一種簡易分離楊梅樹皮中楊梅苷和兒茶素的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于植物有效成分提取的技術(shù)領(lǐng)域，公開了一種簡單的分離、純化楊梅樹皮中楊梅苷和兒茶素的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]經(jīng)濟(jì)水平的發(fā)展和提高導(dǎo)致社會(huì)中肥胖人群的數(shù)量不斷增加。研究表明，從1993年到2006年，我國男性肥胖患者占總?cè)丝跀?shù)的比例從17.9%上升到42.5%，而女性患者的比例從28.8%上升到46.9%。一項(xiàng)2010年發(fā)表的研究報(bào)告稱，中國目前肥胖人口達(dá)3.25億人，增幅超過美國、英國和澳大利亞。這個(gè)數(shù)字在未來20年還可能增加一倍。肥胖患者體內(nèi)含有較高含量的總膽固醇(TC)，甘油三酯(TG)及低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)，而高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)則低于正常值。這些血脂代謝異常，會(huì)極大增加糖尿病、高血壓、冠心病、粥狀動(dòng)脈硬化等心腦血管疾病的發(fā)病率。因此，急需研發(fā)具有預(yù)防肥胖，防止體內(nèi)血脂異常，抗氧化、抗衰老等生物活性的保健藥物。此外，此類藥物還應(yīng)具有無副作用，能夠長期服用，價(jià)格便宜的特點(diǎn)。
[0003]研究證明楊梅苷不僅具有抗炎、鎮(zhèn)痛、抗腫瘤、降血糖、抗氧化、抗衰老和保肝等多種功效，同時(shí)還具有美容功能，對(duì)高血壓、糖尿病、高血脂等患者均有一定療效。目前，美國美國食品與藥品監(jiān)督管理局已將楊梅苷廣泛應(yīng)用于醫(yī)藥、食品、保健品和化妝品。但國內(nèi)外主要采用柱層析方法，包括硅膠柱、聚酰胺柱和葡聚糖凝膠柱來分離純化楊梅苷。這些方法雖然能分離得到楊梅苷，但存在死吸附、耗時(shí)、耗有機(jī)溶劑、成本較高等缺陷。本發(fā)明介紹了一種無需柱層析來分離楊梅樹皮中楊梅苷以及同時(shí)用硅膠柱來分離楊梅樹皮中兒茶素的技術(shù)路線，具有較大的潛在利用價(jià)值。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的目的在于提供一種簡便的從楊梅樹皮中提取楊梅苷和兒茶素的方法，該方法具有簡單、高效、低成本、污染少等優(yōu)點(diǎn)。所制備的楊梅苷和兒茶素純度能達(dá)到95%以上，可開發(fā)成具有抗心血管疾病、抗癌、抗衰老、抗氧化和美容等功效的藥品、食品、保健品和化妝品。
[0005]為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明的技術(shù)方案為:
[0006]—種簡易分離楊梅樹皮中楊梅苷和兒茶素的方法，包括以下步驟:
[0007]I)楊梅樹皮風(fēng)干后粉碎備用；
[0008]2)乙醇浸提，提取液濃縮得浸膏；
[0009]3)將步驟2)得到的楊梅樹皮提取浸膏用水?dāng)嚢枞芙猓尤胧兔演腿≈辽锨逡簾o色，然后將石油醚萃取后分離的下層楊梅樹皮提取物用乙酸乙酯萃取至上清液無色，再將乙酸乙酯萃取后分離得到的下層楊梅樹皮提取物用正丁醇萃取，萃取剩余得到含棕色顆粒狀水相；
[0010]4)步驟3)所得的萃取剩余棕色顆粒狀水相加入乙酸乙酯或者甲醇，加熱、攪拌，過濾得到上清液，重結(jié)晶獲得楊梅苷；
[0011]5)兒茶素的制備
[0012]將步驟3)中乙酸乙酯萃取得到的上清液合并旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮所得浸膏用硅膠拌樣后，干法上硅膠柱，用石油醚和乙酸乙酯混合物沖柱，收集沖下來的洗脫液，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮后重結(jié)晶，制備得JL茶素。
[0013]本發(fā)明方法中所述的楊梅樹皮優(yōu)選采自7月份。
[0014]步驟2)的具體過程如下:
[0015]將粉碎后的楊梅樹皮粉末加入75-95%酒精，原料和酒精的質(zhì)量體積比為lg: 3ml至lg: 10ml，室溫下浸提8-16h后過濾，依照此法浸提1_3次合并提取液，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮，濃縮浸膏在45-65°C烘箱中烘干，使水含量小于10%。
[0016]步驟3)的具體過程如下:
[0017]將楊梅樹皮提取浸膏用去離子水按照質(zhì)量體積比為lg:3ml-lg:5ml攪拌溶解，溶解后按體積比1:1-1:3加入石油醚萃取，靜止去乳化層，合并上清，用石油醚萃取至上清液無色后，將下層楊梅樹皮提取物用乙酸乙酯按照體積比1:1-1:3萃取，離心去除乳化層，合并上清，待乙酸乙酯萃取至上清液無色后，將下層楊梅樹皮提取物用正丁醇按照體積比1:1-1:3萃取，搖晃后離心去除乳化層，合并上清，待正丁醇萃取至上清液無色后，萃取剩余的含棕色顆粒狀水相備用。用乙酸乙酯和正丁醇萃取時(shí)，2000-5000rpm離心3_5分鐘來去除乳化層。
[0018]步驟4)的具體過程如下:
[0019]步驟3)所得的萃取剩余棕色顆粒狀水相按體積比1:2-1:5加入乙酸乙酯或甲醇，攪拌后置于60-8(TC水浴加熱并攪拌，過濾得上清液，保鮮膜封口，其上用針扎小孔便于楊梅苷晶體的析出。
[0020]步驟5)的具體過程如下:
[0021]將步驟3)中乙酸乙酯萃取得到的上清液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮所得含水量小于I %的浸膏用適量乙酸乙酯完全溶解后，按質(zhì)量比1:1與100-200目硅膠拌樣，然后干法上300-400目的硅膠柱，硅膠與上樣浸膏的質(zhì)量比40:1，依次用不同體積配比的石油醚和乙酸乙酯混合物沖柱，石油醚和乙酸乙酯體積配比依次為10:0、10:1、9:1、7:1、5:1、3:1、2:1 ;每個(gè)梯度沖洗2個(gè)柱體積，將石油醚:乙酸乙酯=2:1的混合液沖下來的洗脫液收集，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮后置于20-35 °C下重結(jié)晶，制備得J L茶素。
[0022]本發(fā)明有益效果在于:本發(fā)明公開了一種從楊梅樹皮中提取楊梅苷和兒茶素的方法，將楊梅樹皮烘干、粉碎，用酒精浸提后通過用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇依次萃取、離心后剩余棕色顆粒狀水相中含有大量的楊梅苷，然后用加熱的乙酸乙酯或甲醇溶液攪拌溶解后過濾、重結(jié)晶即可得楊梅苷晶體。將乙酸乙酯部位浸膏用硅膠柱層析，用不同體積配比的石油醚和乙酸乙酯混合物沖柱，將石油醚:乙酸乙酯=2:1的混合液沖下來的洗脫液收集，濃縮、重結(jié)晶即得兒茶素晶體。該方法具有簡單、高效、低成本、污染少等優(yōu)點(diǎn)。所制備的楊梅苷和兒茶素純度能達(dá)到95%以上，可開發(fā)成具有抗心血管疾病、抗癌、抗衰老、抗氧化和美容等功效的藥品、食品、保健品和化妝品。使用該法純化楊梅苷不需要特殊設(shè)備，生產(chǎn)成本低，可以應(yīng)用于工業(yè)化生產(chǎn)。
【附圖說明】
[0023]圖1為本發(fā)明制備得到的楊梅苷氫譜圖；
[0024]圖2為本發(fā)明制備得到的楊梅苷碳譜圖；
[0025]圖3為楊梅苷化學(xué)結(jié)構(gòu)式；
[0026]圖4為本發(fā)明制備得到的兒茶素氫譜圖；
[0027]圖5為本發(fā)明制備得到的兒茶素碳譜圖；
[0028]圖6為兒茶素化學(xué)結(jié)構(gòu)式。
【具體實(shí)施方式】
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[0029]以下結(jié)合實(shí)施例旨在進(jìn)一步說明本發(fā)明，而非限制本發(fā)明。
[0030]實(shí)施例1:
[0031]a.楊梅樹皮的獲取與前處理
[0032]楊梅樹皮7月份采自湖南省懷化市靖州縣飛山，主要為要修剪的楊梅樹枝條或是野樹樹皮。將樹皮上的異物去除、洗凈、風(fēng)干后用粉碎機(jī)粉碎備用。
[0033]b.酒精浸提
[0034]將粉碎后的楊梅樹皮粉末加入浸提罐，加入95%酒精(質(zhì)體比為lg:5ml)蓋好蓋子，室溫下浸提12小時(shí)后放液過濾，依照此法浸提3次合并提取液，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮，濃縮液至大燒杯中于60°C烘箱中烘干至含水率小于10%。
[0035]c.不同溶劑萃取
[0036]將干燥的楊梅樹皮乙醇提取浸膏用去離子水按照質(zhì)量體積比Ig:3ml攪拌溶解，溶解后按1:1(體積比)加入石油醚萃取，靜止去乳化層，合并上清，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮即得楊梅樹皮石油醚提取部位。用石油醚萃取至上清液無色后，將下層楊梅樹皮提取物用乙酸乙酯萃取(1: 1，體積比)，在2000rpm/min離心3分鐘來去除乳化層。將乙酸乙酯上清液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮即得楊梅樹皮乙酸乙酯提取部位。待乙酸乙酯萃取至上清液無色后，將下層楊梅樹皮提取物用正丁醇萃取(1: 1，體積比)，搖晃后于2000rpm/min離心3分鐘來去除乳化層。將正丁醇上清液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮即得楊梅