一種利用外生菌根真菌優(yōu)化苗木培育的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種利用外生菌根真菌優(yōu)化苗木培育的方法。其主要過程包括如下步驟：制作外生菌根真菌菌劑，培育樹木幼苗，外生菌根真菌接種，接種后樹苗的營養(yǎng)管理。在實際使用中可針對不同的樹種進行預(yù)實驗，選擇最佳的外生菌根真菌菌種。本發(fā)明采用6種外生菌根真菌作為材料接種于樹苗根系，使樹苗的生長量及移栽存活率得到顯著提高。
【專利說明】
一種利用外生菌根真菌優(yōu)化苗木培育的方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明屬于栽培領(lǐng)域，具體是一種使用與苗木共生的微生物優(yōu)化苗木培育的方 法，尤其涉及一種利用外生菌根真菌優(yōu)化苗木培育的方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 園林綠化過程中新栽植的苗木存在諸多問題，如：苗木生長遲緩，移栽成活率低， 易受病害。為保證其成活及生長，苗木移栽過程中常使用化學(xué)調(diào)節(jié)的方法，但易造成土壤、 基質(zhì)污染，對綠葉觀賞性苗木的后期觀賞性，以及藥用樹木的品質(zhì)安全有較大的影響。外生 菌根菌是一類與樹木互利共生的土壤真菌，在樹苗根系形成菌根共生體后，可促進樹苗的 水分及營養(yǎng)吸收，提高樹苗對不良環(huán)境的抗性。
[0003]菌根菌劑是一種生物活性劑，其作用原理與其他化學(xué)肥料或化學(xué)生長素完全不 同，它是以土壤真菌通過與植物根系的共生作用，從而對植物起到綜合的生理生態(tài)效應(yīng)。它 不僅可以大幅度提高苗木質(zhì)量、造林成活率、幼苗生長量，還可能會從根本上解決在惡劣生 長環(huán)境條件下的造林技術(shù)難題。另外，菌根菌劑的應(yīng)用還會大大減少速效化肥和農(nóng)藥在農(nóng) 業(yè)、林業(yè)中的使用，從而減少硝態(tài)氮及其它有害物質(zhì)對水資源、土壤資源以及大氣資源的污 染，避免土壤板結(jié)、鹽堿化，增強土壤系統(tǒng)的生物活力，提高土壤肥力。
[0004] 在菌劑研究方面，與北美及歐洲一些國家相比，我國起步較晚，基于菌根菌劑優(yōu) 點，今后的造林中可采用新型的菌根菌劑對幼苗實施菌根化接種，尤其在土壤貧瘠的地方 造林和引種，充分發(fā)揮菌根的促生抗逆作用，將對我國林木生態(tài)效益的發(fā)揮起到很大的推 動作用，對于推動我國經(jīng)濟發(fā)展和改善生態(tài)環(huán)境具有十分重要的戰(zhàn)略意義。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，解決移栽苗木生長過程中的上述問題， 提供了一種利用樹木共生外生菌根真菌優(yōu)化苗木生長的方法。
[0006] 為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案如下：
[0007] -種利用外生菌根真菌優(yōu)化苗木培育的方法，包括如下步驟：
[0008] 1)制作外生菌根真菌菌劑:將混合基質(zhì)A與液體培養(yǎng)基按重量比1: 2混合均勻，分 裝到每個三角瓶(600g/個），瓶口用透氣海綿塞緊，置于滅菌鍋中121°C滅菌20分鐘，制備三 角瓶基質(zhì)，
[0009] 所述混合基質(zhì)A為:泥煤苔(peat moss)和蛭石按重量比3:1均勻混合；
[0010] 所述液體培養(yǎng)基為CaCl2 〇.〇5g/L，MgS〇4 〇.15g/L，NaCl 0.025g/L，F(xiàn)eCl3(l%質(zhì) 量體積比）1.2ml，KH2P〇4 〇.5g/L，Vitamin B1 10mg/L，（NH4)2HP〇4 0.25g/L，葡萄糖 15g/L， 朽1檬酸〇.2g/L，蒸餾水lL，pH 5.7。
[0011] 在無菌環(huán)境下，將固體培養(yǎng)基b上保存培養(yǎng)的外生菌根真菌菌絲體分別用接種棒 分割為I cm2的小塊，等比例分別接種，每三角瓶接種10-20cm2混合菌絲體，放置于25 °C黑暗 通風(fēng)環(huán)境下培養(yǎng)1個月，即得外生菌根真菌菌劑。
[0012] 所述外生菌分別為彩色豆馬勃（Pisolithus tinctorius)，土生空團菌 (Cenocuccum geophinum)，紅錯蘑（Laccaria Iaccata)，紅根須腹菌（Rhizopogon rubescens)，粘蓋牛肝菌（Suillus bovinus)，大紅^(Russula sanguinaria)。
[0013]所述固體培養(yǎng)基b配方為：CaCl2 0.05g/L，MgS〇4 0.15g/L，NaCl 0.025g/L，F(xiàn)eCl3 (l%)1.2ml，KH2P〇4 0.5g/L，Vitamin BI 10mg/L，（NH4)2HP〇4 0.25g/L，葡萄糖 15g/L，瓊脂 15g/L，蒸餾水lL，pH 5.5。
[0014] 2)將樹木種子清洗消毒后，自來水浸泡24小時，播種于裝有滅過菌的混合基質(zhì)B的 塑料盆缽(50cm X 30cm X 20cm)內(nèi)，盆缽置于通風(fēng)溫室內(nèi)，每兩天噴水一次，保持基質(zhì)表面濕 潤，種子萌發(fā)30天后的幼苗用于接種。
[0015]混合基質(zhì)B組分為:珍珠巖+草炭+苗圃土按2:2:3體積比混合。
[0016] 3)將外生菌根真菌菌劑和滅菌混合基質(zhì)C按1:5重量比混合均勻，分裝于塑料盆缽 (50cm X 30cm X 20cm)內(nèi)，挑選長勢良好根系發(fā)達的松樹苗，清洗幼苗根系，移栽于盆缽內(nèi)， 每盆缽移栽約50棵幼苗，約3-4天澆水一次；
[0017] 所述混合基質(zhì)C組分為:珍珠巖+草炭+苗圃土按3:3:2體積混合。
[0018] 4)接種20天后，間苗至每盆缽保留10棵長勢最佳的幼苗，每隔10天噴施一次營養(yǎng) 液，每盆缽用量為l〇〇ml，30天后每盆缽用量為200ml。接種90天后，容器苗可用于培育盆景 或移栽于苗圃種植，移栽過程中應(yīng)盡量保持樹苗根系完整，根系附帶少量的基質(zhì)以保持菌 根的適應(yīng)力。
[0019] 本發(fā)明相比現(xiàn)有技術(shù)具有如下優(yōu)點:苗木經(jīng)侵染后根系數(shù)目增加，生長良好，移栽 后成活率提高;獲得的樹苗生長健壯，株型緊湊，觀賞價值高；同時減少了對土壤和基質(zhì)的 污染，生態(tài)環(huán)保;方法便于操作，降低小苗培育及后期管理過程中的成本，提高生產(chǎn)效率，可 用于培育園林綠化珍貴樹種及珍稀藥用苗木。
【具體實施方式】
[0020] 實施例1:
[0021] 實施案例以馬尾松為材料，采用上述六種外生菌根真菌等比例混合制作菌劑，接 種于馬尾松幼苗根系，于接種后90天測定幼苗生長狀況，并用體視顯微鏡觀察幼苗根系菌 根率。樹苗接種90天后移栽于30cm X 25cm盆缽，移栽一年后觀察幼苗的生長情況。
[0022] 1.材料準(zhǔn)備
[0023]幼苗培養(yǎng):采集當(dāng)年馬尾松種子，于4°C保存兩個月以上。稱取10克種子，用3%的 次氯酸鈉溶液浸泡消毒15分鐘，洗凈后用清水浸泡24小時，然后播種于塑料盆缽內(nèi)，隔天澆 水一次保持土表濕潤。
[0024]將混合基質(zhì)A與液體培養(yǎng)基按重量比1: 2混合均勻，分裝到每個三角瓶(600g/個）， 瓶口用透氣海綿塞緊，置于滅菌鍋中121°C滅菌20分鐘，制備三角瓶基質(zhì)，
[0025]所述混合基質(zhì)A為:泥煤苔(peat moss)和蛭石按重量比3:1均勻混合；
[0026] 所述液體培養(yǎng)基為CaCl2 0.05g/L，MgS〇4 0.15g/L，NaCl 0.025g/L，F(xiàn)eCl3 1.2ml， KH2P〇4 0.5g/L，Vitamin B1 10mg/L，（NH4)2HP〇4 0.25g/L，葡萄糖 15g/L，梓檬酸0.2g/L，蒸 餾水IUpH 5.7。
[0027] FeCl3為 1% 的溶液，lg/100Ml。
[0028] 在無菌環(huán)境下，將固體培養(yǎng)基b上保存培養(yǎng)的外生菌根真菌菌絲體分別用接種棒 分割為I cm2的小塊，等比例分別接種，每三角瓶接種10-20cm2混合菌絲體，放置于25 °C黑暗 通風(fēng)環(huán)境下培養(yǎng)1個月，即得外生菌根真菌菌劑。
[0029] 所述外生菌分別為彩色豆馬勃（Pi so I i thus t inc tor ius )，土生空團菌 (Cenocuccum geophinum)，紅錯蘑（Laccaria Iaccata)，紅根須腹菌（Rhizopogon rubescens)，粘蓋牛肝菌（Suillus bovinus)，大紅^(Russula sanguinaria)。
[0030] 所述固體培養(yǎng)基b配方為：CaCl2 0.05g/L，MgS〇4 0.15g/L，NaCl 0.025g/L，F(xiàn)eCl3 (l%)1.2ml，KH2P〇4 0.5g/L，Vitamin BI 10mg/L，（NH4)2HP〇4 0.25g/L，葡萄糖 15g/L，瓊脂 15g/L，蒸餾水lL，pH 5.5。
[0031] 將樹木種子清洗消毒后，自來水浸泡24小時，播種于裝有滅過菌的混合基質(zhì)B的塑 料盆缽（50cm X 30cm X 20cm)內(nèi)，盆缽置于通風(fēng)溫室內(nèi)，每兩天噴水一次，保持基質(zhì)表面濕 潤，種子萌發(fā)30天后的幼苗用于接種。
[0032]混合基質(zhì)B組分為:珍珠巖+草炭+苗圃土按2:2:3體積比混合。
[0033] 2.苗木接種
[0034]將外生菌根真菌菌劑和滅菌混合基質(zhì)C按質(zhì)量比1: 5混合均勻，分裝于塑料盆缽 內(nèi)，挑選長勢良好的松樹苗，清洗幼苗根系，移栽于盆缽內(nèi)，約3-4天澆水一次，每組接種處 理及不接種的對照處理設(shè)3組重復(fù)，每組重復(fù)10株苗。
[0035]所述混合基質(zhì)C組分為:珍珠巖+草炭+苗圃土按3:3:2體積混合。
[0036] 3.苗木管理及移栽
[0037]接種20天后，間苗至每盆缽保留10棵長勢最佳且均一的幼苗，每隔10天噴施營養(yǎng) 液，每盆缽用量為l〇〇ml，30天后每盆缽用量為200ml。接種90天后，測定樹苗的生物量及株 高、胸徑，并用體視顯微鏡觀察樹苗根系菌根率。接種90天后將苗木移栽入20cmX 25cm盆缽 內(nèi)，移栽1年后觀察樹苗生長情況，統(tǒng)計樹苗存活率，生物量及株高。
[0038] 馬尾松樹苗接種混合外生菌根真菌90天后，體式顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn)，所有接種后的 幼苗根系均成功與外生菌根真菌形成良好的菌根結(jié)構(gòu)，形成大量的外延菌絲，有效提高了 樹苗的根系吸收面積。
[0039] 對照組分別設(shè)置空白對照組:不施用外生菌；
[0040] 對照1-6組，與實施例1組的區(qū)別僅在于，菌劑由混合菌劑等比例混合改為單一菌 劑，單一菌分別為1#彩色豆馬勃（Pisolithus tinetorius)，2#土生空團菌（Cenocuccum geophinum)，3#紅錯蘑（Laccaria laccata)，4#紅根須腹菌（Rhizopogon rubescens)，5#粘 蓋牛肝菌（Suillus bovinus)，6#大紅^(Russula sanguinaria)
[0041] 通過測定樹苗生長的基本數(shù)據(jù)，發(fā)現(xiàn)外生菌根菌接種處理的幼苗地上部及地下部 生物量、株高、胸徑顯著高于不接種的對照處理，其中混合真菌接種處理效果顯著高于其他 真菌接種處理。
[0042]表1實施案例馬尾松樹苗接種90天后生長情況及根系菌根侵染率(P<0.05)
[0044] 馬尾松幼苗盆缽移栽1年后，外生菌根菌接種的樹苗地上部發(fā)達，株高、針葉數(shù)量、 針葉長度顯著高于不接種的對照苗，菌根真菌接種的樹苗存活率、生物量、株高、胸徑均顯 著高于不接種的對照苗，其中本發(fā)明組真菌接種的樹苗存活率為100%，且地上部生物量達 到對照苗的7倍以上，地下部生物量達到對照苗的3.6倍，均顯著高于其他真菌接種的樹苗。
[0045] 表2實施案例馬尾松樹苗移栽12個月后生長情況統(tǒng)計
[0047]該案例驗證了該方法在樹木容器苗育苗中具有可實施性，具有顯著提高樹苗生長 及移栽存活率的作用，針對不同的樹苗可選用相應(yīng)的外生菌根菌種來實施，大量生產(chǎn)前可 做預(yù)實驗來選擇最合適該樹種的外生菌根菌菌種。
[0048]雖然，上文中已經(jīng)用一般性說明及具體實施方案對本發(fā)明作了詳盡的描述，但在 本發(fā)明基礎(chǔ)上，可以對之作一些修改或改進，或在實施案例之外的樹種實施本方法，這對本 領(lǐng)域技術(shù)人員而言是顯而易見的。
[0049]因此，在不偏離本發(fā)明精神的基礎(chǔ)上所做的這些修改，改進或范圍的擴大，均屬于 本發(fā)明要求保護的范圍。
【主權(quán)項】
1. 一種利用外生菌根真菌優(yōu)化苗木培育的方法，其特征在于，包括如下步驟： (1)制作外生菌根真菌菌劑:將混合基質(zhì)A與液體培養(yǎng)基按重量比1:2混合均勻，制備三 角瓶基質(zhì)，將外生菌根真菌菌絲體分別用接種棒分割為lcm2的小塊，每三角瓶接種10-20cm2 菌絲體，放置于25°C黑暗通風(fēng)環(huán)境下培養(yǎng)1個月，即得外生菌根真菌菌劑； 所述混合基質(zhì)A為:泥煤苔和蛭石按重量比3:1均勻混合； 所述液體培養(yǎng)基為 CaCl2 0.05g/L，MgS〇4 0.15g/L，NaCl 0.025g/L，l% 的 FeCl3 1.2ml，KH2P〇4 0.5g/L，Vitamin B! 10mg/L，（NH4)2HP〇4 0.25g/L，葡萄糖 15g/L，檸檬酸 0.2g/L，蒸餾水lL，pH 5.7; 2) 將松樹種子清洗消毒后，播種于裝有混合基質(zhì)B的塑料盆缽，培養(yǎng)30天，制備松樹苗； 混合基質(zhì)B組分為:珍珠巖+草炭+苗圃土按2:2:3體積比混合； 3) 將步驟1)制備的外生菌根真菌菌劑和滅菌混合基質(zhì)C按1:5重量比混合均勻，分裝于 塑料盆缽內(nèi)，挑選長勢良好根系發(fā)達步驟2)制備的松樹苗，移栽于盆缽內(nèi)； 所述混合基質(zhì)C組分為:珍珠巖+草炭+苗圃土按3:3:2體積比混合； 4) 接種培養(yǎng)。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述外生菌根菌為彩色豆馬勃 (Pisolithus tinctorius)、土生空團菌（Cenocuccum geophinum)、紅錯蘑（Laccaria laccata)、紅根須腹菌(Rhizopogon rubescens)、粘蓋牛肝菌（Suillus bovinus)、大紅燕 (Russula sanguinaria)〇3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述外生菌根菌的菌絲體分別用接種棒分 割為1 cm2的小塊，等比例分別接種，每三角瓶接種10-20cm2混合菌絲體，放置于25 °C黑暗通 風(fēng)環(huán)境下培養(yǎng)1個月，即得外生菌根真菌菌劑； 所述外生菌根菌分別為彩色豆馬勃（Pisolithus tinctorius)，土生空團菌 (Cenocuccum geophinum)，紅錯蘑（Laccaria laccata)，紅根須腹菌（Rhizopogon rubescens)，粘蓋牛肝菌（Suillus bovinus)，大紅^(Russula sanguinaria)。4. 根據(jù)權(quán)利要求1-3所述的方法，其特征在于，步驟4)具體操作為:接種20天后，每盆缽 保留10棵長勢最佳的幼苗，每隔10天噴施一次營養(yǎng)液，每盆缽用量為l〇〇ml，30天后每盆缽 用量為200ml，接種90天后，容器苗用于培育盆景或移栽于苗圃種植，移栽過程中應(yīng)盡量保 持樹苗根系完整，根系附帶少量的基質(zhì)以保持菌根的適應(yīng)力。5. 權(quán)利要求1-4所述方法用于優(yōu)化苗木培育的用途。
【文檔編號】A01P21/00GK105861315SQ201510821090
【公開日】2016年8月17日
【申請日】2015年11月22日
【發(fā)明人】劉雁麗, 薛峰, 王宜森, 張志南
【申請人】南京金埔園林股份有限公司