一種噻蟲啉半抗原的合成方法
【技術領域】
[0001]本發(fā)明涉及一種噻蟲啉半抗原的合成方法，用于進一步合成噻蟲啉抗原、誘導生成噻蟲啉抗體，從而建立噻蟲啉的酶聯(lián)免疫分析方法。
【背景技術】
[0002]酶聯(lián)免疫分析法(enzymelinked immunosorbent assay, ELISA)作為新興的農藥殘留檢測方法，具有特異性強、靈敏度高、操作簡便、檢測快速、投入少、測定結果可靠等優(yōu)點。美國化學學會(AOAC)已將免疫分析與氣相色譜、液相色譜同列為農藥殘留檢測的三大支柱技術。美國環(huán)境保護署(USEPA)、美國農業(yè)部食品安全檢驗司(FSIS-USDA)和美國化學學會制定了農藥殘留免疫檢驗商品試劑盒評定和認可的建議準則，明確了測定結果的法律效應。自從Hammock等首次將免疫技術用于農藥殘留分析以來，已有幾十余種農藥建立了酶聯(lián)免疫分析方法，幾乎包括了殺蟲劑、殺菌劑、除草劑、植物(昆蟲)生長調節(jié)劑等所有農藥類別，其中殺蟲劑有對硫磷、亞胺硫磷、甲基對硫磷、殺螟硫磷、甲基毒死蜱、三唑磷、毒死蜱、甲胺磷、西維因、呋喃丹、氰戊菊酯、滅多威等；殺菌劑有三唑酮、噻菌靈、克菌丹、異菌瞇、硝苯唑、福美雙等；除草劑有草甘膦、百草枯、2，4-D、阿特拉津、麥草畏、西瑪津、吡草胺、撲草凈、精喹禾靈、氯磺隆等；植物(昆蟲)生長調節(jié)劑有抑芽丹、氟蟲脲、甲氧保幼激素等。
[0003]噻蟲啉是德國拜耳農用化學品公司開發(fā)的新型氯代煙堿類殺蟲劑，主要作用于昆蟲神經接合后膜，通過與煙堿乙酰膽堿受體結合，干擾昆蟲神經系統(tǒng)正常傳導，引起神經通道的阻塞，造成乙酰膽堿的大量積累，從而使昆蟲異常興奮，全身痙攣、麻痹而死。該種農藥作用特點是:具有較強的內吸、觸殺和胃毒作用，既可用于莖葉處理，也可用于土壤、種子處理。能夠防治水稻、蔬菜、果樹、棉花和馬鈴薯等作物上的大多數(shù)害蟲，對稻薊馬、稻飛虱等害蟲有較好的防治效果。隨著噻蟲啉使用范圍和用量的增大，其在水體、土壤乃至農產品中檢出頻率和檢出濃度越來越高。發(fā)展環(huán)境中痕量噻蟲啉的分析方法，是研究噻蟲啉的環(huán)境行為和科學評估噻蟲啉環(huán)境風險的前提。目前對噻蟲啉的分析主要使用高效液相色譜法(HPLC)，如韓振泰等采用HPLC法檢測白蠟枝葉中噻蟲啉的含量方法回收率達到95.7?97.8%，檢測限為0.0lmg mL 該方法具有很強的代表性，可行性很強；胡敏等使用反向HPLC測定蔬果中的噻蟲啉含量，該方法穩(wěn)定，變異系數(shù)小于0.201%,回收率高達99.89%。但是，儀器檢測方法還存在諸多不足，如測試成本高、分析時間長及前處理步驟繁瑣等，不能滿足環(huán)境水體、土壤、農產品等中噻蟲啉殘留的快速檢測的需要。鑒于ELISA具有靈敏、快速、高通量等優(yōu)點，本發(fā)明以噻蟲啉、巰基丙酸(3-MPA)、氫氧化鉀(KOH)及二甲亞砜(DMSO)為主要原料，合成噻蟲啉半抗原，用于進一步合成噻蟲啉抗原、誘導生成噻蟲啉抗體，從而建立噻蟲啉的酶聯(lián)免疫分析方法。

【發(fā)明內容】

[0004]本發(fā)明所要解決的技術問題是提供一種噻蟲啉半抗原的合成方法，為建立噻蟲啉的酶聯(lián)免疫分析方法提供條件。
[0005]為解決上述技術問題，本發(fā)明采用的技術方案如下:
[0006]—種噻蟲啉半抗原的合成方法，它包括如下步驟:
[0007](I)在氮氣保護下將噻蟲啉、巰基丙酸(3-MPA)和氫氧化鉀(KOH)混合，然后加入二甲亞砜(DMSO)，攪拌至全部溶解；
[0008](2)緩慢升溫至95?100 °C，在95?100 °C保溫反應2?3h ;
[0009](3)將步驟⑵得到的反應體系降溫至20?25°C，向該反應體系中加水，隨后使用鹽酸調節(jié)反應體系的pH值至3?4 ;
[0010](4)向步驟(3)得到的反應體系中加三氯甲烷進行萃取，收集下層有機層；
[0011](5)用鹽酸調節(jié)步驟⑷得到的有機層液體的pH值至5?6，抽濾，濾液減壓脫干得到的固體用甲醇打漿溶解，過濾，濾液減壓脫干得到產物；
[0012](6)產物過硅膠柱，旋蒸，得到噻蟲啉半抗原純品。
[0013]步驟(I)中，噻蟲啉、巰基丙酸和氫氧化鉀的摩爾比為1:1:1?3，優(yōu)選1:1:2。
[0014]步驟(I)中，二甲亞砜與噻蟲啉的用量比為5?6mL:lmol，優(yōu)選5mL:lmol。
[0015]步驟⑴和⑵中，攪拌速度為100?130轉/分鐘，優(yōu)選120轉/分鐘。
[0016]步驟⑵中，緩慢升溫的速率為I?2°C /分鐘。
[0017]步驟(3)中，向反應體系中加入水的體積量為步驟(2)得到的反應體系體積的
2?3倍。
[0018]步驟(3)或(5)中，鹽酸的濃度為I?2mol/L0
[0019]步驟(4)中，向反應體系中加入三氯甲烷的體積量為步驟(3)得到的反應體系體積的40%?50% ;萃取2?3次，合并萃取液。
[0020]步驟(5)中，濾液減壓脫干溫度為40?50°C ;甲醇的加入量為固體體積的2?3倍。
[0021]步驟(6)中，過柱時，洗脫劑為甲醇與乙酸乙酯按體積比1:5的混合物，展開劑為甲醇與乙酸乙酯按體積比為1:1的混合物；旋蒸溫度為30?50°C。
[0022]有益效果:目前尚無噻蟲啉半抗原的合成方法，本發(fā)明以噻蟲啉、巰基丙酸(3-MPA)、氫氧化鉀(KOH)及二甲亞砜(DMSO)為主要原料，合成噻蟲啉半抗原，合成步驟方便、易行，產品合成收率可達80%，為建立噻蟲啉酶聯(lián)免疫分析方法提供了良好的基礎。
【附圖說明】
[0023]圖1為本發(fā)明方法的合成反應式。
【具體實施方式】
[0024]根據(jù)下述實施例，可以更好地理解本發(fā)明。然而，本領域的技術人員容易理解，實施例所描述的內容僅用于說明本發(fā)明，而不應當也不會限制權利要求書中所詳細描述的本發(fā)明。
[0025]實施例1:
[0026]—種噻蟲啉半抗原的合成方法，它包括如下步驟:
[0027](I)在氮氣保護下向一個潔凈干燥的150ml錐形瓶中分別加入4mmol噻蟲啉(1.000g)，4mmol 3-MPA (0.425g)，8mmol Κ0Η(0.450g)，然后加入 20ml DMSO，120 轉 / 分鐘緩慢攪拌至全部溶解；
[0028](2) 120轉/分鐘攪拌條件下，2°C /分鐘緩慢升溫至100°C，保持該溫度反應