一種香豆素類化合物及其提取方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及油茶葉中的香豆素類物質(zhì)提取領(lǐng)域，具體而言，涉及一種香豆素類化 合物及其提取方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 油茶(Camellia oleifera Abel)別名茶籽樹、油茶樹，為山茶屬茶科(Theaceae) 植物，是世界四大木本油料之一，主要分布在中國(guó)云南、廣西、廣東等省份，是中國(guó)特有的純 天然高級(jí)油料作物。油茶研究大多著眼于油茶仁、油茶柏、茶籽油、油茶殼或其種質(zhì)資源，對(duì) 油茶葉的綜合利用研究較少，每年四五月間打葉產(chǎn)生的大批落葉造成了很大的資源浪費(fèi)。 油茶葉的開發(fā)利用可以充分利用廢棄資源，提高油茶的綜合利用效率，提高油茶主產(chǎn)區(qū)農(nóng) 民的經(jīng)濟(jì)收入。油茶葉含有脂肪、蛋白質(zhì)、還原糖、酸、氨基酸、茶皂素、葉綠素、聯(lián)芐類化合 物以及香豆素類化合物等成分，其微量元素和Ve含量高于一些常見水果。
[0003] 香豆素類化合物是一種生物活性很強(qiáng)的物質(zhì)，具有抗氧、抗自由基、抑菌保鮮，防 癌、防骨質(zhì)疏松，清除亞硝酸鹽等作用，隨著天然產(chǎn)物研究的發(fā)展，人們對(duì)香豆素類化合物 組份、其功效作用及利用價(jià)值開展了深入的研究，但是現(xiàn)有技術(shù)中從油茶葉中提取的香豆 素類物質(zhì)多屬于混合物，多種化合物并存，成分不明確雜質(zhì)也比較多，不純凈，不利于油茶 葉提取物的廣泛利用市場(chǎng)化。
[0004] 有鑒于此，特提出本發(fā)明。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的第一目的在于提供一種香豆素類化合物，克服了現(xiàn)有技術(shù)中存在的諸多 技術(shù)問題，其為一種新型的單一化合物，純度高，成分明確，無(wú)任何雜質(zhì)，屬于首次從油茶葉 中提取并純化得到，現(xiàn)有技術(shù)中沒有任何相關(guān)記載，具有開拓性的意義，提高了香豆素類物 質(zhì)的附加值，更利于針對(duì)性的進(jìn)行市場(chǎng)化應(yīng)用，具有廣泛的市場(chǎng)應(yīng)用價(jià)值。
[0006] 本發(fā)明的第二目的在于提供一種該香豆素類化合物的提取方法，該提取方法具有 易操作，簡(jiǎn)單方便，無(wú)需配備專業(yè)人員操作也可實(shí)現(xiàn)，節(jié)省人力物力，前后步驟銜接緊密，提 取操作條件溫和，所需化學(xué)試劑便宜易得，通過特定的提取操作條件的摸索獲得了一種新 型化合物，為后續(xù)提取制備提供了可參考的工藝路線，非常具有借鑒價(jià)值。
[0007] 為了實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的上述目的，特采用以下技術(shù)方案：
[0008] 本發(fā)明實(shí)施例提供了一種油茶葉提取物中的香豆素類化合物，該香豆素類化合物 的化學(xué)中文名稱為4-對(duì)羥基苯基-5-對(duì)羥基苯乙基-7-羥基_3,4_二氫香豆素，英文名稱為 4-p-hydroxylphenyl-5-p-hydroxylphenylethyl-7-hydroxyl-3,4-dihydro-c oumarin， 屬于二氫香豆素的衍生物，分子量為376，化學(xué)結(jié)構(gòu)式為：
[0009]
[0010] 不友明頭施例愒不的這柙化甘物是百次從油佘吖甲分離提取出來(lái)的，其實(shí)其是香 豆素類的物質(zhì)，雖然將其歸于香豆素類物質(zhì)，但是香豆素類物質(zhì)的性能其也有一定的體現(xiàn)， 是一種新的化合物，現(xiàn)有技術(shù)中還沒有過任何相關(guān)報(bào)道，具有開拓性的意義。關(guān)于油茶葉的 提取研究之所以這么受關(guān)注，是因?yàn)橛筒枞~中含有脂肪、蛋白質(zhì)、還原糖、酸、氨基酸、茶皂 素、葉綠素、聯(lián)芐類化合物以及香豆素類化合物等成分，其微量元素和Ve含量也高于一些常 見水果，更進(jìn)一步的油茶葉中的香豆素類物質(zhì)含量豐富，香豆素類化合物是一種生物活性 很強(qiáng)的物質(zhì)，具有抗氧、抗自由基、抑菌保鮮，防癌、防骨質(zhì)疏松，清除亞硝酸鹽等作用，因此 直接提取濃縮后可以更加強(qiáng)化其保健價(jià)值，尤其本發(fā)明提取出的這種具有特定結(jié)構(gòu)的香豆 素類化合物，其應(yīng)用價(jià)值經(jīng)過進(jìn)一步開發(fā)研究會(huì)更具商業(yè)價(jià)值，值得更廣泛的開發(fā)利用起 來(lái)。
[0011] 在本發(fā)明中，提取得到的提取物中，該新型的香豆素類化合物的純度可以達(dá)到 95%以上，更優(yōu)可以達(dá)到98%以上，只有少量的雜質(zhì)，得到的物質(zhì)很純，不像現(xiàn)有技術(shù)中大 部分是多種香豆素類物質(zhì)形成的混合物，純度高的單一物質(zhì)相比于混合物，會(huì)更加提高其 應(yīng)用價(jià)值。
[0012] 本發(fā)明除了針對(duì)該新型的香豆素類化合物從化學(xué)名稱、化學(xué)結(jié)構(gòu)式、分子量等方 面予以確認(rèn)，還提供了該化合物的提取方法，包括如下步驟：
[0013] (A)將油茶葉經(jīng)過熱提取、濃縮得到濃縮液，過D101大孔樹脂吸附完成后，依次用 蒸餾水、20-30wt %乙醇、75-80wt %乙醇溶液洗脫；
[0014] (B)將米用75_80wt%乙醇溶液洗脫得到的洗脫液進(jìn)行娃|父層析，流動(dòng)相米用二氯 甲烷-甲醇，每400_500mL為一個(gè)單位收集洗脫液；
[0015] (C)將收集的第2個(gè)單位的洗脫液進(jìn)行硅膠層析，流動(dòng)相采用二氯甲烷-甲醇，每 90-100mL為一個(gè)單位收集洗脫液，將第12-14單位的洗脫液合并后繼續(xù)分離提取，即得。
[0016] 本發(fā)明實(shí)施例的提取方法是專門針對(duì)本發(fā)明的特定化合物而設(shè)計(jì)的，每一個(gè)步驟 均需要按照本發(fā)明的方案進(jìn)行操作，不能缺少任何一個(gè)步驟，也不能顛倒前后步驟的順序， 更不能采用其他操作方法替換本發(fā)明的任一操作步驟，尤其是本發(fā)明的提取方法中涉及的 各個(gè)操控參數(shù)，需要控制在適宜的范圍內(nèi)，比如(A)步驟中，需要采用不同溶劑進(jìn)行洗脫，并 且由于目標(biāo)化合物存在于75-80wt %乙醇溶液洗脫得到的洗脫液中，因此針對(duì)這部分洗脫 液進(jìn)行進(jìn)一步的一系列提取操作，可見發(fā)明人在設(shè)計(jì)整個(gè)提取方法中均是有目的性的一步 步進(jìn)行操作的，是需要付出大量的創(chuàng)造性勞動(dòng)的，才能最終提取得到目標(biāo)化合物。
[0017] 步驟(A)中，油茶葉在過柱子之前先要經(jīng)過熱提取、濃縮等預(yù)處理操作，油茶葉熱 提取的溫度最好控制在70-80°C，更優(yōu)為75°C，如果溫度太高可能會(huì)破壞油茶葉中的營(yíng)養(yǎng)成 分，因此要注意溫度的控制，另外熱提取之前先將油茶葉粉碎成60目以上的粉狀;優(yōu)選地， 熱提取采用50wt%以上的乙醇為溶劑進(jìn)行提取，粉碎成粉狀有利于提取操作的順利進(jìn)行。
[0018] 在本發(fā)明的步驟(B)中，75_80wt %乙醇溶液洗脫得到的洗脫液先進(jìn)行濃縮干燥 后，溶解于二氯甲烷-甲醇中，再進(jìn)行硅膠層析，其中硅膠層析過程中所用的硅膠目粒度控 制在200-300目，以提尚提取效率，二氯甲燒-甲醇的體積比最好控制在10:1_1:3，層析時(shí)每 400-500mL為一個(gè)單位收集洗脫液，一般是每500mL收集為一個(gè)流份，收集大概24個(gè)組份，對(duì) 其中三個(gè)組分進(jìn)行細(xì)分，分別是排號(hào)為第2、10、23這三個(gè)組分，由于本發(fā)明的目標(biāo)化合物存 在于第2個(gè)單位的洗脫液中，針對(duì)第2組分進(jìn)一步分離提取，實(shí)際進(jìn)行操作時(shí)，一般為對(duì)第2 個(gè)單位的洗脫液進(jìn)行再一次的硅膠層析，其中硅膠層析過程中所用的硅膠目粒度控制在 200-300目，以提高提取效率。
[0019] 優(yōu)選地，步驟(C)中，將第12-14單位的洗脫液合并后繼續(xù)分離提取的步驟包括:將 洗脫液經(jīng)過液相色譜檢測(cè)后，根據(jù)檢測(cè)結(jié)果采用甲醇-水溶液洗脫，再用半制備液相色譜進(jìn) 行分離，即得。
[0020] 更優(yōu)選的，甲醇-水溶液的質(zhì)量百分比濃度控制在60-90%;半制備液相色譜進(jìn)行 分離過程中，最好采用質(zhì)量百分比濃度為30-40%的乙腈-水溶液為流動(dòng)相，以獲得更加純 凈的物質(zhì)。
[0021] 現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果為：
[0022] (1)本發(fā)明提供的新型的油茶葉提取物中的香豆素類化合物，純度高，成分明確， 無(wú)任何雜質(zhì)，屬于首次從油茶葉中提取并純化得到，現(xiàn)有技術(shù)中沒有任何相關(guān)記載，具有開 拓性的意義，提高了香豆素類物質(zhì)的附加值，更利于針對(duì)性的進(jìn)行市場(chǎng)化應(yīng)用，具有廣泛的 市場(chǎng)應(yīng)用價(jià)值；
[0023] (2)對(duì)于上述香豆素類化合物本發(fā)明提供的提取方法具有易操作，簡(jiǎn)單方便，無(wú)需 配備專業(yè)人員操作也可實(shí)現(xiàn)，節(jié)省人力物力，前后步驟銜接緊密，提取操作條件溫和的優(yōu) 點(diǎn)，當(dāng)然本發(fā)明提供的提取方法只是較優(yōu)的一種方法，對(duì)于現(xiàn)有技術(shù)中任何一種提取方法 只要得到具有本發(fā)明特定結(jié)構(gòu)的化合物，均在本發(fā)明的保護(hù)范圍內(nèi)。
【附圖說明】
[0024]為了更清楚地說明本發(fā)明實(shí)施例或現(xiàn)有技術(shù)中的技術(shù)方案，以下將對(duì)實(shí)施例或現(xiàn) 有技術(shù)描述中所需要使用的附圖作簡(jiǎn)單地介紹。
[0025]圖1為本發(fā)明實(shí)施例一中的80wt %乙醇洗脫液的HPLC圖譜；
[0026]圖2為本發(fā)明實(shí)施例一中的第12-14單位的洗脫液合并后繼續(xù)分離提取后所對(duì)應(yīng) 的液相色譜圖；
[0027] 圖3為本發(fā)明實(shí)施例一中的目標(biāo)化合物的離子圖、色譜圖和質(zhì)譜圖；
[0028] 圖4為本發(fā)明實(shí)施例一中的目標(biāo)化合物的1H-NMR圖譜；
[0029] 圖5為本發(fā)明實(shí)施例二中的目標(biāo)化合物的13C_NMR圖譜；
[0030] 圖6為本發(fā)明實(shí)施例二中的目標(biāo)化合物的H-H COSY圖譜；
[0031] 圖7為本發(fā)明實(shí)施例二中的目標(biāo)化合物的HSQC圖譜；
[0032] 圖8為本發(fā)明實(shí)施例二中的目標(biāo)化合物的HMBC圖譜。
【具體實(shí)施方式】
[0033] 下面將結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明的實(shí)施方案進(jìn)行詳細(xì)描述，但是本領(lǐng)域技術(shù)人員將會(huì) 理解，下列實(shí)施例僅用于說明本發(fā)明，而不應(yīng)視為限制本發(fā)明的范圍。實(shí)施例中未注明具體 條件者，按照常規(guī)條件或制造商建議的條件進(jìn)行。所用試劑或儀器未注明生產(chǎn)廠商者，均為 可以通過市售購(gòu)買獲得的常規(guī)產(chǎn)品。
[0034] 實(shí)施例1
[0035] 香豆素類化合物的提取方法如下步驟操作：
[0036] 1)試驗(yàn)儀器與試劑準(zhǔn)備：
[0037] 新鮮油茶葉：采自湖南省天際嶺國(guó)家森林公園，由中南林業(yè)科技大學(xué)譚曉風(fēng)教授 鑒定為普通油茶(Camellia oleifera Abel.)葉；<