的植株相比具有減弱的植物損傷的植株； 所述特定區(qū)域的核酸序列選自 SEQ ID N0:1、SEQ ID N0:2、SEQ ID N0:3、SEQ ID N0:4、 SEQ ID NO: 5、SEQ ID NO:6和SEQ ID NO: 7所示序列中至少一種核酸序列。
26. -種培養(yǎng)對(duì)昆蟲(chóng)具有抗性的且耐受草甘膦除草劑的玉米植物的方法，其特征在于， 包括： 種植至少一粒玉米種子，所述玉米種子的基因組中包括編碼昆蟲(chóng)抗性CrylAb蛋白的 核酸序列、編碼草甘膦除草劑耐受性EPSPS蛋白的核酸序列和特定區(qū)域的核酸序列； 使所述玉米種子長(zhǎng)成玉米植株； 用有效劑量草甘膦除草劑噴灑所述玉米植株，收獲與其他不具有特定區(qū)域的核酸序列 的植株相比具有減弱的植物損傷的植株，所述具有減弱的植物損傷的植株對(duì)昆蟲(chóng)的攝食損 傷也有抗性； 所述特定區(qū)域的核酸序列選自 SEQ ID N0:1、SEQ ID N0:2、SEQ ID N0:3、SEQ ID N0:4、 SEQ ID NO: 5、SEQ ID NO:6和SEQ ID NO: 7所示序列中至少一種核酸序列。
27. -種產(chǎn)生對(duì)昆蟲(chóng)具有抗性的玉米植株的方法，其特征在于，包括向所述玉米植株的 基因組中引入編碼昆蟲(chóng)抗性CrylAb蛋白的核酸序列和特定區(qū)域的核酸序列，所述特定區(qū) 域的核酸序列選自 SEQ ID N0:1、SEQ ID N0:2、SEQ ID N0:3、SEQ ID N0:4、SEQ ID N0:5、 SEQ ID NO:6和SEQ ID NO:7所示序列中至少一種核酸序列。
28. 根據(jù)權(quán)利要求27所述產(chǎn)生對(duì)昆蟲(chóng)具有抗性的玉米植株的方法，其特征在于，包括： 將對(duì)昆蟲(chóng)具有抗性的轉(zhuǎn)基因玉米事件DBN9978第一親本玉米植株與缺少昆蟲(chóng)抗性的 第二親本玉米植株有性雜交，從而產(chǎn)生大量子代植株； 用靶昆蟲(chóng)侵襲所述子代植株； 選擇與其他不具有特定區(qū)域的核酸序列的植株相比具有減弱的植物損傷的所述子代 植株； 所述轉(zhuǎn)基因玉米事件DBN9978在其基因組中包含選自SEQ ID NO: 1、SEQ ID NO: 2、SEQ ID N0:3、SEQ ID N0:4、SEQ ID N0:5、SEQ ID N0:6 和 SEQ ID N0:7 所示序列中至少一種核 酸序列。
29. -種產(chǎn)生對(duì)草甘膦除草劑具有耐受性的玉米植株的方法，其特征在于，包括向所述 玉米植株的基因組中引入編碼草甘膦耐受性EPSPS蛋白的核酸序列和特定區(qū)域的核酸序 列，所述特定區(qū)域的核酸序列選自SEQ ID N0:1、SEQ ID N0:2、SEQ ID N0:3、SEQ ID N0:4、 SEQ ID NO: 5、SEQ ID NO:6和SEQ ID NO: 7所示序列中至少一種核酸序列。
30. 根據(jù)權(quán)利要求29所述產(chǎn)生對(duì)草甘膦除草劑具有耐受性的玉米植株的方法，其特征 在于，包括： 將對(duì)草甘膦除草劑具有耐受性的轉(zhuǎn)基因玉米事件DBN9978第一親本玉米植株與缺少 草甘膦耐受性的第二親本玉米植株有性雜交，從而產(chǎn)生大量子代植株； 用草甘膦除草劑處理所述子代植株； 選擇耐受草甘膦的所述子代植株； 所述轉(zhuǎn)基因玉米事件DBN9978在其基因組中包含選自SEQ ID NO: 1、SEQ ID NO: 2、SEQ ID N0:3、SEQ ID N0:4、SEQ ID N0:5、SEQ ID N0:6 和 SEQ ID N0:7 所示序列中至少一種核 酸序列。
31. -種產(chǎn)生對(duì)昆蟲(chóng)具有抗性且耐受草甘膦除草劑施用的玉米植株的方法，其特征在 于，包括： 將草甘膦耐受和昆蟲(chóng)抗性的轉(zhuǎn)基因玉米事件DBN9978第一親本玉米植株與缺少草甘 膦耐受性和/或昆蟲(chóng)抗性的第二親本玉米植株有性雜交，從而產(chǎn)生大量子代植株； 用草甘膦處理所述子代植株； 選擇耐受草甘膦的所述子代植株，耐受草甘膦的所述子代植株對(duì)昆蟲(chóng)的攝食損傷也有 抗性； 所述轉(zhuǎn)基因玉米事件DBN9978在其基因組中包含選自SEQ ID NO: 1、SEQ ID NO: 2、SEQ ID N0:3、SEQ ID N0:4、SEQ ID N0:5、SEQ ID N0:6 和 SEQ ID N0:7 所示序列中至少一種核 酸序列。
32. -種包含SEQ ID NO: 1或SEQ ID NO:2的多核苷酸的組合物，其特征在于，所述組 合物為玉米粉、玉米面、玉米油、玉米穗絲或玉米淀粉。
33. -種包含SEQ ID NO: 1或SEQ ID NO:2的多核苷酸的農(nóng)產(chǎn)品或商品，其特征在于， 所述農(nóng)產(chǎn)品或商品為玉米粉、玉米面、玉米油、玉米淀粉、玉米面筋、玉米餅、化妝品或填充 劑。
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明涉及一種用于檢測(cè)玉米植物DBN9978的核酸序列及其檢測(cè)方法，所述玉米植物的核酸序列包括SEQ ID NO:1或其互補(bǔ)序列、或者SEQ ID NO:2或其互補(bǔ)序列。本發(fā)明玉米植物DBN9978對(duì)鱗翅目昆蟲(chóng)具有較好的抗性并對(duì)草甘膦除草劑具有較好的耐受性，對(duì)產(chǎn)量無(wú)影響，且檢測(cè)方法可以準(zhǔn)確快速的鑒定生物樣品中是否包含轉(zhuǎn)基因玉米事件DBN9978的DNA分子。CGMCC No.1029220141224
【IPC分類(lèi)】C12N5-10, C12N15-54, C12Q1-68, A01N47-44, A01H1-02, A01G7-06, A01P7-04, C12N15-11, C12N15-82, A01H5-00, C12N15-32
【公開(kāi)號(hào)】CN104878091
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510218637
【發(fā)明人】丁德榮, 康越景, 張?jiān)浦? 劉海利, 龐潔, 王利君, 賈志偉, 黃金存, 郭函子, 王磊, 傅學(xué)乾, 周毅, 李風(fēng), 鮑曉明, 呂玉平, 張世平
【申請(qǐng)人】北京大北農(nóng)科技集團(tuán)股份有限公司, 北京大北農(nóng)科技集團(tuán)股份有限公司生物技術(shù)中心
【公開(kāi)日】2015年9月2日
【申請(qǐng)日】2015年4月30日