15種男性生育相關(guān)蛋白或其組合的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于生物技術(shù)與醫(yī)學(xué)領(lǐng)域，更具體的，本發(fā)明涉及與年齡相關(guān)的15種人精 子定位蛋白在診斷或治療男性不育癥中的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 男性不育是引起不孕癥的重要因素之一。據(jù)2000年世界衛(wèi)生組織（WHO)報道全 球不育癥約占15%，男方因素約占一半；在歐州一些國家不育癥高達(dá)30%。導(dǎo)致男子不育的 原因非常復(fù)雜廣泛，涉及生殖系統(tǒng)解剖結(jié)構(gòu)和功能、激素調(diào)節(jié)、遺傳物質(zhì)、感染免疫等諸多 因素的異常和障礙。
[0003] 男性不育癥不是一種獨立的疾病，而是多種疾病或多因素綜合作用的結(jié)果。雖然 導(dǎo)致男子不育的原因非常復(fù)雜廣泛，然而目前常規(guī)精液檢測手段卻非常局限。
[0004] 研究表明，男性不育的大部分原因是不正常的精子形成或精子缺失。人睪丸生成 的精子進(jìn)入附睪孵育獲得成熟，而伴隨著衰老過程，精子功能逐漸下降甚至完全喪失。
[0005] 盡管已有許多研究報道了附睪和睪丸的功能及其調(diào)控，然而，迄今為止，人們對于 附睪和睪丸從發(fā)育到衰老的過程中各種蛋白質(zhì)（尤其是精子定位蛋白）的表達(dá)情況知之甚 少，更缺乏相應(yīng)的、特異性的檢測方法。因此本領(lǐng)域迫切需要尋找導(dǎo)致精子衰老、生育能力 下降的男性生育相關(guān)蛋白。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明提供了一組與年齡相關(guān)的、男性生育相關(guān)蛋白及其組合在診斷或治療男性 不育中的應(yīng)用。
[0007] 本發(fā)明第一方面，提供了一種腺苷酸激酶6 (adenylate kinase6, AK6)基因或蛋 白，或其與其他男性生育相關(guān)基因或蛋白的組合的用途，用于（i)制備檢測男性不育的試 劑或試劑盒；和/或（ii)制備用于避孕的藥物組合物。
[0008] 在另一優(yōu)選例中，所述的其他男性生育相關(guān)蛋白包括一個或多個列于表1中的蛋 白。
[0009] 在另一優(yōu)選例中，所述的其他男性生育相關(guān)蛋白還包括CN201010195377. 9中所 述的一種或多種男性生育相關(guān)蛋白。
[0010] 在另一優(yōu)選例中，所述的腺苷酸激酶6(adenylate kinase6, AK6)基因或蛋白，或 其與其他男性生育相關(guān)基因或蛋白的組合的用途，還可用于進(jìn)行細(xì)胞質(zhì)量的評價。
[0011] 在另一優(yōu)選例中，所述的組合包括AK6與1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、或14 種表1所示蛋白的組合。
[0012] 在另一優(yōu)選例中，所述的試劑還包括檢測一個或多個選自列于表1中蛋白或其基 因的檢測試劑。
[0013] 在另一優(yōu)選例中，所述的檢測試劑包括AK6和/或一個或多個選自列于表1中蛋 白或其基因的抗體、反義RNA、microRNA、siRNA、shRNA以及其活性抑制劑，例如AK6的抑制 劑。
[0014] 在另一優(yōu)選例中，所述的AK6的抑制劑包括AK6的抗體、AK6核酸的反義RNA、 microRNA、siRNA、shRNA以及AK6的活性抑制劑。
[0015] 在另一優(yōu)選例中，所述的拮抗劑包括一個或多個選自表1中的蛋白的抗體、編碼 所述蛋白核酸的反義RNA、microRNA、siRNA、shRNA以及所述蛋白的活性抑制劑。
[0016] 本發(fā)明第二方面，提供了一種男性生育相關(guān)基因或蛋白或其調(diào)控性miRNA或它們 的組合的用途，用于（i)制備檢測男性不育的試劑或試劑盒；和/或（ii)制備用于判斷精 子來源對象的年齡的試劑或試劑盒；和/或（iii)制備判斷人或其他哺乳動物的年齡，或用 于精子衰老評價以及精子質(zhì)量評價的試劑或試劑盒。
[0017] 在另一優(yōu)選例中，所述的調(diào)控性miRNA包括AK6的調(diào)控性miRNA、和GPX5的調(diào)控性 miRNAo
[0018] 在另一優(yōu)選例中，所述的AK6的調(diào)控性miRNA選自下組：miR-370, miR-544a, miR-27a，miR_27b，miR-128, miR_20a，miR_20b，miR_106b，miR_106a，miR-17, miR_200b，miR-200 c，miR-93, miR-429, miR_519d。
[0019] 在另一優(yōu)選例中，所述的GPX5的調(diào)控性miRNA選自下組：miR-419-5p， miR-299_3p，miR-296_3p，miR-194, miR-134, miR-383, miR-206。
[0020] 在另一優(yōu)選例中，所述的試劑為AK6蛋白或其他男性生育相關(guān)基因或蛋白的捕獲 試劑。
[0021] 在另一優(yōu)選例中，所述的試劑包括AK6或其他男性生育相關(guān)基因或蛋白的特異性 抗體、特異性擴(kuò)增引物、探針或芯片。
[0022] 在另一優(yōu)選例中，所述的抗體包括單克隆抗體、多克隆抗體，較佳地，為單克隆抗 體。
[0023] 在另一優(yōu)選例中，所述的試劑包括：
[0024] (a).抗AK6蛋白或其他男性生育相關(guān)基因或蛋白的特異性抗體；和/或
[0025] (b).特異性擴(kuò)增AK6或其他男性生育相關(guān)基因或蛋白的mRNA或cDNA的特異性引 物。
[0026] 在另一優(yōu)選例中，所述的AK6來源于哺乳動物，較佳地來源于人或嚙齒動物（小 鼠、大鼠）。
[0027] 在另一優(yōu)選例中，所述的AK6基因的Genbank ID No為ΝΜ_016283· 4。
[0028] 在另一優(yōu)選例中，所述的ΑΚ6蛋白序列如SEQ ID NO. : 2所示，編碼該蛋白的核苷 酸序列如SEQ ID NO. : 1所示。
[0029] 在另一優(yōu)選例中，所述的檢測包括定性和/或定量檢測。
[0030] 在另一優(yōu)選例中，所述的檢測是對男性個體的精漿或精液樣品中精子定位蛋白進(jìn) 行定性和/或定量檢測。
[0031] 在另一優(yōu)選例中，所述檢測的檢測對象是男性人類，較佳地，是男性不育或婚后1 年未育女性的配偶。
[0032] 在另一優(yōu)選例中，所述的檢測包括蛋白芯片法、抗體芯片法、DNA芯片法、RT-PCR 法、實時熒光定量PCR法、ELISA法、免疫印跡法、免疫組化法、免疫細(xì)胞化學(xué)法、流式細(xì)胞儀 法、質(zhì)譜法檢測。
[0033] 本發(fā)明第三方面，提供了 AK6抑制劑或其與其他男性生育相關(guān)蛋白促進(jìn)劑或抑制 劑的組合的用途，用于制備治療男性不育的藥物組合物；和/或（b)用于制備抗衰老組合 物；
[0034] 其中，所述的其他男性生育相關(guān)蛋白包括一個或多個列于表1中的蛋白。
[0035] 在另一優(yōu)選例中，所述的抗衰老組合物包括藥物組合物、美容產(chǎn)品組合物、或保健 品組合物。
[0036] 在另一優(yōu)選例中，所述的AK6抑制劑或其與其他男性生育相關(guān)蛋白促進(jìn)劑或抑制 劑的組合還可用于藥物靶點篩選、疾病預(yù)防檢測，環(huán)境污染、健康管理、遺傳分析、或藥物療 效評價。
[0037] 在另一優(yōu)選例中，所述的其他男性生育相關(guān)蛋白包括GPX5蛋白。
[0038] 在另一優(yōu)選例中，所述的AK6抑制劑包括AK6的抗體、AK6核酸的反義RNA、 microRNA、siRNA、shRNA以及AK6的活性抑制劑。
[0039] 在另一優(yōu)選例中，所述的藥物組合物包括作為活性成分的AK6抑制劑或其與其他 男性生育相關(guān)基因或蛋白，或其促進(jìn)劑的組合，和藥學(xué)上可接受的載體。
[0040] 在另一優(yōu)選例中，所述的藥物組合物還包括列于表1中的蛋白或其基因以及其促 進(jìn)劑。
[0041] 本發(fā)明第四方面，提供了一種影響男性生育和/或影響男性精子受精成功率的蛋 白集合，所述的蛋白集合包括：
[0042] (a)AK6蛋白，以及任選的一個或多個選自列于表1中的蛋白；或
[0043] (b)兩個或多個選自列于表1中的蛋白。
[0044] 在另一優(yōu)選例中，所述的蛋白集合包括CTSB，HSPA5, ALDH4A1，AK6蛋白，或其組 合。
[0045] 本發(fā)明第五方面，提供了一種影響男性生育和/或影響男性精子受精成功率的基 因集合，所述的基因集合中的基因分別編碼本發(fā)明第三方面所述的蛋白集合中的蛋白。
[0046] 在另一優(yōu)選例中，所述的基因包括該基因的全長序列或其片段、cDNA、或mRNA。
[0047] 在另一優(yōu)選例中，所述的基因集合含有AK6基因和GPX5基因。
[0048] 在另一優(yōu)選例中，所述的AK6蛋白或其基因在正常年輕男性精子中的表達(dá)量和/ 或活性低于正常老年男性精子中的表達(dá)量和/或活性。
[0049] 在另一優(yōu)選例中，所述一個或多個選自列于表1中的蛋白或其基因在正常年輕男 性精子中的表達(dá)量和/或活性高于正常老年男性精子中的表達(dá)量和/或活性。
[0050] 本發(fā)明第六方面，提供了一種用于檢測男性不育的試劑盒，所述試劑盒含有一容 器，所述容器中含有檢測本發(fā)明第四方面所述蛋白集合或本發(fā)明第五方面所述基因集合的 檢測試劑，以及標(biāo)簽或說明書，所述標(biāo)簽或說明書注明所述試劑盒用于檢測男性不育。
[0051] 在另一優(yōu)選例中，所述的檢測試劑包括CTSB，HSPA5, ALDH4A1，AK6蛋白，或其組合 的單克隆抗體。
[0052] 在另一優(yōu)選例中，所述的男性不育包括弱精癥、少弱精癥。
[0053] 在另一優(yōu)選例中，所述的標(biāo)簽或說明書還記載如下內(nèi)容：
[0054] 當(dāng)來源于檢測對象的樣品中AK6基因或蛋白的表達(dá)量El和/或活性與正常人群 的表達(dá)量和/或活性E2之比E1/E2彡2 ;和/或
[0055] 當(dāng)來源于檢測對象的樣品中一種或多種選自表1中序號1-14的基因或蛋白的表 達(dá)量和/或活性Ea與正常人群的表達(dá)量和/或活性Eb之比Ea/Eb < 0. 5 ;
[0056] 就表明所述的檢測對象患有不育癥的概率高于普通人群。
[0057] 在另一優(yōu)選例中，所述的樣品包括血液樣品、尿液樣品、精漿/液樣品、或組織樣 品。
[0058] 在另一優(yōu)選例中，當(dāng)所述的E1/E2彡2,和/或Ea/Eb彡0. 5,還表明所述的檢測對 象的生活環(huán)境較差。
[0059] 本發(fā)明第七方面，提供了一種用于檢測睪丸或附睪表達(dá)的精子結(jié)合蛋白的芯片， 所述的芯片包括：
[0060] 固相載體以及位于所述固相載體上的用于檢測本發(fā)明第四方面所述蛋白集合的 檢測點。
[0061] 在另一優(yōu)選例中，所述的檢測點分別固定有所述的男性生育相關(guān)蛋白的捕獲試劑 (如抗體）。
[0062] 在另一