協(xié)助鑒別診斷中風(fēng)的方法
【專利說明】協(xié)助鑒別診斷中風(fēng)的方法
[0001] 發(fā)明背景
[0002] 中風(fēng)是全世界第=大導(dǎo)致死亡的原因，并且可被定義為腦功能的快速發(fā)展喪失， 原因是向腦的血液供應(yīng)的中斷。根據(jù)世界衛(wèi)生組織(World化alth (Organisation)統(tǒng)計，全 世界每年一千五百萬的人患有中風(fēng)，具有五百萬的死亡W及另五百萬永久地殘疾。據(jù)推測， 高血壓是運一千五百萬中風(fēng)例中一千兩百屯十萬例的貢獻因子。在英國，每年大約150,000 人具有中風(fēng)，并且中風(fēng)導(dǎo)致每年約53,000的死亡。僅在英國，每年中風(fēng)花費經(jīng)濟估計80億英 鎊，并且中風(fēng)患者占據(jù)所有醫(yī)院急性病床的大約20% W及長期病床的25%。
[0003] 中風(fēng)可被歸類為S種子類型：
[0004] i)缺血性中風(fēng)（IS):當向腦的血液供應(yīng)減少時發(fā)生，其導(dǎo)致腦損害。當血管堵塞時 (通常由血凝塊），發(fā)生缺血性中風(fēng)。該凝塊在動脈粥樣硬化斑塊處局部地形成(血栓形成型 中風(fēng)），或可選地其發(fā)生是由于源自血流中別處的移動顆?；蛩槠?栓塞性中風(fēng)）；
[0005] ii)短暫性腦缺血發(fā)作(TIA):其為'微中風(fēng)'，當向腦的血液供應(yīng)暫時減少時發(fā)生。 如果癥狀被快速地解決(24小時內(nèi)個體返回正常的健康)則診斷為TIA; W及
[0006] iii)出血性中風(fēng)化S):當血液積累在頭骨拱頂內(nèi)時(通常當變?nèi)醯难芷屏褧r)發(fā) 生?？蓪⒊鲅灾酗L(fēng)分類為兩種主要的子類型，即腦內(nèi)的(腦組織內(nèi)）和蛛網(wǎng)膜下腔的(腦的 表層附近及其保護層下）。
[0007] IS和TIA導(dǎo)致所有中風(fēng)例的大約85% ,HS導(dǎo)致15%。為了使中風(fēng)后的神經(jīng)性損害縮 到最小，關(guān)鍵是快速和準確地診斷中風(fēng)患者，W便可施用適當?shù)闹委?。例如，為了打破凝塊， 可施用溶解血栓的療法，如組織血纖維蛋白溶酶原激活劑(TPA)。然而，運樣的療法僅在IS 中是準許的，并且對HS是不利的。TIA的性質(zhì)不需要運樣的療法，而諸如華法林和阿司匹林 的血液稀釋劑是運樣的病例的處方藥。
[000引目前，如果懷疑中風(fēng)，評估身體的癥狀，并且通常進行電腦斷層(CT)掃描。CT掃描 對鑒定HS患者具有好的敏感性(大約90%敏感性)但對鑒定IS和TIA患者具有弱的敏感性 (大約20%敏感性）。在實踐中，TIA由于其短暫性的性質(zhì)而極少發(fā)生或不發(fā)生組織損害，因 此CT掃描作為診斷技術(shù)是無效的。磁共振成像(MRI)改善IS診斷的敏感性(至多大約80%) 但增加時間需求、機器的可及性，并且昂貴的費用限制了其在中風(fēng)診斷中的使用。CT掃描用 于IS和TIA檢測的弱敏感性意味著用于檢測IS和TIA的基于生物流體的診斷生物標志物試 驗將為非常珍貴的工具W協(xié)助臨床醫(yī)生診斷中風(fēng)子類型?；谏锪黧w的生物標志物具有 促進和提高中風(fēng)診斷準確性的潛能。
[0009]多種候選生物標志物已被提議用于中風(fēng)和中風(fēng)子類型描述的診斷，并且現(xiàn)有技術(shù) 中對IS/TIA與HS的區(qū)分存在若干描述，例如EP1238284、W0 2010/086697、W0 2010/012834 和WO 2002/012892。
[0010] EP1419388公開了區(qū)分服與ISW及所有中風(fēng)類型與非中風(fēng)對照的數(shù)據(jù)。然而，迄今 為止還沒有發(fā)現(xiàn)任何一種在臨床實踐中的用途，并且存在具有高敏感性和特異性W能夠進 行準確診斷的所有=種中風(fēng)子類型的生物標志物的真實臨床需求。
[0011]使用血液試驗對=種不同中風(fēng)子類型的鑒別診斷將利于更知情的臨床決策，潛在 地使得不需要昂貴且不快速的神經(jīng)成像診斷學(xué)，并且可改善患者的臨床結(jié)果。
[0012] 發(fā)明概述
[0013] 根據(jù)第一方面，本發(fā)明提供協(xié)助鑒別診斷已患有或正患有中風(fēng)的患者的出血性中 風(fēng)、缺血性中風(fēng)和短暫性腦缺血發(fā)作的方法，其包括:測定獲自患者的離體樣品中生物標志 物VCAM-I、GFAP和CRP的濃度；W及建立生物標志物的濃度的意義。
[0014] 根據(jù)第二方面，本發(fā)明提供基底，其包含生物標志物VCAM-UGFAP和CRP的探針，用 于本發(fā)明第一方面所述的協(xié)助鑒別診斷患者的出血性中風(fēng)、缺血性中風(fēng)和短暫性腦缺血發(fā) 作的方法。
[0015] 根據(jù)第S方面，本發(fā)明設(shè)及包含VCAM-UGFAP和CRP的探針的基底在本發(fā)明第一方 面所述的協(xié)助鑒別診斷患者的出血性中風(fēng)、缺血性中風(fēng)和短暫性腦缺血發(fā)作的方法中的用 途。
[0016] 根據(jù)第四方面，本發(fā)明設(shè)及VCAM-1、GFAP、CRP、IL-6和/或sTNFRl作為出血性中風(fēng) 的生物標志物和/或作為出血性中風(fēng)、缺血性中風(fēng)和短暫性腦缺血發(fā)作的區(qū)分指標的用途。
[0017] 附圖簡述
[0018] 圖1為使用本發(fā)明的生物標志物區(qū)分TIA與其他中風(fēng)類型的ROC曲線分析；
[0019] 圖2為使用本發(fā)明的生物標志物區(qū)分IS與其他中風(fēng)類型的ROC曲線分析；
[0020] 圖3為使用本發(fā)明的生物標志物區(qū)分服與其他中風(fēng)類型的ROC曲線分析；
[0021] 圖4為顯示男性和女性個體中每種中風(fēng)子類型的GFAP濃度的圖表；
[0022] 圖5為顯示男性和女性個體中每種中風(fēng)子類型的VCAMl濃度的圖表；
[0023] 圖6為顯示男性和女性個體中每種中風(fēng)子類型的CRP濃度的圖表；
[0024] 圖7為顯示男性和女性個體中每種中風(fēng)子類型的sTNFRl濃度的圖表；
[0025] 圖8為顯示男性和女性個體中每種中風(fēng)子類型的IL-6濃度的圖表;和
[0026] 圖9顯示數(shù)據(jù)和相應(yīng)的ROC曲線分析，其分別地比較設(shè)計分類算法用于從所有中風(fēng) 類型區(qū)分服的邏輯回歸和神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)方法。
[0027] 發(fā)明詳述
[0028] 本發(fā)明設(shè)及基于生物標志物的方法和生物忍片，其可被用來協(xié)助區(qū)分=種中風(fēng)子 類型：出血性中風(fēng)化S)、缺血性中風(fēng)（IS)和短暫性腦缺血發(fā)作(TIA)。
[0029] 除非另有規(guī)定，所有本文提及的術(shù)語'中風(fēng)'涵蓋所有=種形式的中風(fēng)。
[0030] 本文使用的術(shù)語'缺血性中風(fēng)（IS)'指中風(fēng)的類型，當向腦的血液供應(yīng)減少時發(fā) 生，其導(dǎo)致腦損害。當血管堵塞時(通常通過血凝塊），缺血性中風(fēng)發(fā)生。該凝塊在動脈粥樣 硬化斑塊下可局部地形成(血栓形成型中風(fēng)），或可選地其發(fā)生是由于源自血流中其他處的 移動顆粒或碎片(栓塞性中風(fēng)）。術(shù)語'短暫性腦缺血發(fā)作(TIA) '指'小中風(fēng)'，當向腦的血液 供應(yīng)暫時性減少時發(fā)生。如果癥狀被很快地解決(24小時內(nèi)個體返回正常的健康)則診斷為 TIA。當血液在頭骨拱頂內(nèi)積累時(通常當變?nèi)醯难芷屏褧r），術(shù)語'出血性中風(fēng)化S)'發(fā) 生。可將出血性中風(fēng)分類為兩種主要的子類型:腦內(nèi)的（腦組織內(nèi)）；和蛛網(wǎng)膜下腔的（腦表 層周圍并在其保護層下）。
[0031] 本文提及的'已患有或正患有中風(fēng)的患者'包括已被診斷為當前正患有中風(fēng)或已 被診斷為之前中過中風(fēng)的患者。中風(fēng)可為最近的事件，運樣的事件發(fā)動個體尋求臨床幫助 的過程。
[0032] 術(shù)語"個體"和"患者"在本文可被交換地使用，并且指哺乳動物，其包括非靈長類 (例如牛、豬、馬、狗、貓、大鼠和小鼠）和靈長類(例如猴和人）。優(yōu)選地，個體或患者為人。
[0033] 本文使用的術(shù)語'生物標志物'指存在于獲自患者的生物樣品中的分子，所述樣品 中生物標志物的濃度可指示病理狀態(tài)。本文描述了多種生物標志物，本申請的發(fā)明人發(fā)現(xiàn) 所述多種生物標志物單獨或與其他診斷方法組合，或作為與其他生物標志物組合的互補生 物標志物對鑒別不同的中風(fēng)子類型是有用的。本文使用的術(shù)語'互補生物標志物'指可被用 于與其他中風(fēng)生物標志物結(jié)合W支持診斷的生物標志物。
[0034] 本領(lǐng)域很好理解的是，由于例如年齡、性別或種族/地區(qū)的遺傳型，生物標志物的 正?；?背景'濃度可呈現(xiàn)出輕微的變化。因此，本發(fā)明的方法中使用的闊值也可由于根據(jù) 祀患者/群體的優(yōu)化而輕微地變化。
[0035] 獲自患者的生物學(xué)樣品優(yōu)選地為血液、血清或血漿樣品。本文使用的術(shù)語'離體 (ex vivo) '具有其在本領(lǐng)域中的通常含義，并且指已從患者的身體取走的樣品。
[0036] 當從患者抽取血液樣品用于分析時，分析全血、血清或血漿。血液樣品的分析可為 數(shù)種分析方法學(xué)的方式，如與預(yù)分離步驟(如色譜法)結(jié)合的質(zhì)譜法。優(yōu)選的方法學(xué)基于免 疫檢測。也將免疫檢測技術(shù)容易地并入便攜式或手提式裝置用于在臨床環(huán)境的外部使用。 可使用定量免疫分析如免疫印跡或化ISA來檢測蛋白的量。分析的優(yōu)選