豬繁殖與呼吸綜合征病毒組合物及其用圖
【專利說明】
[0001] 相關(guān)申請的交叉引用
[0002] 本申請要求于2012年12月7日提交的美國申請編號61/734, 919的優(yōu)先權(quán)，所述 專利申請以引用的方式全文納入本文。
[0003] 序列表
[0004] 此申請包括作為ASCII格式的電子*.txt文件提交的序列表，所述序列表以引用 的方式全文納入本文。
技術(shù)領(lǐng)域
[0005] 本申請涉及包含豬繁殖與呼吸綜合征病毒（PRRSV)的組合物，以及所述組合物的 用途，包括作為疫苗。
【背景技術(shù)】
[0006] 豬繁殖與呼吸綜合征（PRRS)的特征在于，母豬的嚴重繁殖障礙和高比例的晚期 流產(chǎn)和早產(chǎn)，以及幼豬的呼吸疾病和死亡。PRRS是由具有單鏈正義RNA基因組的小的包膜 病毒導致，所述病毒屬于動脈病毒科（Arteriviridae)動脈病毒屬（Arterivirus)。在天然 條件下，PRRS病毒在肺泡巨噬細胞中復制并且能夠維持長時間的病毒血癥，在一些情況下 導致持續(xù)數(shù)月的持續(xù)性感染。所述疾病于20世紀80年代晚期在美國和歐洲突然出現(xiàn)，隨 后已經(jīng)在全世界傳播，給豬飼養(yǎng)業(yè)帶來重大經(jīng)濟損失。所述病毒能夠在被感染的農(nóng)場中持 續(xù)存在，這主要是由于其存在于被持續(xù)感染的攜帶者母豬中。
[0007] 根據(jù)PRRS病毒所來源的大陸將其分成兩種基因型。來源于北美的PRRS病毒毒株 被分類為2型基因型，而來源于歐洲的PRRS病毒毒株被指定為1型基因型。目前兩種基因 型都在全球傳播。所述兩種基因型在基因組水平上彼此相差約40%，并且在血清學上也是 不同的。每種基因型內(nèi)的分離株也表現(xiàn)出最高達20%的相當大的核苷酸序列異質(zhì)性。PRRS 病毒似乎是通過隨機突變和基因內(nèi)重組事件而進化的。
[0008] 根據(jù)對西班牙毒株的序列分析，已估計PRRS病毒表現(xiàn)出的突變率為在每個位點 每年1-3X102次置換，這與其他快速進化的RNA病毒的突變率類似。在過去的25年中已 觀察到的PRRS病毒的巨大遺傳變異，以及產(chǎn)生與較早分離株相比更高發(fā)病率和死亡率的 PRRS病毒分離株在本領(lǐng)域中的出現(xiàn)是值得注意的。此外，正逐漸認識到每種PRRS病毒原液 (stock)通常作為遺傳相關(guān)物種的混合物存在的事實。
[0009] 在獸醫(yī)學中用于保護動物免患病毒疾病的常見類型的生物制品是由經(jīng)修飾的活 病毒（MLV)疫苗組成。用于產(chǎn)生減毒活病毒疫苗的最常用的方法是在基質(zhì)（通常是細胞培 養(yǎng)物）而非天然宿主中和/或不利條件下連續(xù)傳代致病病毒，直至所述病毒從其初始的毒 力（產(chǎn)生疾病的能力）充分減毒但仍保持誘導保護性免疫的能力。1996年，第一種MLV疫 苗被引入北美市場，所述疫苗是基于在1991年分離的PRRS病毒毒株VR-2332。通過使所述 病毒在35-37Γ下在猿猴腎細胞（MA-104/MARC-145)中進行25次連續(xù)傳代，然后在31°C下 在相同的細胞型中進行12次額外傳代（共36次傳代），獲得所述減毒疫苗株。
[0010] 隨后，由于觀察到最初的PRRSMLV疫苗保護效力下降（推測是由于流行的PRRS 病毒分離株的基因組中進化的遺傳改變，這導致出現(xiàn)毒力更強且遺傳上不同的（異源的）PRRS病毒毒株），因此在1999年引入第二個版本的MLV疫苗。這次行動的原理是增大疫苗 株的遺傳同源性使其超過20世紀90年代后期本領(lǐng)域中傳播的同期病毒的遺傳同源性。該 減毒疫苗株來源自在1997年從PRRS的嚴重病例中分離得到的JA-142PRRS病毒，并且代 表該分離株在37°C下在猴腎細胞系MARC-145中的200次連續(xù)傳代。已記載了這些疫苗的 兩種祖先分離株（progenitor)VR-2332和JA-142分別表現(xiàn)出中等水平和高水平的毒力，因 此這解釋了為了產(chǎn)生減毒的疫苗病毒，需要在細胞培養(yǎng)物中在不利條件下進行中等次數(shù)的 傳代（VR-2332)或在更溫和的環(huán)境中進行更多次的連續(xù)傳代（JA-142)。值得注意的是，將 這些減毒的PRRS病毒毒株接種到豬中導致持續(xù)4周以上的病毒血癥。在此期間，所述病毒 從身體分泌物中排出，導致所述疫苗病毒傳播到未接種的動物。因此，這些疫苗的使用導致 其從減毒表型倒退為毒力表型。
[0011]用野生型PRRS病毒感染豬或者用該病原體的活的減毒形式進行疫苗接種引發(fā)產(chǎn) 生病毒特異性但是非中和的抗體，以及產(chǎn)生少量中和抗體。此外，在此期間，產(chǎn)生有限數(shù)量 的干擾素（IFN)γ分泌細胞（SC)。病毒中和抗體和病毒特異性IFNySC的產(chǎn)生被認為是引 發(fā)針對PRRS病毒的保護性免疫的主要決定因素。被廣泛接受的是，PRRS病毒天然會刺激不 平衡（即強體液應答，其特征在于產(chǎn)生豐富的非中和抗體和有限但具有潛在保護性的T細 胞介導的基于IFNy的細胞免疫）和非保護性免疫應答。之前已提出，決定產(chǎn)生通常觀察 到的針對疫苗接種或感染的非保護性的適應性免疫應答的最相關(guān)的參數(shù)是缺少由PRRS病 毒所引發(fā)的充分的先天免疫應答。被病毒感染的細胞通常分泌I型IFN(IFNa和IFN0)， 所述I型IFN在鄰近的細胞中引起分子改變以幫助這些細胞保護自身免受病毒感染。值得 注意的是，豬對PRRS病毒感染的IFNa應答幾乎不存在。
[0012] 已經(jīng)假設(shè)，不存在針對PRRS病毒的感染或疫苗接種的充分的先天免疫應答，可以 至少部分導致特異性病毒中和抗體的延遲產(chǎn)生以及豬針對這種病毒的細胞介導的免疫應 答的延遲出現(xiàn)。因此，PRRS病毒可通過在感染其宿主后不引發(fā)充分的IFNa產(chǎn)生而避開 Th-Ι型應答的發(fā)生。就這點而言，已知漿細胞樣樹狀突細胞（pDC)在誘導早期抗病毒狀態(tài) 中發(fā)揮重要作用，這是由于除了其他細胞因子（例如，對適應性免疫的發(fā)生具有重要影響 的腫瘤壞死因子（TNF)a和白細胞介素6(IL_6))以外，pDC還迅速并大量分泌IFNa。盡 管PDC僅占豬外周血單核細胞（PBMC)群的一小部分（〈1%)，它們卻產(chǎn)生了新鮮分離的豬 PBMC樣品中所分泌的IFNa中的大多數(shù)。值得注意的是，與刺激pDC分泌大量IFNa的其 他豬病毒不同，PRRS病毒引發(fā)這種細胞亞群的少量IFNa應答，甚至通過主動抑制被刺激 的pDC分泌IFNa和TNFa的能力而對其功能產(chǎn)生不利影響?？珊侠淼仡A料到，這種阻礙 對宿主隨后的適應性免疫應答的性質(zhì)具有顯著影響。通過在用PRRSMLV疫苗進行免疫時 提供外源性IFNa源而對PRRS病毒特異性的T細胞介導的IFNy應答的強度產(chǎn)生的增強 作用，提供了對該假說的支持。
[0013] 在本領(lǐng)域中，一直需要有效且經(jīng)濟的疫苗，以保護豬免受PRRS感染的影響，從而 使損失最小。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0014] 在本發(fā)明的一個實施方案中，本文提供了一種分離的豬繁殖與呼吸綜合征（PRRS) 病毒。所述病毒的基因組可編碼選自如下的蛋白：在相對于SEQIDN0:25的第31位上包 含纈氨酸的E蛋白、在相對于SEQIDN0:25的第60位上包含丙氨酸的E蛋白，或在相對于 SEQIDN0:21的第94位上包含纈氨酸的GP3蛋白。所述病毒的基因組還可編碼在相對于 SEQIDN0:25的第31位上包含纈氨酸的E蛋白、在相對于SEQIDN0:25的第60位上包含 丙氨酸的E蛋白，和在相對于SEQIDN0:21的第94位上包含纈氨酸的GP3蛋白。所述病 毒的基因組可包含SEQIDNO: 1的序列或其RNA等價序列。
[0015] 作為一個實施方案，本文還提供了一種包含所述病毒和可藥用載體的疫苗。所述 疫苗還可包含免疫佐劑。
[0016] 作為一個實施方案，本文還提供了在哺乳動物中誘導特異性針對PRRS病毒的免 疫應答的方法，所述方法可包括將所述疫苗給予有此需要的哺乳動物。所述疫苗還可包含 免疫佐劑。
[0017] 在一個實施方案中，所述免疫佐劑可以是干擾素α (IFN-α)、干擾素 β (IFN-β)、白細胞介素-12、白細胞介素-15和白細胞介素-18 ;編碼干擾素α的核酸；編 碼白細胞介素-12的核酸、編碼白細胞介素-15的核酸；編碼白細胞介素-18的核酸；編碼 干擾素β的核酸；誘導或增強干擾素α的活性的物質(zhì)；誘導或增強干擾素β的活性的物 質(zhì)；多聚1C或多聚ICLC。可在給予所述疫苗的同時、在給予所述疫苗之后24小時內(nèi)或在 給予所述疫苗之前24小時內(nèi)給予所述免疫佐劑。所述給藥可以是肌肉內(nèi)、真皮內(nèi)、粘膜、口 月艮、舌下、眼內(nèi)、鼻內(nèi)、靜脈內(nèi)、腹膜內(nèi)、局部或經(jīng)皮膚給藥。所述給藥可以是肌肉內(nèi)給藥。
[0018] 本文還提供了分離的豬繁殖與呼吸綜合征（PRRS)病毒，其被保藏在美國典型 菌種保藏中心（theAmericanTypecultureCollection)，被指定為ATCC專利保藏號 PTA-120658。
[0019] 在一個實施方案中，本發(fā)明提供了豬繁殖與呼吸綜合征病毒（PRRSV)的分離的毒 株，其中所述毒株是G16X、111698或794A61。在一個實施方案中，所述毒株是G16X。在一 個實施方案中，所述毒株具有SEQIDN0:1中所示的基因組RNA序列（毒株G16X)。在一 個實施方案中，本發(fā)明提供了豬繁殖與呼吸綜合征病毒（PRRSV)的分離的毒株，其中所述 毒株具有SEQIDN0:1(毒株G16X)或SEQIDN0:3(毒株111698)中所示的基因組RNA序 列。在一個實施方案中，本發(fā)明提供了PRRSV的分離的毒株，所述毒株具有由SEQIDN0:12 和SEQIDNO: 14中所示的序列表征的蛋白E序列；由SEQIDNO: 16和SEQIDNO: 17表征 的GP3序列；由SEQIDN0:7表征的Nsp2序列；和/或由SEQIDNO: 19表征的GP4序列。
[0020] 在一個實施方案6中，本發(fā)明提供了PRRSV的分離的毒株，其中所述毒株具有與 SEQIDN0:1(G16X)具有至少95%同一性的核酸序列，并且所述毒株相對于PRRS病毒毒株 89-46448-40的蛋白序列具有一個或多個所編碼的氨基酸置換，所述氨基酸置換選自：蛋 白Nsp2V/M67V;蛋白Nsp2P/S490P、Nsp2P495L;Nsp2Y338H;蛋白EI31V;蛋白ET60A; 蛋白GP3I94V;和蛋白GP3P/S96S。在一個實施方案中，所述毒株具有一個或多個如以 下所示的所編碼的氨基酸：蛋白Nsp2 67V;蛋白Nsp2 490P;蛋白Nsp2Y338H;蛋白Nsp2 P495L;蛋白E31V;蛋白E60A;蛋白GP3 94V;蛋白GP3L213F;蛋白GP3 96S和蛋白GP4 A32S。在其他實施方案中，所述毒株具有如本文別處所描述的同一"性水平百分數(shù)。在一個 實施方案中，有利的是，當PRRSV的疫苗株被給予豬時，其具有由例如巨噬細胞產(chǎn)生的高的 干擾素α應答的表型。在一個實施方案7中，本發(fā)明提供了一種免疫原性組合物，其包含 至少一種分離的PRRSV毒株以及還包含可用于獸醫(yī)用途的藥物載體，所述分離的PRRSV毒 株選自G16X、111698和實施方案6的毒株。
[0021] 在一個實施方案中，本發(fā)明提供了在動物中誘導特異性針對豬繁殖與呼吸綜合征 病毒（PRRSV)的免疫應答的方法，所述方法包括給予動物本文所描述的免疫原性組合物的 步驟。在一個實施方案中，所述免疫原性組合物還包括免疫佐劑。
[0022] 在一個實施方案中，免疫原性組合物還包括免疫佐劑。在一個實施方案中，所述 免疫佐劑包括以下物質(zhì)中的至少一種：干擾素α、干擾素β、白細胞介素-12、白細胞介 素-15、白細胞介素-18、在豬細胞中表達的編碼干擾素α的核酸、在豬細胞中表達的編碼 白細胞介素-12的核酸、在豬細胞中表達的編碼白細胞介素-15的核酸、在豬細胞中表達的 編碼白細胞介素-18的核酸、在豬細胞中表達的編碼干擾素β的核酸、誘導或增強干擾素 β或干擾素α或二者的活性的物質(zhì)，以及多聚1C或多聚ICLC。在一個實施方案中，在給 予所述免疫原性組合物的同時、在給予所述免疫原性組合物之后24小時內(nèi)或在給予所述 免疫原性組合物之前24小時內(nèi)給予所述免疫佐劑。
[0023] 在一個實施方案中，免疫原性組合物的給藥是肌肉內(nèi)、真皮內(nèi)、粘膜、口服、舌下、 眼內(nèi)、鼻內(nèi)、靜脈內(nèi)、腹膜內(nèi)、局部或經(jīng)皮膚給藥。在一個實施方案中，給藥是肌肉內(nèi)給藥。
【附圖說明】
[0024] 圖1說明在用PRRS病毒分離株89-46448-40、NADC-20或模擬接種物（mock inoculum)感染后第7天和第14天，豬的體重改變（％)。根據(jù)激發(fā)時的體重來確定體重增 加百分數(shù)。計算各組的平均值（土SEM)。
[0025] 圖2表示在用PRRS病毒分離株89-46448-40或NADC-20或模擬接種物感染豬之后 的血清病毒血癥。在ZMAC細胞（ATCCNo.PTA-8764,野豬（Susscrofa)(豬（pig/swine)) 肺組織細胞）中測定豬血清樣品中傳染性病毒的數(shù)量（TCID5(]/ml)。
[0026] 圖3說明用PRRS病毒分離株89-46448-40或NADC-20或模擬接種物感染14天的 豬的肺部總病理學得分。根據(jù)本領(lǐng)域已知的評分系統(tǒng)來確定總肺病理學得分。
[0027]圖 4A-4D提供了PRRS病毒分離株 89-46448-40 和衍生毒株 794A61、111698 和G16X 之間非結(jié)構(gòu)蛋白2(Nsp2,圖4A)、蛋白E(圖4B)以及糖蛋白GP3(圖4C)和GP4(圖4D)的 一級結(jié)構(gòu)中預測的氨基酸差異。粗體字母示出了PRRSV89-46448-40、794A61、111698和 G16X的完整蛋白E和GP3以及Nsp2和GP4的連續(xù)部分（以〈和〉指示）的預測的氨基酸 序列中有區(qū)別的氨基酸位點。加框的字母對示出了PRRS病毒89-46448-40的一些蛋白中 的多態(tài)位點。
[0028] 圖5示出了豬肺泡巨噬細胞針對不同類型的PRRS病毒感染的干擾素α應答。以 標示的感染復數(shù)（Μ0Ι)用PRRS病毒感染ZMAC細胞。通過特異性針對豬干擾素α的ELISA 測定在所述細胞暴露于所標示的病毒后8h時收集的培養(yǎng)物上清液中干擾素α的量。
[0029] 圖6示出了不同的PRRS病毒毒株對于肺泡巨噬細胞對多聚（I:C)的干擾素α應 答的影響。模擬感染或用標示的病毒（Μ0Ι= 5)感染ZMAC細胞。在孵育2h之后，將細胞 培養(yǎng)物暴露于25mg/ml多聚（I:C)。8h后收集細胞培養(yǎng)基，并通過特異性針對豬干擾素α 的ELISA檢測干擾素α的存在。
[0030] 圖7提供了在用有毒力的PRRS病毒激發(fā)后第7天時未接種PRRS病毒（PRRS virusnaive)和接種PRRS病毒的豬的體重改變（％)。根據(jù)激發(fā)時體重來確定體重增加 百分數(shù)。計算每組的平均值（土SEM)。
[0031] 圖8說明用有毒力的PRRS病毒激發(fā)之后在未接種PRRS病毒和接種PRRS病毒的 豬中的病毒血癥的程度和頻率。通過實時定量PCR來測定在用有毒力的PRRS病毒激發(fā)之 后第7天從豬采集的血清樣品中PRRS病毒基因組的拷貝數(shù)。
[0032] 圖9不出了用有毒力的PRRS病毒激發(fā)之后在未接種PRRS病毒和接種PRRS病毒 的豬中的BAL液中的病毒載量。在ZMAC細胞中滴定在用有毒力的PRRS病毒激發(fā)后第14 天采集的豬BAL液樣品中的傳染性病毒的量（TCIDM/ml)。
[0033]圖 10A示出了PRRS病毒毒株G16X(SEQIDN0:26)、89-46448-40、794A61 和 111698(后三者為SEQIDN0:25)的蛋白E氨基酸序列的比對。圖10B示出了來自G16X的 蛋白E的氨基酸序列（SEQIDN0:26)，圖10C示出了來自毒株89-46448-40的蛋白E的氨 基酸序列（SEQIDN0:25)。
[0034]圖 11A示出了PRRS病毒毒株G16X(SEQIDN0:23)、89-46448-40(SEQIDN0:23)、 794A61(SEQIDNO:23)和 111698(SEQIDNO:24)的GP4 氨基酸序列的比對。圖 1IB示出 了來自毒株89-46448-40的GP4的氨基酸序列（SEQIDNO: 23)。圖11C示出了與PRRSV分 離株89-46448-40相關(guān)的GP4的氨基酸序列（SEQIDN0. 24)。
[0035]圖 12A示出了PRRS病毒毒株G16X(SEQIDN0:22)、89-46448-40(SEQIDN0:21)、 794A61(SEQIDN0:22)和 111698(SEQIDN0:48)的GP3 氨基酸序列的比對。圖 12B表示 來自毒株89-46448-40的GP3的氨基酸序列（SEQIDN0:21)。圖12C表示與PRRSV分離株 G16X相關(guān)的GP3的氨基酸序列（SEQIDN0. 22)。
[0036] 圖13示出了用IngelvacPRRSMLV或G16X接種后豬的血清干擾素α的水平。如 在"材料和方法"中所述用IngelvacPRRSMLV或G16X接種兩組豬（η= 6)。在接種后所 標示的時間點采集血清樣品并通過ELISA測定血清干擾素α的水平。數(shù)據(jù)代表在每個處 理組中每個時間點檢測的6個樣品的平均值土SE。模擬接種動物在每個測試的時間點具有 <2pg/ml血清（數(shù)據(jù)未示出）。
[0037] 圖14示出了暴露于有毒力的PRRS病毒之后豬的體重（BW)改變。在用野生型 PRRSV分離株LTX1激發(fā)之前不久以及激發(fā)后第7、10和14天對模擬接種、接種Ingelvac PRRSMLV或接種G16X病毒的豬（每組η= 6)進行稱重。還在所述4個時間點對未被激 發(fā)且未接種的動物（嚴格對照，η= 6)進行稱重。在個體基礎(chǔ)上測定激發(fā)后接下來的第7、 10和14天期間的BW改變，并計算相對于激發(fā)時BW的體重改變百分數(shù)（％)。結(jié)果代表每 組的平均體重改變百分數(shù))+/_SDEV。除了G16X組，所有組都是由每組6只動物組成。 G16X組有6只動物，直到第10天該組減少到5只動物。該組中的一只動物被排除，因為它 患了腸扭轉(zhuǎn)，需要在病毒激發(fā)后第10天對該動物施行安樂死。
[0038] 圖15不出了暴露于有毒力的PRRS病毒后豬的病毒血癥的程度和頻率。在用野生 型PRRS病毒LTX1激發(fā)之前不久和激發(fā)后的標示天數(shù)從模擬接種、接種IngelvacPRRSMLV 或接種G16X病毒的動物采集血清樣品。還在這些時間點采集未激發(fā)且未接種的動物（嚴 格對照）（η= 6)的樣品。通過在ZMAC細胞中進行傳染性病毒滴定來測定血清中的病毒載 量。提供各個豬的結(jié)果，然后計算每組成員的平均值（水平紅色柱）。在激發(fā)后第10天將 G16X組的一只豬從試驗中排除（參見圖14的圖注）。
[0039] 圖16不出了暴露于有毒力的PRRS病毒后豬的BAL液中的病毒載量。在用野生型 PRRS病毒LTX1激發(fā)后第14天從模擬接種、接種IngelvacPRRSMLV或接種G16X病毒的動 物的肺采集BAL液。還在此時間點從未激發(fā)且未接種動物（嚴格對照）（η= 6)獲得樣品。 通過在ZMAC細胞中進行傳染性病毒滴定來測定每只動物的BAL液中的病毒載量。提供各 個豬的結(jié)果，然后僅使用病毒陽性樣品計算每組成員的平均值（水平柱）。
【具體實施方式】
[0040] 豬繁殖與呼吸綜合征病毒在20世紀80年代后期首先出現(xiàn)在美國。過去幾年中美 國豬種群中PRRS患病率的顯著增加最好地說明了需要新工具來控制PRRS的令人信服的證 據(jù)。動植物衛(wèi)生檢驗局（APHIS)所進行的血清學調(diào)查表明，在2000年觀察到的養(yǎng)殖者/加 工者（grower/finisher)美國豬群中PRRS的最初患病率為35%，到2006年增加到53%。 從那時起，所述患病率持續(xù)升高，到2009年所述患病率令人擔憂地高達71 %，這代表在9年 中患病率>200%的增加?，F(xiàn)在，美國70%以上的豬群被北美型（基因型2)PRRS病毒感染， 導致每年的經(jīng)濟損失超過6. 64億美元，使PRRS成為豬養(yǎng)殖業(yè)帶來損失最高的疾病。
[0041] 作為豬養(yǎng)殖業(yè)的主要經(jīng)濟問題，美國國家豬肉委員會（NPB)將在豬的商業(yè)種群中 控制和根除PRRS病毒視為最優(yōu)先的事。但是，疾病控制被證明難以在很大程度上實現(xiàn)，因 為該病毒的RNA基因組表現(xiàn)出很高的突變速率，這導致顯著且持續(xù)的遺傳/抗原病毒的多 樣化。這可通過以下事實得到清楚的說明：存在這樣的9種明確定義的2型（或北美樣） PRRS病毒譜系，在其之間表現(xiàn)出較大的系統(tǒng)發(fā)生差異。從25年前這一主要的豬病原體首 次出現(xiàn)起，所述9種不同的北美樣PRRS病毒譜系就已經(jīng)出現(xiàn)，并且包含了目前世界上存在 的PRRSV病毒的大的遺傳差異。這些譜系在遺傳上是不同的，這可通過至少11%的譜系內(nèi) 多樣性來證實。大多數(shù)（>95%)在美國已分離的PRRS病毒屬于這些譜系中的四個，即譜系 1、5、8 和 9。
[0042] 通常認為，PRRSMLV疫苗針對因有毒力的PRRS病毒感染而導致的疾病的保護性 效力水平主要取決于所述兩種病毒的遺傳相似性（同源性）。因此，基于本領(lǐng)域中表現(xiàn)出的 集體智慧，同時期的PRRS病毒毒株之間的遺傳多樣性中的時間依賴性的增加，應當會使具 有過時基因型的減毒PRRS病毒疫苗不能在豬中賦予針對最近進化的PRRS病毒的充分有效 的保護性免疫。因此，應當注意到，