国产精品1024永久观看,大尺度欧美暖暖视频在线观看,亚洲宅男精品一区在线观看,欧美日韩一区二区三区视频,2021中文字幕在线观看

  • <option id="fbvk0"></option>
    1. <rt id="fbvk0"><tr id="fbvk0"></tr></rt>
      <center id="fbvk0"><optgroup id="fbvk0"></optgroup></center>
      <center id="fbvk0"></center>

      <li id="fbvk0"><abbr id="fbvk0"><dl id="fbvk0"></dl></abbr></li>

      一種近視風(fēng)險評估的基因檢測試劑盒及其檢測方法

      文檔序號:10506116閱讀:593來源:國知局
      一種近視風(fēng)險評估的基因檢測試劑盒及其檢測方法
      【專利摘要】本發(fā)明公開了一種近視風(fēng)險評估的基因檢測試劑盒及其檢測方法,包括盒體及盒體內(nèi)單獨存放試劑,單獨存放試劑包括:(1)針對2個基因SNP多態(tài)位點的PCR反應(yīng)引物組;(2)PCR擴增試劑;(3)瓊脂糖凝膠電泳分析試劑。本發(fā)明通過PCR引物的設(shè)計使多個PCR擴增反應(yīng)在同一臺PCR儀上同步進行,對受測者的相關(guān)基因進行檢測,并實現(xiàn)檢測的高效性、特異性,分析得到受測者發(fā)展成為高度近視的風(fēng)險,為其發(fā)現(xiàn)近視的遺傳與基因內(nèi)在因素,能夠更好的為受測者提供科學(xué)的參考,幫助其改善、調(diào)理生活工作習(xí)慣,以預(yù)防或降低近視的風(fēng)險,同時在日常生活中采取相應(yīng)的策略避免對其無效甚至是有害的方法。
      【專利說明】
      -種近視風(fēng)險評估的基因檢測試劑盒及其檢測方法
      技術(shù)領(lǐng)域
      [0001] 本發(fā)明設(shè)及基因檢測領(lǐng)域,具體是一種近視風(fēng)險評估的基因檢測試劑盒及其檢測 方法。
      【背景技術(shù)】
      [0002] 近視,是指眼在調(diào)節(jié)松弛狀態(tài)下,平行光線經(jīng)眼的屈光系統(tǒng)的折射后,光線在視網(wǎng) 膜前聚焦而非在視網(wǎng)膜上聚焦,運通常是因為晶狀體的增厚和老化所導(dǎo)致,近視受先天遺 傳因素和后天環(huán)境因素的共同影響。調(diào)查表明,近視的產(chǎn)生受遺傳的影響比較大。如果父母 兩人都是近視,子女同樣近視的幾率高達33-60%;如果父母一方是近視,子女近視的幾率 降低到23-40%;如果父母兩人都不近視,則子女近視的幾率只有6-15%。與近視眼有關(guān)聯(lián) 的基因在眼睛發(fā)育W及視覺信號向大腦的傳遞過程中發(fā)揮著關(guān)鍵作用。該類基因一旦出現(xiàn) 缺陷,眼球就可能過度發(fā)育生長,導(dǎo)致觀看遠處物體時發(fā)生視覺模糊,近視形成。
      [0003] 很顯然,近視的發(fā)生深受遺傳因素的影響。2001年英國研究者對226對同卵李生成 年人和280對異卵李生成年人的研究表明,近視的遺傳率高達0.89,也就是說,近視主要受 基因控制,與后天因素的關(guān)系不大。差不多同時丹麥研究者對53對同卵和61對異卵李生成 年人的研究也得出了相同的結(jié)論。
      [0004] 不過,基因的表達離不開環(huán)境因素的作用,某些環(huán)境因素(例如閱讀)可能是近視 的誘因。另外某些人在某些環(huán)境因素的刺激下,天生就比較容易得近視??傊瑢暤幕?因檢測將會幫助我們更好的了解遺傳因素的影響,避免不利的環(huán)境因素誘發(fā),更好的保護 視力。

      【發(fā)明內(nèi)容】

      [0005] 本發(fā)明的目的在于提供一種近視風(fēng)險評估的基因檢測試劑盒及其檢測方法,該試 劑盒對受測者的相關(guān)基因進行檢測,分析得到受測者發(fā)展成為高度近視的風(fēng)險,為其發(fā)現(xiàn) 近視的遺傳與基因內(nèi)在因素,能夠更好的為受測者提供科學(xué)的參考,幫助其改善、調(diào)理生活 工作習(xí)慣,W預(yù)防或降低近視的風(fēng)險,同時在日常生活中采取相應(yīng)的策略避免對其無效甚 至是有害的方法。且PCR擴增反應(yīng)在同一臺PCR儀上同步進行并具備檢測的高效性、特異性, W解決上述【背景技術(shù)】中提出的問題。
      [0006] 為實現(xiàn)上述目的,本發(fā)明提供如下技術(shù)方案:
      [0007] 本實施例對測試者采用近視風(fēng)險評估基因檢測試劑盒同時檢測2個基因的SNP多 態(tài)位點,并根據(jù)基因分型結(jié)果,分析得到受測者發(fā)展成為高度近視的風(fēng)險,為其發(fā)現(xiàn)近視的 遺傳與基因內(nèi)在因素,能夠更好的為受測者提供科學(xué)的參考,幫助其改善、調(diào)理生活工作習(xí) 慣,W預(yù)防或降低近視的風(fēng)險,同時在日常生活中采取相應(yīng)的策略避免對其無效甚至是有 害的方法。
      [000引一種近視風(fēng)險評估的基因檢測試劑盒,包括盒體及盒體內(nèi)單獨存放試劑,所述單 獨存放試劑包括:
      [0009] (I)針對2個基因 SNP多態(tài)位點的PCR反應(yīng)引物組,引物序列方向均為5 '端至3 '端:
      [0010] ①針對SNP rsl89798的引物組:
      [0011] 1 GTAGTGCTG GTGG
      [0012] 2 CAGAGAGAGCACTTCAG
      [0013] 3 GACAGA GACATTGAGGC
      [0014] 4 GGAATACTGCAAGATCCGT
      [0015] ②針對SNP rs100 34228的引物組:
      [0016] 1 GGTGCTCTCT CAAGCCTTTG
      [0017] 2 CTTTTGTGCCTCCACTATTC
      [0018] 3 GAAGAAGTCA GAGATGTGTAT
      [0019] 4 GACTGCCACACTAACAAAT;
      [0020] (2)PCR擴增試劑:IOXPCR緩沖液,該PCR緩沖液由90~IlOmM Tris-HCl P冊.3、 480~520mM KCU13~17mM MgC12組成;dNTPs混合物,該dNTPs混合物由S憐酸鳥嚷嶺脫氧 核巧酸dGTP、=憐酸腺嚷嶺脫氧核巧酸dATP、=憐酸胸腺喀晚脫氧核巧酸dTTP、=憐酸胞喀 晚脫氧核巧酸dCTP四種核巧酸組成,各組分濃度為2.2~2. SmM; 4~抓AU熱啟動化q酶;基 因組模板;
      [0021] (3)瓊脂糖凝膠電泳分析試劑:瓊脂糖、TAE緩沖液、DNA分子量標(biāo)準(zhǔn)、Goldvi ew染色 液和DNA上樣緩沖液,該緩沖液W漠酪藍為指示劑稀釋至1倍后使用。
      [0022] 作為本發(fā)明進一步的方案:所述DNA無毒染色液為Biotium Gelred無毒染料或 Goldview染色液。
      [0023] -種所述的近視風(fēng)險評估的基因檢測試劑盒的檢測方法,步驟如下:
      [0024] (1)提取樣本基因組DNA
      [0025] 采集測試者唾液,向1~2ml唾液樣品中加入480~52化L提取緩沖溶液,該提取緩 沖溶液溶劑為48~52mM的化is-肥1 pH7.4、0.4~0.6mM的抓TA和48~52mM的化Cl,反復(fù)吹 打混勻后,8000 Xg離屯、4~6min,棄去上清,此步驟重復(fù)一次;得到的沉淀中加入480~52化 L裂解液,該裂解液溶劑為48~52mM化is-HCl抑7.4,48~52mM化is-HClpH7.4,145~ 155mMNaCl,0.9~l.lmMEDTA,0.9~l.l%Tritonx-100,0.9~l.l%Sodium deo巧cholate,0.09~0.11 % SDS,蛋白酶K20mg/mL,徹底懸浮沉淀并充分混勻后,室溫放置 28~32min,期間來回顛倒離屯、管數(shù)次;得到的混合液中,加入濃度為9~1 Img/mL RNA酶的 水溶液9~11化,36~38°C下靜置IOmin;得到的上清液中,加入等體積苯酪-氯仿混合溶液, 苯酪和氯仿體積比為0.9~1.1:1,充分混勻,混合液3~5°C,12000 Xg離屯、4~6min,上清液 移入干凈離屯、管內(nèi);加入等體積苯氛-氯仿-異戊醇混合溶液,苯酪、氯仿和異戊醇體積比為 24~26:23~25:1,充分混勻后,3~5°C,12000 Xg離屯、4~6min,上清液移入干凈離屯、管內(nèi); 加入等體積氯仿-異戊醇混合溶液,充分混勻后,3~5°C,12000 Xg離屯、4~6min,上清液移 入干凈離屯、管內(nèi);加入0.5~0.7倍體積的冰浴異丙醇溶液及0.09~0.11倍的2.8~3.2mol/ L醋酸鋼溶液,-19~-2rC靜置57~63min,3~5°C,12000 X g離屯、9~1 Imin,棄上清液;得到 的沉淀物中加入0.4~0.6mL 70 %乙醇清洗沉淀物,3~5°C,12000 X g離屯、4~6min,棄上清 液,此步驟重復(fù)一次;得到的沉淀物自然風(fēng)干,加入18~22化無菌超純水回溶,電泳檢測,-20°C保存;
      [00%] (2)PCR 擴增
      [0027] 每個SNP的檢測需要一對上下游引物、兩條多態(tài)引物共4條PCR引物,共需要8條引 物,每個SNP的檢測需要做兩管PCR擴增,為防止出現(xiàn)假陽性之類的反應(yīng),衡量PCR是否成功, 加設(shè)一管陰性對照組,共做5管PCR,陰性對照組基因組模板沒有引物存在;
      [0028] 根據(jù)不同的檢測位點,用相應(yīng)的引物按如下比例分別配制PCR反應(yīng)體系:2.3~2.7 化10 X PCR緩沖液,1.8~2.化L dNTPs,0.4~0.6化引物組,熱啟動Taq酶0.12~0.1祉L,基 因組模板78~82mg,添加超純水至總體積為24~
      [0029] 將裝有反應(yīng)溶液的Eppendorf試管放入PCR儀中,設(shè)置反應(yīng)條件如下:預(yù)變性94~ 96^2.5~3.5111111;熱循環(huán)93~95^28~323,59~61^28~323,71~73^28~323,35個循 環(huán);延伸71~73°C2.5~3.5min,反應(yīng)結(jié)束后,取出試管;
      [0030] (3)瓊脂糖凝膠電泳檢測
      [0031] 將擴增后的產(chǎn)物進行瓊脂糖電泳檢測,過程如下:2.7~3.3g瓊脂糖,加入95~ 105mL去離子水,微波爐加熱55~65s,冷卻到58~62°C,加入4.8~5.化L DNA無毒染色液, 審Ij成2.9~3.1 %的瓊脂糖凝膠,用9~11化的PCR產(chǎn)物與0.7~0.9化的6 X T肥緩沖液混合上 樣,在98~102V電壓下電泳14~16min,紫外燈下讀取結(jié)果并拍照。
      [0032] 與現(xiàn)有技術(shù)相比,本發(fā)明的有益效果是:本發(fā)明通過PCR引物的設(shè)計使多個PCR擴 增反應(yīng)在同一臺PCR儀上同步進行,對受測者的相關(guān)基因進行檢測,并實現(xiàn)檢測的高效性、 特異性,分析得到受測者發(fā)展成為高度近視的風(fēng)險,為其發(fā)現(xiàn)近視的遺傳與基因內(nèi)在因素, 能夠更好的為受測者提供科學(xué)的參考,幫助其改善、調(diào)理生活工作習(xí)慣,W預(yù)防或降低近視 的風(fēng)險,同時在日常生活中采取相應(yīng)的策略避免對其無效甚至是有害的方法。
      【附圖說明】
      [0033] 圖1為反應(yīng)產(chǎn)物瓊脂糖凝膠電泳圖。
      【具體實施方式】
      [0034] 下面將結(jié)合本發(fā)明實施例中的附圖,對本發(fā)明實施例中的技術(shù)方案進行清楚、完 整地描述,顯然,所描述的實施例僅僅是本發(fā)明一部分實施例,而不是全部的實施例?;?本發(fā)明中的實施例,本領(lǐng)域普通技術(shù)人員在沒有做出創(chuàng)造性勞動前提下所獲得的所有其他 實施例,都屬于本發(fā)明保護的范圍。
      [00對實施例
      [0036] (1)針對2個基因 SNP多態(tài)位點的PCR反應(yīng)引物組(W下引物序列方向均為5 '端至3 ' 端):
      [0037] 針對SNP rsl89798的引物組:
      [0038] 1 GTAGTGCTG GTGG
      [oow] 2 CAGAGAGAGCACTTCAG
      [0040] 3 GACAGA GACATTGAGGC
      [0041 ] 4 GGAATACTGCAAGATCCGT
      [0042] 針對SNP rs100 34228的引物組:
      [0043] 1 GGTGCTCTCT CAAGCCTTTG
      [0044] 2 CTTTTGTGCCTCCACTATTC
      [0045] 3 GAAGAAGTCA GAGATGTGTAT
      [0046] 4 GACTGCCACACTAACAAAT
      [0047] (2)PCR擴增試劑aOXPCR緩沖液,該PCR緩沖液為IOOmM IYis-HCl P冊.3,500mM KCl,15mM MgCl 2; dNTPs混合物,該dNTPs混合物為S憐酸鳥嚷嶺脫氧核巧酸dGTP,S憐酸腺 嚷嶺脫氧核巧酸dATP,S憐酸胸腺喀晚脫氧核巧酸dTTP,S憐酸胞喀晚脫氧核巧酸dCTP四 種核巧酸,各組分濃度為2.5mM;抓AU熱啟動化q酶;
      [004引(3)瓊脂糖凝膠電泳分析試劑:瓊脂糖、TAE緩沖液、DNA分子量標(biāo)準(zhǔn)、Goldvi ew染色 液和DNA上樣緩沖液,該緩沖液W漠酪藍為指示劑稀釋至1倍后使用。
      [0049]使用上述運動后體質(zhì)恢復(fù)狀況基因檢測試劑盒按如下步驟進行檢測:
      [(K)加](1)提取樣本基因組DNA
      [0051 ]采集該測試者唾液,向l-2ml唾液樣品中加入50化L提取緩沖溶液,該DNA提取緩沖 溶液溶劑為50mM的化is-肥1 pH7.4、0.5mM的邸TA和50mM的化Cl,反復(fù)吹打混勻后,8000 X g 離屯、5min,棄去上清,此步驟重復(fù)一次;得到的沉淀中加入5(K)化裂解液,該裂解液溶劑為 50mM Tris-肥 1 pH7.4,50mM Tris-肥 1 pH7.4,150mM NaCiamM EDTA,l%Triton X-100, I % Sodium deoxycholate,0.1 % SDS,蛋白酶K20mg/mL,徹底懸浮沉淀并充分混勻后,室溫 放置30min,期間來回顛 倒離屯、管數(shù)次;得到的混合液中,加入濃度為lOmg/mLRNA酶的水溶 液10化,37°C下靜置IOmin;得到的上清液中,加入等體積苯酪-氯仿混合溶液,苯酪和氯仿 體積比為1:1,充分混勻,混合液4°C,12000 X g離屯、5min,上清液移入干凈離屯、管內(nèi);加入等 體積苯氛-氯仿-異戊醇混合溶液,苯酪、氯仿和異戊醇體積比為25: 24:1,充分混勻后,4°C, 12000 X g離屯、5min,上清液移入干凈離屯、管內(nèi);加入等體積氯仿-異戊醇混合溶液,充分混 勻后,4°C,12000 X g離屯、5min,上清液移入干凈離屯、管內(nèi);加入0.6倍體積的冰浴異丙醇溶 液及0.1倍的3mol/L醋酸鋼溶液,-20°C靜置60min后,4°C,12000Xg離屯、lOmin,棄上清液; 得到的沉淀物中加入0.5mL 70 %乙醇清洗沉淀物,4°C,12000 X g離屯、5min,棄上清液,此步 驟重復(fù)一次;得到的沉淀物自然風(fēng)干,加入20化無菌超純水回溶,電泳檢測,-20°C保存。 [0化 2] (2)PCR 擴增
      [0化3] 本實施例同時檢測rsl89798、rs100 34228,每個SNP的檢測需要一對上下游引物、 兩條多態(tài)引物共4條PCR引物,共需要8條引物。每個SNP的檢測需要做兩管PCR擴增,為防止 出現(xiàn)假陽性之類的反應(yīng),衡量PCR是否成功,加設(shè)一管陰性對照組,共做5管PCR,所述陰性對 照組基因組模板及反應(yīng)體系是一樣的,但沒有引物存在。
      [0054] 根據(jù)不同的檢測位點,用相應(yīng)的引物按如下比例分別配制PCR反應(yīng)體系:2.5化10 X PCR緩沖液,dNTPs,0.5化引物組,熱啟動化q酶0.15化,基因組模板SOmg,添加超純水 至總體積為2如L。
      [0055] 將裝有反應(yīng)溶液的化pendorf試管放入ABI 9700PCR儀中,設(shè)置反應(yīng)條件如下:預(yù) 變性 95°C3min;熱循環(huán) 941:3〇3,6〇1:3〇3,721:3〇3,35個循環(huán);延伸721:3111111。反應(yīng)結(jié)束后, 取出試管。
      [0056] 由于5管PCR擴增反應(yīng)是在同一臺PCR儀上同步進行的,為了實現(xiàn)檢測的高效性、特 異性,要求8條PCR引物的Tm值相近,為此需要先進行大量的DNA序列軟件分析來設(shè)計PCR引 物,并通過大量的實驗來進行Tm值的優(yōu)化并確定設(shè)計的合理性,本試劑盒各基因 SNP多態(tài)性 的檢測是既相對獨立又相互聯(lián)系的,不可分割。
      [0057] (3)瓊脂糖凝膠電泳檢測
      [0058] 將擴增后的產(chǎn)物進行瓊脂糖電泳檢測,過程如下::3g瓊脂糖,加入IOOmL去離子水, 微波爐加熱Imin,冷卻到60°C時加入扣L Goldview染色液,制成3%的瓊脂糖凝膠。PCR產(chǎn)物 10化與6 X T邸緩沖液0.祉L混合上樣,電壓IOOV電泳15min。紫外燈下讀取結(jié)果并拍照,所得 瓊脂糖電泳檢測圖如圖1所示。
      [0059] 檢測得到2個基因分型分析結(jié)果如下:
      [0061] 根據(jù)W上分析結(jié)果,該測試者不容易患高度近視。如在平常生活和學(xué)習(xí)中,注意用 眼保護,則更能保證眼睛的健康,遠離近視的苦惱。
      [0062] 對于本領(lǐng)域技術(shù)人員而言,顯然本發(fā)明不限于上述示范性實施例的細節(jié),而且在 不背離本發(fā)明的精神或基本特征的情況下,能夠W其他的具體形式實現(xiàn)本發(fā)明。因此,無論 從哪一點來看,均應(yīng)將實施例看作是示范性的,而且是非限制性的,本發(fā)明的范圍由所附權(quán) 利要求而不是上述說明限定,因此旨在將落在權(quán)利要求的等同要件的含義和范圍內(nèi)的所有 變化囊括在本發(fā)明內(nèi)。不應(yīng)將權(quán)利要求中的任何附圖標(biāo)記視為限制所設(shè)及的權(quán)利要求。
      【主權(quán)項】
      1. 一種近視風(fēng)險評估的基因檢測試劑盒,包括盒體及盒體內(nèi)單獨存放試劑,其特征在 于,所述單獨存放試劑包括: (1) 針對2個基因 SNP多態(tài)位點的PCR反應(yīng)引物組,引物序列方向均為5 '端至3 '端: ① 針對SNP rsl89798的引物組: 1 GTAGTGCTG GTGG 2 CAGAGAGAGCACTTCAG 3 GACAGA GACATTGAGGC 4 GGAATACTGCAAGATCCGT ② 針對SNP rs100 34228的引物組: 1 GGTGCTCTCT CAAGCCTTTG 2 CTTTTGTGCCTCCACTATTC 3 GAAGAAGTCA GAGATGTGTAT 4 GACTGCCACACTAACAAAT; (2) PCR擴增試劑:10XPCR緩沖液,該PCR緩沖液由90~llOmM Tris-HCl pH8.3、480~ 520mM KC1、13~17mM MgCl2組成;dNTPs混合物,該dNTPs混合物由三磷酸鳥嘌呤脫氧核苷 酸dGTP、三磷酸腺嘌呤脫氧核苷酸dATP、三磷酸胸腺嘧啶脫氧核苷酸dTTP、三磷酸胞嘧啶脫 氧核苷酸dCTP四種核苷酸組成,各組分濃度為2.2~2.8mM; 4~6UAU熱啟動Taq酶;基因組 模板; (3) 瓊脂糖凝膠電泳分析試劑:瓊脂糖、TAE緩沖液、DNA分子量標(biāo)準(zhǔn)、Go 1 dvi ew染色液和 DNA上樣緩沖液,該緩沖液以溴酚藍為指示劑稀釋至1倍后使用。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的近視風(fēng)險評估的基因檢測試劑盒,其特征在于,所述DNA無毒 染色液為Biotium Gelred無毒染料或Goldview染色液。3. -種如權(quán)利要求1所述的近視風(fēng)險評估的基因檢測試劑盒的檢測方法,其特征在于, 步驟如下: (1)提取樣本基因組DNA 采集測試者唾液,向1~2ml唾液樣品中加入480~520yL提取緩沖溶液,該提取緩沖溶 液溶劑為48~52mM的Tris-HCl pH7 ·4、0 ·4~0 · 6mM的EDTA和48~52mM的NaCl,反復(fù)吹打混 勻后,8000 Xg離心4~6min,棄去上清,此步驟重復(fù)一次;得到的沉淀中加入480~520yL裂 解液,該裂解液溶劑為48~52mM Tris-HCl ρΗ7·4,48~52mM Tris-HCl ρΗ7·4,145~155mM NaCl,0.9~l.lmM EDTA,0.9~l.l%Triton χ_100,0·9~l.l%Sodium deoxycholate, 0.09~0.11 % SDS,蛋白酶K20mg/mL,徹底懸浮沉淀并充分混勻后,室溫放置28~32min,期 間來回顛倒離心管數(shù)次;得到的混合液中,加入濃度為9~1 lmg/mL RNA酶的水溶液9~11μ L,36~38°C下靜置10min;得到的上清液中,加入等體積苯酚-氯仿混合溶液,苯酚和氯仿體 積比為0.9~1.1:1,充分混勻,混合液3~5°C,12000 Xg離心4~6min,上清液移入干凈離心 管內(nèi);加入等體積苯氛-氯仿-異戊醇混合溶液,苯酚、氯仿和異戊醇體積比為24~26: 23~ 25:1,充分混勻后,3~5°C,12000 Xg離心4~6min,上清液移入干凈離心管內(nèi);加入等體積 氯仿-異戊醇混合溶液,充分混勻后,3~5°C,12000 X g離心4~6min,上清液移入干凈離心 管內(nèi);加入0.5~0.7倍體積的冰浴異丙醇溶液及0.09~0.11倍的2.8~3.2mol/L醋酸鈉溶 液,-19~-21°C靜置57~63min,3~5°C,12000Xg離心9~llmin,棄上清液;得到的沉淀物 中加入0.4~0.6mL 70 %乙醇清洗沉淀物,3~5°C,12000 X g離心4~6min,棄上清液,此步 驟重復(fù)一次;得到的沉淀物自然風(fēng)干,加入18~22yL無菌超純水回溶,電泳檢測,-20°C保 存; (2) PCR擴增 每個SNP的檢測需要一對上下游引物、兩條多態(tài)引物共4條PCR引物,共需要8條引物,每 個SNP的檢測需要做兩管PCR擴增,為防止出現(xiàn)假陽性之類的反應(yīng),衡量PCR是否成功,加設(shè) 一管陰性對照組,共做5管PCR,陰性對照組基因組模板沒有引物存在; 根據(jù)不同的檢測位點,用相應(yīng)的引物按如下比例分別配制PCR反應(yīng)體系:2.3~2.7yL 10 X PCR緩沖液,1 · 8~2 · 2yL dNTPs,0 · 4~0 · 6yL引物組,熱啟動Taq酶0 · 12~0 · 18yL,基因 組模板78~82mg,添加超純水至總體積為24~26yL; 將裝有反應(yīng)溶液的Eppendorf試管放入PCR儀中,設(shè)置反應(yīng)條件如下:預(yù)變性94~96°C 2.5~3.5111丨11;熱循環(huán)93~951€28~328,59~611€28~328,71~73 1€28~328,35個循環(huán);延 伸71~73°C2.5~3.5min,反應(yīng)結(jié)束后,取出試管; (3) 瓊脂糖凝膠電泳檢測 將擴增后的產(chǎn)物進行瓊脂糖電泳檢測,過程如下:2.7~3.3g瓊脂糖,加入95~105mL去 離子水,微波爐加熱55~65s,冷卻到58~62°C,加入4.8~5.2yLDNA無毒染色液,制成2.9~ 3.1 %的瓊脂糖凝膠,用9~1 lyL的PCR產(chǎn)物與0.7~0.9yL的6 X TBE緩沖液混合上樣,在98~ 102V電壓下電泳14~16min,紫外燈下讀取結(jié)果并拍照。
      【文檔編號】C12Q1/68GK105861714SQ201610345524
      【公開日】2016年8月17日
      【申請日】2016年5月22日
      【發(fā)明人】李則軒
      【申請人】深圳中美基因研究院有限公司
      網(wǎng)友詢問留言 已有0條留言
      • 還沒有人留言評論。精彩留言會獲得點贊!
      1