一種龜甲膠原蛋白多肽的提取方法及其在制備睡眠面膜中的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及中藥化妝品技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種龜甲膠原蛋白多肽的提取方法及 其在制備睡眠面膜中的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 龜甲（龜板）為龜科動(dòng)物烏龜Chinemysreevesii(Gray)的背甲及腹甲。咸、甘， 微寒。歸肝、腎、心經(jīng)。具有滋陰潛陽(yáng)，益腎強(qiáng)骨，養(yǎng)血補(bǔ)心，固經(jīng)止崩的作用；用于陰虛潮熱， 骨蒸盜汗，頭暈?zāi)垦?，虛風(fēng)內(nèi)動(dòng)，筋骨瘺軟，心虛健忘，崩漏經(jīng)多。烏龜為我國(guó)傳統(tǒng)常用中藥 材和藥食兩用資源，也是著名的滋補(bǔ)食品，是"滋陰"圣品，龜甲始載于東漢《神農(nóng)本草經(jīng)》， 列為上品，謂之"龜甲味咸平，主漏下赤白，破癥瘕……"；宋代《日華本草》視龜甲為極陰之 物，用于補(bǔ)陰；元朝朱丹溪?jiǎng)?chuàng)導(dǎo)滋陰學(xué)說(shuō)以后，補(bǔ)陰必用。
[0003] 膠原蛋白通常是由18種人體必須氨基酸組成的由3條肽鏈擰成螺旋形的纖維狀 高分子蛋白質(zhì)。通過(guò)對(duì)膠原蛋白復(fù)合酶解工藝水解，可變成可溶解性的水解膠原蛋白，是片 段的，但具有活性的三螺旋多肽結(jié)構(gòu)，這種絲狀的膠原蛋白纖維能使皮膚保持結(jié)實(shí)而有彈 性，它存在于人體皮膚、骨骼、牙齒、肌腱等部位，主要生理機(jī)能是做結(jié)締組織的粘合物質(zhì)， 在體內(nèi)以膠原纖維形式存在。通常膠原蛋白的分子量在2000-3000道爾頓時(shí)，最利于人體 吸收，并能充分發(fā)揮其保濕、美白、消除色班和皺紋、緊致肌膚的作用，在人體皮膚成分中， 有70%是由膠原多肽所組成，膠原蛋白是機(jī)體的主要結(jié)構(gòu)蛋白，它是一種促纖維細(xì)胞生長(zhǎng) 因子，約占入體內(nèi)蛋白質(zhì)總量的三分之一，其特有的極低抗原性、可生物降解性、生物吸收 性、止血性能和促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)的功能。補(bǔ)充膠原蛋白多肽，可以預(yù)防皮膚衰老，淡化皮膚色 斑。簡(jiǎn)單地說(shuō)膠原多肽有保濕、亮膚、緊膚、防皺、淡斑、修復(fù)皮膚等作用。
[0004] 本發(fā)明旨在提取中藥材龜甲的膠原蛋白多肽，佐以現(xiàn)代先進(jìn)的化妝品制造工藝， 為大眾提供優(yōu)良的護(hù)膚產(chǎn)品?，F(xiàn)有技術(shù)中尚未有相關(guān)報(bào)道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)中存在的不足，本發(fā)明的目的首先在于提供了一種二次發(fā)酵提取龜 甲膠原蛋白多肽的方法，該方法能夠獲得分子量較小的肽鏈。
[0006] -種二次發(fā)酵提取龜甲膠原蛋白多肽的方法，依次包括如下步驟：
[0007] (1)水煮提取
[0008] 取龜甲（血板），水提三次，合并提取液，具體操作如下：
[0009] 第一次加入2-5倍龜甲重量的水，加熱至微沸并保持15_30h，收集濾液；
[0010] 第二次加入2-5倍龜甲重量的水，加熱至微沸并保持15-30h，收集濾液；
[0011] 第三次加入2-5倍龜甲重量的水，加熱至微沸并保持15-30h，收集濾液。
[0012] 合并上述三次濾液，沸水浴中濃縮至重量為原料龜甲重量的0. 8-1. 2倍，濃縮液 靜置待用。
[0013] (2)胃蛋白酶酶解
[0014] 取步驟⑴所得濃縮液，用lmol/L的HC1調(diào)節(jié)pH值至1-3,然后加入胃蛋白酶，在 35-55°C下酶解 12h;
[0015] 所述胃蛋白酶的加入量為步驟（1)所得濃縮液重量的0. 1-10%，優(yōu)選2%。
[0016] (3)胰蛋白酶酶解
[0017] 將步驟⑵胃蛋白酶酶解后的溶液用lmol/L的NaOH調(diào)pH值至8-10,加入胰蛋白 酶，在35-55°C下酶解4h;
[0018] 所述胰蛋白酶的加入量為步驟（1)所得濃縮液重量的0.1-10%，優(yōu)選5%。
[0019] (4)滅活
[0020] 將步驟（3)胰蛋白酶酶解后的溶液加熱至沸騰并保持沸騰10-20min，過(guò)濾去渣， 濾液用lmol/L的HC1調(diào)節(jié)pH值至7,即得龜甲膠原蛋白多肽。
[0021] 經(jīng)檢測(cè)，所得龜甲膠原蛋白多肽中相對(duì)分子質(zhì)量小于5000道爾頓的龜甲膠原蛋 白多肽占總質(zhì)量的50%以上；相對(duì)分子質(zhì)量小于3000道爾頓的龜甲膠原蛋白多肽占總質(zhì) 量的30%以上。
[0022] 在此基礎(chǔ)上，本發(fā)明的第二個(gè)目的在于，將上述方法獲得的龜甲膠原蛋白多肽用 于制備睡眠面膜，所制得的睡眠面膜化妝品具有較溫和的祛斑潤(rùn)膚、美白抗皺、保濕營(yíng)養(yǎng)等 改善皮膚膚質(zhì)的作用。
[0023] 優(yōu)選的，每100mL所述睡眠面膜中含有0. 5-3. 5g羥基乙酸，優(yōu)選3. 5g，所述睡眠面 膜中用于調(diào)節(jié)pH的物質(zhì)為乳酸。
[0024] 所述睡眠面膜中除了含有龜甲膠原蛋白多肽、羥基乙酸及乳酸以外，其余成分為 水和輔料。
[0025] 進(jìn)一步，每100mL所述睡眠面膜的原料配方如下：
[0026] 原料 含量 龜甲膠原蛋白多肽 5-20mL 乳酸 1-10mL
[0027] 羥基乙酸 0. 5-3. 5 g 肉豆蔻酸異丙酯 5-10mL 甘油 5mL 維生素E 3mL 維生素C磷酸酯鎂 2g 白油 1CH15 mL 硅油 10-20 mL Tween-80 3. 5~4. 5mL Span-80 2. 5-3. 5mL 尼泊金甲酯 〇. 1g 尼泊金丙酯 0. 1g 香精 0.2g 水 余量。
[0028] 進(jìn)一步，本發(fā)明提供了一種利用所述龜甲膠原蛋白多肽制備睡眠面膜的工藝，其 步驟如下：
[0029] (1)油相A混合：將白油、硅油、肉豆蔻酸異丙酯、維生素E、Tween-80、Span-80混 合，緩慢加熱至80°C混溶，現(xiàn)配現(xiàn)用；
[0030] (2)水相B混合：將龜甲膠原蛋白多肽、甘油和維生素C磷酸酯鎂混合，緩慢加熱 至80°C混溶；然后用20wt%的乳酸調(diào)節(jié)pH值至4. 0-5. 0,加入去離子水至本工藝最終所得 睡眠面膜體積的一半，現(xiàn)配現(xiàn)用；
[0031] (3)趁熱將油相A緩慢加入水相B中，并快速攪拌，當(dāng)油相A和水相B混合液在攪 拌中降溫至50°C時(shí)，加入羥基乙酸，并快速攪拌，羥基乙酸完全溶解后加入尼泊金甲酯、尼 泊金丙酯以及香精，繼續(xù)攪拌至常溫，脫氣既得。
[0032] 與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有以下優(yōu)點(diǎn)和效果：
[0033] 1、現(xiàn)有技術(shù)中以中藥材作為原材料，制備化妝品的很多，但多以藥粉或粗提物用 于產(chǎn)品的為多，而像本發(fā)明用現(xiàn)代生物技術(shù)對(duì)中藥材進(jìn)行深加工來(lái)制備化妝品的不多，因 此，本發(fā)明的產(chǎn)品更加適合消費(fèi)者的消費(fèi)需求，也能更好地體現(xiàn)中藥材的功效。
[0034] 2、現(xiàn)有技術(shù)中對(duì)各種原料的膠原蛋白的提取技術(shù)多見(jiàn)，但本發(fā)明所采用人體仿生 提取技術(shù)對(duì)龜甲中的膠原蛋白進(jìn)行提取，未見(jiàn)報(bào)道；本發(fā)明中的提取技術(shù)更符合人體需要， 更適宜于人體應(yīng)用，更加自然溫和。
【具體實(shí)施方式】
[0035] 下面申請(qǐng)人將結(jié)合具體的實(shí)施例對(duì)本發(fā)明的產(chǎn)品及其制備方法和應(yīng)用做進(jìn)一步 的詳細(xì)說(shuō)明，應(yīng)理解，以下內(nèi)容不以任何方式對(duì)本發(fā)明的保護(hù)范圍加以限制。
[0036] 以下實(shí)施例中所用主要試劑及材料介紹如下：
[0037] 胃蛋白酶（豬源）（1 :15000)，上海晶純生化科技股份有限公司；
[0038]胰蛋白酶（豬源）（1:250)，上海研謹(jǐn)生物科技有限公司，Sigma;
[0039] 其他均為常規(guī)市售試劑及材料。
[0040] 實(shí)施例1 :
[0041] 一種二次發(fā)酵提取龜甲膠原蛋白多肽的方法，依次包括如下步驟：
[0042] (1)水煮提取
[0043] 取龜甲（血板）lKg，水提三次，具體操作如下：
[0044] 第一次加入5Kg去離子水，加熱至微沸并保持24h，收集濾液；
[0045] 第二次加入3Kg去離子水，加熱至微沸并保持24h，收集濾液；
[0046] 第三次加入2Kg去離子水，加熱至微沸并保持24h，收集濾液。
[0047] 合并上述三次濾液，沸水浴中濃縮至lKg，濃縮液靜置待用。
[0048] (2)胃蛋白酶酶解
[0049] 取步驟⑴所得的lKg濃縮液，用lmol/L的HC1調(diào)節(jié)pH值至1. 8,然后加入胃蛋 白酶20g，在45°C下酶解12h。
[0050] (3)胰蛋白酶酶解
[0051] 將步驟⑵胃蛋白酶酶解后的溶液用lmol/L的NaOH調(diào)pH值至9,加入胰蛋白酶 50g，在55°C下酶解4h。
[0052] (4)滅活
[0053] 將步驟⑶胰蛋白酶酶解后的溶液加熱至沸騰并保持沸騰15min，過(guò)濾去澄，濾液 用lmol/L的HC1調(diào)節(jié)pH值至7,即得龜甲膠原蛋白多肽。
[0054] 經(jīng)檢測(cè)，所得龜甲膠原蛋白多肽中相對(duì)分子質(zhì)量小于5000道爾頓的龜甲膠原蛋 白多肽占總質(zhì)量的56%;相對(duì)分子質(zhì)量小于3000道爾頓的龜甲膠原蛋白多肽占總質(zhì)量的 35%〇
[0055] 實(shí)施例2 :
[0056] -種二次發(fā)酵提取龜甲膠原蛋白多肽的方法，依次包括如下步驟：
[0057](1)水煮提取
[0058] 取龜甲（血板）lKg，水提三次，具體操作如下：
[0059]第一次加入4Kg去離子水，加熱至微沸并保持20h，收集濾液；
[0060] 第二次加入3Kg去離子水，加熱至微沸并保持20h，收集濾液；
[0061] 第三次加入3Kg去離子水，加熱至微沸并保持20h，收集濾液。
[0062] 合并上述三次濾液，沸水浴中濃縮至lKg，濃縮液靜置待用。
[0063](2)胃蛋白酶酶解
[0064] 取步驟⑴所得的lKg濃縮液，用lmol/L的HC1調(diào)節(jié)pH值至2. 5,然后加入胃蛋 白酶50g，在50°C下酶解12h。
[0065] (3)胰蛋白酶酶解
[0066] 將步驟⑵胃蛋白酶酶解后的溶液用lmol/L的NaOH調(diào)pH值至9,加入胰蛋白酶 40g，在45°C下酶解4h。
[0067] (4)滅活
[0068] 將步驟（3)胰蛋白酶酶解后的溶液加熱至沸騰并保持沸騰15min，過(guò)濾去澄，濾液 用lmol/L的HC1調(diào)節(jié)pH值至7,即得龜甲膠原蛋白多肽。
[0069] 經(jīng)檢測(cè)，所得龜甲膠原蛋白多肽中相對(duì)分子質(zhì)量小于5