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      中國人運動優(yōu)勢相關基因的檢測試劑盒及其應用

      文檔序號:10506133閱讀:552來源:國知局
      中國人運動優(yōu)勢相關基因的檢測試劑盒及其應用
      【專利摘要】本發(fā)明公開了一種中國人運動優(yōu)勢相關基因的檢測試劑盒,所述的試劑盒包括ACE基因第16內(nèi)含子的插入或缺失(I/D)多態(tài)性檢測引物和ACTN3基因R577X多態(tài)性檢測引物。本發(fā)明所述的試劑盒專用于檢測中國人的運動優(yōu)勢基因,可用于為個體選擇或匹配一種運動或運動項目(例如競技項目、速度爆發(fā)力、力量型運動項目和耐力型運動項目)以及用于評價和預測運動性能、優(yōu)化設計訓練計劃的新方法,其包括評價多個基因或基因型。本發(fā)明的試劑盒還可以用于檢測幼兒、兒童和青少年的12個與運動優(yōu)勢和潛能相關的基因,預測其運動天賦,為其未來從事的體育運動項目提供合理化建議。
      【專利說明】
      中國人運動優(yōu)勢相關基因的檢測試劑盒及其應用
      技術領域
      [0001] 本發(fā)明設及一種運動優(yōu)勢相關基因的檢測試劑盒及其應用,特別是適用于中國人 人群的檢測試劑盒,屬于生物檢測技術領域。
      [0002]
      【背景技術】
      [0003 ]人體運動能力的能量供應、神經(jīng)肌肉控制能力及體形特征等存在著明顯的種族和 個體差異,上述因素均受到基因的影響。突出的運動能力很大程度上取決于運動基因遺傳 優(yōu)勢。隨著分子遺傳學的進展及其在運動醫(yī)學領域的應用,科學家發(fā)現(xiàn)一些重要的身體運 動素質如力量、速度和耐力及其發(fā)展?jié)摿哂邢喈敻叩倪z傳度,運動員對訓練的敏感度也 受到遺傳因素很大的影響。遺傳因素作為內(nèi)因,決定了人的運動天賦和發(fā)展?jié)摿?,先天影?著發(fā)展的空間及極限。對大量優(yōu)秀運動員的研究表明,先天遺傳優(yōu)勢占2/3,后天訓練所起 的作用占1/3。因此,發(fā)現(xiàn)與了解個人的運動遺傳優(yōu)勢成為人們有目的的規(guī)劃成長道路的重 要參考依據(jù)。
      [0004] 有些人之所W能更容易取得輝煌的運動成就,目前認為,主要與W下因素有關: 1、人種的差異 國際人類基因組的正版圖譜(2001年)研究表明:人與人之間的基因密碼的相似程度高 達99.99%,僅0.01%的差異。但正是運0.001%的差異,使得個體在生理和體能上有了不同的 表達,使得遺傳存在個體、種族間、運動能力差異。運動醫(yī)學長期研究的結果表明,黑人的屯、 血管較其他人種粗,能耐高溫,腳和腿肚之間有一個出色的力矩,臀部翅起等,都是他們的 體能特點。另外,屯、肺功能、肌肉類型、力量、速度和耐力及其發(fā)展?jié)摿哂邢喈敻叩倪z傳 度,運動員對訓練的敏感度也在很大程度上受遺傳因子的影響。
      [0005] 2、運動相關基因與運動關鍵基因 目前與運動相關的基因有206個,起關鍵性作用的運動基因18個,但具體哪些運動基因 與中國人的體能指標密切相關還有待進一步研究。
      [0006] 歐美國家有不少機構開展了運動基因檢測服務并已應用于運動員選材過程,同時 在健康基因也開始向商業(yè)化發(fā)展,但由于人種不同,還沒有針對中國人群開發(fā)的檢測試劑 盒。

      【發(fā)明內(nèi)容】

      [0007] 本發(fā)明針對現(xiàn)有技術的不足,為了制備得到一種針對中國人的運動優(yōu)勢相關基因 的檢測試劑盒。為了實現(xiàn)本發(fā)明的目的,擬采用如下技術方案: 本發(fā)明一方面設及中國人運動優(yōu)勢相關基因的檢測試劑盒,其特征在于所述的試劑盒 包括ACE基因第16內(nèi)含子的插入或缺失(I/D)多態(tài)性檢測引物和ACTN3基因 R577X多態(tài)性檢 測引物。
      [0008] 在本發(fā)明的一個優(yōu)選實施方式中,所述的ACE基因第16內(nèi)含子的插入或缺失(I/D) 多態(tài)性檢測引物包括: 正向:5 ' -CTGGAGACCACTCCCATCCTTTCT-3 ' 反向:5 '-GATGTGGCCATCACATTCGTCAGAT-3 '。
      [0009] 在本發(fā)明的一個優(yōu)選實施方式中,所述的ACTN3基因 R577X多態(tài)性檢測引物包括: 正向:5 ' -CTG TTGCCTGTGGTAAGTGGG-3 ' 反向:5 '-TGGTCACAGTATGCAGGAGGG-3 '。
      [0010] 本發(fā)明另一方面設及上述試劑盒在檢測待測對象耐力和/或爆發(fā)力中的應用。
      [0011] 本發(fā)明另一方面還設及上述試劑盒在制備檢測中國人耐力和/或爆發(fā)力的試劑中 的應用。
      [0012] 本發(fā)明另一方面還設及一種中國人運動優(yōu)勢相關基因的檢測方法,其特征在于包 括如下步驟: 1) 提取待測對象的外周靜脈血基因組DNA; 2) 采用上述試劑盒PCR擴增ACE基因第16內(nèi)含子片段; 3) 步驟2)PCR產(chǎn)物分析,分析待測對象的基因型,II型僅有4Wbp擴增片段,為插入純 合型;孤型僅有19化P,為缺失純合型;ID型既有IWbp片段,又有49化P片段,為雜合型; 4) 采用上述試劑盒PCR擴增擴增ACTN3基因的片段 5) 步驟4)PCR產(chǎn)物分析:采用內(nèi)切酶DdeI酶切PCR擴增產(chǎn)物,采用瓊脂糖凝膠電泳分析 酶切產(chǎn)物得到待測對象的基因型,RR型有20化P和86bp兩條帶;XX型有108bp、97bp和86bpS 條帶,為純合子突變;RX型既有20化P,又有IOSbp、97bp和86bp條帶,為雜合子突變。
      [0013] 本發(fā)明所述的試劑盒專用于檢測中國人的運動優(yōu)勢基因,可用于為個體選擇或匹 配一種運動或運動項目(例如短距離賽跑/力量運動或耐力運動)W及用于評價和預測 運動性能、優(yōu)化設計訓練計劃的新方法,其包括評價多個基因或基因型。本發(fā)明的試劑盒還 可W用于檢測幼兒、兒童和青少年的12個與運動優(yōu)勢和潛能相關的基因,預測其運動天賦, 為其未來從事的體育運動項目提供合理化建議。
      [0014]
      【具體實施方式】
      [0015] 若未特別說明,實施例中所用的技術手段為本領域技術人員所熟知的常規(guī)手段。
      [0016] 實施例1: (一)研究對象 1.運動員組總共218名運動員,分別來自浙江省田徑隊、游泳隊和皮劃艇隊,其中田徑 運動員69名(包括2名國家級健將和2名國際級健將),游泳運動員34名,皮劃艇運動員115名 (包括8名國家級健將和5名國際級健將)。根據(jù)研究需要我們將他們分成了耐力運動員組和 速度/爆發(fā)型運動員組,耐力運動員組總共129人包括8名田徑運動員(> 800m)、6名游泳運 動員(含400m)和115名皮劃艇運動員,速度/爆發(fā)型運動員組總共89人包括61名田徑運動員 (< 400m、鉛球、標槍、鐵餅、跳高、跳遠)和28名游泳運動員(<400m),其中耐力運動員組男性 75人,女性54人;速度/爆發(fā)型運動員組男性43人,女性46人。
      [0017] 2.對照組288名健康獻血者,其中男性149人,女性139人。
      [001引(二)材料、試劑與器材 1. 邸TA抗凝血:2ml/人 2. 血液基因組DNA提取試劑盒(非離屯、柱型)(北京天根生化科技有限公司) 3. PCR擴增試劑 1) PCR引物(序列見后) 2) 化姐NA聚合酶巧u/ul,北京天根生化科技有限公司) 3) dNTP(10mM)(北京天根生化科技有限公司) 4) 10XPCR Buffer(北京天根生化科技有限公司) 4. 瓊脂糖凝膠電泳試劑 1) 瓊脂糖(北京天根生化科技有限公司) 2) 儲存液5 X T肥(Tris 54g,棚酸27.5g,抓TA45g加水定容至1000 ml,P冊.0),工作液1 X T 邸和 0.5 XTBE。
      [0019] 3化樣緩沖液(0.25%漠酪藍,0.25%二甲苯氯和40%薦糖) 4)漠化乙錠(儲存液濃度為lOmg/ml,工作液濃度為0.5mg/ml) 5. PCR產(chǎn)物柱純化系統(tǒng):含DNA吸附膜、別和…溶液。上海生工生物工程技術服務有限公 司。
      [0020] 6.測序混合物:BigDye末端標記及測序混合物含有4種巧光標記dNTPs、dNTPs、DNA 聚合酶和測序酶。美國PE公司。 表1 Bi曲ye體系中的4種末端巧光標記染料 堿基染料 膠圖像中 測序圖中 A dR6G 綠色 綠色 C Drox 紅色 藍色 G DrllO 藍色 黑色 T Dtamra黃色 紅色 7. 藍色葡聚糖/EDTA上樣緩沖液:美國PE公司 8. DNA分子量標準 DNA Marker I和DNA Marker IK北京天根生化科技有限公司) 9. 限制性內(nèi)切酶 HpyF3I(MBI F'ermen^s) 10. 主要實驗儀器設備 1 )PCR儀:MG 96G型,杭州朗基科學儀器有限公司 2) 高速低溫離屯、機:Megaf Uge 1. OR型,德國Heraeus公司 3) 臺式高速離屯、機:T化-16B型,上海安亭科學儀器廠 4) 電子天平:PB302型,AB54型,瑞±METTLER TOLEDO公司 5) 水平電泳槽:Tanon肥-120 Gen多功能水平電泳槽 6) 恒壓恒流電泳儀:Tanon EPS300電泳儀 7) 紫外分析儀:天能2500型凝膠成像系統(tǒng),上海天能 8) DK-8D型電熱恒溫水槽(上海醫(yī)用恒溫設備廠) 9) 縱滿混勻器:華利達WH-861型 10) 微量加樣器:法國Gi Ison公司 11) 冷凍冷藏設備:-80 °C深低溫冰箱(Forma Scient if iC公司) 12) 核酸蛋白測定儀:nd 1000 (美國Nano化op公司) (二)實驗方法 1.人外周靜脈血基因組DNA提取(試劑盒法) 1)向30化1邸TA抗凝血中加入75化1細胞裂解液化,顛倒混勻5次。
      [0021] 2) 10 ,OOOXg 離屯、1 分鐘。
      [0022] 3)倒棄上清,將離屯、管倒置在干凈的吸水紙上停留2分鐘,確保沉淀在管中。
      [0023] 4)配置緩沖液FG與蛋白酶K的混合液(150iil緩沖液FG加1.化1蛋白酶K)。
      [0024] 5)將混合液加入離屯、管中,立即滿旋混勻至溶液無團塊。
      [0025] 6) 56 °C 浴1 Omin,期間顛倒混勻數(shù)次。
      [00%] 7)加入異丙醇150 iil,顛倒充分混勻至出現(xiàn)絲狀或簇狀基因組DNA。
      [0027] 8) 1000,0 X g離屯、3分鐘。倒棄上清,將離屯、管倒置在干凈吸水紙上,確保沉淀在管 中。
      [002引 9)加入70 %乙醇,滿旋振蕩5秒鐘,1000,0 Xg離屯、3分鐘。
      [0029] 10)倒棄上清,將離屯、管倒置在干凈吸水紙上停留至少5分鐘,確保沉淀在管中。
      [0030] 11)空氣干燥DNA沉淀直至所W的液體揮發(fā)干凈(至少5分鐘,避免過分干燥DNA沉 淀,過于干燥的DNA很難溶解)。
      [0031] 12)加入洗脫緩沖液TBl 0化1,低速滿旋5秒,65 °C加熱10分鐘~1小時溶解DNA,期 間顛倒混勻數(shù)次助溶。
      [0032] 2. DNA濃度測定及保存 用NanoDrop核酸蛋白測定儀ndlOOO測定DNA濃度,取化IDNA溶液(不需稀釋巧日到上樣 臺即可W馬上測知濃度。將已知濃度的DNA溶液稀釋到25ngAU,置-20°C保存。
      [0033] 3. ACE基因型檢測 3.1 ACE基因第16內(nèi)含子PCR擴增 3.11引物設計: PCR擴增ACE基因第16內(nèi)含子片段,PCR引物序列如下: 正向:5 ' -CTGGAGACCACTCCCATCCTTTCT-3 ' 反向:5 '-GATGTGGCCATCACATTCGTCAGAT-3 ' 3.12 PCR反應 1) 反應體系: DNA模板 2山巧Ong) IOXBuffer 3 山 25mM MgC12 3 山 IOmM dNTPs 1 山 IOpmol上游引物0.8山 IOpmol下游引物0.8山 hq DNA聚合酶 2 U 加去離子水至 30山 2) PCR循環(huán)條件:反應混合物經(jīng)94 °C預變性5分鐘后,W94°C變性60秒,58 °C退火120秒, 72°C延伸90秒,共35個循環(huán)后,最后72°C延伸5分鐘終止擴增,PCR擴增采用朗基MG 96G型 PCR 儀。
      [0034] 3 )PCR產(chǎn)物分析:取PCR擴增產(chǎn)物扣1,加入化1上樣緩沖液,室溫下于2 %瓊脂糖凝 膠恒壓120V電泳20-40分鐘,EB染色15分鐘,然后置紫外分析儀上檢測PCR擴增產(chǎn)物及其特 異性,對擴增不理想者重新擴增。人群中有3種基因型:II型僅有490bp擴增片段,為插入純 合型;孤型僅有19化P,為缺失純合型;ID型既有IWbp片段,又有49化P片段,為雜合型。
      [0035] 4. ACTN3基因型檢測 4.1 ACTN3基因的PCR擴增 4.11引物設計: PCR擴增ACTN3基因的片段,PCR引物序列如下: 正向:5 ' -CTG TTGCCTGTGGTAAGTGGG-3 ' 反向:5 '-TGGTCACAGTATGCAGGAGGG-3 ' 引物由上海生工生物工程技術服務有限公司合成。
      [0036] 4.12 PCR反應 1) 反應體系:。
      [0037] DNA模板 2 yK50ng) IOXBuffer 3 山 25mM MgCb 3 IOmM dNTPs I 山 IOpmol上游引物0.6山 IOpmol下游引物0.6山 Taq DNA聚合酶2 U 加去離子水至30山 2) PCR循環(huán)條件:反應混合物經(jīng)94°C預變性5分鐘后,W94°C變性30秒,58.2°C退火30 秒,72°C延伸45秒,共35個循環(huán)后,最后72°C延伸5分鐘終止擴增,PCR擴增采用朗基MG 96G 型PCR儀。
      [003引3 )PCR產(chǎn)物分析:取PCR擴增產(chǎn)物扣1,加入化1上樣緩沖液,室溫下于2 %瓊脂糖凝 膠恒壓120V電泳20-40分鐘,EB染色15分鐘,然后置紫外分析儀上檢測PCR擴增產(chǎn)物及其特 異性,對擴增不理想者重新擴增。
      [0039] 4.2限制性酶切 4.21酶切反應體系: PCR產(chǎn)物 10山 去離子水 16山 IOXBuffer Tango 2 山 內(nèi)切酶DdeKlOU/山)1山 總共 29山 加完需充分混勻 4.22酶切反應溫度和時間: 在37°C恒溫水浴箱中作用2~3小時,放入65°C恒溫水浴箱20min終止反應。
      [0040] 4.23酶切產(chǎn)物檢測: 采用瓊脂糖凝膠電泳。取酶切產(chǎn)物10山,與化1 6 X上樣緩沖液混合上樣,于3.5%瓊脂 糖凝膠、0.5 X T邸緩沖液中水平電泳,IOOV約1小時,邸染色15分鐘,然后置紫外分析儀上檢 測酶切產(chǎn)物。人群中有3中基因型:RR型有20化P和86bp兩條帶;XX型有108bp、97bp和86bpS 條帶,為純合子突變;RX型既有20化P,又有IOSbp、97bp和86bp條帶,為雜合子突變。
      [0041] 5. DNA序列測定 5.1 PCR產(chǎn)物的純化:采用PCR產(chǎn)物膠回收柱純化系統(tǒng)。
      [0042] 1)用1%低烙點瓊脂糖凝膠電泳分離目的DNA片段,盡可能薄地切割含目的片段的 凝膠,置1.5ml離屯、管中; 2) 加 Sl液及1/3體積異丙醇,混勻,56°C水浴10分鐘充分溶解; 3) 移液至含DNA吸附膜的純化柱,12000rpm離屯、1分鐘,用Wl液離屯、洗涂兩次; 4) 加去離子水溶解吸附膜上DNA 30分鐘,12000巧m離屯、2分鐘收集DNA溶解液。取化1上 樣,1%瓊脂糖凝膠電泳,WDNA分子量標準(天根DNA Marker II)為參照,檢測純化片段的 大小、純度及濃度。
      [0043] 5.2測序反應 1) 反應總體積為20山,其中含: 純化的DNA模版150~300 ng 3.2pmol單側測序引物1山 測序反應混合物(Mix) 8山 加去離子水至20山 2) 循環(huán)反應條件:在朗基MG 96G型PCR儀上進行循環(huán)測序反應:96°C 10秒,50°C 5秒, 60°C 4分鐘,25個循環(huán)后,4°C保存。
      [0044] 5.3測序反應產(chǎn)物的純化: 1) 20山測序反應產(chǎn)物,加入76 %乙醇80山,充分混勻,短暫離屯、,室溫下避光靜置20分 鐘。
      [0045] 2) 12,000巧m離屯、20分鐘后,小屯、吸除上清; 3) 加入70%乙醇250山,充分混勻,12 ,OOOrpm離屯、10分鐘后,小屯、吸除上清; 4) 打開離屯、管蓋,PCR儀上90°C干燥2分鐘; 5) 加入化1測序變性上樣緩沖液,96 °C變性3分鐘,立即放入冰浴。
      [0046] 5.4 則序電泳:在ABI377自動測序儀上進行: 1)在DNA Sequencer軟件中設定樣品欄,運行"化eck-plate"程序檢測電泳玻璃板清潔 度/'Pre-run程序"(1.68KV)進行預電泳至玻板溫度達56°C。
      [0047] 2)在預電泳模式下上樣化1。
      [004引 3)運行"Run"程序進行電泳(1.68KV,9小時),軟件自動收集信號,電泳結束后用 DNA Sequencer軟件結合手動調節(jié),對每個電泳道的信息進行逐道跟蹤分析,得出相應樣品 堿基序列,打印彩色波形圖譜。
      [0049] 6.序列比較分析 WGeneBank[www.n;Lbc .nlm.nih.gov]中人ACTN3基因(基因登錄號NM_001104)序列為 正常標準,所得序列用DNA TooKVer. 5.1)或PC GE肥(Ver3.0)軟件進行序列對比,確定突 變的位置和性質。
      [0化日]7.統(tǒng)計學處理 采用SPSS13.0統(tǒng)計軟件,等位基因和基因型頻率分布經(jīng)基因平衡定律 a.不同類型運動員組ACE基因型分布特征 位于ACE基因第16號內(nèi)含子的插入或缺失(I/D)多態(tài)性經(jīng)PCR方法檢測可W擴增出兩種 DNA片段,一種是49化P長的DNA片段,稱之為插入型(I型),另一種是IWbp長的DNA片段,稱 之為缺失型(D型),因此在群體中可有II、ID及DD巧巾基因型,II型僅有49化P片段,為插入 型純合子;孤型僅有IWbp片段,為缺失型純合子;ID型則既有490bp片段,又有IWbp片段, 為雜合型。
      [0051] 表1耐力運動員組與爆發(fā)型運動員組ACE基因型男女分組比較
      注:O中的值表示該基因型占總數(shù)的百分比。
      [0052] 從上述研究結果看來女性耐力運動員II基因型頻率較對照高,孤基因型頻率較對 照低,即中國女性耐力運動員ACE基因多態(tài)頻率分布特征。另外,對照人群ACE基因 I/D多態(tài) 頻率分布與歐美人群有非常顯著差異,即在漢族普通人群高比例的I等位基因和II基因型 頻率的基礎上,歐美研究結論中得出的杰出耐力運動員的獨特特征或許不可能出現(xiàn)在漢族 群體中,或許是另外的表現(xiàn)形式。
      [0053] (3) b.不同類型運動員組ACTN3基因型分布特征 PCR擴增出長29化P的DNA片段,由于人類ACTN3基因 R577X多態(tài)性,從測序結果可W判斷 ACTN3基因第16號外顯子的1747核巧酸是否有一 C到T位點突變,如果無突變發(fā)生,則為RR純 合野生型,若該位點變?yōu)門,則為XX突變純合型,若既有C又有T則為RX雜合型。如果為RR型, 擴增出來的片段只有一個DdeI酶切位點,若帶有1747C到T突變,則會產(chǎn)生一個新的DdeI酶 切位點,3種ACTN3基因型PCR擴增片段經(jīng)DdeI限制性內(nèi)切酶消化后可見,純合子突變XX型經(jīng) 酶切后能產(chǎn)生巧巾長度片段,分別為86bp、97bp和IOSbp,RR型只有86bp和20化P兩種片段,RX 型既有86bp和20化P片段,又有97bp和IOSbp片段,為雜合型。
      [0化4] 爆發(fā)型運動員組ACTN3基因型分布特征 131例對照人群中ACTN3基因型分布為RR型36.6%(48/131),RX型為48.9%(64/131),XX 型為14.5%(19/131);等位基因頻率R型為61.1%,X型為38.9%。89名爆發(fā)型運動員ACTN3基因 型分布為 RR 型 34.8%(31/89),RX 型為 49.4%(44/89),XX 型為 15.8%(14/89);等位基因頻率 R 型為59.6%,X型為40.4%。見表巧口 3 表2爆發(fā)型運動員組ACTN3基因型分布
      [005
      注:O中的值表示該基因型占總數(shù)的百分比。
      [0056] 由上述結果可知,女性耐力運動員XX基因型所占比例和X等位基因頻率均顯著高 于對照組,由此可見,ACTN3基因的X等位基因對女性耐力運動員的耐力表現(xiàn)有促進作用。
      [0057] W上所述是本發(fā)明的優(yōu)選實施例,應當指出,對于本技術領域的普通技術人員來 說,在不脫離本發(fā)明所述原理的前提下,還可W作出若干改進和潤飾,運些改進和潤飾也應 視為本發(fā)明的保護范圍。
      【主權項】
      1. 中國人運動優(yōu)勢相關基因的檢測試劑盒,其特征在于,包括ACE基因第16內(nèi)含子的插 入或缺失(Ι/D)多態(tài)性檢測引物和ACTN3基因 R577X多態(tài)性檢測引物。2. 根據(jù)權利要求1所述的中國人運動優(yōu)勢相關基因的檢測試劑盒,其特征在于,所述的 ACE基因第16內(nèi)含子的插入或缺失(Ι/D)多態(tài)性檢測引物包括: 正向:5 ' -CTGGAGACCACTCCCATCCTTTCT-3 ' 反向:5 '-GATGTGGCCATCACATTCGTCAGAT-3 '。3. 根據(jù)權利要求1所述的中國人運動優(yōu)勢相關基因的檢測試劑盒,其特征在于,所述的 ACTN3基因 R577X多態(tài)性檢測引物包括: 正向:5 ' -CTG TTGCCTGTGGTAAGTGGG-3 ' 反向:5 '-TGGTCACAGTATGCAGGAGGG-3 '。4. 上述試劑盒在檢測待測對象耐力和/或爆發(fā)力中的應用,待測對象為女性。5. 上述試劑盒在制備檢測中國人耐力和/或爆發(fā)力的試劑中的應用,待測對象為女性。6. -種中國人運動優(yōu)勢相關基因的檢測方法,其特征在于包括如下步驟: 1) 提取待測對象的外周靜脈血基因組DNA; 2) 采用上述試劑盒PCR擴增ACE基因第16內(nèi)含子片段; 3) 步驟2)PCR產(chǎn)物分析,分析待測對象的基因型,II型僅有490bp擴增片段,為插入純 合型;DD型僅有190bp,為缺失純合型;ID型既有190bp片段,又有490bp片段,為雜合型; 4) 采用上述試劑盒PCR擴增ACTN3基因的片段; 5) 步驟4)PCR產(chǎn)物分析:采用內(nèi)切酶Ddd酶切PCR擴增產(chǎn)物,采用瓊脂糖凝膠電泳分析 酶切產(chǎn)物得到待測對象的基因型,RR型有205bp和86bp兩條帶;XX型有108bp、97bp和86bp三 條帶,為純合子突變;RX型既有205bp,又有108bp、97bp和86bp條帶,為雜合子突變; 優(yōu)選的,所述待測對象為女性。
      【文檔編號】C12Q1/68GK105861731SQ201610419880
      【公開日】2016年8月17日
      【申請日】2016年6月14日
      【發(fā)明人】韋俊芳
      【申請人】杭州勢必健生物科技有限公司
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