一種am菌根真菌mw21及其生防菌劑及應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明植物保護(hù)領(lǐng)域，涉及一種AM菌根真菌MW21及其生防菌劑及應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 木本植物病害主要有52種，其中葉部病害32種，枝干病害9種，根部病害5種、花 果病害6種。其病源有真菌、細(xì)菌、病毒、類菌質(zhì)體、線蟲、寄生性種子植物以及非侵染性因 素。雖對(duì)病害防治做了一些工作，但總的看重視不夠，輕的使樹木生長(zhǎng)衰弱，降低觀賞價(jià)值， 重則死亡，造成不可彌補(bǔ)的社會(huì)、生態(tài)及經(jīng)濟(jì)效益損失。如地上部病害炭疽病是世界范圍內(nèi) 農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中發(fā)生普遍且危害較重的植物病害，對(duì)許多林木、果樹、茶樹、銀杏等造成嚴(yán)重的 經(jīng)濟(jì)損失，主要危害葉片和嫩梢；地下部病害根部病害白紋羽病，為害海棠、芍藥、蘋果、葡 萄、梅、桃等。植物染病后，樹勢(shì)衰弱，葉片自上而下變黃，凋萎，枝葉干枯，最后全株枯死。
[0003] 因此，對(duì)木本植物病害防治刻不容緩。目前，已有一些防治方法：選用抗病品種，移 除病株、集中處理，加強(qiáng)田間管理等物理措施；施用甲基硫菌靈、井閃霉素、百菌清、多菌靈 等化學(xué)農(nóng)藥。由于化學(xué)農(nóng)藥對(duì)環(huán)境以及人類健康的危害已日益明顯，近年來，出現(xiàn)了一些生 物防治手段，如利用生防菌株或天然代謝產(chǎn)物等進(jìn)行生物防治，取得了一定的成果，但是其 效果不穩(wěn)定等缺陷限制了其進(jìn)一步的推廣。因此高效、穩(wěn)定的防治木本植物病害的生防菌 株及其制劑的研發(fā)是迫切需要的。
[0004] 隨著氣候的變化日益劇烈，不良環(huán)境對(duì)木本植物的生長(zhǎng)造成造成植株矮小、生長(zhǎng) 不良，易產(chǎn)生生理性病害等嚴(yán)重后果，不良環(huán)境包括干旱、洪澇、高溫、寒冷等惡劣天氣。
[0005] 另外，木本植物在移栽時(shí)，遇到移栽存活率低下，以及移栽后生長(zhǎng)勢(shì)弱，是制約木 本植物栽培的重要因素。目前，在生產(chǎn)上主要通過選用具有良好排水性和透氣性的基質(zhì)配 方、加強(qiáng)移栽后的管理以及利用植物激素，以提高其存活率以及移栽后生長(zhǎng)勢(shì)。但是，這些 應(yīng)用的提高并不十分顯著、穩(wěn)定。
[0006]AM菌根真菌（arbuscularmycorrhizalfungi，以下簡(jiǎn)稱AM真菌）可以在植物根 系定植，建立共生體。AM真菌的菌絲從環(huán)境中吸收營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，轉(zhuǎn)運(yùn)至寄主植株，類似于以菌 絲代替活體植物的根的部分功能，為寄主提供一定的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。且AM真菌還能夠調(diào)節(jié)寄主 體內(nèi)激素的平衡，如生長(zhǎng)素、細(xì)胞分裂素等，提高光合作用速率，促進(jìn)寄主的生長(zhǎng)，提高其存 活率。AM菌還能夠抑制病原菌、促進(jìn)有益菌生長(zhǎng)的作用，可與其他拮抗菌結(jié)合。生防菌AM 真菌誘導(dǎo)抗性及誘導(dǎo)系統(tǒng)抗性，即AM菌侵染植物根系后，誘導(dǎo)植物體內(nèi)酚酸類代謝產(chǎn)物增 加，使植物產(chǎn)生局部或系統(tǒng)防御反應(yīng)。并且還能誘導(dǎo)木本植物的抵抗逆境的能力。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007] 本發(fā)明的目的是針對(duì)木本植物上現(xiàn)有技術(shù)的上述不足，提供一種AM菌根真菌 MW21〇
[0008] 本發(fā)明的目的是提供該AM菌根真菌MW21制備的生防菌劑。
[0009]本發(fā)明的又一目的是提供該AM菌根真菌麗21及其生防菌劑在木本植物上的應(yīng) 用。
[0010] 本發(fā)明的目的可通過如下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)：
[0011] -種AM菌根真菌MW21，該菌株為微白巨孢囊霉（Gigasporaalbida)，于2014年 11月25日保藏于中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，菌種保藏號(hào)為CGMCC No.10058。
[0012] 本發(fā)明所述的叢枝菌根真菌MW21在制備防治木本植物病害、促進(jìn)木本植物生長(zhǎng)、 提高果實(shí)產(chǎn)量和質(zhì)量、提高木本植物抗逆性的制劑中的應(yīng)用。
[0013] 其中，所述的木本植物優(yōu)選鵝掌楸、蘋果樹、葡萄樹、銀杏；所述的病害優(yōu)選真菌、 細(xì)菌、病毒病害，進(jìn)一步優(yōu)選白紋羽病或炭疽??；所述的抗逆能力優(yōu)選抗寒、抗寒、耐熱或耐 澇能力，進(jìn)一步優(yōu)選抗旱能力；所述的促進(jìn)生長(zhǎng)優(yōu)選包括提高種子發(fā)芽率、幼苗移栽存活 率，或促進(jìn)地上部枝葉、根部生長(zhǎng)。
[0014] 用本發(fā)明所述的AM菌根真菌麗21制備的生防菌劑。
[0015] 所述的生防菌劑優(yōu)選將含有本發(fā)明所述的AM菌根真菌麗21孢子的土按照一定 比例與高嶺土混合，烘干后粉碎，并加入1 %的阿拉伯膠，以及添加磷酸二氫鈉將pH調(diào)整至 7. 0,過300目篩，并烘干至3 %的含水量，制成濃度為40 - 60個(gè)孢子/g的粉劑；或者經(jīng)造 粒制成顆粒劑或經(jīng)壓片制成片劑。
[0016] 本發(fā)明所述的生防菌劑的制備方法，包括以下步驟：
[0017] 1)將含有本發(fā)明所述的濃度為40 - 60個(gè)麗21孢子/g的土按體積比1:80 - 120 的比例與培養(yǎng)基質(zhì)均勻混合，所述培養(yǎng)基質(zhì)配方：泥炭土與經(jīng)過至少2h熱氣蒸過的粗砂體 積比1:0. 5 - 3混合；
[0018] 2)將混合好含MW21孢子的基質(zhì)裝入滅菌后的盆缽，并種上寄主植物，保證孢子能 很充分的跟高粱接觸到，4個(gè)月后，將盆缽內(nèi)的土壤和寄主植物根系一塊取出，烘干，粉碎， 保持干燥，制得含菌根真菌MW21孢子的土壤，備用；所述的寄主植物優(yōu)選高粱或三葉草；
[0019] 3)制劑：將步驟2)制得的含菌根真菌麗21孢子的土壤與高嶺土混合，烘干后粉 碎，粉碎過程中加入質(zhì)量比1 %的阿拉伯膠，并添加磷酸二氫鈉將pH調(diào)整至7. 0,過300目 篩，再次烘干至含水量為3%，最終制成濃度為40 - 60個(gè)孢子/g的生防菌MW21粉劑；或者 經(jīng)造粒制成顆粒劑或經(jīng)壓片制成片劑。
[0020] 本發(fā)明所述的生防菌劑的制備方法，優(yōu)選包括以下步驟：
[0021] 1)將含有本發(fā)明所述的菌株麗21孢子的土按體積比1:80 - 120的比例與培養(yǎng)基 質(zhì)均勻混合，所述培養(yǎng)基質(zhì)配方：泥炭土與經(jīng)過至少2h熱氣蒸過的粗砂體積比1:0. 5 -3混 合；
[0022] 2)將混合好含孢子的基質(zhì)裝入滅菌后地盆缽，并種上高粱，每個(gè)盆缽50-60顆種 子，保證孢子能很充分的跟高粱接觸到，4個(gè)月后，將盆缽內(nèi)的土壤和高粱根系一塊取出，烘 干，粉碎至800目，保持干燥，制得含菌根真菌孢子的土壤，備用；
[0023] 3)制劑：將步驟2)制得的含菌根真菌孢子的土壤與高嶺土混合，烘干后粉碎至 300目，粉碎過程中加入質(zhì)量比1 %的阿拉伯膠，并添加磷酸二氫鈉將pH調(diào)整至7. 0,過300 目篩，再次烘干至含水量為3%，最終制成濃度為40 - 60個(gè)孢子/g的生防菌MW21粉劑；或 者經(jīng)造粒制成顆粒劑或經(jīng)壓片制成片劑。
[0024] 本發(fā)明所述生防菌劑MW21在防治木本植物病害、促進(jìn)木本植物生長(zhǎng)、提高果實(shí)產(chǎn) 量和質(zhì)量、提高木本植物抗逆性中的應(yīng)用。
[0025]其中，所述的木本植物優(yōu)選鵝掌楸、蘋果樹、葡萄樹、銀杏；所述的病害優(yōu)選真菌、 細(xì)菌、病毒病害，進(jìn)一步優(yōu)選白紋羽病或炭疽?。凰龅目鼓婺芰?yōu)選抗寒、抗寒、耐熱或耐 澇能力，進(jìn)一步優(yōu)選抗旱能力；所述的促進(jìn)生長(zhǎng)優(yōu)選包括提高種子發(fā)芽率、幼苗移栽存活 率，或促進(jìn)地上部枝葉、根部生長(zhǎng)。
[0026]所述的生防菌劑優(yōu)選撒在移栽苗木根部，按照每株2g的用量進(jìn)行應(yīng)用。
[0027]有益效果：
[0028]本發(fā)明提供了一株對(duì)木本植物具備促生、防病、抗逆作用的AM菌根真菌MW21。利 用該菌株制備的生防菌劑是針對(duì)提高對(duì)木本植物根部病害以及地上部病害的生物防治效 果以及促生和抗逆的制劑。由于是生物制劑，完全沒有因化學(xué)農(nóng)藥的使用所帶來的一系列 問題，因而能有效保護(hù)生態(tài)系統(tǒng)，實(shí)施農(nóng)業(yè)的可持續(xù)發(fā)展，且在生產(chǎn)上對(duì)環(huán)境無污染。撒在 移栽苗木根部的處理方式，可減少化學(xué)藥劑的大量使用。
[0029]溫室試驗(yàn)表明，AM真菌粉劑高對(duì)木本植物根部病害以及地上部病害有顯著的生防 效果，且對(duì)木本植物如蘋果、葡萄、鵝掌楸有明顯的促生作用，增加苗木的株高、莖粗、上下 部鮮干重、葉綠素a、葉綠素b以及總?cè)~綠素含量。
[0030]該菌根真菌MW21粉劑，可室溫保存6個(gè)月-1年。該制劑對(duì)木本植物的白紋羽病 等各種土傳病害的防治效果達(dá)到60%以上，對(duì)炭疽病等各種地上部病害的防治效果達(dá)到 52. 29%以上；在溫室條件下木本植物的移栽存活率達(dá)92. 36%以上；AM真菌處理的木本植 物在葉綠素a、葉綠素b、總?cè)~綠素含量、株高、莖粗、上下部鮮干重顯著提高，對(duì)其具有一定 的促生作用。
【附圖說明】
[0031]圖1、AM菌劑處理對(duì)木本植物耐旱性的影響
[0032]生物材料保藏信息
[0033] 生防菌AM菌根真菌MW21，為微白巨孢囊霉（Gigasporaalbida)，于2014年11 月25日保藏于中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，菌種保藏號(hào)為CGMCC NO. 10058,地址：北京市朝陽區(qū)北辰西路1號(hào)院3號(hào)中科院微生物研宄所。
【具體實(shí)施方式】
[0034] 實(shí)施例1
[0035]-種生防制劑AM菌根真菌麗21粉劑，含微生物成分：AM菌根真菌麗21 (保藏號(hào)CGMCCNo.10058)由貴州省煙草根圍土壤中分離得到。
[0036]AM菌根真菌MW21的分離、鑒定方法：用濕篩傾注-蔗糖離心法分離AM真菌孢子， 稱取l〇〇g土樣于離心管中，加水至離心管2/3處，3000rpm離心3min中后去掉上清液，加入 45%-50%的蔗糖溶液，攪勻后迅速1500印111離心1.51^11，過400目篩，并用水輕輕沖洗篩 子上面的孢子和孢子果，用生理鹽水收集于培養(yǎng)皿中，在顯微鏡下統(tǒng)計(jì)孢子數(shù)目并觀察孢 子形態(tài)。
[0037] 麗21形態(tài)學(xué)特征：孢子土中單生，球形，白色，143 - 330 ( - 350)ym，偶見橢圓形， 233 -252X234 -250ym。孢壁由不可分的多個(gè)亞層組成，厚4-12ym。鱗莖狀柄樣細(xì)胞無 色至黃色，24 - 55ym。孢壁輕壓易碎，連孢菌絲有隔有分支。MW21經(jīng)形態(tài)學(xué)鑒定為微白巨 孢囊霉（Gigasporaalbida)，送交中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心保藏， 菌種保藏號(hào)為CGMCCNO. 10058。
[0038] 實(shí)施例2麗21粉劑工藝
[0039] 該AM真菌麗21粉劑的制備方法如下：
[0040] 1)將含有所述的菌株麗21孢子的土壤按體積1:80 - 120的比例與培養(yǎng)基質(zhì)均勻 混合，基質(zhì)配方：泥炭土（購買于南京棲霞區(qū)大理花丼銷售中心）與經(jīng)過至少2h熱氣蒸過 的粗砂（購買于南京棲霞區(qū)大理花丼銷售中心）1 :〇. 5 - 3混合；
[0041] 2)將混合好含孢子的基質(zhì)裝入滅菌后地盆缽（直徑15cm,高19cm)，并種上高粱， 每個(gè)盆缽50-60顆種子，保證孢子能很充分的跟高粱接觸到。4個(gè)月后，將盆缽內(nèi)的土壤和 高粱根系一塊取出，烘干，粉碎至800目，保持干燥，制得含菌根真菌孢子的土壤，備用；
[0042] 3)