一種耐酸產(chǎn)香氣布拉酵母菌及其應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于微生物領(lǐng)域，涉及一種新篩選的菌種，尤其是一種耐酸產(chǎn)香氣布拉酵 母菌菌種及其應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 布拉酵母菌（AtwJariZii)是單細(xì)胞真菌，屬于酵母屬，釀酒酵母亞 種的一個(gè)菌株。研究證明布拉酵母菌株在消化道中沒(méi)有病源性和擴(kuò)散性，在37 °C高溫下通 常生長(zhǎng)良好，且具有獨(dú)特生物活性，適合作為人和動(dòng)物的益生菌使用。布拉酵母菌可以促進(jìn) 腸道上皮細(xì)胞增殖及成熟，使絨毛更長(zhǎng)，隱窩更深，從而提高營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的消化、吸收能力；促 進(jìn)腸粘膜產(chǎn)生免疫球蛋白，筑起抵抗病原體的第一道防線(xiàn)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003] 本發(fā)明的目的是提供一種耐酸產(chǎn)香氣布拉酵母菌及其應(yīng)用，該酵母菌具有良好的 發(fā)酵力且耐酸發(fā)酵，并可與植物乳桿菌和耐久腸球菌等益生菌很好地共存于發(fā)酵面團(tuán)中， 用其制作的饅頭有特殊的風(fēng)味物質(zhì)。
[0004] 本發(fā)明的目的是通過(guò)以下技術(shù)方案來(lái)實(shí)現(xiàn)的：一種耐酸產(chǎn)香氣布拉酵母菌，菌株 的名稱(chēng)YT-35，分類(lèi)命名為：布拉酵母菌（，該菌株于2014年 07年03日保藏于中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，保存編號(hào)為：CGMCC No. 9409。保藏地址為：北京市朝陽(yáng)區(qū)北辰西路1號(hào)院3號(hào)。
[0005] 該酵母菌耐酸發(fā)酵程度為：在乳酸0-1. 0 mL/100g面團(tuán)中仍能正常發(fā)酵面團(tuán)。
[0006] 本發(fā)明的耐酸產(chǎn)香氣布拉酵母菌可用于饅頭發(fā)酵劑。
[0007] 利用本發(fā)明的酵母菌制作的饅頭能檢測(cè)出58種揮發(fā)性風(fēng)味物質(zhì)，主要成分包括 醇類(lèi)、酯類(lèi)、烴類(lèi)、醛類(lèi)、酮類(lèi)和酸類(lèi)。
[0008] 與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于：經(jīng)實(shí)驗(yàn)得出這株布拉酵母菌具有良好的發(fā) 酵力且耐酸發(fā)酵，其發(fā)酵的面團(tuán)持氣性好，長(zhǎng)時(shí)間發(fā)酵條件下才出現(xiàn)空洞，用其制作的饅頭 不僅比容大、有彈性、咀嚼性好，而且含有特殊的風(fēng)味物質(zhì)。它與植物乳桿菌和耐久腸球菌 等益生菌可以很好地共存于發(fā)酵面團(tuán)中。將布拉酵母應(yīng)用于饅頭面團(tuán)中可以避免由于益生 細(xì)菌產(chǎn)生的酸對(duì)酵母發(fā)酵的影響，從而可以在不影響面團(tuán)發(fā)酵的同時(shí)保留益生細(xì)菌在饅頭 制作過(guò)程中產(chǎn)生的特殊風(fēng)味物質(zhì)。
【附圖說(shuō)明】
[0009] 圖1為布拉酵母耐酸發(fā)酵特性暨面團(tuán)體積隨時(shí)間增長(zhǎng)圖。
[0010] 圖2為使用頂空固相微萃取-氣質(zhì)聯(lián)用法對(duì)布拉酵母菌饅頭揮發(fā)性風(fēng)味物質(zhì)進(jìn)行 測(cè)定的質(zhì)譜圖。
【具體實(shí)施方式】 toon] 以下結(jié)合具體實(shí)例對(duì)本發(fā)明的酵母菌株的篩選和鑒定過(guò)程以及相關(guān)特性實(shí)驗(yàn)做 進(jìn)一步詳細(xì)描述，但并不是為了限定本發(fā)明。
[0012] 下述實(shí)施實(shí)例中所使用的實(shí)驗(yàn)方法如無(wú)特殊說(shuō)明，均為常規(guī)方法；所使用的材料、 試劑等，如無(wú)特殊說(shuō)明，均可從商業(yè)途徑得到。
[0013] 孟加拉紅固體培養(yǎng)基：蛋白胨5 g/L，磷酸二氫鉀I g/L，硫酸鎂0.5 g/L，葡萄糖 10 g/L，氯霉素0.1 g/L，孟加拉紅0.033 g/L，瓊脂粉18.5 g/L。
[0014] YH)液體培養(yǎng)基：酵母膏10 g/L，蛋白胨20 g/L，葡萄糖20 g/L，氯霉素0· I g/L。
[0015] 酚：氯仿（1:1V/V) TE 溶液（pH 7.5) :10 mM Tris-HCl (ρΗ7· 5)，I mM EDTA (ρΗ8·0) STES 緩沖液：0· 2 M Tris-HCl (pH 7· 6)，0· 5 M NaCl，0. 1% (m/V) SDS，0. 01 M EDTA 50XTAE (100 mL) :Tris 24.2 g，冰醋酸 5.71 mL，0.5 M EDTA 10 mL，雙蒸水定容至 100 mL，121°C滅菌30 min，電泳檢測(cè)時(shí)使用IXTAE (將50XTAE稀釋50倍后使用）。
[0016] 一、菌株的分離與鑒定 菌株分離樣品為河南商丘市售的傳統(tǒng)發(fā)酵劑--酵子 1.樣品稀釋液制備及菌株分離 取碾碎后樣品25 g放入裝有225 mL無(wú)菌生理鹽水的錐形瓶(瓶?jī)?nèi)預(yù)置適當(dāng)數(shù)量的無(wú) 菌玻璃珠）中，充分振搖，制成1:10的懸浮液。
[0017] 吸取1:10樣品懸浮液I mL，沿管壁緩慢注于裝有9 mL生理鹽水的無(wú)菌試管中， 振搖試管或換用1支無(wú)菌吸管反復(fù)吹打使其混合均勻，制成1:100的樣品懸浮液。再吸取 I mL 1:100樣品懸浮液按上述操作順序，做10倍稀釋樣品懸浮液，以此類(lèi)推。
[0018] 根據(jù)待檢樣品活菌總數(shù)的估計(jì)，選擇2~3個(gè)連續(xù)的適宜稀釋度，每個(gè)稀釋度吸取 0. 2 mL樣品懸浮液涂布于2個(gè)孟加拉紅瓊脂平板，30 °C培養(yǎng)48 h。
[0019] 2.菌株純化 接種針挑取平板上的單菌落，在新的相同的平板上進(jìn)行劃線(xiàn)接種，平板純化2代后，斜 面保藏并進(jìn)行菌落形態(tài)觀(guān)察及顯微鏡觀(guān)察。
[0020] 3. ITS rDNA 鑒定 挑取孟加拉紅平板上的YT-35菌落，加入Yro液體培養(yǎng)基中，30 °c搖菌培養(yǎng)過(guò)夜，取 3 mL菌懸液至5 mL離心管中離心，6000 r，3 min;棄去上清，用TE洗滌，離心（6000 r, 2 min)洗滌，至上清為無(wú)色，棄去上清；取0.2 mL STES至離心管中，加石英砂，加60 μL酸 氯仿，渦旋振蕩5 min，間歇震蕩，冷卻；將菌懸液轉(zhuǎn)移至1.5 mL離心管中，離心（6000 r，2 min)離心后分層；取上清液至I. 5 mL離心管中，用等體積酚氯仿抽提3次；取上清加2倍 體積無(wú)水乙醇，-20 °C沉淀過(guò)夜；于4 °C下10, 000 rpm離心5 min，收集核酸沉淀，用70% 乙醇洗滌沉淀，10, 〇〇〇離心I min，空氣干燥DNA沉淀至沒(méi)有酒精味，溶于40 μ L TE，取體 系做PCR。引物由生工生物工程(上海）有限公司合成： 引物 ITS4 的序列為：5' - TCC TCC GCT GAC TAA TAT GC- 3' 引物 ITS5 的序列為：5' - GGA AGT AAA AGT CGT AAC AAGG- 3' 將PCR產(chǎn)物進(jìn)行電泳檢測(cè)，將有條帶的產(chǎn)物送生工生物工程(上海）有限公司進(jìn)行測(cè) 序。
[0021] 測(cè)得YT-35菌株的ITS序列如SEQ ID NO :1所示，見(jiàn)序列表。
[0022] 測(cè)序結(jié)果用BLAST程序與美國(guó)國(guó)立生物技術(shù)信息中心數(shù)據(jù)庫(kù)中已報(bào)道的真菌 ITS rDNA進(jìn)行比對(duì)，結(jié)果顯示，YT-35菌株的ITS序列與布拉酵母菌 AtwJaiZii)的同源性大于99%。
[0023] 由以上鑒定結(jié)果可知，YT-35菌株為布拉酵母菌AtwJaiZii)。 該菌已于2014年07月03日保