折疊氯代毒素、氯代毒素變異體與折疊氯代毒素變異體及其制備工藝的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種折疊氯代毒素、氯代毒素變異體與折疊氯代毒素變異體及其制備 工藝。
【背景技術(shù)】
[0002] 近年來(lái)有學(xué)者發(fā)現(xiàn)一段由36個(gè)氨基酸殘基組成的多肽一一氯代毒素 (chlorotoxin，簡(jiǎn)稱CTX)。該CTX具有良好的腫瘤靶向性，能夠特異性結(jié)合多種腫瘤細(xì)胞， 如神經(jīng)膠質(zhì)瘤、惡性肉瘤、腸癌以及前列腺癌等。研宄表明，CTX通過(guò)基質(zhì)金屬蛋白酶-2 (MMP-2)介導(dǎo)進(jìn)入腫瘤細(xì)胞，而MMP-2只在腫瘤細(xì)胞表面高量表達(dá)，正常細(xì)胞表面不表達(dá)， 這就解釋了 CTX特異性結(jié)合腫瘤細(xì)胞的原因。同時(shí)，研宄顯示CTX雖然對(duì)無(wú)脊椎動(dòng)物有強(qiáng) 烈毒性，卻對(duì)哺乳動(dòng)物無(wú)毒。目前已有利用CTX修飾的放射治療藥物131I-TM-601，正在接 受FDA審批，并已進(jìn)入II期臨床試驗(yàn)階段。還有研宄將CTX與熒光染料連接用于手術(shù)過(guò) 程的腫瘤顯像等。因此，CTX可能成為一種腫瘤特異性非常高的靶向頭基。
[0003] 目前學(xué)界的研宄方向都是基于氯代毒素（chlorotoxin)，而對(duì)于其氯代毒素的折 疊結(jié)構(gòu)和變異結(jié)構(gòu)缺少研宄和創(chuàng)新，因此，限制了氯代毒素的應(yīng)用潛力。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的第一個(gè)目的是為了克服現(xiàn)有技術(shù)存在的缺點(diǎn)和不足，而提供一種折疊氯 代毒素。
[0005] 本發(fā)明的第二個(gè)目的是提供一種上述折疊氯代毒素的制備工藝。
[0006] 本發(fā)明的第三個(gè)目的是提供一種氯代毒素變異體。
[0007] 本發(fā)明的第四個(gè)目的是提供一種折疊氯代毒素變異體。
[0008] 本發(fā)明的第五個(gè)目的是提供一種上述折疊氯代毒素變異體的制備工藝。
[0009] 為實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的第一個(gè)目的，為實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的第一個(gè)目的，本發(fā)明的技術(shù)方案是 其肽序列為 MCMPCFTTDHQMARKCDDCCGGKGRGKCYGPQCLCR-NH2 ; 其結(jié)構(gòu)式為：
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種折疊氯代毒素，其特征在于：其肽序列為MCMPCFTTDHQMARKCDDCCGGKGRGKCYGPQ CLCR-NH2 ； 其結(jié)構(gòu)式為：
2. -種如權(quán)利要求1所述的折疊氯代毒素的制備工藝，其特征在于包括有以下步驟： 按以下數(shù)值等比例構(gòu)建反應(yīng)體系：將40毫克的氯代毒素稱量后置于放有100毫摩爾碳 酸氫銨、2-4毫摩爾鹽酸胍、10-200毫摩爾谷胱甘肽、10wt%二甲亞砜混合溶液的容器中； 將反應(yīng)體系渦旋振蕩直至溶液透明澄清，反應(yīng)體系置于4攝氏度冷藏室中，反應(yīng)1-24 小時(shí)，獲得折疊氯代毒素產(chǎn)物。
3. -種如權(quán)利要求1所述的折疊氯代毒素的制備工藝，其特征在于包括有以下步驟： 按以下數(shù)值等比例構(gòu)建反應(yīng)體系：氯代毒素稱量后置于放有100毫摩爾碳酸氫銨、2毫 摩爾乙二胺四乙酸二鈉、3毫摩爾還原谷胱甘肽、1毫摩爾氧化谷胱甘肽、酸堿度pH~7. 8 的混合溶液的容器中，反應(yīng)體系中氯代毒素濃度為0. 05毫克/毫升； 將反應(yīng)體系渦旋振蕩直至溶液透明澄清，反應(yīng)體系置于4攝氏度冷藏室中，反應(yīng)6天， 獲得折疊氯代毒素產(chǎn)物。
4. 一種氯代毒素變異體，其特征在于： 該氯代毒素變異體的肽序列為： MCMPCFTTDTOMARSCDDCCGGSGRGSCYGPQCLCR-NH2 ; 其由絲氨酸（Ser, S)取代氯代毒素肽序列中的賴氨酸（Lys, K)構(gòu)成，其結(jié)構(gòu)式為：
5. -種折疊氯代毒素變異體，其特征在于： 該折疊氯代毒素變異體的肽序列為： MCMPCFTTDTOMARSCDDCCGGSGRGSCYGPQCLCR-NH2 ; 其由絲氨酸（Ser，S)取代氯代毒素肽序列中賴氨酸（Lys，K)構(gòu)成， 該折疊氯代毒素變異體的結(jié)構(gòu)式為：
6. -種如權(quán)利要求5所述的折疊氯代毒素變異體的制備工藝，其特征在于包括以下步 驟： 按以下數(shù)值等比例構(gòu)建反應(yīng)體系：38毫克氯代毒素變異體稱量后置于放有100毫摩爾 碳酸氫銨、2-4毫摩爾鹽酸胍、10-200毫摩爾谷胱甘肽、10wt%二甲亞砜混合溶液的容器中； 將反應(yīng)體系渦旋振蕩直至溶液透明澄清，反應(yīng)體系置于4攝氏度冷藏室中，反應(yīng)1-24 小時(shí)，獲得折疊氯代毒素變異體產(chǎn)物。
7. -種如權(quán)利要求5所述的折疊氯代毒素變異體的制備工藝，其特征在于包括以下步 驟： 按以下數(shù)值等比例構(gòu)建反應(yīng)體系：氯代毒素變異體稱量后置于放有100毫摩爾碳酸 氫銨、2毫摩爾乙二胺四乙酸二鈉、3毫摩爾還原谷胱甘肽、1毫摩爾氧化谷胱甘肽、酸堿度 pH~7. 8的混合溶液的容器中，反應(yīng)體系中氯代毒素變異體濃度為0. 05毫克/毫升， 將反應(yīng)體系渦旋振蕩直至溶液透明澄清，反應(yīng)體系置于4攝氏度冷藏室中，反應(yīng)6天， 獲得折疊氯代毒素變異體產(chǎn)物。
【專利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種折疊氯代毒素、氯代毒素變異體與折疊氯代毒素變異體及其制備工藝，該折疊氯代毒素，肽序列為MCMPCFTTDHQMARKCDDCCGGKGRGKCYGPQCLCR-NH2，該折疊氯代毒素變異體的肽序列為：MCMPCFTTDHQMARSCDDCCGGSGRGSCYGPQCLCR-NH2；其由絲氨酸(Ser, S)取代氯代毒素肽序列中的賴氨酸(Lys, K)構(gòu)成。本發(fā)明開(kāi)拓了氯代毒素及其衍生物在生物與藥學(xué)中具有潛在應(yīng)用價(jià)值，對(duì)于生命健康與個(gè)性化醫(yī)療等方面產(chǎn)生良好的經(jīng)濟(jì)與社會(huì)效益。
【IPC分類】C07K14-00
【公開(kāi)號(hào)】CN104877016
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510218160
【發(fā)明人】劉哲
【申請(qǐng)人】溫州生物材料與工程研究所
【公開(kāi)日】2015年9月2日
【申請(qǐng)日】2015年4月30日