二肽基肽酶-iv(dppiv)抑制性肽化合物，包含所述肽化合物的組合物，及其制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及具有二肽基肽酶-IV(DPPIV)抑制活性的肽及其鹽（作為肽化合物）， 和包含其的組合物。所述組合物包含一種或多種在源自水產(chǎn)品如魚和貝類的魚白的蛋白源 的水解產(chǎn)物中發(fā)現(xiàn)的具有DPPIV抑制活性的肽化合物作為活性成分。
【背景技術(shù)】
[0002] 糖尿病包括一組具有基于不足的胰島素作用的慢性高血糖的基本癥狀的代謝疾 病。為了治療進(jìn)行的血糖控制，作為用于不僅抑制糖尿病的發(fā)病，而其抑制并發(fā)癥如視網(wǎng)膜 病，腎病，神經(jīng)病，心肌梗死和腦梗死的發(fā)病和進(jìn)展；和用于改善患者的生命質(zhì)量（QOL)和 預(yù)期壽命的方法，是非常有意義的。在日本，95%以上的糖尿病患者被認(rèn)為是2型糖尿病 (非胰島素依賴性糖尿?。┗颊摺＝陙?，二肽基肽酶-IV(DPPIV)抑制劑已經(jīng)被批準(zhǔn)作為 2型糖尿病的新型治療劑，并且引起注意，因?yàn)槠湟鹦〉挠泻Ψ磻?yīng)如低血糖并且可以以優(yōu) 異的機(jī)制進(jìn)行血糖控制。DPPIV將腸促胰島素（incretin)(胃抑制性多肽：GIP，胰高血糖 素樣肽-I :GLP-1)(其是通過作用在胰腺β細(xì)胞上刺激胰島素分泌的胃腸激素）轉(zhuǎn)變?yōu)?其失活形式。因此，當(dāng)DPPIV被抑制時(shí)，腸促胰島素的作用可以被保留以促進(jìn)胰島素分泌。 DPPIV是絲氨酸蛋白酶中的一種，并且是識別和切割距肽的N末端的第二位點(diǎn)處的脯氨酸 (Pro)或丙氨酸（Ala)的酶。已經(jīng)報(bào)道，DPPIV強(qiáng)烈作用在具有距N末端第二個(gè)殘基處的脯 氨酸和丙氨酸，并且進(jìn)一步具有賴氨酸（Lys)和精氨酸（Arg)作為N末端殘基的肽上（非 專利文獻(xiàn)1)。
[0003] 已經(jīng)報(bào)道了由蛋白水解產(chǎn)物導(dǎo)致的對血液葡萄糖水平的增加的抑制性作用。作為 該作用的機(jī)制，已經(jīng)報(bào)道了促進(jìn)胰島素分泌的作用（專利文獻(xiàn)1)，葡萄糖吸收抑制活性（專 利文獻(xiàn)2)，和胰高血糖素樣肽-I(GLP-I)分泌的促進(jìn)（專利文獻(xiàn)3)。在一些報(bào)道中，確認(rèn) 由紫菜的酶分解的產(chǎn)物（專利文獻(xiàn)4)和通過分解蜂王漿獲得的肽（專利文獻(xiàn)5)導(dǎo)致對血 液葡萄糖水平增加的抑制作用。還有一些報(bào)道，其中未標(biāo)明機(jī)制。從作為起始材料的水產(chǎn) 品的魚白獲得的廣物，已知從魚白提取的魚精蛋白具有淀粉酶抑制活性（非專利文獻(xiàn)2)和 促進(jìn)GLP-I分泌的作用（非專利文獻(xiàn)3)。
[0004] 已經(jīng)報(bào)道很多通過化學(xué)合成獲得的化合物具有DPPIV抑制活性（專利文獻(xiàn)6)，但 考慮到安全性問題和有害反應(yīng)，應(yīng)該小心使用這樣的化學(xué)合成的產(chǎn)品。作為源自天然產(chǎn)物 的DPPIV抑制劑，已經(jīng)知道那些，如源自奶酪的水溶性級分的肽（專利文獻(xiàn)7)，源自牛乳蛋 白的肽（專利文獻(xiàn)8)，小豆（azuki bean)或菜豆（kidney bean)的酶分解產(chǎn)物（專利文獻(xiàn) 9)，源自明膠的肽（專利文獻(xiàn)10)，和源自從鮭魚皮提取的明膠的酶分解產(chǎn)物的肽（非專利 文獻(xiàn)4)，等。
[0005] 與其卵相比，水產(chǎn)品的魚白具有更低的使用價(jià)值，并且尚未有效使用。其使用限于 肥料或飼料。甚至源自鮭魚的魚白（其相對良好地被使用），用作魚精蛋白或核酸的起始材 料，每年魚白以10, 〇〇〇噸或更多的量被作為工業(yè)廢料處理。
[0006] 參考文獻(xiàn)列表
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[0019] 非專利文獻(xiàn)
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[0025] 發(fā)明概述
[0026] 本發(fā)明要解決的技術(shù)問題
[0027] 本發(fā)明的目標(biāo)是使用有長時(shí)間食用經(jīng)驗(yàn)并且具有高安全性的水產(chǎn)品的魚白作為 原材料，通過簡單方法，提供能夠促進(jìn)糖尿病患者或具有糖尿病風(fēng)險(xiǎn)的患者中病理的發(fā)病 或進(jìn)展的預(yù)防的具有DPPIV抑制活性的肽化合物或包含所述肽化合物的組合物。本發(fā)明的 另一目標(biāo)是使用有長時(shí)間食用經(jīng)驗(yàn)并且具有高安全性的水產(chǎn)品的魚白作為原材料，通過簡 單方法，提供具有對血液葡萄糖水平的增加的抑制作用的用于食品和飲料的DPPIV抑制性 活性成分，所述食品和飲料如功能性食品，保健功能食品，用于特定膳食用途的食品，營養(yǎng) 補(bǔ)品，健康輔助食品和補(bǔ)品。
[0028] 解決所述問題的方式
[0029] 本發(fā)明人已經(jīng)對具有DPPIV抑制活性的源自天然的材料進(jìn)行了認(rèn)真研究，并且 因此，本發(fā)明人已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，來自魚白或水產(chǎn)品的魚白或加工的魚白的蛋白源的水解產(chǎn)物具 有DPPIV抑制活性。隨后，本發(fā)明人已經(jīng)確定了包含在所述水解產(chǎn)物中的結(jié)構(gòu)和/或具有 DPPIV抑制活性的新型肽，并隨后完成了本發(fā)明。
[0030] 根據(jù)本發(fā)明的用于抑制DPPIV的組合物的第一實(shí)施方案，特征在于包含通過水解 源自水產(chǎn)品的魚白的蛋白源獲得的具有DPPIV抑制活性的肽化合物。
[0031] 根據(jù)本發(fā)明的用于抑制DPPIV的組合物的第二實(shí)施方案，特征在于包含 選自 Phe-Pro-Val-Gly 或其鹽，Ile-Pro-Leu 或其鹽，Leu-Pro-Val-Leu 或其鹽，和 Val-Pro-Phe-Pro或其鹽的至少一種作為DPPIV抑制成分。
[0032] 這種用于抑制DPPIV的組合物或肽化合物可以用于制備用于抑制DPPIV的藥物， 食品和飲料，如功能性食品，保健功能食品，用于特定膳食用途的食品，營養(yǎng)補(bǔ)品，健康輔助 食品和補(bǔ)品等，寵物食品等。
[0033] 根據(jù)本發(fā)明的肽化合物是選自Phe-Pro-Val-Gly及其鹽；Ile-Pro-Leu及其鹽； Leu-Pro-Val-Leu及其鹽的至少一種。這些肽化合物中的一種可以單獨(dú)使用或以這些中的 兩種以上的混合物的形式使用，用于所需用途。
[0034] 一種制備根據(jù)本發(fā)明的具有DPPIV抑制活性的水解產(chǎn)物的方法，所述方法包括水 解源自水產(chǎn)品的魚白的蛋白源以獲得具有DPPIV抑制活性的水解產(chǎn)物的步驟。
[0035] -種制備根據(jù)本發(fā)明的具有DPPIV抑制活性的肽化合物的方法，所述方法包括水 解源自水產(chǎn)品的魚白的蛋白源以獲得包含具有DPPIV抑制活性的肽化合物的水解產(chǎn)物的 步驟；和從水解產(chǎn)物分離具有DPPIV抑制活性的肽化合物的步驟。
[0036] 尚未公開在來自作為原材料的魚白的加工的產(chǎn)物中確認(rèn)DPPIV抑制的報(bào)道。在根 據(jù)本發(fā)明確定的肽中，Phe-Pro-Val-Gly，Ile-Pro-Leu和Leu-Pro-Val-Leu的結(jié)構(gòu)和活性 尚未被報(bào)道。盡管已知Val-Pro-Phe-Pro抑制涉及癌細(xì)胞生長的泛上皮膜粘蛋白（MUCl) 的作用（專利文獻(xiàn)11)，其DPPIV抑制活性未知。
[0037] 作為由源自魚白的材料提供的對血液葡萄糖水平增加的抑制作用，從魚白提取的 魚精蛋白的淀粉酶抑制活性是已知的（非專利文獻(xiàn)2)。然而，當(dāng)將具有Phe-Pro-Val-Gly， Ile-Pro-Leu，Leu-Pro-Val-Leu 或 Val-Pro-Phe-Pro 的氨基酸序列的本發(fā)明的 DPPIV 抑制 性肽與魚精蛋白的氨基酸序列相比較時(shí)，顯然，本發(fā)明的DPPIV抑制性肽不源自魚精蛋白 (非專利文獻(xiàn)5)。
[0038] 此外，報(bào)道了，當(dāng)源自水產(chǎn)品的蛋白水解產(chǎn)物用作原材料時(shí)，源自從鮭魚皮提取的 明膠的酶分解產(chǎn)物的肽具有DPPIV抑制活性（非專利文獻(xiàn)4)。然而，魚白和皮膠原蛋白在 氨基酸組成上大不相同。因此，顯然，對于從它們水解獲得的組合物的DPPIV抑制活性，各 不相同的肽組是其活性中心。
[0039] 從皮提取膠原蛋白的過程和將皮中包含的混有脂或來自其他組織的雜質(zhì)去除的 復(fù)雜過程是獲得皮膠原蛋白的水解產(chǎn)物所必需的。因?yàn)槠ず汪~白明顯是不同的部分，在魚 白中不含有皮膠原蛋白。因?yàn)轸~白具有與其他部分明顯不同的形狀，認(rèn)為分選各個(gè)魚白作 為原材料可以容易進(jìn)行。因?yàn)轸~白具有小的脂含量，認(rèn)為魚白適于作為原材料。核酸通過 水解魚白等被釋放并且其極好的味道變得明顯。因此，認(rèn)為魚白可廣泛應(yīng)用于食品領(lǐng)域。
[0040] 發(fā)明效果
[0041] 具有DPPIV抑制活性的肽化合物和包含根據(jù)本發(fā)明的肽化合物的組合物具有高 安全性，因?yàn)槠湓牧鲜撬a(chǎn)品的魚白，其已經(jīng)被食用了很久。因此，它們可以被廣泛用于 藥物，食品和飲料，（如功能性食品，保健功能食品，用于特定膳食用途的食品，營養(yǎng)補(bǔ)品，健 康輔助食品和補(bǔ)品），寵物食品，等。
[0042] 此外，水產(chǎn)品的魚白可以用作原材料以獲得具有DPPIV抑制活性的肽化合物和包 含根據(jù)本發(fā)明的肽化合物的組合物。
[0043] 尤其是，優(yōu)選使用鮭魚魚白，因?yàn)?br>[0044