一種海南霉素發(fā)酵工藝的制作方法
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明屬于微生物發(fā)酵領(lǐng)域，具體涉及一種海南霉素發(fā)酵工藝，本方法以稠李鏈霉菌東方變種為發(fā)酵菌種，經(jīng)過(guò)斜面培養(yǎng)基制備成出凍存孢子懸液，然后以凍存孢子出發(fā)制備成可以直接上罐使用的凍存菌絲管，經(jīng)過(guò)種子培養(yǎng)轉(zhuǎn)入發(fā)酵罐進(jìn)行恒溫培養(yǎng)，在發(fā)酵中前期補(bǔ)入液化玉米淀粉，經(jīng)過(guò)該項(xiàng)工藝改進(jìn)，不僅菌種活力增強(qiáng)，發(fā)酵水平得到大幅度的提升。相對(duì)于現(xiàn)有技術(shù)而言，該工藝解決了一支斜面只能制備少量菌種的局限，批量制備的凍存菌絲管數(shù)量大，活力強(qiáng)，在發(fā)酵罐上表現(xiàn)穩(wěn)定而且產(chǎn)量高。發(fā)酵過(guò)程中被料解決了后期菌絲自、發(fā)酵單位滯漲的問(wèn)題。CGMCC No. 530820110929
【專(zhuān)利說(shuō)明】
一種海南霉素發(fā)酵工藝
技術(shù)領(lǐng)域
[0001]本發(fā)明屬于微生物發(fā)酵領(lǐng)域，具體涉及一種海南霉素發(fā)酵工藝。
【背景技術(shù)】
[0002]海南霉素鈉是一種多醚類(lèi)抗生素，是從我國(guó)海南島土壤中分離的一種稠李鏈霉菌東方變種(Streptomyces padanus Var.dangfangeusls)培養(yǎng)液中提取出的，對(duì)畜禽球蟲(chóng)有很強(qiáng)的殺蟲(chóng)作用，而且具有提高牛羊飼料利用率、作為“長(zhǎng)肉素”促動(dòng)物生長(zhǎng)(增重)的作用。
[0003]海南霉素鈉，分子以環(huán)狀構(gòu)象存在，在溶液狀態(tài)下分子二個(gè)末端(羧酸羰基與叔羥基)形成H鍵，眾多氧原子集中于中心位置，形成一個(gè)離子陷阱(Lontrapping)是一元羧酸離子載體抗生素，當(dāng)進(jìn)入細(xì)胞，干涉細(xì)胞膜離子轉(zhuǎn)運(yùn)，導(dǎo)致生命必須的K+等離子丟失，是抗生素殺球蟲(chóng)的生物活性的理化基礎(chǔ)。
[0004]牛羊飼料中添加海南霉素鈉，使瘤胃微生物菌群改變，瘤胃發(fā)酵提高了丙酸分子含量，飼料能量利用率提高，蛋白分解菌受抑制，瘤胃中飼料蛋白降解減少，增加微生物蛋白合成，促進(jìn)牛羊體重增長(zhǎng)。
[0005]我公司作為國(guó)內(nèi)唯一一家生產(chǎn)該產(chǎn)品的廠家，該產(chǎn)品目前使用凍存孢子進(jìn)罐，一支斜面制備的菌種數(shù)量較少，而且接種后種子生長(zhǎng)過(guò)慢，活力較差?，F(xiàn)有技術(shù)中，一級(jí)種子罐周期較長(zhǎng)40h左右，既不利于生產(chǎn)安排，也不利于節(jié)能;發(fā)酵罐中基礎(chǔ)料物料雖然較為豐富，但是其菌絲濃度較低，后期氨基氮回升較早，氨基氮回升后，發(fā)酵單位漲幅明顯降低，即培養(yǎng)周期太短，后期發(fā)酵單位明顯滯漲。因此，為了滿足日益增長(zhǎng)的市場(chǎng)容量，迫切需要開(kāi)發(fā)新的生產(chǎn)工藝。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]針對(duì)【背景技術(shù)】中提到的現(xiàn)有技術(shù)中的不足，本發(fā)明提供一種海南霉素發(fā)酵的新工藝，其使用凍存菌絲進(jìn)罐，接種后種子活力好、生長(zhǎng)快，同時(shí)發(fā)酵過(guò)程中補(bǔ)料，極大提高了發(fā)酵單位。
[0007]本發(fā)明解決現(xiàn)有技術(shù)中的不足的具體技術(shù)方案為，一種海南霉素發(fā)酵工藝，包括以下步驟:
[0008]S1.制備凍存孢子懸液:將稠李東方鏈霉菌SDSL-HNl 109 CGMCC N0.5308的孢子接種到斜面培養(yǎng)基上，28 ± 1°C下培養(yǎng)7天，用無(wú)菌水洗下斜面培養(yǎng)上的孢子，加入甘油水溶液配成凍存孢子懸液，在-80?-70°C下保存?zhèn)溆茫?br>[0009]S2.制備凍存菌絲懸液:將SI中的凍存孢子懸液按照I?5vol%。的接種量接種到種子培養(yǎng)基中，28 ± TC培養(yǎng)，培養(yǎng)40?45h，加入甘油水溶液配成凍存菌絲懸液，在-80?-70°C下保存?zhèn)溆茫?br>[0010]S3.制備種子液:將S2中凍存菌絲懸液接種到種子培養(yǎng)基中，經(jīng)過(guò)種子擴(kuò)大培養(yǎng)，得到種子液；
[0011]S4.發(fā)酵:將S3得到的種子液按照I?5vol%。的接種量接入發(fā)酵培養(yǎng)基中，28± 1°C下攪拌并通氣，發(fā)酵培養(yǎng)130?150h，培養(yǎng)過(guò)程中補(bǔ)加液化淀粉。
[0012]在上述技術(shù)方案的基礎(chǔ)上，本發(fā)明還可以有如下進(jìn)一步的具體要求或優(yōu)化。
[0013]具體的，SI及S2中甘油水溶液的濃度為20wt%，Sl制備的凍存孢子懸液中甘油水溶液與無(wú)菌水的體積比為1:1，S2制備的凍存菌絲懸液中甘油水溶液與種子培養(yǎng)基的體積比為1:1。
[0014]具體的，S3中的種子擴(kuò)大培養(yǎng)包括兩級(jí)擴(kuò)大:將SI中的凍存孢子懸液按照10?25vol%。的接種量接種到種子培養(yǎng)基中，28±I°C下培養(yǎng)40?45h得中間種子液，將中間種子液按照I?5vo 1%。的接種量接種到種子培養(yǎng)基中，28 ± I °C下培養(yǎng)40?45h得種子液。
[0015]為了方便生產(chǎn)，實(shí)際生產(chǎn)中凍存孢子懸液及凍存菌絲懸液通常都使用5mL的凍存管封裝后凍存，其方便取用和標(biāo)準(zhǔn)化生產(chǎn)，提高生產(chǎn)效率。
[0016]優(yōu)選的，S4中發(fā)酵培養(yǎng)至發(fā)酵培養(yǎng)基中總糖低于5g/100ml時(shí)開(kāi)始補(bǔ)加液化淀粉，每天補(bǔ)加量為發(fā)酵液總體積的2-3%，發(fā)酵培養(yǎng)結(jié)束前1h停止補(bǔ)加。
[0017]優(yōu)選的，S4中補(bǔ)加液化淀粉的方式為流加。
[0018]具體的，S4中補(bǔ)加液化淀粉的濃度為30wt%。
[0019]具體的，S4中發(fā)酵培養(yǎng)時(shí)的攪拌轉(zhuǎn)速為50-120r/min、通氣量為0.5-1.2vvm。
[°02°]具體的，SI中所述的斜面培養(yǎng)基由以下原料組成:玉米淀粉1.0wt%，酵母粉1.0wt %，碳酸|丐0.6wt %，氯化鈉0.2wt %，瓊脂1.7wt %，黃豆餅粉1.0wt %，葡萄糖2.0wt%，蛋白胨0.2wt%，硫酸鎂0.05wt%，磷酸氫二鉀0.02wt%，余量為飲用水。
[0021]具體的，S2及S3中所述的種子培養(yǎng)基由下原料組成:玉米淀粉1.0wt%，酵母粉
1.0wt %，碳酸0.8wt %，氯化鈉0.3wt %，黃豆餅粉0.5wt %，葡萄糖1.0wt %，蛋白胨
0.lwt%，硫酸鎂0.05wt%，磷酸氫二鉀0.02wt%，余量為飲用水。
[0022]與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明提供的海南霉素發(fā)酵工藝具有如下優(yōu)點(diǎn):
[0023]I)相比于現(xiàn)有技術(shù)中使用凍存孢子直接制備種子液后接入發(fā)酵培養(yǎng)基中的工藝，本發(fā)明提供的工藝使用凍存孢子批量制備出大量的凍存菌絲，凍存菌絲經(jīng)種子擴(kuò)大培養(yǎng)后接入發(fā)酵培養(yǎng)基中，本發(fā)明的工藝克服了一支斜面只能制備少量菌種的局限性，使用本發(fā)明的工藝一支斜面就可以批量產(chǎn)生較大量的凍存菌絲懸液備用；
[0024]2)相比于現(xiàn)有技術(shù)中使用凍存孢子，本發(fā)明提供的工藝使用的凍存菌絲活力更強(qiáng)，在發(fā)酵過(guò)程中表現(xiàn)更加穩(wěn)定且產(chǎn)量更高；
[0025]3)發(fā)酵過(guò)程的中前期根據(jù)發(fā)酵培養(yǎng)基中總糖含量情況，補(bǔ)加液化淀粉，解決了后期菌絲自溶產(chǎn)生氨基氮而引起的發(fā)酵單位滯漲的問(wèn)題。
【具體實(shí)施方式】
[0026]以下結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明的原理和特征進(jìn)行描述，所舉實(shí)例只用于解釋本發(fā)明，并非用于限定本發(fā)明的范圍。
[0027]下述實(shí)施例中，所用菌種為streptomycespadanus var.dangfangeusls稠李東方鏈霉菌，該菌種于2011年9月29日保藏在中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心(CGMCC)保藏號(hào)為:CGMCC N0.5308。
[0028]下述實(shí)施例中，凍存菌絲懸液的制備方式為:
[0029](I)在無(wú)菌條件下，用接種鏟從母斜面上輕輕刮取全部的孢子，移入裝有10mL20^%甘油的三角瓶中，瓶中裝有適量玻璃珠，搖動(dòng)三角瓶將孢子打散使其均勻成孢子懸液。
[0030](2)將5ml的凍存管滅菌(經(jīng)取樣檢測(cè)無(wú)菌方可使用)，分裝孢子懸液，每只凍存管裝量為2mL，保存于-80?-70 °C的冰箱中備用。
[0031](3)取凍存孢子懸液一支于種子培養(yǎng)基中，28±1°C培養(yǎng)，搖床轉(zhuǎn)速220-240rpm振蕩培養(yǎng)40-45小時(shí)，取2mL上述培養(yǎng)后的含菌絲培養(yǎng)基加入2mL 20wt%甘油分裝于5ml凍存管中，即為凍存菌絲懸液，保存于-80?-70 0C的冰箱中備用。
[0032]母斜面用培養(yǎng)基組成為:玉米淀粉1.0wt %，酵母粉1.0wt %，碳酸，氯化鈉0.2wt %，瓊脂1.7wt %，黃豆餅粉1.0wt %，葡萄糖2.0wt %，蛋白胨0.2wt %，硫酸鎂
0.05wt%，磷酸氫二鉀0.02wt%，余量為飲用水，pH7.4-7.9o
[ο。33] 所用種子培養(yǎng)基組成為:玉米淀粉1.0wt %，酵母粉1.0wt %，碳酸IS0.Swt^，氯化鈉0.3wt%，黃豆餅粉0.5wt%，葡萄糖1.0wt%，蛋白胨0.lwt%，硫酸鎂0.05wt%，磷酸氫二鉀0.02wt%，余量為飲用水，ρΗ7.4-7.9。
[0034]實(shí)施例1
[0035]將稠李東方鏈霉菌(streptomycespadanus var.dangfangeusls)凍存菌絲懸液一支接種于200mL裝料種子瓶中，28°C培養(yǎng)40h后，接種于裝有50L種子培養(yǎng)基的種子罐中(種子罐容量為100L)，28°C培養(yǎng)40h后，轉(zhuǎn)入裝有40m3發(fā)酵培養(yǎng)基的發(fā)酵罐中(發(fā)酵罐容量為 60m3)，28 °C 培養(yǎng)。
[0036]發(fā)酵培養(yǎng)至發(fā)酵培養(yǎng)基中總糖含量約為5g/100ml時(shí)(離開(kāi)始培養(yǎng)的時(shí)間大約為40h)開(kāi)始補(bǔ)加液化淀粉，補(bǔ)料所用物料為30 %液化玉米淀粉，流加的方式補(bǔ)入，補(bǔ)料至110-120hr，補(bǔ)料總量大約為發(fā)酵培養(yǎng)基總體積的2-3%，結(jié)束補(bǔ)料后繼續(xù)培養(yǎng)至130hr。
[0037]種子罐培養(yǎng)40h用轉(zhuǎn)子離心機(jī)在3500轉(zhuǎn)，15分鐘的檢測(cè)菌濃為28%。
[0038]發(fā)酵結(jié)束，照抗生素微生物檢定法二劑量法測(cè)定效價(jià)，放罐效價(jià)為5606yg/ml。
[0039]種子瓶及種子罐中所用的種子培養(yǎng)基組成均為:玉米淀粉1.0wt %，酵母粉
1.0wt%，碳酸Ii0.8wt%，氯化鈉0.3wt%，黃豆餅粉0.5wt%，葡萄糖1.0wt %，蛋白胨0.Iwt %，硫酸鎂0.05wt %，磷酸氫二鉀0.02wt %，飲用水余量，pH7.4-7.9。
[0040]發(fā)酵培養(yǎng)基組成為:玉米淀粉6-lOwt%，黃豆餅粉2.0-3.0wt%，葡萄糖2.0wt%,碳酸，酵母粉0.5wt%，硫酸鎂0.08wt%，磷酸氫二鉀0.02wt%，氯化鈉0.2wt%，飲用水余量，pH7.4-7.9。
[0041 ] 液化淀粉制備方法:30wt %的玉米淀粉，0.03wt %耐高溫淀粉酶，85-90 V糊化20分鐘。
[0042]實(shí)施例2
[0043]將稠李東方鏈霉菌(streptomycespadanus var.dangfangeusls)凍存菌絲一支接種于200ml裝料種子瓶中，28°C培養(yǎng)40h后，接種于裝有50L種子培養(yǎng)基的種子罐中(種子罐容量為100L)，28°C培養(yǎng)40h后，轉(zhuǎn)入裝有40m3發(fā)酵培養(yǎng)基的發(fā)酵罐中(發(fā)酵罐容量為60m3)，28 °C 培養(yǎng)。
[0044]發(fā)酵培養(yǎng)至發(fā)酵培養(yǎng)基中總糖含量約為4.5g/100ml時(shí)(離開(kāi)始培養(yǎng)的時(shí)間大約為55h)開(kāi)始補(bǔ)加液化淀粉，補(bǔ)料所用物料為30 %液化玉米淀粉，流加的方式補(bǔ)入，補(bǔ)料至120-130hr，補(bǔ)料總量大約為發(fā)酵培養(yǎng)基總體積的2-3%，結(jié)束補(bǔ)料后繼續(xù)培養(yǎng)至140hr。
[0045]種子罐培養(yǎng)40h用轉(zhuǎn)子離心機(jī)在3500轉(zhuǎn)，15分鐘的檢測(cè)菌濃為26%。
[0046]發(fā)酵結(jié)束，照抗生素微生物檢定法二劑量法測(cè)定效價(jià)，放罐效價(jià)為5828yg/ml。
[0047]種子瓶及種子罐中所用的種子培養(yǎng)基組成均為:玉米淀粉1.0wt %，酵母粉1.0wt%，碳酸Ii0.8wt%，氯化鈉0.3wt%，黃豆餅粉0.5wt%，葡萄糖1.0wt %，蛋白胨0.Iwt %，硫酸鎂0.05wt %，磷酸氫二鉀0.02wt %，飲用水余量，pH7.4-7.9。
[0048]發(fā)酵培養(yǎng)基組成為:玉米淀粉6-lOwt%，黃豆餅粉2.0-3.0wt%，葡萄糖2.0wt%,碳酸，酵母粉0.5wt%，硫酸鎂0.08wt%，磷酸氫二鉀0.02wt%，氯化鈉0.2wt%，飲用水余量，pH7.4-7.9。
[0049]液化淀粉制備方法:30wt %的玉米淀粉，0.03wt %耐高溫淀粉酶，85-90 V糊化20分鐘。
[0050]實(shí)施例3
[0051 ]將稠李東方鏈霉菌(streptomyces padanus var.dangfangeusls)凍存菌絲一支接種于200mL裝料種子瓶中，28°C培養(yǎng)40h后，接種于裝有50L種子培養(yǎng)基的種子罐中(種子罐容量為100L)，28°C培養(yǎng)40h后，轉(zhuǎn)入裝有40m3發(fā)酵培養(yǎng)基的發(fā)酵罐中(發(fā)酵罐容量為60m3)，28 °C 培養(yǎng)。
[0052]發(fā)酵培養(yǎng)至發(fā)酵培養(yǎng)基中總糖含量約為2.8g/100ml時(shí)(離開(kāi)始培養(yǎng)的時(shí)間大約為88h)開(kāi)始補(bǔ)加液化淀粉，補(bǔ)料所用物料為30 %液化玉米淀粉，流加的方式補(bǔ)入，補(bǔ)料至130-140hr，補(bǔ)料總量大約為發(fā)酵培養(yǎng)基總體積的2-3%，結(jié)束補(bǔ)料后繼續(xù)培養(yǎng)至150hr。
[0053]種子罐培養(yǎng)40h用轉(zhuǎn)子離心機(jī)在3500轉(zhuǎn)，15分鐘的檢測(cè)菌濃為28%。
[0054]發(fā)酵結(jié)束，照抗生素微生物檢定法二劑量法測(cè)定效價(jià)，放罐效價(jià)為5422yg/ml。
[0055]種子瓶及種子罐中所用的種子培養(yǎng)基組成均為:玉米淀粉1.0wt %，酵母粉1.0wt%，碳酸Ii0.8wt%，氯化鈉0.3wt%，黃豆餅粉0.5wt%，葡萄糖1.0wt %，蛋白胨0.Iwt %，硫酸鎂0.05wt %，磷酸氫二鉀0.02wt %，飲用水余量，pH7.4-7.9。
[0056]發(fā)酵培養(yǎng)基組成為:玉米淀粉6-lOwt%，黃豆餅粉2.0-3.0wt%，葡萄糖2.0wt%,碳酸，酵母粉0.5wt%，硫酸鎂0.08wt%，磷酸氫二鉀0.02wt%，氯化鈉0.2wt%，飲用水余量，pH7.4-7.9。
[0057]液化淀粉制備方法:30wt %的玉米淀粉，0.03wt %耐高溫淀粉酶，85-90 V糊化20分鐘。
[0058]對(duì)比例
[0059]將稠李東方鏈霉菌(streptomycespadanus var.dangfangeusls)凍存抱子管一支接種于200mL裝料種子瓶中，28°C培養(yǎng)40h后，接種于裝有50L種子培養(yǎng)基的種子罐中(種子罐容量為100L)，28 0C培養(yǎng)40h后，轉(zhuǎn)入裝有40m3發(fā)酵培養(yǎng)基的發(fā)酵罐中(發(fā)酵罐容量為60m3)，28 °C培養(yǎng)。在發(fā)酵培養(yǎng)的過(guò)程中不補(bǔ)料，直到130h放罐。
[0060]種子瓶及種子罐中所用的種子培養(yǎng)基組成均為:玉米淀粉1.0wt %，酵母粉
1.0wt %，碳酸Ii0.8wt%，氯化鈉0.3wt%，黃豆餅粉0.5wt%，葡萄糖1.0wt%，蛋白胨0.Iwt %，硫酸鎂0.05wt %，磷酸氫二鉀0.02wt %，飲用水余量，pH7.4-7.9。
[0061 ] 發(fā)酵培養(yǎng)基組成為:玉米淀粉6-lOwt%，黃豆餅粉2.0-3.0wt%，葡萄糖2.0wt%,碳酸，酵母粉0.5wt%，硫酸鎂0.08wt%，磷酸氫二鉀0.02wt%，氯化鈉0.2wt%，飲用水余量，pH7.4-7.9。
[0062]液化淀粉制備方法:30wt %的玉米淀粉，0.03wt %耐高溫淀粉酶，85-90 V糊化20分鐘。
[0063]種子罐培養(yǎng)40h用轉(zhuǎn)子離心機(jī)在3500轉(zhuǎn)，15分鐘的檢測(cè)菌濃為18%。
[0064]發(fā)酵結(jié)束，照抗生素微生物檢定法二劑量法測(cè)定效價(jià)，放罐效價(jià)為458lyg/ mL。
[0065]從對(duì)比例和3個(gè)實(shí)施例的對(duì)比可以看出，本發(fā)明在發(fā)酵過(guò)程中通過(guò)凍存菌絲進(jìn)罐，可以明顯增大種子罐的菌絲量，實(shí)施例1至3種子罐培養(yǎng)40h時(shí)轉(zhuǎn)子離心機(jī)在3500轉(zhuǎn)，15分鐘的檢測(cè)菌濃平均為27.3%，而對(duì)比例中僅為18%，菌濃提高了51.9% ;在發(fā)酵培養(yǎng)過(guò)程中補(bǔ)料，可以大幅度的提高發(fā)酵單位，實(shí)例例I至3中發(fā)酵結(jié)束時(shí)測(cè)定的放罐效價(jià)平均為5618.7μg/mL，對(duì)比例中僅為4581yg/mL，放罐效價(jià)提高了 22.7 %。
[0066]以上所述僅為本發(fā)明的較佳實(shí)施例，并不用以限制本發(fā)明，凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)，所作的任何修改、等同替換、改進(jìn)等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種海南霉素發(fā)酵工藝，其特征在于，包括以下步驟: 51.制備凍存孢子懸液:將稠李東方鏈霉菌SDSL-HNl109 CGMCC N0.5308的孢子接種到斜面培養(yǎng)基上，28 ± I °C下培養(yǎng)7天，用無(wú)菌水洗下斜面培養(yǎng)上的孢子，加入甘油水溶液配成凍存孢子懸液，在-80?-70 °C下保存?zhèn)溆茫? 52.制備凍存菌絲懸液:將SI中的凍存孢子懸液按照I?5vol%。的接種量接種到種子培養(yǎng)基中，28 ± I °C培養(yǎng)，培養(yǎng)40?45h，加入甘油水溶液配成凍存菌絲懸液，在-80?-70°C下保存?zhèn)溆茫?53.制備種子液:將S2中凍存菌絲懸液接種到種子培養(yǎng)基中，經(jīng)過(guò)種子擴(kuò)大培養(yǎng)，得到種子液； 54.發(fā)酵:將S3得到的種子液按照I?5vol%。的接種量接入發(fā)酵培養(yǎng)基中，28土1°C下攪拌并通氣，發(fā)酵培養(yǎng)130?150h，培養(yǎng)過(guò)程中補(bǔ)加液化淀粉。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種海南霉素發(fā)酵工藝，其特征在于，SI及S2中甘油水溶液的濃度為20wt%，SI制備的凍存孢子懸液中甘油水溶液與無(wú)菌水的體積比為I: I，S2制備的凍存菌絲懸液中甘油水溶液與種子培養(yǎng)基的體積比為I: I。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種海南霉素發(fā)酵工藝，其特征在于，S3中的種子擴(kuò)大培養(yǎng)包括兩級(jí)擴(kuò)大:將S2中的凍存菌絲懸液按照10?25vol%。的接種量接種到種子培養(yǎng)基中，28土I °C下培養(yǎng)4 O?4 5 h得中間種子液，將中間種子液按照I?5 V ο I %。的接種量接種至Ij種子培養(yǎng)基中，28 ± 1°C下培養(yǎng)40?45h得種子液。4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種海南霉素發(fā)酵工藝，其特征在于，S4中發(fā)酵培養(yǎng)至發(fā)酵培養(yǎng)基中總糖低于5g/100ml時(shí)開(kāi)始補(bǔ)加液化淀粉，每天補(bǔ)加量為發(fā)酵液總體積的2-3%，發(fā)酵培養(yǎng)結(jié)束前1h停止補(bǔ)加。5.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種海南霉素發(fā)酵工藝，其特征在于，S4中補(bǔ)加液化淀粉的方式為流加。6.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種海南霉素發(fā)酵工藝，其特征在于，S4中補(bǔ)加液化淀粉的濃度為30wt%。7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種海南霉素發(fā)酵工藝，其特征在于，S4中發(fā)酵培養(yǎng)時(shí)的攪拌轉(zhuǎn)速為 50_120r/min、通氣量為 0.5-1.2vvm。8.根據(jù)權(quán)利要求1至7任一項(xiàng)所述的一種海南霉素發(fā)酵工藝，其特征在于，SI中所述的斜面培養(yǎng)基由以下原料組成:玉米淀粉1.0wt%，酵母粉1.0wt%，碳酸I丐0.6wt%，氯化鈉0.2wt %，瓊脂1.7wt %，黃豆餅粉1.0wt %，葡萄糖2.0wt %，蛋白胨0.2wt %，硫酸鎂0.05wt%，磷酸氫二鉀0.02wt%，余量為飲用水。9.根據(jù)權(quán)利要求1至7任一項(xiàng)所述的一種海南霉素發(fā)酵工藝，其特征在于，S2及S3中所述的種子培養(yǎng)基由下原料組成:玉米淀粉1.0wt%，酵母粉1.0wt%，碳酸0.8wt%，氯化鈉0.3wt%，黃豆餅粉0.5wt%，葡萄糖1.0wt%，蛋白胨0.1wt%，硫酸鎂0.05wt%，磷酸氫二鉀0.02wt%，余量為飲用水。10.根據(jù)權(quán)利要求1至7任一項(xiàng)所述的一種海南霉素發(fā)酵工藝，其特征在于，S4中所述的發(fā)酵培養(yǎng)基由以下原料組成:玉米淀粉6-10wt%，黃豆餅粉2.0-3.0wt%，葡萄糖2.0wt%，碳酸，酵母粉0.5wt%，硫酸鎂0.08wt%，磷酸氫二鉀0.02wt%，氯化鈉0.2wt%，余量為飲用水。
【文檔編號(hào)】C12P17/16GK105821092SQ201610279984
【公開(kāi)日】2016年8月3日
【申請(qǐng)日】2016年4月28日
【發(fā)明人】何魯波, 朱傳峰, 陳寧, 李新新, 馬生龍, 譚芳, 吳海燕
【申請(qǐng)人】山東勝利生物工程有限公司