香菇多糖的提取方法
【技術領域】
[0001] 本發(fā)明屬于生物提取技術領域，具體涉及香菇多糖的提取方法。
【背景技術】
[0002] 香菇多糖是香菇的重要化學成分之一，能增強腹腔巨噬細胞的吞噬能力，提高機 體抗腫瘤功效且無毒副作用，是理想的免疫促進劑。香菇中多糖成分復雜，主要有葡萄糖、 木糖和半乳糖組成，香菇多糖的抗腫瘤活性與分子量有關。然而，香菇多糖由于提取工藝落 后，得到的產(chǎn)品呈黃褐色，這是由于香菇多糖中色素含量較多，影響了香菇多糖的色澤，不 僅如此，雜質(zhì)含量過高的香菇多糖的抗腫瘤活性也較差。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003] 本發(fā)明要解決的技術問題是提供一種香菇多糖的提取方法，該方法得到的香菇多 糖純度高、顏色正，且抗癌活性好。
[0004] 本發(fā)明提供的技術方案是香菇多糖的提取方法，包括以下步驟：
[0005] 1)將香菇破碎，用6~12倍重量80~95v%乙醇回流提取2~3次，每次回流 2~3h，過濾，取濾渣備用；
[0006] 2)將濾渣用6~12倍重量的水回流提取2~3次，每次提取2~3h，過濾，收集 濾液備用；
[0007] 3)將濾液濃縮至60°C下相對密度為1. 15~1. 25的浸膏，加入乙醇沉淀，離心得 沉淀；
[0008] 4)將沉淀依次用2~4倍重量的無水乙醇、丙酮分別洗滌，將洗滌后的沉淀用2~ 4倍蒸餾水溶解，過截留分子量為100萬的中空纖維膜，收集濃縮液，然后將濃縮液過截留 分子量為180萬的中空纖維膜，收集透過液離心，過濾，取濾液備用；
[0009] 5)取濾液噴霧干燥，即為香菇多糖。
[0010] 步驟3)中，往浸膏中加入90~95v%的乙醇至乙醇含量為80~85v%。
[0011] 步驟4)中，洗滌后的沉淀溶于蒸餾水后，先過截留分子量為100萬的中空纖維膜， 這樣活性分子量低于1〇〇萬的多糖以及低聚糖、單糖和色素均隨著透過液流出，收集的濃 縮液過截留分子量為180萬的中空纖維膜，大分子蛋白質(zhì)以及分子量高于180萬的多糖被 截留，收集透過液。
[0012] 本發(fā)明兩次過中空纖維膜，不僅可以最大程度地去除雜質(zhì)和色素，以保證成品純 度和色澤，且提取得到的香菇多糖分子量在100萬~180萬之間，其抗腫瘤活性比其他區(qū)間 范圍內(nèi)的多糖活性高。
【具體實施方式】
[0013] 以下具體實施例對本發(fā)明作進一步闡述，但不作為對本發(fā)明的限定。
[0014] 實施例1
[0015] 1)將香菇破碎，用6倍重量80v%乙醇回流提取2次，每次回流2h，過濾，取濾渣備 用；
[0016] 2)將濾渣用6倍重量的水回流提取2次，每次提取2h，過濾，收集濾液備用；
[0017] 3)將濾液濃縮至60°C下相對密度為I. 1的浸膏，往浸膏中加入90v%的乙醇至乙 醇含量為80v%沉淀，離心，得到沉淀；
[0018] 4)將沉淀依次用2倍重量的無水乙醇、丙酮分別洗滌，將洗滌后的沉淀用2倍蒸餾 水溶解，過截留分子量為100萬的中空纖維膜，收集濃縮液，然后將濃縮液過截留分子量為 180萬的中空纖維膜，收集透過液離心，過濾，取濾液備用；
[0019] 5)取濾液噴霧干燥，即為香菇多糖。用苯酚-硫酸法測定多糖含量為90.0%，顏 色為灰白色。
[0020] 對照組
[0021] 1)將香菇破碎，用6倍重量80v%乙醇回流提取2次，每次回流2h，過濾，取濾渣備 用；
[0022] 2)將濾渣用6倍重量的水回流提取2次，每次提取2h，過濾，收集濾液備用；
[0023] 3)將濾液濃縮至60°C下相對密度為I. 1的浸膏，往浸膏中加入90v%的乙醇至乙 醇含量為80v%沉淀，離心，得到沉淀；
[0024] 4)將沉淀依次用2倍重量的無水乙醇、丙酮分別洗滌，將洗滌后的沉淀用2倍蒸餾 水溶解，上D303型大孔樹脂，用水洗脫至流出液無色透明，收集流出液，濃縮，噴霧干燥，即 為香菇多糖。用苯酚-硫酸法測定多糖含量為85. 1 %，顏色為淺黃色。
[0025] 實施例2
[0026] 1)將香菇破碎，用12倍重量95v%乙醇回流提取3次，每次回流3h，過濾，取濾渣 備用；
[0027] 2)將濾渣用12倍重量的水回流提取3次，每次提取3h，過濾，收集濾液備用；
[0028] 3)將濾液濃縮至60°C下相對密度為1. 3的浸膏，往浸膏中加入95v%的乙醇至乙 醇含量為85v%沉淀，離心，得到沉淀；
[0029] 4)將沉淀依次用4倍重量的無水乙醇、丙酮分別洗滌，將洗滌后的沉淀用4倍蒸餾 水溶解，過截留分子量為100萬的中空纖維膜，收集濃縮液，然后將濃縮液過截留分子量為 180萬的中空纖維膜，收集透過液離心，過濾，取濾液備用；
[0030] 5)取濾液噴霧干燥，即為香菇多糖。用苯酚-硫酸法測定多糖含量為91. 3%，顏 色為灰白色。
[0031] 實施例3
[0032] 1)將香菇破碎，用10倍重量90v%乙醇回流提取2次，每次回流2h，過濾，取濾渣 備用；
[0033] 2)將濾渣用10倍重量的水回流提取2次，每次提取2h，過濾，收集濾液備用；
[0034] 3)將濾液濃縮至60°C下相對密度為1. 2的浸膏，往浸膏中加入95v%的乙醇至乙 醇含量為85v%沉淀，離心，得到沉淀；
[0035] 4)將沉淀依次用3倍重量的無水乙醇、丙酮分別洗滌，將洗滌后的沉淀用3倍蒸餾 水溶解，過截留分子量為100萬的中空纖維膜，收集濃縮液，然后將濃縮液過截留分子量為 180萬的中空纖維膜，收集透過液離心，過濾，取濾液備用；
[0036] 5)取濾液噴霧干燥，即為香菇多糖。用苯酚-硫酸法測定多糖含量為91. 6%，顏 色為灰白色。
[0037] 為驗證本發(fā)明的香菇多糖具有較強的免疫促進作用，現(xiàn)進行以下動物實驗。
[0038] 1、抗Lewis肺癌活性實驗
[0039] 取清潔級C57BL/6小鼠30只，小鼠體重18~20g，隨機分為3組，每組10只，分別 為實驗組，陰性對照組和陽性對照組。
[0040] 取生長旺盛的小鼠Lewis肺癌腫瘤細胞以常規(guī)方法制成勻漿約1~2X107cfu/ml 的癌細胞懸浮液，于每只小鼠的右腋皮下接種〇. 2ml癌細胞懸浮液，24h后，各組開始每日 口服給藥一次，實驗組給藥實施例1的香菇多糖，陰性對照組給藥生理鹽水，陽性對照組給 藥對照例1的香菇多糖，給藥劑量見下表1，連續(xù)給藥10天。停藥后次日處死所有動物，截 取足趾稱重并計算腫瘤抑制率。腫瘤生長抑制率按下列公式計算，抑制率（％) = (陰性對 照組瘤重-實驗組/陽性對照組瘤重）/陰性對照組瘤重X100。
[0041]表1
[0042]
[0043] 注：與陰性對照組相比，*p<0? 05，**p<0? 01。
[0044] 由上表可知，采用常規(guī)方法提取的香菇多糖對小鼠Lewis肺癌的抑制率達 25. 71%，而本發(fā)明提取的香菇多糖對小鼠Lewis肺癌的抑制率高達46. 07%，明顯優(yōu)于常 規(guī)香菇多糖。
[0045] 2、抗C-26結腸癌活性實驗
[0046] 取清潔級C57BL/6小鼠30只，小鼠體重18~20g，隨機分為3組，每組10只，分別 為實驗組，陰性對照組和陽性對照組。
[0047] 取生長旺盛的小鼠C-26結腸癌腫瘤細胞以常規(guī)方法制成勻漿約1~2XIO7Cfu/ ml的癌細胞懸浮液，于每只小鼠的右腋皮下接種0. 2ml癌細胞懸浮液，24h后，各組開始每 日口服給藥一次，實驗組給藥實施例1的香菇多糖，陰性對照組給藥生理鹽水，陽性對照組 給藥對照例1的香菇多糖，給藥劑量見下表2,連續(xù)給藥10天。停藥后次日處死所有動物， 截取足趾稱重并計算腫瘤抑制率。腫瘤生長抑制率按下列公式計算，抑制率（％) =(陰性 對照組瘤重-實驗組/陽性對照組瘤重）/陰性對照組瘤重X100。
[0048]表2
[0049]

[0050] 注：與陰性對照組相比，，*p < 0? 05，**p < 0? 01。
[0051] 由上表可知，采用常規(guī)方法提取的香菇多糖對小鼠C-26結腸癌的抑制率達 21. 07%，而本發(fā)明提取的香菇多糖對小鼠Lewis肺癌的抑制率高達46. 49%，明顯優(yōu)于常 規(guī)香菇多糖。
【主權項】
1. 香菇多糖的提取方法，其特征在于：包括以下步驟： 1) 將香菇破碎，用6~12倍重量80~95v%乙醇回流提取2~3次，每次回流2~ 3h，過濾，取濾渣備用； 2) 將濾渣用6~12倍重量的水回流提取2~3次，每次提取2~3h，過濾，收集濾液 備用； 3) 將濾液濃縮至60°C下相對密度為1. 15~1. 25的浸膏，加入乙醇沉淀，離心得沉淀； 4) 將沉淀依次用2~4倍重量的無水乙醇、丙酮分別洗滌，將洗滌后的沉淀用2~4倍 蒸餾水溶解，過截留分子量為100萬的中空纖維膜，收集濃縮液，然后將濃縮液過截留分子 量為180萬的中空纖維膜，收集透過液離心，過濾，取濾液備用； 5) 取濾液噴霧干燥，即為香菇多糖。2. 根據(jù)權利要求1所述的香菇多糖的提取方法，其特征在于：步驟3)中，往浸膏中加 入90~95v%的乙醇至乙醇含量為80~85v%。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種香菇多糖的提取方法，包括以下步驟：1)將香菇乙醇提取，取濾渣備用；2)將濾渣水提，收集濾液備用；3)將濾液濃縮浸膏，乙醇沉淀，離心得沉淀；4)將沉淀依次無水乙醇、丙酮分別洗滌，將洗滌后的沉淀用蒸餾水溶解，過截留分子量為100萬的中空纖維膜，收集濃縮液，然后將濃縮液過截留分子量為180萬的中空纖維膜，收集透過液離心，過濾，取濾液備用；5)取濾液噴霧干燥，即為香菇多糖。本發(fā)明的香菇多糖純度高，色澤潔白，且抗腫瘤活性強。
【IPC分類】C08B37/00
【公開號】CN105001351
【申請?zhí)枴緾N201510542540
【發(fā)明人】文繼承
【申請人】桂林茗興生物科技有限公司
【公開日】2015年10月28日
【申請日】2015年8月31日