青蒿琥酯與鬼臼毒素偶聯(lián)物在抗白血病藥物中的應(yīng)用及制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種青蒿琥酯與鬼臼毒素偶聯(lián)物及其制備方法，以及在制備抗白血病 藥物中的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 青蒿素是一種從菊科蒿屬植物青蒿中分離提取的具有過(guò)氧橋鍵的倍半萜內(nèi)酯類(lèi) 天然產(chǎn)物，目前其在世界范圍類(lèi)作為主要的抗瘧疾藥物使用（Chem. Soc. Rev. 2010，39， 435.)。此外，研宄還發(fā)現(xiàn)青蒿素還具有其他方面的活性，如抗腫瘤和抗病毒等（Bioorg. Med. Chem. Lett. 2001，11，5 ;Bioorg. Med. Chem. 2013，21，3702)。與此同時(shí)，為了 改善青蒿素溶解度等方面的性質(zhì)，多種青蒿素衍生物被研宄人員合成出來(lái)，其中青蒿琥酯 作為一個(gè)典型的代表性藥物，主要用于治療惡性皰原蟲(chóng)（八111：；[111；[01'013.48611丨80161]1〇1：1161·· 2010，54，3730.)。并且，通過(guò)人體試驗(yàn)研宄證實(shí)，青蒿琥酯是一種安全性較強(qiáng)的藥物，不 良反應(yīng)較少（Am J Trop Med Hyg, 1999，60，547)。研宄還發(fā)現(xiàn)，青蒿琥醋也具有一定的 抗腫瘤活性，并且活性強(qiáng)于青蒿素。青蒿琥酯的抗腫瘤機(jī)制主要有：誘導(dǎo)凋亡、阻滯細(xì)胞周 期、抗血管新生等（J. Cell Physiol. 2012，227，3778 ;Int. Immunopharmacol. 2011， 11，2039 ;Biochem. Pharmacol. 2004，68，2359)。除了體外抗抗增殖活性，青蒿瑭醋有 一定的體內(nèi)抗腫瘤活性，同時(shí)還具有與其它抗腫瘤藥物協(xié)同抗腫瘤的作用。
[0003] 此外，鬼白毒素作為一種重要的木質(zhì)素類(lèi)天然產(chǎn)物，其主要藥理活性包括抗腫瘤 和抗病毒等，但是由于其毒副作用較大，限制了鬼白毒素作為抗腫瘤藥物在臨床上使用（J Ethnopharmacol. 2013，149，24)。為此，人們對(duì)鬼臼毒素進(jìn)行了大量的結(jié)構(gòu)修飾和改造 工作，得到了大量的鬼白毒素衍生物，其中依托泊苷和替尼泊苷已作為抗腫瘤藥物在臨床 上廣泛使用，主要用于白血病、肺癌和乳腺癌等多種腫瘤的治療（Med. Res. Rev. 2014， 35，1.)。鬼臼毒素發(fā)揮抗腫瘤作用的主要機(jī)制為抑制微管蛋白和拓?fù)洚悩?gòu)酶II的活性， 此外還有誘導(dǎo)凋亡和阻滯細(xì)胞周期等（Eur. J. Med. Chem. 2012，49，48)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明目的是提供一種青蒿琥酯與鬼臼毒素偶聯(lián)物及其制備方法，以及在制備抗 白血病藥物中的應(yīng)用，本發(fā)明青蒿琥酯與鬼白毒素偶聯(lián)物對(duì)人白血病細(xì)胞K562和人白血 病阿霉素耐藥株K562/Adr均有不同程度的抗增殖作用。
[0005] 為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案是： 一種式（I)所示的青蒿琥酯與鬼臼毒素偶聯(lián)物：
一種式（I)所示的青蒿琥酯與鬼臼毒素偶聯(lián)物的制備方法，所述的制備方法為：將式 (II)所示青蒿琥酯和式（III)所示鬼臼毒素溶于有機(jī)溶劑中，在1-乙基-(3-二甲氨基丙 基）碳二亞胺鹽酸鹽和4-二甲氨基吡啶的催化下進(jìn)行攪拌反應(yīng)，制得式（I)所示的青蒿琥 酯與鬼臼毒素偶聯(lián)物。
[0006] 本發(fā)明青蒿琥酯與鬼白毒素偶聯(lián)物的制備方法，其中所述的有機(jī)溶劑可以為 N，N-二甲基甲酰胺或二氯甲烷，優(yōu)選為N，N-二甲基甲酰胺。
[0007] 本發(fā)明青蒿琥酯與鬼臼毒素偶聯(lián)物的制備方法，其中所述的青蒿琥酯與鬼臼毒素 的投料物質(zhì)的量之比為優(yōu)選為1:1 ;攪拌反應(yīng)溫度為25~50°C，優(yōu)選為25°C。
[0008] 本發(fā)明的青蒿琥酯與鬼臼毒素的偶聯(lián)物可在制備抗白血病藥物中應(yīng)用。
[0009] 本發(fā)明的有益之處在于：本發(fā)明提供了一種新穎的青蒿琥酯與鬼臼毒素偶聯(lián)物， 且該偶聯(lián)物具有抗白血病細(xì)胞活性，能夠用于制備抗白血病藥物，本發(fā)明青蒿琥酯與鬼臼 毒素偶聯(lián)物對(duì)對(duì)人白血病細(xì)胞K562和人白血病阿霉素耐藥株K562/Adr具有不同程度的抗 增殖作用（詳見(jiàn)實(shí)施例3)。
【具體實(shí)施方式】
[0010] 下面通過(guò)具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步的描述，但本發(fā)明的保護(hù)并不限于此。
[0011] 實(shí)施例1 :青蒿琥酯與鬼臼毒素偶聯(lián)物的制備（1) 在IOmL梨形瓶中加入青蒿瑭醋（0. 25mmol)、鬼臼毒素（0. 25mmol)和4-二甲氨基吡啶 (0. 3mmol)，再加入N, N-二甲基甲酰胺（4mL)溶解，冰水浴冷卻下加入1-乙基-(3-二甲氨 基丙基）碳二亞胺鹽酸鹽（0. 5mmol)，25°C下攪拌反應(yīng)6小時(shí)，反應(yīng)液傾入水中，攪拌、抽濾、 水洗、真空干燥，所得粗品經(jīng)柱層析(洗脫劑為體積比1:2的乙酸乙酯與石油醚混合液)得到 式（I)所示的青蒿琥酯與鬼臼毒素偶聯(lián)物，產(chǎn)率為60%。
[0012] MP :139-141 °C ；IR (KBr) 3622, 2938, 1779, 1588, 11485, 1456, 1420, 1376，1331, 1240，1127，1037，927 cnT1; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 6.80 (s, 1H), 6.52 (s, 1H), 6.39 (s, 2H), 5.98 (dd, J = 5. 5, 1.3 Hz, 2H), 5.92 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 5.80 (d, J = 9.9 Hz, 1H), 5.43 (s, 1H), 4.59 (d, J = 3.9 Hz, 1H), 4.38-4.41 (m, 1H), 4.14-4.19 (m, 1H), 3.81 (s, 3H), 3.76 (s, 6H), 2.72-2.94 (m, 5H), 2.60-2.70 (m, 1H), 2.51-5.58 (m, 1H), 2.93-2.41 (m, 1H), 1.99-2.05 (m, 1H), 1.81-1.92 (m, 1H), 1.69-1.79 (m, 2H), 1.62-1.64 (m, 1H), 1.23-1.49 (m, 7H), 0.99-1.05 (m, 1H), 0.96 (d, J = 6.0 Hz, 3H), 0.83 (d, J = 7. I Hz, 3H) ;13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ 173.69，172.62，171.04，152.62，148. 12，147.62， 137.14, 134.82, 132.25, 128.22, 109.63, 108.10, 107.09, 104.45, 101.55, 92.39, 91.50, 80.05, 73.92, 71.35, 60.71, 56.15, 51.53, 45.58, 45.19, 43.76, 38.57, 37.24, 36.19, 34.04, 31.82, 29.12, 29.01, 25.87, 24.57, 21.97, 20.16, 12. 02；HRMS calcd for C41H48NaO15 [M+Na]+ 803.2885, found 803.2889. 實(shí)施例2 :青蒿琥酯與鬼臼毒素偶聯(lián)物的制備（2) 在IOmL梨形瓶中加入青蒿瑭醋（0. 25mmol)、鬼臼毒素（0. 5mmol)和4-二甲氨基R比啶 (0. 3mmol)，再加入二氯甲烷（4mL)溶解，冰水浴冷卻下加入1-乙基-(3-二甲氨基丙基） 碳二亞胺鹽酸鹽（〇. 5mmo 1 )，30 °C下攪拌反應(yīng)4小時(shí)，反應(yīng)液傾入水中，攪拌、抽濾、水洗、真 空干燥，所得粗品經(jīng)柱層析(洗脫劑為體積比1:2的乙酸乙酯與石油醚混合液）得到式（I) 所示的青蒿琥酯與鬼白毒素偶聯(lián)物，產(chǎn)率為50%。
[0013] 實(shí)施例3 :式（I)所示偶聯(lián)物對(duì)人白血病細(xì)胞的增殖抑制活性 CCK-8染色法： 將細(xì)胞接種于96孔板中，在CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時(shí)后，加入濃度梯度的含藥培養(yǎng)基， 同時(shí)設(shè)立陰性對(duì)照組和陽(yáng)性對(duì)照組和溶媒組，繼續(xù)培養(yǎng)72小時(shí)后取出培養(yǎng)板，加入10微升 CCK-8溶液，培養(yǎng)3小時(shí)后，在酶標(biāo)儀上選擇450nm出測(cè)吸光度值（0D值)，計(jì)算各組別抑制 率，抑制率（%) = [(陰性對(duì)照組OD值一實(shí)驗(yàn)組OD值）/陰性對(duì)照組OD值]X 100%。利用 SPSS17. 0軟件計(jì)算出半數(shù)抑制濃度（IC5Q)。
[0014] 本試驗(yàn)按照CCK-8方法，以青蒿琥酯和鬼臼毒素為陽(yáng)性對(duì)照，進(jìn)行了式（I)所示偶 聯(lián)物對(duì)人白細(xì)胞細(xì)胞K562和人白細(xì)胞阿霉素耐藥株K562/Adr的增殖抑制活性測(cè)試，結(jié)果 如表1所示： 表1
由表1可知，偶聯(lián)物（I)對(duì)人白細(xì)胞細(xì)胞K562和人白細(xì)胞阿霉素耐藥株K562/Adr均 有一定程度的抑制活性，對(duì)K562和K562/Adr的抑制活性顯著強(qiáng)于青蒿琥酯，但弱于鬼臼毒 素。雖然偶聯(lián)物（I)的抑制活性低于鬼臼毒素，但偶聯(lián)物（I)的耐藥顯著低于鬼臼毒素，說(shuō) 明偶聯(lián)物具有一定逆轉(zhuǎn)K562/Adr多藥耐藥的作用。整體而言，如式（I)所示的青蒿琥酯與 鬼臼毒素偶聯(lián)物對(duì)K562和K562/Adr均有較強(qiáng)的抗增殖效果，可將其用于制備抗白血病藥 物。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種青富班醋與鬼白毒素偶聯(lián)物，其特征在于；如化學(xué)結(jié)構(gòu)式（I)所示，該偶聯(lián)物應(yīng) 用在制備抗白血病藥物中：2. -種青富班醋與鬼白毒素偶聯(lián)物的制備方法，其特征在于：將青富班醋和鬼白毒素 溶于有機(jī)溶劑中，在1-己基-3-二甲氨基丙基碳二亞胺鹽酸鹽和4-二甲氨基化晚的催化 下進(jìn)行攬拌反應(yīng)，制得式（I)所示的青富班醋與鬼白毒素偶聯(lián)物。3. 如權(quán)利要求2所述的青富班醋與鬼白毒素偶聯(lián)物的制備方法，其特征在于；所述的 有機(jī)溶劑為N，N-二甲基甲酯胺或二氯甲燒。4. 如權(quán)利要求2所述的青富班醋與鬼白毒素偶聯(lián)物的制備方法，其特征在于；所述的 青富班醋與鬼白毒素的投料物質(zhì)的量之比為1:1~10。5. 如權(quán)利要求2所述的青富班醋與鬼白毒素偶聯(lián)物的制備方法，其特征在于；所述的 攬拌反應(yīng)溫度為25~50°C。
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種式（I）所示的青蒿琥酯與鬼臼毒素偶聯(lián)物應(yīng)用在抗白血病藥物及制備方法，其制備方法：以青蒿琥酯和鬼臼毒素為原料，經(jīng)酯化反應(yīng)制得式（I）所示的青蒿琥酯與鬼臼毒素偶聯(lián)物；本發(fā)明青蒿琥酯-鬼臼毒素偶聯(lián)物可在制備抗白血病藥物中應(yīng)用。該偶聯(lián)物具有抗白血病細(xì)胞活性，能夠用于制備抗白血病藥物，本發(fā)明青蒿琥酯與鬼臼毒素偶聯(lián)物對(duì)人白血病細(xì)胞K562和人白血病阿霉素耐藥株K562/Adr具有不同程度的抗增殖作用。
【IPC分類(lèi)】C07D519/00, A61K31/365, A61P35/02
【公開(kāi)號(hào)】CN104926841
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510371672
【發(fā)明人】張磊, 王京
【申請(qǐng)人】遵義醫(yī)學(xué)院
【公開(kāi)日】2015年9月23日
【申請(qǐng)日】2015年6月30日