鑒定或輔助鑒定鱘魚種質(zhì)的pcr引物對(duì)組合物及其應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域中鑒定或輔助鑒定鱘魚種質(zhì)的PCR引物對(duì)組合物及其 應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 鱘魚隸屬于硬骨魚綱（Osteichthyes)、福鰭亞綱（Actinopterygii)、硬鱗總 目（Chondrostei)、鱘形目（Acipenseriformes)。鱘魚類是一種古老的、有重要經(jīng)濟(jì)價(jià) 值的、大型的亞冷水性魚類?，F(xiàn)存的鱘魚有2科6屬27種，其中鱘科（Acipenseridae) 有魚皇屬（此80)2種、鱘屬（4(^口6]1861')18種、|產(chǎn)鱘屬（3〇3。11；[1'11711(311118)2種、擬|產(chǎn)鱘屬 (Pseudoscaphirhynchus)3種，白鱘科（Polyodontidae)有白鱘屬（Psephurus)和匙吻鱘屬 (Polyodon)各 1 種。
[0003] 在鱘魚野生資源日益枯竭的同時(shí)，由于其重要的經(jīng)濟(jì)價(jià)值，市場(chǎng)對(duì)鱘魚產(chǎn)品的需 求卻逐年增加，因此人工養(yǎng)殖就成為解決鱘魚資源保護(hù)和市場(chǎng)需求間矛盾的唯一方法。但 是現(xiàn)存的鱘魚都是多倍體，彼此間極易進(jìn)行雜交，鱘形目魚類種間甚至屬間的雜交現(xiàn)象極 為普遍，且部分雜交種仍可育，產(chǎn)生三雜交后代，且產(chǎn)生的雜交種很難區(qū)分，這為進(jìn)行鱘魚 種質(zhì)鑒定造成了極大的困難。而不同種類鱘魚及其雜交種的生長(zhǎng)速度和適應(yīng)條件各不相 同，其經(jīng)濟(jì)價(jià)值也不盡相同。因此，進(jìn)行正確的鱘魚種質(zhì)鑒定是解決因種質(zhì)混亂引起的糾紛 及提高鱘魚產(chǎn)業(yè)價(jià)值的有效途徑。
[0004] 由于目前沒(méi)有規(guī)范的養(yǎng)殖引種制度，且國(guó)內(nèi)外也還沒(méi)有一套完善的鱘魚種質(zhì)鑒定 體系，使得鱘魚種質(zhì)現(xiàn)狀繁雜，極不利于鱘魚產(chǎn)業(yè)的健康發(fā)展。為規(guī)范鱘魚貿(mào)易以及防止非 法捕撈和交易，急需建立一套完整的鱘魚種質(zhì)鑒定體系。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題是如何鑒定或輔助鑒定鱘魚種質(zhì)，并且區(qū)分鱘魚的父 本和母本。
[0006] 本發(fā)明所提供的鑒定或輔助鑒定鱘魚母本和鱘魚父本的PCR引物對(duì)組合物，其名 稱為組合物1，由鑒定或輔助鑒定鱘魚母本的組合物甲、鑒定或輔助鑒定鱘魚親本的組合物 乙和鑒定或輔助鑒定鱘魚母本是否為小體鱘的組合物丙組成；所述組合物甲、所述組合物 乙和所述組合物丙均獨(dú)立包裝；
[0007] 所述組合物甲由名稱為AGF的PCR引物對(duì)、名稱為ABF的PCR引物對(duì)、名稱為ABRM 的PCR引物對(duì)、名稱為DauF的PCR引物對(duì)和名稱為SchF的PCR引物對(duì)組成；
[0008] 所述AGF由序列表中序列27和序列28所示的兩條單鏈DNA組成；
[0009] 所述ABF由序列表中序列27和序列29所示的兩條單鏈DNA組成；
[0010] 所述ABRM由序列表中序列30和序列29所示的兩條單鏈DNA組成；
[0011] 所述DauF由序列表中序列27和序列31所示的兩條單鏈DNA組成；
[0012] 所述SchF由序列表中序列27和序列33所示的兩條單鏈DNA組成；
[0013] 所述組合物乙由名稱分別為 Atr-101、Atr-105、Atr-107、Atr-114、Atr-117、 Eu-39、Eu-40、Eu-41、Aful9、Afu22、Afu39、Afu54和Afu68的組成；
[0014] 所述Atr-101由序列表中序列1和序列2所示的兩條單鏈DNA組成；
[0015] 所述Atr-105由序列表中序列3和序列4所示的兩條單鏈DNA組成；
[0016] 所述Atr-107由序列表中序列5和序列6所示的兩條單鏈DNA組成；
[0017] 所述Atr-114由序列表中序列7和序列8所示的兩條單鏈DNA組成；
[0018] 所述Atr-117由序列表中序列9和序列10所示的兩條單鏈DNA組成；
[0019] 所述Eu-39由序列表中序列11和序列12所示的兩條單鏈DNA組成；
[0020] 所述Eu-40由序列表中序列13和序列14所示的兩條單鏈DNA組成；
[0021] 所述Eu-41由序列表中序列15和序列16所示的兩條單鏈DNA組成；
[0022] 所述Aful9由序列表中序列17和序列18所示的兩條單鏈DNA組成；
[0023] 所述Afu22由序列表中序列19和序列20所示的兩條單鏈DNA組成；
[0024] 所述Afu39由序列表中序列21和序列22所示的兩條單鏈DNA組成；
[0025] 所述Afu54由序列表中序列23和序列24所示的兩條單鏈DNA組成；
[0026] 所述Afu68由序列表中序列25和序列26所示的兩條單鏈DNA組成；
[0027] 所述組合物丙由名稱為RutF的PCR引物對(duì)組成；所述RutF由序列表中序列27和 序列32所示的兩條單鏈DNA組成；
[0028] 所述鱘魚母本或所述鱘魚父本為俄羅斯鱘、西伯利亞鱘、達(dá)氏鰉、小體鱘和施氏鱘 這五種鱘魚中的五種、四種、三種、兩種或一種。
[0029] 上述鑒定或輔助鑒定鱘魚母本和鱘魚父本的PCR引物對(duì)組合物中，所述鱘魚可為 純種俄羅斯鱘、俄羅斯鱘早X西伯利亞鱘?、俄羅斯鱘早X達(dá)氏鰉?、俄羅斯鱘早X小體 鱘?、俄羅斯鱘早X施氏鱘?、純種西伯利亞鱘、西伯利亞鱘早X俄羅斯鱘?、西伯利亞鱘 早X達(dá)氏鰉?、西伯利亞鱘早X小體鱘?、西伯利亞鱘早X施氏鱘?、純種達(dá)氏鰉、達(dá)氏 鰉早X俄羅斯鱘?、達(dá)氏鰉早X西伯利亞鱘?、達(dá)氏鰉早X小體鱘?、達(dá)氏鰉早X施氏 鱘?、純種小體鱘、小體鱘早X俄羅斯鱘?、小體鱘早X西伯利亞鱘?、小體鱘早X達(dá)氏 鰉?、小體鱘早X施氏鱘?、純種施氏鱘、施氏鱘早X俄羅斯鱘?、施氏鱘早X西伯利亞 鱘?、施氏鱘早X達(dá)氏鰉?、施氏鱘早X小體鱘?這25種鱘魚中的任意一種或任意的組 合，具體可為純種俄羅斯鱘、俄羅斯鱘早X西伯利亞鱘?、俄羅斯鱘早X達(dá)氏鰉?、純種 西伯利亞鱘、西伯利亞鱘早X達(dá)氏鰉?、純種施氏鱘、施氏鱘早X西伯利亞鱘?、小體鱘 早X達(dá)氏魚皇?或施氏鱘早X達(dá)氏魚皇古。
[0030] 上述鑒定或輔助鑒定鱘魚母本和鱘魚父本的PCR引物對(duì)組合物中，所述組合物 甲、所述組合物乙和組合物丙均可獨(dú)立包裝，在不同的步驟中使用。
[0031] 上述鑒定或輔助鑒定鱘魚母本和鱘魚父本的PCR引物對(duì)組合物中，所述AGF、所 述ABF、所述ABRM、所述DauF、所述SchF、所述RutF、所述Atr-101、所述Atr-105、所述 Atr-107、所述 Atr-114、所述 Atr-117、所述 Eu_39、所述 Eu_40、所述 Eu_41、所述 Aful9、所 述Afu22、所述Afu39、所述Afu54和所述Afu68均可獨(dú)立包裝。
[0032] 上述鑒定或輔助鑒定鱘魚母本和鱘魚父本的PCR引物對(duì)組合物中，所述AGF、所 述ABF、所述ABRM、所述DauF、所述SchF、所述RutF、所述Atr-101、所述Atr-105、所述 Atr-107、所述 Atr-114、所述 Atr-117、所述 Eu_39、所述 Eu_40、所述 Eu_41、所述 Aful9、所 述Afu22、所述Afu39、所述Afu54和所述Afu68的單鏈DNA均可獨(dú)立包裝。
[0033] 上述鑒定或輔助鑒定鱘魚母本和鱘魚父本的PCR引物對(duì)組合物中，所述Atr-101、 所述 Atr-105、所述 Atr-107、所述 Atr-114、所述 Atr-117、所述 Eu_39、所述 Eu_40、所述 Eu_41、所述Afu 19、所述Afu22、所述Afu39、所述Afu54和所述Afu68均用突光標(biāo)記物標(biāo)記， 所述熒光標(biāo)記物具體可為TAMRA、HEX或FAM。
[0034] 在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例中，所述Atr-101由TAMRA標(biāo)記，所述Atr-105由HEX標(biāo)記， 所述Atr-107由TAMRA標(biāo)記，所述Atr-114由TAMRA標(biāo)記，所述Atr-117由TAMRA標(biāo)記，所 述Eu-39由FAM標(biāo)記，所述Eu-40由HEX標(biāo)記，所述Eu-41由FAM標(biāo)記，所述Aful9由FAM 標(biāo)記，所述Afu22由FAM標(biāo)記，所述Afu39由HEX標(biāo)記，所述Afu54由FAM標(biāo)記，所述Afu68 由HEX標(biāo)記。
[0035] 上述鑒定或輔助鑒定鱘魚母本和鱘魚父本的PCR引物對(duì)組合物中，所述AGF、所述 ABF、所述ABRM、所述DauF和所述SchF這五種引物對(duì)可組合在一起組合使用進(jìn)行多重PCR。 這五種引物對(duì)單獨(dú)使用或組合使用時(shí)，本申請(qǐng)的鑒定或輔助鑒定鱘魚母本和鱘魚父本的 PCR引物對(duì)組合物中這五種引物對(duì)的配比沒(méi)有要求，可以根據(jù)待鑒定鱘魚確定。本申請(qǐng)中， 這五種引物對(duì)組合在一起使用時(shí)，序列表中序列27、序列28、序列29、序列30、序列31和序 列33所示的單鏈DNA的摩爾比為0. 65:0. 55:0. 5:0. 5:0. 45:0. 45。
[0036] 上述鑒定或輔助鑒定鱘魚母本和鱘魚父本的PCR引物對(duì)組合物中，所述RutF的兩 條單鏈DNA的配比可以根據(jù)待鑒定鱘魚確定，本申請(qǐng)中所述RutF的兩條單鏈DNA的摩爾比 為 1 :1。
[0037] 本發(fā)明的再一個(gè)目的是提供鑒定或輔助鑒定鱘魚親本的PCR引物對(duì)組合物。
[0038] 本發(fā)明所提供的為鑒定或輔助鑒定鱘魚親本的PCR引物對(duì)組合物，其名稱為組合 物2,為下述Bl)-B7)中的任一種組合物：
[0039] B1)所述組合物乙與所述RutF ;
[0040] B2)所述組合物乙與所述AGF ;
[0041] B3)所述組合物乙與所述ABF ;
[0042] B4)所述組合物乙與所述ABRM ;
[0043] B5)所述組合物乙與所述DauF ;
[0044] B6)所述組合物乙與所述SchF ;
[0045] B7)所述組合物乙與所述RutF、所述AGF、所述ABF、所述ABRM、所述DauF、所述 SchF這八種中的任兩種、任二種、任四種或任五種；
[0046] 所述鱘魚親本為俄羅斯鱘、西伯利亞鱘、達(dá)氏鰉、小體鱘和施氏鱘這五種鱘魚中的 五種、四種、三種、兩種或一種。
[0047] 上述鑒定或輔助鑒定鱘魚親本的PCR引物對(duì)組合物中，所述鱘魚可為純種俄羅斯 鱘、俄羅斯鱘早X西伯利亞鱘?、俄羅斯鱘早X達(dá)氏鰉?、俄羅斯鱘早X小體鱘?、俄羅 斯鱘早X施氏鱘?、純種西伯利亞鱘、西伯利亞鱘早X俄羅斯鱘?、西伯利亞鱘早X達(dá)氏 魚皇?、西伯利亞鱘早X小體鱘?、西伯利亞鱘早X施氏鱘?、純種達(dá)氏魚皇、達(dá)氏魚皇早X俄 羅斯鱘?、達(dá)氏鰉早X西伯利亞鱘?、達(dá)氏鰉早X小體鱘?、達(dá)氏鰉早X施氏鱘?、純種 小體鱘、小體鱘早X俄羅斯鱘?、小體鱘早X西伯利亞鱘?、小體鱘早X達(dá)氏鰉?、小體 鱘早X施氏鱘?、純種施氏鱘、施氏鱘早X俄羅斯鱘?、施氏鱘早X西伯利亞鱘?、施氏 鱘早X達(dá)氏鰉?、施氏鱘早X小體鱘?這25種鱘魚中的任意一種或任意的組合，具體可 為純種俄羅斯鱘、俄羅斯鱘早X西伯利亞鱘?、俄羅斯鱘早X達(dá)氏鰉?、純種西伯利亞鱘、 西伯利亞鱘早X達(dá)氏鰉?、純種施氏鱘、施氏鱘早X西伯利亞鱘?、小體鱘早X達(dá)氏鰉古 或施氏鱘早X達(dá)氏鰉古。
[0048] 上述鑒定或輔助鑒定鱘魚親本的PCR引物對(duì)組合物中，所述組合物乙可獨(dú)立包 裝。
[0049] 上述鑒定或輔助鑒定鱘魚親本的PCR引物對(duì)組合物中，所述AGF、所述ABF、所述 ABRM、所述 DauF、所述 SchF、所述 RutF、所述 Atr-101、所述 Atr-105、所述 Atr-107、所述 Atr-114、所述 Atr-117、所述 Eu_39、所述 Eu_40、所述 Eu_41、所述 Aful9、所述 Afu22、所述 Afu39、所述Afu54和所述Afu68均可獨(dú)立包裝。
[0050] 上述鑒定或輔助鑒定鱘魚親本的PCR引物對(duì)組合物中，所述AGF、所述ABF、所述 ABRM、所述 DauF、所述 SchF、所述 RutF、所述 Atr-101、所述 Atr-105、所述 Atr-107、所述 Atr-114、所述 Atr-117、所述 Eu_39、所述 Eu_40、所述 Eu_41、所述 Aful9、所述 Afu22、所述 Afu39、所述Afu54和所述Afu68的單鏈DNA均可獨(dú)立包裝。
[0051] 上述鑒定或輔助鑒定鱘魚親本的PCR引物對(duì)組合物中，所述Atr-101、所述 Atr-105、所述 Atr-107、所述 Atr-114、所述 Atr-117、所述 Eu_39、所述 Eu_40、所述 Eu_41、 所述Afu 19、所述Afu22、所述Afu39、所述Afu54和所述Afu68均用突光標(biāo)記物標(biāo)記，所述突 光標(biāo)記物具體可為TAMRA、HEX或FAM。
[0052] 上述鑒定或輔助鑒定鱘魚親本的PCR引物對(duì)組合物中，所述RutF、所述AGF、所述 ABF、所述ABRM