支原體檢測和去除方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及生物技術領域。支原體檢測和去除方法，包括如下步驟：步驟一，取至少2個反應管，分別為陽性對照管、測試管，陽性對照管內加入陽性支原體DNA，測試管內加入測試培養(yǎng)液；步驟二，將反應管放至PCR反應儀內進行檢測，如果測試結果為培養(yǎng)液中存有支原體，跳至步驟三；步驟三，使用支原體清除試劑對支原體進行去除。本發(fā)明通過設有2反應管，便于進行數(shù)據(jù)的比對，通過PCR反應儀進行測定，相較傳統(tǒng)的培養(yǎng)法測試時間縮短了，提高了測試效率。
【專利說明】
支原體檢測和去除方法
技術領域
[0001]本發(fā)明涉及生物技術領域，具體涉及支原體的檢測?！颈尘凹夹g】
[0002]哺乳動物細胞的培養(yǎng)，支原體(Mycoplasma)污染是個世界性的問題。支原體污染幾乎可以改變細胞的所有參數(shù)，導致實驗結果的不準確、甚至完全錯誤。從2013年開始， 《Nature》期刊已正式要求投稿的文章，如涉及細胞培養(yǎng)都要進行支原體檢測。相信會有越來越多的高水平期刊將做出同樣的支原體檢測要求。
[0003]培養(yǎng)法是相對可靠的支原體檢測技術，但是該方法非常耗時的，需要數(shù)周，不適合作為細胞培養(yǎng)液中支原體污染的快速檢測。此外，通過固體培養(yǎng)法無法檢測污染細胞的一種最常見的支原體，即豬鼻支原體(M.Hyorhinis)。這是因為豬鼻支原體無法在支原體固體培養(yǎng)基上形成可見的菌落。而豬鼻支原體約占所有支原體污染的20-50%。
【發(fā)明內容】

[0004]本發(fā)明的目的在于提供支原體檢測和去除方法，以解決上述技術問題。
[0005]本發(fā)明所解決的技術問題可以采用以下技術方案來實現(xiàn):
[0006]支原體檢測和去除方法，其特征在于，包括如下步驟:
[0007]步驟一，取至少2個反應管，分別為陽性對照管、測試管，陽性對照管內加入陽性支原體DNA，測試管內加入測試培養(yǎng)液；
[0008]步驟二，將反應管放至PCR反應儀內進行檢測，如果測試結果為培養(yǎng)液中存有支原體，跳至步驟三；
[0009]步驟三，使用支原體清除試劑對支原體進行去除。
[0010]本發(fā)明通過設有2反應管，便于進行數(shù)據(jù)的比對，通過PCR反應儀進行測定，相較傳統(tǒng)的培養(yǎng)法測試時間縮短了，提高了測試效率。
[0011]步驟一之前，反應管內放置有凍干粉劑，將凍干粉劑溶解；
[0012]所述凍干粉劑包括DNA聚合酶、支原體的特異性引物和去離子水；
[0013]步驟二中，通過反應管的變色情況判斷測試培養(yǎng)液是否存有支原體。
[0014]所述凍干粉劑是PCR反應液。[〇〇15]所述凍干粉劑包括緩沖液，所述緩沖液包括200mM且pH8.8的三羥基甲基氨基甲烷-鹽酸、l〇〇mM的氯化鉀、100mM的硫酸銨、20mM的硫酸鎂DTT、50mM溴酚藍。
[0016]mM的單位即為mmol/L。
[0017]所述凍干粉劑包括磷酸緩沖鹽溶液。當作緩沖液的同時，還可以用作裂解液。磷酸緩沖鹽溶液pH為7.4。
[0018]測試管的顏色變化與陽性對照管的顏色變化一致，說明測試培養(yǎng)液內含有支原體；
[0019]測試管的顏色變化與陽性對照管的顏色變化不一致，說明測試培養(yǎng)液內含有支原體。
[0020]陽性對照管的顏色應呈藍綠色。[0021 ]所述PCR反應儀的反應時間為60分鐘，反應溫度為61°C。[〇〇22] DNA聚合酶包括Bst DNA聚合酶或者顯色酶蛋白。[〇〇23] DNA聚合酶是Bst DNA聚合酶時，緩沖液為200mM、pH8.8的三羥基甲基氨基甲烷-鹽酸、100mM的氯化鉀、100mM的硫酸銨、20mM的硫酸鎂DTT、50mM溴酚藍。[〇〇24] DNA聚合酶是顯色酶蛋白時，緩沖液為200mM、pH8.8的三羥基甲基氨基甲烷-鹽酸、 100mM的氯化鉀、100mM的硫酸銨、20mM的硫酸鎂DTT。[〇〇25] DNA聚合酶對溫度非常敏感，只允許儀器顯示溫度與實際溫度的溫差不超過0.5 °C。如果溫差超過2°C，將導致酶活性大幅降低，進而擴增速度也大幅降低，陽性對照管可能無法呈現(xiàn)藍綠色。
[0026]步驟三中，反應管內放入礦物油1?3ml后，將反應管放至PCR反應儀內進行檢測。 通過礦物油來代替PCR反應儀中熱蓋。
[0027]所述反應管設有一用于輸入裂解液的第一進口，所述裂解液是用于破壞細菌的細胞膜使得細菌的DNA釋放到溶液中的裂解液；[〇〇28] 所述裂解液為濃度為0.lm〇L/L的PBS裂解液。[〇〇29] 所述第一進口設有一水流傳感器，所述水流傳感器連接一微型處理器系統(tǒng)，所述微型處理器系統(tǒng)連接一電磁閥，所述電磁閥也位于所述第一進口，且所述水流傳感器位于所述電磁閥的進口。
[0030]便于實現(xiàn)裂解液加入量的自動控制。
[0031]所述凍干粉劑還包括濃度為0.lm〇L/L的PBS裂解液。[〇〇32]所述凍干粉劑是將原材料充分攪拌均勻后冰凍成塊狀體，將塊狀體在0°C以下的環(huán)境下研磨成粉末。[〇〇33]便于存儲于運輸。[〇〇34]所述凍干粉劑還包括PH試劑?；蛘咚龇磻苌显O有用于輸入PH試劑的第三進□ 〇
[0035]支原體清除試劑的配方如下:泰妙菌素0.5 %?1 %、瑞他帕林1 %?1.5 %、克拉霉素1.5%?2%、氫吡四環(huán)素1 %?1.5%、氧氟沙星0.2%?0.5%、環(huán)丙沙星0.5 %?0.8%、 NaCll%?1.5%，余量為去尚子水。
[0036]支原體清除試劑的配方如下:泰妙菌素1%?1.5%、克拉霉素1.5%?2%、氫吡四環(huán)素1 %?1.5%、肉桂醛氧氟沙星酰腙0.3%?0.5%、NaCl 1 %?1.5%，余量為去離子水。 [〇〇37]支原體清除試劑的配方如下:泰妙菌素1%?1.5%、克拉霉素1.5%?2%、氫吡四環(huán)素1 %?1.5%、肉桂醛氧氟沙星酰腙0.3%?0.5%、NaCll %?1.5%，銀杏葉粉0.1 %? 0.3%，余量為去尚子水。
[0038]經試驗，上述配方的支原體清除效果優(yōu)異，且無毒性。
[0039]支原體清除試劑的配方如下:泰妙菌素1%、克拉霉素1.5%、氫吡四環(huán)素1.3%、肉桂醛氧氟沙星酰腙〇.5%、NaCl 1.5%，余量為去離子水。經試驗，上述配方的支原體清除效果最佳。且無毒性。
[0040]所述PCR反應儀上設有一用于放置反應管的放置位，所述放置位的底部設有一重量傳感器，所述重量傳感器連接所述微型處理器系統(tǒng)。
[0041]當感應到有反應管放置到PCR反應儀上后，自動進行裂解液的進入。[〇〇42]所述反應管上設有用于輸入支原體清除試劑的第二進口，所述第二進口設有一水流傳感器，所述水流傳感器連接一微型處理器系統(tǒng)，所述微型處理器系統(tǒng)連接一電磁閥，所述電磁閥也位于所述第二進口，且所述水流傳感器位于所述電磁閥的進口。
[0043]便于實現(xiàn)裂支原體清除試劑加入量的自動控制。便于在加入支原體清除試劑的同時，計算支原體清除試劑的使用量。
[0044]所述PCR反應儀包括一溫控模塊、一電源驅動模塊和一顯示與接口模塊，還包括一 PCR和毛細管電泳集成的微流控芯片，
[0045]微流控芯片包括一位于上方的上層基板、一位于下方的下層基板，所述上層基板和所述下層基板鍵合在一起，所述下層基板上設有一 PCR反應通道，所述PCR反應通道的一端與所述反應管的出料口導通；
[0046]所述反應管的出料口位于所述反應管的下端部；
[0047]所述溫控模塊包括一用于改變PCR反應通道溫度的半導體溫控片、一用于測量PCR 反應通道溫度的溫度傳感器；
[0048]所述半導體溫控片貼合在微流控芯片的雙面，微流控芯片單面的數(shù)量設有至少兩個，半導體溫控片的排列方向平行于PCR反應通道的導流方向。
[0049]所述反應管的出料口設有一止回閥，防止溶液逆流。
[0050]所述出料口上設有一 T型運動件，所述T型運動件與一彈簧的一端固定連接，所述彈簧的另一端與所述反應管的下端面固定連接，所述彈簧的彈性方向平行于所述T型運動件的運動方向；
[0051]所述T型運動件包括用于控制出料口水流通斷的擋板，所述擋板為所述T型運動件的上端部；
[0052]所述放置位是一與所述出料口相匹配的插口，所述插口上設有導流槽，所述導流槽的正中央設有一突起，所述突起的中心線與所述彈簧的中心軸線處于同一直線上，所述導流槽的下端面設有與所述PCR反應通道導通的通孔。
[0053]本發(fā)明通過優(yōu)化反應管的結構，從而實現(xiàn)將反應管放置于放置位上時，出料口與放置位上的導流槽的導通，反應管內的液體經出料口流至插口。當反應管放置與插口上時， 插口上的突起帶動T型運動件運動，T型運動件通過擋板控制出料口的水流導通至插口導流槽內的通孔。實現(xiàn)通過所述T型運動件控制所述第一出水口與所述插口上導流槽的導通情況。插口上的突起帶動T型運動件運動的同時，彈簧伸長，當反應管移出時，彈簧收縮，實現(xiàn)回復。
[0054]或者，所述出料口上設有一 T型運動件，所述T型運動件包括用于控制出料口水流通斷的擋板，所述擋板為所述T型運動件的上端部；
[0055]所述擋板與一彈簧的一端固定連接，所述彈簧的另一端與所述反應管的下端面固定連接，所述彈簧的彈性方向平行于所述T型運動件的運動方向；
[0056]所述放置位是一與所述出料口相匹配的插口，所述插口上設有導流槽，所述導流槽的正中央設有第一磁鐵，所述第一磁鐵的中心線與所述插口的中心軸線處于同一直線上，所述T型運動件的下端面設有與所述磁鐵磁性方向相同的第二磁鐵；
[0057]所述導流槽的下端面設有與所述PCR反應通道導通的通孔。
[0058]本發(fā)明通過優(yōu)化反應管的結構，從而實現(xiàn)將反應管放置于放置位上時，出料口與放置位上的導流槽的導通，反應管內的液體經出料口流至插口。當反應管放置與插口上時， 插口上的第一磁鐵驅動T型運動件運動，從而驅使彈簧運動，實現(xiàn)反應管移出時通過彈簧彈性實現(xiàn)出料口的閉合，防止漏液。T型運動件通過擋板控制出料口的水流導通至插口導流槽內的通孔。實現(xiàn)通過所述T型運動件控制所述第一出水口與所述插口上導流槽的導通情況。
[0059]所述PCR反應儀包括熒光檢測模塊，所述下層基板上設有CE分離通道；
[0060]所述熒光檢測模塊包括一激發(fā)光源，激發(fā)光源產生較窄光譜帶寬的激發(fā)光，并照射CE分離通道上，激發(fā)含有熒光分子的DNA片段發(fā)出熒光；[0061 ] 所述PCR反應通道與所述CE分離通道存在至少一個交叉點，所述PCR反應通道和所述CE分離通道的端口處均設有一凹槽；
[0062]所述上層基板上與所述凹槽相對的地方開有用于填充試劑和安置電極的孔；
[0063]所述電源驅動模塊包括一 PCR驅動電源和一 CE驅動電源，所述PCR驅動電源與兩個分別放置在PCR反應通道的起始端和末端的電極相連接，所述CE驅動電源與兩個分別放置在CE分離通道的起始端和末端的電極相連接?！靖綀D說明】[〇〇64]圖1為本發(fā)明的流程圖?！揪唧w實施方式】
[0065]為了使本發(fā)明實現(xiàn)的技術手段、創(chuàng)作特征、達成目的與功效易于明白了解，下面結合具體圖示進一步闡述本發(fā)明。
[0066]參見圖1，支原體檢測和去除方法，包括如下步驟:步驟一，取至少2個反應管，分別為陽性對照管、測試管，陽性對照管內加入陽性支原體DNA，測試管內加入測試培養(yǎng)液;步驟二，將反應管放至PCR反應儀內進行檢測，如果測試結果為培養(yǎng)液中存有支原體，跳至步驟三;步驟三，使用支原體清除試劑對支原體進行去除。本發(fā)明通過設有2反應管，便于進行數(shù)據(jù)的比對，通過PCR反應儀進行測定，相較傳統(tǒng)的培養(yǎng)法測試時間縮短了，提高了測試效率。
[0067]步驟一之前，反應管內放置有凍干粉劑，將凍干粉劑溶解;凍干粉劑包括DNA聚合酶、支原體的特異性引物和去離子水;步驟二中，通過反應管的變色情況判斷測試培養(yǎng)液是否存有支原體。測試管的顏色變化與陽性對照管的顏色變化一致，說明測試培養(yǎng)液內含有支原體;測試管的顏色變化與陽性對照管的顏色變化不一致，說明測試培養(yǎng)液內含有支原體。陽性對照管的顏色應呈藍綠色。凍干粉劑包括20nMDNA聚合酶、200nM支原體的特異性引物，余量為去離子水。上游引物及下游引物的量相等。[〇〇68] 支原體的特異性引物包括上游引物及下游引物，上游引物及下游引物各20uL，上游引物的序列為5 ’ -TAGACCAGGATGGACAAGATGAT-3 ’，下游引物的序列為5 ’ -AACCACAGGACTAAGACGCAACA-3 ’。支原體的特異性引物包括包括兩條內引物(FIP和BIP)和兩條外引物(F3和B3)，其核酸序列如下:
[0069]F3:5 ’-TCTTACCACTGTTAACGGCC-3 ’；
[0070]B3:5 ’-CCGCTTTGGTCAACACATCA-3 ’；[0071 ] FIP:5 ’-ACGGCAACACGTAATCAGGTCATCCAGTCAAGGTCCCCAA-3 ’；
[0072] BIP:5’-AGGACTTGCCATTGGAATCCCAGATAGCGCAAACCCAGCC-3’。[〇〇73] DNA聚合酶包括Bst DNA聚合酶或者顯色酶蛋白。[〇〇74] PCR反應儀的反應時間為60分鐘，反應溫度為61°C ANA聚合酶對溫度非常敏感，只允許儀器顯示溫度與實際溫度的溫差不超過〇.5°C。如果溫差超過2°C，將導致酶活性大幅降低，進而擴增速度也大幅降低，陽性對照管可能無法呈現(xiàn)藍綠色。[〇〇75]步驟三中，反應管內放入礦物油1?3ml后，將反應管放至PCR反應儀內進行檢測。 通過礦物油來代替PCR反應儀中熱蓋。DNA聚合酶包括TaqDNA聚合酶。
[0076]反應管設有一用于輸入裂解液的第一進口，裂解液是用于破壞細菌的細胞膜使得細菌的DNA釋放到溶液中的裂解液;裂解液為濃度為0.lm〇L/L的PBS裂解液;第一進口設有一水流傳感器，水流傳感器連接一微型處理器系統(tǒng)，微型處理器系統(tǒng)連接一電磁閥，電磁閥也位于第一進口，且水流傳感器位于電磁閥的進口。便于實現(xiàn)裂解液加入量的自動控制。 [〇〇77]凍干粉劑還包括濃度為0.lm〇L/L的PBS裂解液。凍干粉劑是將原材料充分攪拌均勻后冰凍成塊狀體，將塊狀體在o°c以下的環(huán)境下研磨成粉末。便于存儲于運輸。
[0078]支原體清除試劑的配方如下:泰妙菌素0.5 %?1 %、瑞他帕林1 %?1.5 %、克拉霉素1.5%?2%、氫吡四環(huán)素1 %?1.5%、氧氟沙星0.2%?0.5%、環(huán)丙沙星0.5 %?0.8%、 NaCll%?1.5%，余量為去離子水。支原體清除試劑的配方如下:泰妙菌素1 %?1.5%、克拉霉素1.5%?2%、氫吡四環(huán)素1 %?1.5%、肉桂醛氧氟沙星酰腙0.3%?0.5%、NaCll% ?1.5%，余量為去離子水。支原體清除試劑的配方如下:泰妙菌素1 %、克拉霉素1.5%、氫吡四環(huán)素1.3%、肉桂醛氧氟沙星酰腙0.5%、NaCll.5%，余量為去離子水。經試驗，上述配方的支原體清除效果最佳。
[0079]PCR反應儀上設有一用于放置反應管的放置位，放置位的底部設有一重量傳感器， 重量傳感器連接微型處理器系統(tǒng)。當感應到有反應管放置到PCR反應儀上后，自動進行裂解液的進入。
[0080]反應管上設有用于輸入支原體清除試劑的第二進口，第二進口設有一水流傳感器，水流傳感器連接一微型處理器系統(tǒng)，微型處理器系統(tǒng)連接一電磁閥，電磁閥也位于第二進口，且水流傳感器位于電磁閥的進口。便于實現(xiàn)裂支原體清除試劑加入量的自動控制。便于在加入支原體清除試劑的同時，計算支原體清除試劑的使用量。[0〇81 ] PCR反應儀包括一溫控模塊、一電源驅動模塊和一顯不與接口模塊，還包括一PCR 和毛細管電泳集成的微流控芯片，微流控芯片包括一位于上方的上層基板、一位于下方的下層基板，上層基板和下層基板鍵合在一起，下層基板上設有一 PCR反應通道，PCR反應通道的一端與反應管的出料口導通;反應管的出料口位于反應管的下端部;溫控模塊包括一用于改變PCR反應通道溫度的半導體溫控片、一用于測量PCR反應通道溫度的溫度傳感器;半導體溫控片貼合在微流控芯片的雙面，微流控芯片單面的數(shù)量設有至少兩個，半導體溫控片的排列方向平行于PCR反應通道的導流方向。
[0082]反應管的出料口設有一止回閥，防止溶液逆流。
[0083]出料口上設有一 T型運動件，T型運動件與一彈簧的一端固定連接，彈簧的另一端與反應管的下端面固定連接，彈簧的彈性方向平行于T型運動件的運動方向；T型運動件包括用于控制出料口水流通斷的擋板，擋板為T型運動件的上端部;放置位是一與出料口相匹配的插口，插口上設有導流槽，導流槽的正中央設有一突起，突起的中心線與彈簧的中心軸線處于同一直線上，導流槽的下端面設有與PCR反應通道導通的通孔。本發(fā)明通過優(yōu)化反應管的結構，從而實現(xiàn)將反應管放置于放置位上時，出料口與放置位上的導流槽的導通，反應管內的液體經出料口流至插口。當反應管放置與插口上時，插口上的突起帶動T型運動件運動，T型運動件通過擋板控制出料口的水流導通至插口導流槽內的通孔。實現(xiàn)通過T型運動件控制第一出水口與插口上導流槽的導通情況。插口上的突起帶動T型運動件運動的同時， 彈簧伸長，當反應管移出時，彈簧收縮，實現(xiàn)回復。
[0084]或者，出料口上設有一 T型運動件，T型運動件包括用于控制出料口水流通斷的擋板，擋板為T型運動件的上端部;擋板與一彈簧的一端固定連接，彈簧的另一端與反應管的下端面固定連接，彈簧的彈性方向平行于T型運動件的運動方向；放置位是一與出料口相匹配的插口，插口上設有導流槽，導流槽的正中央設有第一磁鐵，第一磁鐵的中心線與插口的中心軸線處于同一直線上，T型運動件的下端面設有與磁鐵磁性方向相同的第二磁鐵;導流槽的下端面設有與PCR反應通道導通的通孔。本發(fā)明通過優(yōu)化反應管的結構，從而實現(xiàn)將反應管放置于放置位上時，出料口與放置位上的導流槽的導通，反應管內的液體經出料口流至插口。當反應管放置與插口上時，插口上的第一磁鐵驅動T型運動件運動，從而驅使彈簧運動，實現(xiàn)反應管移出時通過彈簧彈性實現(xiàn)出料口的閉合，防止漏液。T型運動件通過擋板控制出料口的水流導通至插口導流槽內的通孔。實現(xiàn)通過T型運動件控制第一出水口與插口上導流槽的導通情況。
[0085]PCR反應儀包括熒光檢測模塊，下層基板上設有CE分離通道;熒光檢測模塊包括一激發(fā)光源，激發(fā)光源產生較窄光譜帶寬的激發(fā)光，并照射CE分離通道上，激發(fā)含有熒光分子的DNA片段發(fā)出熒光;PCR反應通道與CE分離通道存在至少一個交叉點，PCR反應通道和CE分離通道的端口處均設有一凹槽;上層基板上與凹槽相對的地方開有用于填充試劑和安置電極的孔；電源驅動模塊包括一PCR驅動電源和一CE驅動電源，PCR驅動電源與兩個分別放置在PCR反應通道的起始端和末端的電極相連接，CE驅動電源與兩個分別放置在CE分離通道的起始端和末端的電極相連接。[〇〇86]以上顯示和描述了本發(fā)明的基本原理和主要特征以及本發(fā)明的優(yōu)點。本行業(yè)的技術人員應該了解，本發(fā)明不受上述實施例的限制，上述實施例和說明書中描述的只是說明本發(fā)明的原理，在不脫離本發(fā)明精神和范圍的前提下，本發(fā)明還會有各種變化和改進，這些變化和改進都落入要求保護的本發(fā)明范圍內。本發(fā)明要求保護范圍由所附的權利要求書及其等效物界定。
【主權項】
1.支原體檢測和去除方法，其特征在于，包括如下步驟:步驟一，取至少2個反應管，分別為陽性對照管、測試管，陽性對照管內加入陽性支原體 DNA，測試管內加入測試培養(yǎng)液；步驟二，將反應管放至PCR反應儀內進行檢測，如果測試結果為培養(yǎng)液中存有支原體， 跳至步驟三；步驟三，使用支原體清除試劑對支原體進行去除。2.根據(jù)權利要求1所述的支原體檢測和去除方法，其特征在于:步驟一之前，反應管內 放置有凍干粉劑，將凍干粉劑溶解；所述凍干粉劑包括DNA聚合酶、支原體的特異性引物和去離子水；步驟二中，通過反應管的變色情況判斷測試培養(yǎng)液是否存有支原體。3.根據(jù)權利要求2所述的支原體檢測和去除方法，其特征在于:測試管的顏色變化與陽 性對照管的顏色變化一致，說明測試培養(yǎng)液內含有支原體；測試管的顏色變化與陽性對照管的顏色變化不一致，說明測試培養(yǎng)液內含有支原體。4.根據(jù)權利要求1所述的支原體檢測和去除方法，其特征在于:DNA聚合酶包括Bst DNA 聚合酶或者顯色酶蛋白；所述PCR反應儀的反應時間為60分鐘，反應溫度為61°C ;步驟三中，反應管內放入礦物油1?3ml后，將反應管放至PCR反應儀內進行檢測。5.根據(jù)權利要求2所述的支原體檢測和去除方法，其特征在于:所述凍干粉劑還包括濃 度為0.lm〇L/L的PBS裂解液；所述凍干粉劑是將原材料充分攪拌均勻后冰凍成塊狀體，將塊狀體在〇°C以下的環(huán)境 下研磨成粉末。6.根據(jù)權利要求1所述的支原體檢測和去除方法，其特征在于:所述反應管上設有用于 輸入支原體清除試劑的第二進口，所述第二進口設有一水流傳感器，所述水流傳感器連接 一微型處理器系統(tǒng)，所述微型處理器系統(tǒng)連接一電磁閥，所述電磁閥也位于所述第二進口， 且所述水流傳感器位于所述電磁閥的進口。7.根據(jù)權利要求1所述的支原體檢測和去除方法，其特征在于:所述PCR反應儀包括一 溫控模塊、一電源驅動模塊和一顯示與接口模塊，還包括一 PCR和毛細管電泳集成的微流控 芯片，微流控芯片包括一位于上方的上層基板、一位于下方的下層基板，所述上層基板和所 述下層基板鍵合在一起，所述下層基板上設有一 PCR反應通道，所述PCR反應通道的一端與 所述反應管的出料口導通；所述反應管的出料口位于所述反應管的下端部；所述溫控模塊包括一用于改變PCR反應通道溫度的半導體溫控片、一用于測量PCR反應 通道溫度的溫度傳感器；所述半導體溫控片貼合在微流控芯片的雙面，微流控芯片單面的數(shù)量設有至少兩個， 半導體溫控片的排列方向平行于PCR反應通道的導流方向。8.根據(jù)權利要求7所述的支原體檢測和去除方法，其特征在于:所述出料口上設有一 T 型運動件，所述T型運動件包括用于控制出料口水流通斷的擋板，所述擋板為所述T型運動 件的上端部；所述擋板與一彈簧的一端固定連接，所述彈簧的另一端與所述反應管的下端面固定連 接，所述彈簧的彈性方向平行于所述T型運動件的運動方向；所述放置位是一與所述出料口相匹配的插口，所述插口上設有導流槽，所述導流槽的 正中央設有第一磁鐵，所述第一磁鐵的中心線與所述插口的中心軸線處于同一直線上，所 述T型運動件的下端面設有與所述磁鐵磁性方向相同的第二磁鐵；所述導流槽的下端面設有與所述PCR反應通道導通的通孔。9.根據(jù)權利要求1所述的支原體檢測和去除方法，其特征在于:支原體清除試劑的配方 如下:泰妙菌素1 %?1.5%、克拉霉素1.5%?2%、氫吡四環(huán)素1 %?1.5%、肉桂醛氧氟沙 星酰腙0.3%?0.5%、NaCl 1 %?1.5%，余量為去離子水。10.根據(jù)權利要求1所述的支原體檢測和去除方法，其特征在于:支原體清除試劑的配 方如下:泰妙菌素0.5%?1 %、瑞他帕林1 %?1.5%、克拉霉素1.5%?2%、氫吡四環(huán)素1 % ?1.5%、氧氟沙星0.2%?0.5%、環(huán)丙沙星0.5%?0.8%、NaCll%?1.5%，余量為去離子 水。
【文檔編號】C12Q1/04GK105950719SQ201610277895
【公開日】2016年9月21日
【申請日】2016年4月28日
【發(fā)明人】周靜, 楊妍, 劉迪慧, 溫韜
【申請人】上海源培生物科技股份有限公司