立即酸化至PH 1，攪拌4 h后，靜置24h，離心得到固體，標記為腐殖酸pH12 ；
氮氣保護下，以10柱體積/h的速度，用pH =13的焦磷酸鈉緩沖液淋洗XAD-8樹脂柱，每收集2-50 ml流出液，用特定波長紫外/可見光進行測定，流出液的紫外/可見吸光值先增大后減小，當(dāng)流出液紫外/可見吸光值小于最大吸光值的0.5%時，停止pH=13的焦磷酸鈉緩沖液淋洗過程，合并流出液，立即酸化至PH 1，攪拌4 h后，靜置24h，離心得到固體，標記為腐殖酸pH13 ；
步驟g、土壤腐殖酸除鹽及固化:在氮氣保護下，用0.1-0.3 mol/L的氫氧化鈉分別溶解腐殖酸PH3-腐殖酸pH13，使每份溶液固液體積比均為1:2，用濃鹽酸分別調(diào)節(jié)溶液pH=4-9，共計得到11份腐殖酸亞組分溶液；
將11份腐殖酸亞組分溶液分別置入11個截留分子量為10000道爾頓透析袋，并將每個透析袋置于超純水中，組成透析體系，攪拌24 h，鹽分通過透析袋進入超純水，將每個透析袋中的腐殖酸亞組分溶液冷凍干燥得到11份腐殖酸亞組分，命名為腐殖酸亞組分pH3-13o
[0031]實施例3:本實施例公開了一種土壤中腐殖酸的分級提取方法，具體包括如下步驟:
步驟a、土壤預(yù)處理:稱取天然土壤，剔除樹根和石子等雜物，風(fēng)干碾磨后過2.0 mm的篩，得到土壤樣品；
步驟b、土壤酸洗:向土壤樣品中加入去離子水，使固液比達到3:8，用氫氧化鈉和鹽酸調(diào)節(jié)其pH=3.0，得到固液混合物，向該固液混合物中加0.lmol/L的鹽酸溶液，使其固液比為1:10，連續(xù)攪拌8h，靜置28 h后，離心后棄去上清液，得到酸洗土壤樣品；
步驟C、提取土壤中腐殖酸:向酸洗土壤樣品中加入去離子水，使其固液比為1:12，用鹽酸和氫氧化鈉調(diào)節(jié)溶液pH=7，得到固液混合物，氮氣保護條件下，向該固液混合物中加入焦磷酸鈉溶液，并用去離子水稀釋，使焦磷酸鈉濃度為0.2 mol/L且固液比為1:10，持續(xù)攪拌8h，靜置28 h后，離心得到上清液I和土壤樣品I ;
氮氣保護條件下，向上清液I中加入6mol/L鹽酸，使其pH =3.0，攪拌15min，靜置28后，離心得固體，標記為腐殖酸I ;
向步驟b中的土壤樣品I中加入去離子水，使其固液比為3:8，用鹽酸和氫氧化鈉調(diào)節(jié)其pH=7，得到固液混合物，氮氣保護條件下，向該固液混合物中加入氫氧化鈉溶液，并用去離子水稀釋，使氫氧化鈉濃度為0.3 mol/L且固液比為1:10，攪拌8h，靜置28 h后，離心得到上清液2和土壤殘渣；
氮氣保護條件下，向上清液2中加入6mol/L鹽酸，使其pH =3.0，攪拌30 min，靜置28h后，離心得固體，標記為腐殖酸2;
步驟d、腐殖酸除硅:將腐殖酸I和腐殖酸2合并，氮氣保護條件下，用含有0.3 mol/L氫氧化鈉和0.2 mol/L氯化鈉的溶液溶解，高速離心分離，得到上層清液；將該上層清液用鹽酸酸化，使其PH=3.0，攪拌15min，靜置28 h，離心得固體，標記為腐殖酸3 ;
在容器中，向腐殖酸3中加入含有0.3 mol/L鹽酸和0.4 mol/L氫氟酸的溶液，使其固液比為1:10，持續(xù)攪拌20h，離心分離得固體標記為無硅腐殖酸；
步驟e、土壤腐殖酸除雜酸:向無硅腐殖酸中加入0.lmol/L鹽酸溶液，使其固液比為3:12，持續(xù)攪拌8h，并靜置28 h后，離心得到上層清液及純化腐殖酸；
步驟f、土壤腐殖酸的亞組分分級::在氮氣保護條件下，用氫氧化鈉將步驟e中的純化腐殖酸溶解，加入去離子水使溶液中腐殖酸濃度在3 g/L，用鹽酸和氫氧化鈉調(diào)節(jié)溶液pH=3后，以10倍柱體積/h的速度流過XAD-8樹脂柱，流出液棄去；
以5-10柱體積/h的速度，用pH =3的焦磷酸鈉緩沖液淋洗XAD-8樹脂柱，每收集2_50ml流出液，用特定波長紫外/可見光進行測定，流出液的紫外/可見吸光值先增大后減小，當(dāng)流出液紫外/可見吸光值小于最大吸光值的0.5%時，停止pH=3的焦磷酸鈉緩沖液淋洗過程，合并流出液，立即酸化至PH= 1，攪拌4 h后，靜置24h，離心得到固體，標記為腐殖酸PH3 ;
以5-10柱體積/h的速度，用pH =4的焦磷酸鈉緩沖液淋洗XAD-8樹脂柱，每收集2_50ml流出液，用特定波長紫外/可見光進行測定，流出液的紫外/可見吸光值先增大后減小，當(dāng)流出液紫外/可見吸光值小于最大吸光值的0.5%時，停止pH=4的焦磷酸鈉緩沖液淋洗過程，合并流出液，立即酸化至PH= 1，攪拌4 h后，靜置24h，離心得到固體，標記為腐殖酸pH4 ；
以5-10柱體積/h的速度，用pH =5的焦磷酸鈉緩沖液淋洗XAD-8樹脂柱，每收集2_50ml流出液，用特定波長紫外/可見光進行測定，流出液的紫外/可見吸光值先增大后減小，當(dāng)流出液紫外/可見吸光值小于最大吸光值的0.5%時，停止pH=5的焦磷酸鈉緩沖液淋洗過程，合并流出液，立即酸化至PH= 1，攪拌4 h后，靜置24h，離心得到固體，標記為腐殖酸PH5 ;
以5-10柱體積/h的速度，用pH =6的焦磷酸鈉緩沖液淋洗XAD-8樹脂柱，每收集2_50ml流出液，用特定波長紫外/可見光進行測定，流出液的紫外/可見吸光值先增大后減小，當(dāng)流出液紫外/可見吸光值小于最大吸光值的0.5%時，停止pH=6的焦磷酸鈉緩沖液淋洗過程，合并流出液，立即酸化至PH= 1，攪拌4 h后，靜置24h，離心得到固體，標記為腐殖酸
PH6 ;
以5-10柱體積/h的速度，用pH =7的焦磷酸鈉緩沖液淋洗XAD-8樹脂柱，每收集2_50ml流出液，用特定波長紫外/可見光進行測定，流出液的紫外/可見吸光值先增大后減小，當(dāng)流出液紫外/可見吸光值小于最大吸光值的0.5%時，停止pH=7的焦磷酸鈉緩沖液淋洗過程，合并流出液，立即酸化至PH= 1，攪拌4 h后，靜置24h，離心得到固體，標記為腐殖酸PH7 ;
氮氣保護下，以5-10柱體積/h的速度，用pH =8的焦磷酸鈉緩沖液淋洗XAD-8樹脂柱，每收集2-50 ml流出液，用特定波長紫外/可見光進行測定，流出液的紫外/可見吸光值先增大后減小，當(dāng)流出液紫外/可見吸光值小于最大吸光值的0.5%時，停止pH=8的焦磷酸鈉緩沖液淋洗過程，合并流出液，立即酸化至PH= 1，攪拌4 h后，靜置24h，離心得到固體，標記為腐殖酸pH8 ；
氮氣保護下，以5-10柱體積/h的速度，用pH =9的焦磷酸鈉緩沖液淋洗XAD-8樹脂柱，每收集2-50 ml流出液，用特定波長紫外/可見光進行測定，流出液的紫外/可見吸光值先增大后減小，當(dāng)流出液紫外/可見吸光值小于最大吸光值的0.5%時，停止pH=9的焦磷酸鈉緩沖液淋洗過程，合并流出液，立即酸化至PH= 1，攪拌4 h后，靜置24h，離心得到固體，標記為腐殖酸pH9 ；
氮氣保護下，以5-10柱體積/h的速度，用pH =10的焦磷酸鈉緩沖液淋洗XAD-8樹脂柱，每收集2-50 ml流出液，用特定波長紫外/可見光進行測定，流出液的紫外/可見吸光值先增大后減小，當(dāng)流出液紫外/可見吸光值小于最大吸光值的0.5%時，停止pH=10的焦磷酸鈉緩沖液淋洗過程，合并流出液，立即酸化至PH =1，攪拌4 h后，靜置24h，離心得到固體，標記為腐殖酸pH1 ；
氮氣保護下，以10柱體積/h的速度，用pH =11的焦磷酸鈉緩沖液淋洗XAD-8樹脂柱，每收集2-50 ml流出液，用特定波長紫外/可見光進行測定，流出液的紫外/可見吸光值先增大后減小，當(dāng)流出液紫外/可見吸光值小于最大吸光值的0.5%時，停止pH=ll的焦磷酸鈉緩沖液淋洗過程，合并流出液，立即酸化至PH =1，攪拌4 h后，靜置24h，離心得到固體，標記為腐殖酸pHll ；
氮氣保護下，以10柱體積/h的速度，用pH =12的焦磷酸鈉緩沖液淋洗XAD-8樹脂柱，每收集2-50 ml流出液，用特定波長紫外/可見光進行測定，流出液的紫外/可見吸光值先增大后減小，當(dāng)流出液紫外/可見吸光值小于最大吸光值的0.5%時，停止pH=12的焦磷酸鈉緩沖液淋洗過程，合并流出液，立即酸化至PH= 1，攪拌4 h后，靜置24h，離心得到固體，標記為腐殖酸pH12 ；
氮氣保護下，以10柱體積/h的速度，用pH =13的焦磷酸鈉緩沖液淋洗XAD-8樹脂柱，每收集2-50 ml流出液，用特定波長紫外/可見光進行測定，流出液的紫外/可見吸光值先增大后減小，當(dāng)流出液紫外/可見吸光值小于最大吸光值的0.5%時，停止pH=13的焦磷酸鈉緩沖液淋洗過程，合并流出液，立即酸化至PH =1，攪拌4 h后，靜置24h，離心得到固體，標記為腐殖酸pH13 ；
步驟g、土壤腐殖酸除鹽及固化:在氮氣保護下，用0.1-0.3 mol/L的氫氧化鈉分別溶解腐殖酸PH3-腐殖酸pH13，使每份溶液固液體積比均為1:2，用濃鹽酸分別調(diào)節(jié)溶液pH=4-9，共計得到11份腐殖酸亞組分溶液；
將11份腐殖酸亞組分溶液分別置入11個截留分子量為10000道爾頓透析袋，并將每個透析袋置于超純水中，組成透析體系，攪拌24 h，鹽分通過透析袋進入超純水，將每個透析袋中的腐殖酸亞組分溶液冷凍干燥得到11份腐殖酸亞組分，命名為腐殖酸亞組分pH3-13o
[0032]實施例4:本實施例中公開了一種土壤中腐殖酸的分級提取方法，所述分級提取方法包括如下步驟:
步驟a、土壤預(yù)處理:稱取天然土壤，剔除樹根和石子等雜物，風(fēng)干碾磨后過2.0 mm的篩，得到土壤樣品；
步驟b、土壤酸洗:向土壤樣品中加入去離子水，使固液比達到1:5，用氫氧化鈉和鹽酸調(diào)節(jié)其PH=L O，得到固液混合物，向該固液混合物中加0.lmol/L的鹽酸溶液，使其固液比為1:10，連續(xù)攪拌4 h，靜置24 h后，離心后棄去上清液，得到酸洗土壤樣品；
步驟C、提取土壤中腐殖酸:向酸洗土壤樣品中加入去離子水，使其固液比為1:3，用鹽酸和氫氧化鈉調(diào)節(jié)溶液pH=7，得到固液混合物，氮氣保護條件下，向該固液混合物中加入焦磷酸鈉溶液，并用去離子水稀釋，使焦磷酸鈉濃度為0.1 mol/L且固液比為1:10，持續(xù)攪拌4h，靜置24 h后，離心得到上清液I和土壤樣品I ;
氮氣保護條件下，向上清液I中加入6mol/L鹽酸，使其pH =1.0，攪拌30 min，靜置24后，離心得固體，標記為腐殖酸I;
向步驟b中的土壤樣品I中加入去離子水，使其固液比為1:3，用鹽酸和氫氧化鈉調(diào)節(jié)其pH=7，得到固液混合物，氮氣保護條件下，向該固液混合物中加入氫氧化鈉溶液，并用去離子水稀釋，使氫氧化鈉濃度為0.1 mol/L且固液比為1:10，攪拌4 h，靜置24 h后，離心得到上清液2和土壤殘渣；
氮氣保護條件下，向上清液2中加入6mol/L鹽酸，使其pH =1.0，攪拌30 min，靜置24h后，離心得固體，標記為腐殖酸2 ;
步驟d、腐殖酸除硅:將腐殖酸I和腐殖酸2合并，氮氣保護條件下，用含有0.1 mol/L氫氧化鈉和0.3 mol/L氯化鈉的溶液溶解，高速離心分離，得到上層清液；將該上層清液用鹽酸酸化，使其PH=L 0，攪拌30min，靜置24 h，離心得固體，標記為腐殖酸3 ;
在容器中，向腐殖酸3中加入含有用含有0.lmol/L鹽酸和0.3 mol/L氫氟酸的溶液，使其固液比為1:10，持續(xù)攪拌24 h，離心分離得固體標記為無硅腐殖酸；
步驟e、土壤腐殖酸除雜酸:向無硅腐殖酸中加入0.lmol/L鹽酸溶液，使其固液比為1:10,持續(xù)攪拌4h，并靜置24 h后，離心得到上層清液及純化腐殖酸；
步驟f、土壤腐殖酸的亞組分分級::在氮氣保護條件下，用氫氧化鈉將步驟e中的純化腐殖酸溶解，加入去離子水使溶液中腐殖酸濃度在1-3 g/L，用鹽酸和氫氧化鈉調(diào)節(jié)溶液pH值=2后，以10倍柱體積/h的速度流過XAD-8樹脂柱，流出液棄去；
以10柱體積/h的速度，用pH =3的焦磷酸鈉緩沖液淋洗XAD-8樹脂柱，每收集2_50ml流出液，用特定波長紫外/可見光進行測定，流出液的紫外/可見吸光值先增大后減小，當(dāng)流出液紫外/可見吸光值小于最大吸光值的0.5%時，停止pH=3的焦磷酸鈉緩沖液淋洗過程，合并流出液，立即酸化至PH= 1，攪拌4 h后，靜置24h，離心得到固體，標記為腐殖酸PH3 ;
以10柱體積/h的速度，用pH =4的焦磷酸鈉緩沖液淋洗XAD-8樹脂柱，每收集2_50ml流出液，用特定波長紫外/可見光進行測定，流出液的紫外/可見吸光值先增大后減小，當(dāng)流出液紫外/可見吸光值小于最大吸光值的0.5%時，停止pH=4的焦磷酸鈉緩沖液淋洗過程，合并流出液，立即酸化至PH =1，攪拌4 h后，靜置24h，離心得到固體，標記為腐殖酸pH4 ；
以10柱體積/h的速度，用pH =5的焦磷酸鈉緩沖液淋洗XAD-8樹脂柱，每收集2_50ml流出液，用特定波長紫外/可見光進行測定，流出液的紫外/可見吸光值先增大后減小，當(dāng)流出液紫外/可見吸光值小于最大吸光值的0.5%時，停止pH=5的焦磷酸鈉緩沖液淋洗過程，合并流出液，立即酸化至pH= 1，攪拌4 h后，靜置24h，離心得到固體，標記為腐殖酸PH5 ;
以10柱體積/h的速度，用pH =6的焦磷酸鈉緩沖液淋洗XAD-8樹脂柱，每收集2_50ml流出液，用特定波長紫外/可見光進行測定，流出液的紫外/可見吸光值先增大后減小，當(dāng)流出液紫外/可見吸光值小于最大吸光值的0.5%時，停止pH=6的焦磷酸鈉緩沖液淋洗過程，合并流出液，立即酸化至PH =1，攪拌4 h后，靜置24h，離心得到固體，標記為腐殖酸
PH6 ;
以10柱體積/h的速度，用pH =7的焦磷酸鈉緩沖液淋洗XAD-8樹脂柱，每收集2_50ml流出液，用特定波長紫外/可見光進行測定，流出液的紫外/可見吸光值先增大后減小，當(dāng)流出液紫外/可見吸光值小于最大吸光值的0.5%時，停止pH=7的焦磷酸鈉緩沖液淋洗過程，合并流出液，立即酸化至PH= 1，攪拌4 h后，靜置24h，離心得到固體，標記為腐殖酸PH7 ;
氮氣保護下，以10柱體積/h的速度，用pH =8的焦磷酸鈉緩沖液淋洗XAD-8樹脂柱，每收集2-50 ml流出液，用特定波長紫外/可見光進行測定，流出液的紫外/可見吸光值先增大后減小，當(dāng)流出液紫外/可見吸光值小于最大吸光值的0.5%時，停止pH=8的焦磷酸鈉緩沖液淋洗過程，合并流出液，立即酸化至PH= 1，攪拌4 h后，靜置24h，離心得到固體，標記為腐殖酸pH8 ；
氮氣保護下，以10柱體積/h的速度，用pH =9的焦磷酸鈉緩沖液淋洗XAD-8樹脂柱，每收集2-50 ml流出液，用特定波長紫外/可見光進行測定，流出液的紫外/可見吸光值先增大后減小，當(dāng)流出液紫外/可見吸光值小于最大吸光值的0.5%時，停止pH=9的焦磷酸鈉緩沖液淋洗過程，合并流出液，立即酸化至PH= 1，攪拌4 h后，靜置24h，離心得到固體，標記為腐殖酸pH9 ；
氮氣保護下，以10柱體積/h的速度，用pH =10的焦磷酸鈉緩沖液淋洗XAD-8樹脂柱，每收集2-50 ml流出液，用特定波長紫外/可見光進行測定，流出液的紫外/可見吸光值先增大后減小，當(dāng)流出液紫外/可見吸光值小于最大吸光值的0.5%時，停止pH=10的焦磷酸鈉緩沖液淋洗過程，合并流出液，立即酸化至PH =1，攪拌4 h后，靜置24h，離心得到固體，標記為腐殖酸p