一種從蕓香科植物的籽或果實(shí)中提取吳茱萸內(nèi)酯的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于植物中有效成分利用領(lǐng)域，主要是涉及從蕓香科植物的籽或果實(shí)中大量制備吳茱萸內(nèi)酯(檸檬苦素)的方法。
技術(shù)背景
[0002]吳茱萸內(nèi)酯又被稱為梓檬苦素(Limonoids)，主要存在于蕓香科(Rutaceae)植物的籽或果實(shí)中。如在吳茱萸的果實(shí)、石虎的果實(shí)、疏毛吳茱萸的果實(shí)、檸檬的籽、桔子的籽、柑橘的籽、橙子的籽或柚子的籽等中都有較高含量的吳茱萸內(nèi)酯(檸檬苦素)。吳茱萸內(nèi)酯(檸檬苦素)具有較強(qiáng)的生理活性，例如:抗氧化、抗炎、抗真菌、鎮(zhèn)痛、抗腫瘤、抗病毒等活性，所以吳茱萸內(nèi)酯(檸檬苦素)是一類具有非常高的開(kāi)發(fā)價(jià)值的活性成分。
[0003]本發(fā)明提出了一種新的高效分離純化吳茱萸內(nèi)酯(檸檬苦素)的方法，該方法所用原料來(lái)源廣泛、易得，制備方法簡(jiǎn)便易行，非常易于吳茱萸內(nèi)酯(檸檬苦素)的大規(guī)模工業(yè)化生產(chǎn)。
[0004]在文獻(xiàn)或?qū)＠幸呀?jīng)多種制備吳茱萸內(nèi)酯(檸檬苦素)的方法報(bào)道，如中國(guó)專利“申請(qǐng)?zhí)?200910115318.3、201110081655.2、200810046164.2、200810037312.4、201210153841.7^201110004630.2^200910104500.9^201010300601.6 和 200810204440.3”都有采用柱層析或大孔樹(shù)脂分離的手段來(lái)制備吳茱萸內(nèi)酯(檸檬苦素)；中國(guó)專利“申請(qǐng)?zhí)?01210033504.4”采用多次超臨界0)2提取和結(jié)晶的方法來(lái)制備吳茱萸內(nèi)酯(檸檬苦素)；中國(guó)專利“申請(qǐng)?zhí)?01410555943.0”采用反復(fù)洗滌、結(jié)晶和活性炭脫色的方法來(lái)制備吳茱萸內(nèi)酯(檸檬苦素)；中國(guó)專利“申請(qǐng)?zhí)?0106285.9”采用反復(fù)脫脂和結(jié)晶的方法來(lái)制備吳茱萸內(nèi)酯(檸檬苦素)；中國(guó)專利“申請(qǐng)?zhí)?01410259115.2”采用榨汁法及鹽析的方法提取和制備吳茱萸內(nèi)酯(檸檬苦素)。本專利以常規(guī)溶劑為提取溶劑，利用堿溶酸沉的原理來(lái)分離純化吳茱萸內(nèi)酯(檸檬苦素)，簡(jiǎn)單有效更易工業(yè)化。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明主要是以蕓香科植物的籽或果實(shí)為原料，提供一種吳茱萸內(nèi)酯(檸檬苦素)的制備方法。它主要是先通過(guò)溶劑對(duì)原料進(jìn)行提取，回收溶劑得到的浸膏；浸膏用石油醚進(jìn)行脫脂；脫脂后的浸膏用稀酸溶液洗滌；洗滌后浸膏用堿溶液充分溶解，然后用酸調(diào)節(jié)pH至酸性，析出固體；取固體，干燥后用氯仿溶解，取氯仿溶液，回收氯仿得固體；所得固體用少量乙醇等溶劑洗滌；洗滌后的固體進(jìn)行結(jié)晶和重結(jié)晶，就可得到高純度的吳茱萸內(nèi)酯(梓檬苦素)晶體。
[0006]蕓香科植物的籽或果實(shí)中含有大量的吳茱萸內(nèi)酯(檸檬苦素)可以作為提取原料，如檸檬籽、柑橘籽、桔子籽、橙子籽或柚子籽、吳茱萸果實(shí)、或石虎果實(shí)等；優(yōu)選為桔子籽、檸檬籽。
[0007]本發(fā)明從蕓香科植物的籽或果實(shí)中提取吳茱萸內(nèi)酯的方法方法，具體步驟主要如下:
[0008]將蕓香科植物的籽或果實(shí)作為原料；
[0009]取經(jīng)干燥、粉碎的原料粉末，按液固比mL/g 1/1-50/1加入溶劑，提取1_5次，每次l-4h，合并提取液并回收溶劑得到浸膏；所述溶劑為甲醇、乙醇、丙酮、氯仿、乙酸乙酯的一種或幾種混合物、或甲醇、乙醇、丙酮的50%?95%體積比濃度水溶液；
[0010]將上述浸膏按液固比mL/g 1/1-100/1用石油醚脫脂1_5次；然后再按液固比mL/g 1/1-100/1用濃度為1-10%的稀鹽酸、硫酸、硝酸或磷酸溶液浸泡洗滌l_48h，反復(fù)進(jìn)行1-6 次；
[0011]將上述經(jīng)洗滌所得的固體按液固比mL/g 1/1-100/1加入到濃度為1_20%的氫氧化鈉或氫氧化鉀溶液中，充分溶解l_48h，過(guò)濾或離心得堿溶液；取堿溶液加鹽酸、硫酸、硝酸或磷酸調(diào)節(jié)PH至1-7，析出固體，過(guò)濾或離心，所得固體干燥，得吳茱萸內(nèi)酯粗產(chǎn)品；
[0012]將所得茱萸內(nèi)酯粗產(chǎn)品按液固比mL/g 1/1-200/1用氯仿或二氯甲烷溶解，過(guò)濾或離心，取溶液，回收溶劑得到固體；所得固體按液固比mL/g 1/1-50/1用甲醇、乙醇、氯仿或丙酮洗滌1-6次，干燥；
[0013]將干燥所得固體，用二氯甲烷、氯仿或丙酮進(jìn)行溶解并結(jié)晶，然后用二氯甲烷、氯仿、丙酮、乙醇、異丙醇一種或幾種的混合溶劑重結(jié)晶，即可到高純度吳茱萸內(nèi)酯晶體。
[0014]為達(dá)到更好的提取效果:
[0015]提取過(guò)程是在超聲波或微波輔助下進(jìn)行提取，或加熱回流提取或常溫浸取。
[0016]所用石油醚沸程為60-90°C。
[0017]本發(fā)明的有益效果:從原料中提取吳茱萸內(nèi)酯(檸檬苦素)的提取率可達(dá)90%以上，且提取純度可達(dá)99%，制作工藝簡(jiǎn)單易操作，且成本低，適用于工業(yè)化大規(guī)模生產(chǎn)。
[0018]具體實(shí)施方法:
[0019]實(shí)施例1:
[0020]①取干燥桔子籽的干燥粉末適量，按液固比mL/g 3/1加入乙醇，超聲(400W，30°C )攪拌提取3次，每次2h，合并提取液回收溶劑得到浸膏。
[0021]②將上述浸膏按液固比mL/g 10/1用石油醚脫脂3次。然后按液固比mL/g 10/1用I %的鹽酸溶液浸泡洗滌反應(yīng)Ih，過(guò)濾，取用固體，重復(fù)3次。
[0022]③將上述固體按液固比mL/g 10/1浸泡入I %的氫氧化鈉溶液，反應(yīng)lh，過(guò)濾，取堿液加鹽酸調(diào)節(jié)溶液PH至I，并攪拌，過(guò)濾，留用固體。
[0023]④將所述的固體按液固比mL/glO/1用氯仿溶解，過(guò)濾，氯仿液回收，固體按液固比mL/g 10/1用乙醇洗滌，重復(fù)洗滌5次。
[0024]⑤將上述洗滌后的固體干燥，用丙酮溶解結(jié)晶，然后用丙酮一乙醇(體積比1/1)重結(jié)晶，即可到吳茱萸內(nèi)酯(檸檬苦素)晶體，純度為99%。
[0025]實(shí)施例2:
[0026]①取干燥吳茱萸果實(shí)粉末適量，按液固比mL/g 4/1加入無(wú)水乙醇，攪拌，60°C回流提取5次，每次4h，合并提取液回收溶劑得到浸膏。
[0027]②將上述浸膏按液固比mL/g 1/1用石油醚脫脂5次。然后按液固比mL/g 100/1用2%的硫酸溶液浸泡洗滌反應(yīng)lh，過(guò)濾，取用固體。
[0028]③將上述固體按液固比mL/g 20/1浸泡入I %的氫氧化鉀溶液，反應(yīng)lh，過(guò)濾，取堿液加鹽酸調(diào)節(jié)溶液PH至5，并攪拌，過(guò)濾，留用固體。
[0029]④將所述的固體按液固比mL/g 10/1用二氯甲烷溶解，過(guò)濾，氯仿液回收，固體用5倍量乙醇洗滌，重復(fù)洗滌多次。
[0030]⑤將上述洗滌后的固體干燥，用丙酮溶解結(jié)晶，然后用異丙醇重結(jié)晶，即可到吳茱萸內(nèi)酯(檸檬苦素)晶體，純度為89%。
[0031]實(shí)施例3:
[0032]①取檸檬籽干燥粉末適量，按液固比mL/g 15/1加入75%甲醇水溶液，超聲(300W，20°C )攪拌提取4次，每次lh，合并提取液回收溶劑得到浸膏。
[0033]②將上述浸膏按液固比mL/g 100/1用石油醚脫脂I次。然后按液固比mL/g 30/1用10%的鹽酸溶液浸泡洗滌反應(yīng)10h，過(guò)濾，取用固體，重復(fù)3次。
[0034]③將上述固體按液固比mL/g 20/1浸泡入I %的氫氧化鈉溶液，反應(yīng)10h，過(guò)濾，取堿液加硫酸調(diào)節(jié)溶液PH至I，并攪拌，過(guò)濾，留用固體。
[0035]④將所述的固體按液固比mL/g 30/1用氯仿溶解，過(guò)濾，氯仿液回收，固體按液固比mL/g 10/1用甲醇洗滌，重復(fù)洗滌多次。
[0036]⑤將上述洗滌后的固體干燥，用丙酮溶解結(jié)晶，然后用乙醇重結(jié)晶，即可到吳茱萸內(nèi)酯(檸檬苦素)晶體，純度為98%。
[0037]實(shí)施例4:
[0038]①取柑橘籽的干燥粉末適量，按液固比mL/g 3/1加入，無(wú)水甲醇超聲(300W，25°C )攪拌提取3次，每次2h，合并提取液回收溶劑得到浸膏。
[0039]②將上述浸膏按液固比mL/g 2/1用石油醚脫脂5次。然后按液固比mL/g 7/1用I %的磷酸溶液浸泡反應(yīng)lh，過(guò)濾，這們重復(fù)6次。
[0040]③將上述固體按液固比mL/g 5/1浸泡入I %的氫氧化鉀溶液，反應(yīng)5h，過(guò)濾，取堿液加硝酸調(diào)節(jié)溶液PH至7，并攪拌，過(guò)濾，留用固體。
[0041]④將所述的固體按液固比mL/g 10/1用氯仿溶解，過(guò)濾，回收氯仿，得到固體按液固比mL/g 5/1用甲醇洗滌，重復(fù)洗滌2次。
[0042]⑤將上述洗滌后的固體干燥，用氯仿溶解結(jié)晶，然后用二氯甲烷溶劑重結(jié)晶，即可到較高純度吳茱萸內(nèi)酯(檸檬苦素)晶體，純度為90%。
[0043]實(shí)施例5:
[0044]①取柚子籽的干燥粉末適量，按液固比mL/g 50/1加入乙醇水溶液(95% )，超聲(400W，30°C )攪拌提取I次，提取lh，合并提取液回收溶劑得到浸膏。
[0045]②將上述浸膏按液固比mL/g5/l用石油醚脫脂5次。然后按液固比mL/g 50/1用10%的鹽酸溶液浸泡反應(yīng)10h，過(guò)濾，這樣重復(fù)5次。
[0046]③將上述固體按液固比mL/g 20/