一種葵花籽粕綠原酸的制備方法及其應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及綠原酸制備的技術(shù)領(lǐng)域。具體的說(shuō)，本發(fā)明涉及葵花籽柏綠原酸的制 備方法及應(yīng)用的技術(shù)領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002] 綠原酸又名咖啡單寧酸、咖啡鞣酸，是由一分子奎尼酸與一分子咖啡酸脫水縮合 而成的縮酸酸，分子式為C 16H18O9，恪點(diǎn)為208°C，相對(duì)分子質(zhì)量為354. 30,為白色或淡黃色 針晶，且在ll〇°C脫水轉(zhuǎn)變?yōu)闊o(wú)水化合物，比旋光度[a ]D = 35. 2、綠原酸在水中的溶解 度約為4%，溶解度與水溫呈正相關(guān)關(guān)系，易溶于甲醇、乙醇、丙酮等強(qiáng)極性有機(jī)溶劑，微溶 于乙酸乙酯，難溶于苯、氯仿、乙醚等弱極性有機(jī)溶劑，綠原酸類物質(zhì)是許多中藥材的主要 功效成分，也是多種成品藥質(zhì)量控制的重要指標(biāo)之一。
[0003] 葵花籽一般含綠原酸1. 1% -4. 5%。但葵花籽柏中的蛋白質(zhì)容易被綠原酸氧化， 降低葵花籽柏蛋白的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值。目前，葵花榨油廠一般把榨油后的餅柏作為飼料，這樣嚴(yán)重 浪費(fèi)了自然資源。如果首先從葵花籽柏中提取綠原酸，然后進(jìn)一步提取優(yōu)質(zhì)的蛋白質(zhì)，這樣 就可以大幅度地提高葵花籽柏的利用率，對(duì)葵花籽柏實(shí)現(xiàn)多次經(jīng)濟(jì)增值。
[0004] 經(jīng)檢索，目前有很多關(guān)于利用葵花籽柏做為飼料的應(yīng)用研究，而關(guān)于提取葵花籽 柏中綠原酸、利用超聲輔助離子提取法和NKA-2大孔樹(shù)脂-溶致結(jié)晶聯(lián)用技術(shù)提取葵花籽 柏中的綠原酸和純化葵花籽柏綠原酸的研究較少。因此，探索和研究提取率高、純度高、制 備的葵花籽柏綠原酸具有較強(qiáng)活性的制備方法具有重要的意義。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 針對(duì)目前未見(jiàn)利用超聲輔助離子提取法和NKA-2大孔樹(shù)脂-溶致結(jié)晶聯(lián)用技術(shù)提 取葵花籽柏中的綠原酸和純化葵花籽柏綠原酸的研究現(xiàn)狀，本發(fā)明旨在于提供一種葵花籽 柏綠原酸的制備方法及其應(yīng)用，目的在于利用超聲輔助離子提取法和NKA-2大孔樹(shù)脂-溶 致結(jié)晶聯(lián)用技術(shù)提取葵花籽柏中的綠原酸和純化葵花籽柏綠原酸。本發(fā)明制備的葵花籽柏 綠原酸為淡黃色，提取率為5. 72%，綠原酸純度為67. 56%，同時(shí)，本發(fā)明制備的葵花籽柏 綠原酸具有較強(qiáng)的總抗氧化活性、清除·OH自由基和DPPH ·自由基的能力；對(duì)大腸桿菌、金 黃色葡萄球菌、黑曲霉均有抑制作用；將本發(fā)明制備的葵花籽柏綠原酸添加到面包中，可以 使面包的貯藏期延長(zhǎng)33. 3%。
[0006] 本發(fā)明通過(guò)以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的。
[0007] 本發(fā)明以葵花籽柏為原料，采用超聲輔助離子提取法提取葵花籽柏綠原酸，利用 NKA-2大孔樹(shù)脂-溶致結(jié)晶聯(lián)用技術(shù)對(duì)提取獲得的葵花籽柏綠原酸進(jìn)行純化，其中，超聲輔 助離子液體提取法的條件為：功率220W，溫度41°C，[Bmim]BF4與水的體積比1 :4,料液比 為1:15,提取時(shí)間34min ;NKA-2大孔樹(shù)脂-溶致結(jié)晶聯(lián)用技術(shù)的工藝條件為上樣液濃度為 I. 06-1. 59mg/mL、上樣流速為2BV/h、上樣量為3BV，用3BV 60%乙醇以2BV/h進(jìn)行洗脫，結(jié) 晶時(shí)，葵花籽柏綠原酸的PH = 2. 0,萃取時(shí)間25min，萃取四次，真空冷凍干燥獲得葵花籽柏 綠原酸。同時(shí)，本發(fā)明制備的葵花籽柏綠原酸具有較強(qiáng)的總抗氧化活性、清除· OH自由基 和DPPH ·自由基的能力；對(duì)大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、黑曲霉均有抑制作用；將本發(fā)明制 備的葵花籽柏綠原酸添加到面包中，可以使面包的貯藏期延長(zhǎng)33. 3%。
[0008] 本發(fā)明具體提供一種葵花籽柏綠原酸的制備方法及其應(yīng)用，具體的制備方法步驟 如下：
[0009] (1)葵花籽柏的預(yù)處理：挑選無(wú)霉變的葵花籽柏，脫脂，脫脂試劑為石油醚，脫脂 溫度為40°C，時(shí)間為12h ;低溫烘干，粉碎，過(guò)100目篩。
[0010] (2)超聲處理：稱取步驟（1)制備的葵花籽柏于萃取容器中，按照料液比為1:15 的比例添加混合萃取溶劑，進(jìn)行超聲處理，其中超聲功率為220W、溫度41°C、時(shí)間34min。
[0011] 所述的混合萃取溶劑：按照[8!11加]8?4與水的體積比為1:4的比例混合，制備獲 得。
[0012] (3)離心：對(duì)步驟⑵制備的混合溶液進(jìn)行離心處理，其中離心時(shí)間為10分鐘，轉(zhuǎn) 速為8000r/min，取上清液，上清液在30°C的條件下進(jìn)行濃縮，濃縮液在_50°C的條件進(jìn)行 冷凍干燥。
[0013] (4)純化：將步驟（3)冷凍干燥后的綠原酸，制備為濃度為I. 06mg/mL-l. 59mg/mL 的綠原酸溶液，上NKA-2大孔樹(shù)脂柱，上樣量的流速為2BV/h，上樣量為3BV ;用3BV的60% 的乙醇以2BV/h的流速進(jìn)行洗脫，洗脫液濃縮，得到葵花籽柏濃縮液，冷凍干燥得到綠原酸 I 〇
[0014] (5)溶致結(jié)晶純化技術(shù)：步驟（4)制備的葵花籽柏濃縮液調(diào)節(jié)pH，使葵花籽柏濃縮 液的pH值為2. 0 ;以乙酸乙酯為萃取溶劑，按體積比1: 1，震動(dòng)萃取時(shí)間25min，萃取四次， 并在40°C下真空干燥2h，得到淡黃色葵花籽柏綠原酸。
[0015] 本發(fā)明采用超聲輔助離子液體提取法提取葵花籽柏中的綠原酸，相比傳統(tǒng)提取 法和超聲輔助提取法，本發(fā)明應(yīng)用的超聲輔助離子液體提取法的提取率明顯高于其它兩 種。本發(fā)明應(yīng)用的超聲輔助離子液體提取法的提取率為5. 72 %，傳統(tǒng)提取法的提取率為 4. 46%，超聲輔助提取法的提取率為4. 88% ;本發(fā)明采用的超聲輔助離子液體提取率比傳 統(tǒng)回流法、超聲輔助法分別高28. 25%、17. 21%。
[0016] 本發(fā)明采用大孔樹(shù)脂-溶致結(jié)晶聯(lián)用技術(shù)純化分離葵花籽柏綠原酸，其中利用 NKA-2大孔樹(shù)脂對(duì)提取的綠原酸進(jìn)行純化，并利用乙酸乙酯溶致結(jié)晶技術(shù)進(jìn)行進(jìn)一步的純 化，使得制備的葵花籽柏綠原酸的純度為67. 56%。
[0017] 對(duì)于采用現(xiàn)有公知常識(shí)作為現(xiàn)有技術(shù)基礎(chǔ)的問(wèn)題。事實(shí)上，除了開(kāi)創(chuàng)性的發(fā)明外， 任何一項(xiàng)發(fā)明創(chuàng)造都是離不開(kāi)現(xiàn)有技術(shù)手段和技術(shù)要素為基礎(chǔ)，都是采用現(xiàn)有技術(shù)手段基 礎(chǔ)上經(jīng)過(guò)進(jìn)一步創(chuàng)新的結(jié)果。對(duì)于超聲處理、粉碎、離心、純化等技術(shù)都是現(xiàn)有技術(shù)基礎(chǔ)， 但是應(yīng)用哪種試劑使得葵花籽柏中的綠原酸得到充分的提取，提取綠原酸的條件是什么， 如何應(yīng)用大孔樹(shù)脂-溶致結(jié)晶聯(lián)用技術(shù)純化葵花籽柏綠原酸，并獲得高純度的葵花籽柏綠 原酸以及如何保留葵花籽柏綠原酸的活性都需要通過(guò)科學(xué)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，都需要經(jīng)過(guò)系列不可 預(yù)見(jiàn)的科學(xué)試驗(yàn)反復(fù)驗(yàn)證。正是由于這些原因，本申請(qǐng)雖然利用了常規(guī)技術(shù)手段為基礎(chǔ)， 并在此基礎(chǔ)上經(jīng)過(guò)科學(xué)實(shí)驗(yàn)提供了葵花籽柏綠原酸的制備方法和應(yīng)用，采用超聲輔助離 子液體提取法使得葵花籽柏綠原酸的提取率為5. 72%，比傳統(tǒng)回流法、超聲輔助法分別高 28. 25%、17. 21% ;采用大孔樹(shù)脂-溶致結(jié)晶聯(lián)用技術(shù)純化分離葵花籽柏綠原酸，使得制備 的葵花籽柏綠原酸的純度為67. 56% ;葵花籽柏綠原酸的總抗氧化能力高于Ve，葵花籽柏綠 原酸清除羥基自由基、DPPH ·自由基能力比Vc分別高110. 34%、17. 75%;葵花籽柏綠原酸對(duì) 大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、黑曲霉的MIC、MBC的濃度分別為I. 2mg/mL、l. 5mg/mL、l. 2mg/ mL，I. 2mg/mL、l. 5mg/mL、l. 5mg/mL，表明本發(fā)明制備的葵花籽柏綠原酸具有較強(qiáng)的抑菌能 力；可見(jiàn)，本發(fā)明提供的葵花籽柏綠原酸的制備方法和應(yīng)用具有廣泛的應(yīng)用價(jià)值。
[0018] 通過(guò)實(shí)施本發(fā)明上述具體的
【發(fā)明內(nèi)容】
可以達(dá)到以下有益效果：
[0019] ⑴本發(fā)明采用超聲輔助離子液體提取法提取葵花籽柏中的綠原酸，相比傳統(tǒng)提 取法和超聲輔助提取法，本發(fā)明應(yīng)用的超聲輔助離子液體提取法的提取率明顯高于其它兩 種。本發(fā)明應(yīng)用的超聲輔助離子液體提取法的提取率為5. 72 %，傳統(tǒng)提取法的提取率為 4. 46%，超聲輔助提取法的提取率為4. 88% ;本發(fā)明采用的超聲輔助離子液體提取率比傳 統(tǒng)回流法、超聲輔助法分別高28. 25%、17. 21%。
[0020] (2)本發(fā)明采用大孔樹(shù)脂-溶致結(jié)晶聯(lián)用技術(shù)純化分離葵花籽柏綠原酸，其中利 用NKA-2大孔樹(shù)脂對(duì)提取的綠原酸進(jìn)行純化，并利用乙酸乙酯溶致結(jié)晶技術(shù)進(jìn)行進(jìn)一步的 純化，使得制備的葵花籽柏綠原酸的純度為67. 56%，本發(fā)明采用的NKA-2大孔樹(shù)脂-溶致 結(jié)晶聯(lián)用技術(shù)純化獲得的綠原酸純度比單一采用NKA-2大孔樹(shù)脂純化獲得的綠原酸純度 提尚了 192.09%。
[0021] (3)本發(fā)明制備的葵花籽柏綠原酸的總抗氧化能力高于Vc，葵花籽柏綠原酸的清 除羥基自由基、DPPH ·自由基能力比Vc分別高110. 34%、17. 75%，說(shuō)明本發(fā)明制備的葵花 籽柏綠原酸具有良好的抗氧化活性。
[0022] (4)本發(fā)明制備的葵花籽柏綠原酸對(duì)大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、黑曲霉均有一定 的抑制作用，葵花籽柏綠原酸對(duì)大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、黑曲霉的MIC、MBC的濃度分別 為 I. 2mg/mL、I. 5mg/mL、I. 2mg/mL，I. 2mg/mL、I. 5mg/mL、I. 5mg/mL。研究表明本發(fā)明制備的 葵花籽柏綠原酸具有較強(qiáng)的抑菌性。
[0023] (5)將本發(fā)明制備的葵花籽柏綠原酸添加到面包中，可以使面包的貯藏期延長(zhǎng) 33. 3%
【附圖說(shuō)明】
[0024] 圖1顯示為不同V[B_]BF4/水體積比對(duì)綠原酸提取得率的影響圖。
[0025] 圖2顯