II-2)。
[0091] 采用N，N-二甲基甲酰胺做溶劑，利用烏式粘度計在30°C恒溫水浴中測定PHEMA 的粘度，通過Mark-Houwink方程= 計算得到PHEMA的粘均分子量（α = 〇. 78, K = 7· 9Χ 10 2cm3/g)為 15023。x+y = (15023-184)/130 = 114。
[0092] 4 NMR(DMS0-d6, δ，ppm) :4. 812 (OH)，3· 905 (C00CH2)，3· 595 (CH20H)，1· 783 (CH2CC H3)，0· 776 (CH2CCH3)。
[0093] (2)疏水性聚酯內(nèi)核（III-2)的制備：
[0094] 在氮氣氛保護下，將制得的lmmol PHEMA(II-2)加入到無水二甲基亞砜中使溶解， 攪拌均勻后加入ε -己內(nèi)酯和催化劑辛酸亞錫密封后，反復進行抽真空，通氮氣操作4次 后，在120°C聚合反應24小時，冷卻到室溫，用三氯甲烷溶解得到粗產(chǎn)物，粗產(chǎn)物經(jīng)冰甲醇 沉析、分離，沉淀物真空干燥后得到白色的PHEMA-PCL(III-2)。
[0095] ε -己內(nèi)酯與PHEMA的摩爾比為38:1，為38mmol ;所述辛酸亞錫與ε -己內(nèi)酯的 摩爾比為 1:1000,為 〇· 〇38mmol。
[0096] NMR (CDCl3-d, δ , ppm) :4.079 (CO (CH2) (CH2) 3 (CH2) 0C0) ,3.668 (CO (CH2) (CH2) 3 (CH2) OH), 2. 327 (CO (CH2) (CH2) 3 (CH2) 0C0), 1. 400, 1. 664 (CO (CH2) (CH2) 3 (CH2) 0C0), x+y =95。
[0097] 通過聚ε -己內(nèi)酯上的亞甲基（C0(CH2) (CH2)3(CH2)0C0)的特征吸收峰面積和末 端ε-己內(nèi)酯上的亞甲基（C0(CH2)(CH2)3(CH2)0H)的特征吸收峰面積比得到主鏈上連接 ε -己內(nèi)酯的重復單元數(shù)為32,即η = 32。
[0098] (3)羧基端疏水性聚酯內(nèi)核（IV-2)的制備：
[0099] 在氮氣氛保護下，將 lmmol PHEMA-PCL(III-2)，250mmol 丁二酸酐，250mmol 催化 劑4-二甲氨基吡啶和200mmol縛酸劑三乙胺加入到無水吡啶中使溶解，在室溫攪拌反應 35小時，在冰甲醇中沉析得到粗產(chǎn)物，真空干燥，干燥物用二甲基亞砜溶解，用截留分子量 為14000的透析管在蒸餾水中透析60h，冷凍干燥，得到白色的PHEMA-PCL-C00H(IV-2)。4 NMR (CDCl3-d，δ，ppm) : 4. 079 (CO (CH2) (CH2) 3 (CH2) 0C0)，2. 670 (C0CH2CH2C0)，2. 327 (CO (CH2) (CH2) 3 (CH2) 0C0)，1. 402, 1. 663 (CO (CH2) (CH2) 3 (CH2) 0C0);
[0100] x+y = 114, n = 32。
[0101] (4)帶兩種親水段修飾的梳型聚合物（V-2)的制備：
[0102] 在氮氣氛保護下，將 lmmol PHEMA-PCL-C00H(IV-2), 200mmol 1-(3-二甲氨基丙 基）-3_乙基碳二亞胺，135mmol N-羥基丁二酰亞胺，65mmol 4-二甲氨基批陡，60mmol分 子量為3500的聚乙二醇單甲醚和113mmol分子量為1800的支鏈的聚乙烯亞胺加入到5mL 二甲基亞砜和lmL三氯甲烷的混合溶劑中使溶解，在室溫攪拌反應18h，用截留分子量為 14000的透析管在蒸餾水中透析60h，冷凍干燥，得到白色的PHEMA-PCL-PEI-PEG(V-2)。4 NMR(CDCl3-d，δ，ppm) :4· 081 (C0(CH2) (CH2)3(CH2)0⑶），3. 681 (0CH2CH2)，3. 401 (CH30)，3. 1 56-2. 408 (NHCH2CH2NH)，2. 327 (CO (CH2) (CH2) 3 (CH2) 0⑶），1. 665, 1. 403 (CO (CH2) (CH2) 3 (CH2) 〇H)；
[0103] 通過聚乙二醇單甲醚上的亞甲基（0CH2CH2)的特征吸收峰面積和聚乙烯亞胺上的 亞甲基（NHCH2CH2NH)的特征吸收峰面積比得到x:y = 3:1。
[0104] 其中 x+y = 114, η = 32, m = 80, 43ml+86m2 = 1740。
[0105] 實驗證明，用二氯甲烷替代本步驟中的三氯甲烷，其它同本步驟，可以完成本步 驟。
[0106] (5)在氮氣氛保護下，將 10mg PHEMA-PCL-PEI-PEG(V-2)和 2mg 分子量為 2000 的0PSS-PEG-NHS用3mL pH = 7. 4的0. lmol/L磷酸緩沖溶液和3mL二甲基亞砜的混合 溶劑溶解，在暗室中于室溫下反應3h，加入0. 34mg CREDVW多肽，室溫下反應6h，產(chǎn)物 用截留分子量為14000的透析管在蒸餾水中透析60h，冷凍干燥，得到白色的用REDV多 肽修飾的雙親梳形基因載體PHEMA-PCL-PEI-PEG-REDV (I-2)。在激發(fā)波長為290nm時， PHEMA-PCL-PEI-PEG-REDV在360nm處有明顯的熒光發(fā)射峰。
[0107] 反應路線同實施例 1，其中：x+y = 114, x:y = 3:1，η = 32, m = 80, 43ml+86m2 = 1740。
[0108] 經(jīng)測定：CREDVW多肽的質量占式（1-2)總質量的1%。
[0109] 實施例3:用REDV多肽修飾的雙親梳形基因載體的制備方法，包括如下步驟：
[0110] (1)帶苯環(huán)基的聚甲基丙烯酸羥乙酯梳型大分子引發(fā)劑（Π -3)的制備：
[0111] 在氮氣氛保護下，將聚合管高溫烘烤除水，自然冷卻后在鼓吹氮氣流的同時，依次 加入20mmol甲基丙烯酸輕乙酯反應單體，0. lmmol溴化亞銅和0. 2mmol 2, 2' -聯(lián)批陡催 化劑以及〇. lmmol 1-溴乙基苯引發(fā)劑到無水丁酮溶劑中使溶解，密封后在液氮冷卻下， 反復進行抽真空，通氮氣操作4次，在70°C反應16小時得混合液，混合液用二氯甲烷稀 釋后過中性氧化鋁柱除去未反應的溴化亞銅，然后用冰乙醚沉淀后真空干燥得白色產(chǎn)物 PHEMA(II-3) 〇
[0112] 采用N，N_二甲基甲酰胺做溶劑，利用烏式粘度計在30°C恒溫水浴中測定PHEMA的 粘度，通過Mark-Houwink方程= 計算得到PHEMA的粘均分子量（α = 〇. 78, K = 7. 9 X 10 2cm3/g)為 15023。x+y = (1484-184)/130 = 10。
[0113] 4 NMR(DMS0-d6, δ，ppm) :4. 810(0H), 3. 905(C00CH2)，3. 596(CH20H)，1. 783(CH2CC H3)，0· 778 (CH2CCH3)。
[0114] (2)疏水性聚酯內(nèi)核（III-3)的制備：
[0115] 在氮氣氛保護下，將制得的lmmol PHEMA(II-3)加入到無水二甲基亞砜溶劑中使 溶解，攪拌均勻后加入ε -己內(nèi)酯和催化劑辛酸亞錫密封后，反復進行抽真空，通氮氣操作 5次后，在140°C聚合反應20小時，冷卻到室溫，用三氯甲烷溶解得到粗產(chǎn)物，粗產(chǎn)物經(jīng)冰乙 醚沉析、分離，沉淀物真空干燥后得到白色的PHEMA-PCL(III-3)。
[0116] ε -己內(nèi)酯與PHEMA的摩爾比為45:1,為45mmol ;所述辛酸亞錫與ε -己內(nèi)酯的 摩爾比為 1:1200,為 0· 038 μ mol。
[0117] NMR (CDCl3-d, δ , ppm) : 4. 080 (CO (CH2) (CH2) 3 (CH2) 0C0) ,3.668 (CO (CH2) (CH2) 3 (CH2) OH), 2. 327 (CO (CH2) (CH2) 3 (CH2) 0C0), 1. 400, 1. 664 (CO (CH2) (CH2) 3 (CH2) OH), x+y =10〇
[0118] 通過通過聚ε -己內(nèi)酯上的亞甲基（C0(CH2) (CH2)3(CH2)0C0)的特征吸收峰面積和 末端ε-己內(nèi)酯上的亞甲基（C0(CH2)(CH2)3(CH2)0H)的特征吸收峰面積比得到主鏈上連接 ε -己內(nèi)酯的重復單元數(shù)為40,即η = 40。
[0119] (3)羧基端疏水性聚酯內(nèi)核（IV-3)的制備：
[0120] 在氮氣氛保護下，將 lmmol PHEMA-PCL(III-3)，50mmol 丁二酸酐，50mmol 催化劑 4-二甲氨基吡啶和17mmol縛酸劑三乙胺加入到無水二氧六環(huán)中使溶解，在室溫攪拌反應 20小時，在冰乙醚中沉析得到粗產(chǎn)物，真空干燥，干燥物用二甲基亞砜溶解，用截留分子量 為5000的透析管在蒸餾水中透析50h，冷凍干燥，得到白色的PHEMA-PCL-C00H(IV-3)。4 NMR(CDCl3-d，S，ppm):4.082(C0(CH2)(CH 2)3(CH2)0C0)，2.671(raCH2CH 2C0)，2.327(ra(CH2) (CH2) 3 (CH2) 0C0), 1. 402, 1. 664 (CO (CH2) (CH2) 3 (CH2) 0C0)；
[0121] x+y = 10, n = 40〇
[0122] (4)帶兩種親水段修飾的梳型聚合物（V-3)的制備：
[0123] 在氮氣氛保護下，將 lmmol PHEMA-PCL-C00H(IV-3)，30mmol 1-(3-二甲氨基丙 基）-3_乙基碳二亞胺，20mmol N-羥基丁二酰亞胺，lOmmol 4-二甲氨基批陡，lOmmol分 子量為5000的聚乙二醇單甲醚和17mmol分子量為1800的支鏈的聚乙烯亞胺加入到3mL 三氯甲烷和3mL二甲基亞砜的混合溶劑中使溶解，在室溫攪拌反應28h，用截留分子量為 5000的透析管在蒸餾水中透析50h，冷凍干燥，得到白色的PHEMA-PCL-PEI-PEG(V-3)。4 NMR (CDCl3-d，δ，ppm) : 4. 081 (CO (CH2) (CH2) 3 (CH2) 0⑶），3. 680 (0CH2CH2)，3. 401 (CH30)，3. 1 54-2. 400 (NHCH2CH2NH)，2. 327 (CO (CH2) (CH2) 3 (CH2) 0⑶），1. 6