專利名稱：純化花紅片粗提物中黃酮類化合物的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于一種純化花紅片粗提物中黃酮類化合物的方法。
背景技術(shù)：
花紅片組成成份為一點(diǎn)紅、白花蛇舌草、地桃花、白背葉根、桃金娘根、菥蓂、雞血藤。 功能主治清熱解毒、燥濕止帶，祛瘀止痛。用于濕熱下注，帶下黃稠，月經(jīng)不調(diào)，痛經(jīng)等 癥；附件炎、子宮內(nèi)膜炎、盆腔炎等婦科炎癥。由廣西花紅藥業(yè)有限責(zé)任公司獨(dú)家生產(chǎn)。經(jīng) 過臨床驗(yàn)證本品對(duì)因濕熱瘀滯所致婦科炎癥有很好的療效，無明顯毒副作用。
關(guān)于花紅片藥材水提醇沉浸膏的黃酮類化合物的進(jìn)一步提取分離技術(shù)沒有報(bào)道。由于粗 提物中總黃酮含量不高，制約了其藥效更好的發(fā)揮。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是提供一種利用膜分離和大孔吸附樹脂技術(shù)，純化花紅片粗提 物浸膏中黃酮類化合物的方法，以保證花紅片能發(fā)揮更好藥效。
本發(fā)明以如下技術(shù)方案解決上述技術(shù)問題 純化方法為
(1) 將花紅片藥材的水提醇沉浸膏按1 : 20 1 : 200 (g/ml)溶于去離子水中，待充分
溶解后減壓抽濾，除去水不溶成分；
(2) 進(jìn)行膜過濾，合并濾液并濃縮至干；膜材料為聚丙烯中空纖維、陶瓷復(fù)合膜或聚四
氟乙烯膜，膜孔徑為0. 05um 0.5um;
(3) 用醋酸水溶液和氫氧化鈉或氫氧化鉀水溶液調(diào)節(jié)pH值至1.0 10.0;
(4) 在瓶中靜態(tài)吸附、解吸或上大孔吸附樹脂柱動(dòng)態(tài)吸附，用乙醇-水組合洗脫，控制吸 附速度和洗脫速度；大孔吸附樹脂是DM130、 AB-8、 DlOl、 DM301或X-5;大孔吸附樹 脂與吸附液用量之比為1 : 2~1 : 200g/ml;
(5) 收集各段洗脫液，減壓濃縮，得高含量黃酮的花紅片浸膏。
洗脫液pH值為1.0 10.0，洗脫液乙醇濃度為10 95%,洗脫液用量為吸附液體積的 Q.l 3倍，洗脫速度1 20ml/min，洗脫時(shí)間0.1 24h。用本發(fā)明方法生產(chǎn)的花紅片浸膏，為黑色黏稠膏狀固體，總黃酮含量大于60%，高于只
采用膜分離或只采用大孔吸附樹脂單一技術(shù)得到的總黃酮含量。且生產(chǎn)成本低，安全無毒副 作用，為工業(yè)化生產(chǎn)提供了必要的條件，將使醫(yī)藥企業(yè)獲得顯著的經(jīng)濟(jì)效益和社會(huì)效益。
具體實(shí)施例方式
花紅片是有明顯清熱解毒、燥濕止帶、祛瘀止痛功能的一種中成藥，得到眾多患者的信 賴。但由于黃酮類化合物分離技術(shù)未能很好過關(guān)，導(dǎo)致花紅片藥材的水提醇沉浸膏中的黃酮
類化合物的含量一般只能在15%左右，直接影響到花紅片藥效的進(jìn)一步提高。
本發(fā)明將技術(shù)效果明確、己經(jīng)公知的膜分離技術(shù)和大孔吸附樹脂技術(shù)結(jié)合起來，對(duì)花紅 片藥材的水提醇沉浸膏中的黃酮類化合物進(jìn)一步純化，結(jié)果可使水提醇沉浸膏中的黃酮含量. 提高到60%以上。
膜分離技術(shù)是采用陶瓷復(fù)合膜和聚四氟乙烯膜等對(duì)不同分子量大小的物質(zhì)進(jìn)行分離。原 料液從循環(huán)罐中由泵輸送到膜組件后，由于膜的內(nèi)外存在壓差，溶解性的物質(zhì)或粒徑小于膜 孔徑的物質(zhì)透過膜進(jìn)入到滲透?jìng)?cè)，大分子物質(zhì)被膜截留并被帶出膜組件回流到循環(huán)罐。這樣 循環(huán)工作，最終達(dá)到分離的目的。膜分離方法簡單，易于工業(yè)化生產(chǎn)。
大孔吸附樹脂法明顯的好處是不需要復(fù)雜的設(shè)備，處理方法簡單，樹脂可再生，樹脂再 生所用的酸和堿可互相中和，對(duì)環(huán)境造成的危害小，制備的成本較低，制備方法容易得到推 廣。
本發(fā)明的方法先采用膜分離技術(shù)對(duì)花紅片藥材水提醇沉浸膏中水溶解完全的部分進(jìn)行 初步純化，去除一些大分子物質(zhì)包括鞣質(zhì)和多糖等，得到小分子的水溶液，再用處理好的樹 脂柱(或瓶中樹脂)對(duì)其中的總黃酮進(jìn)行吸附，待吸附充分后，用乙醇-水洗脫，分別收集 過柱后的吸附液和解吸液，減壓濃縮，溶劑可以回收再利用。
本發(fā)明采用的原料是花紅片藥材水提醇沉浸膏，這種浸膏是采用現(xiàn)有技術(shù)由花紅片的七 種藥材經(jīng)水提取乙醇沉淀工藝得到的產(chǎn)品。
本發(fā)明的具體工藝是
(1) 稱取定量的花紅片藥材水提醇沉浸膏，加入去離子水溶解。浸膏與去離子水的比
例為1 : 20 1 : 200 (g/ml);室溫靜置3h 6h分層后減壓抽濾，加水靜置分層1~5次，合 并濾液，即得水溶液。
(2) 進(jìn)行膜過濾，合并并濃縮過濾液至干；膜孔徑為0. 05um 0.5um。
(3) 加入醋酸水溶液和氫氧化鈉或氫氧化鉀水溶液調(diào)節(jié)經(jīng)(2)所得的濃縮液pH值。 醋酸水溶液濃度可為10% 95%,氫氧化鈉或氫氧化鉀水溶液的重量百分比濃度為4% 20%;吸附液pH為1.0 10.0。(4) 采用大孔吸附樹脂靜態(tài)吸附、解吸時(shí)，大孔吸附樹脂用量與吸附液用量之比為i :
2~1: 200 (g/ml)，放置恒溫?fù)u床震蕩，溫度0'C 80。C，震蕩速度40 200(rad/min)，吸 附、解吸時(shí)間0. lh 24h。
(5) 若采用大孔吸附樹脂柱進(jìn)行動(dòng)態(tài)吸附，大孔吸附樹脂型號(hào)包括DM130， AB-8， DlOl， DM301， X-5;大孔吸附樹脂柱徑高比為1 : 1 1 :30，樹脂用量與吸附液用量比為 1 : 2~1 : 200 (g/ml)，吸附次數(shù)1 5次，控制吸附速度1 20 (ml/min)，吸附時(shí)間0.1h 7h。
(6) 用乙醇水溶液洗脫。加入醋酸水溶液和氫氧化鈉或氫氧化鉀水溶液調(diào)節(jié)洗脫液 pH值為1.0 10.0，洗脫液乙醇濃度為10%~95%，洗脫液用量為吸附液用量的0.1 3倍， 洗脫速度1 20(ml/min)，洗脫時(shí)間0.1h 3.5h。
(7) 利用紫外分光光度法，在500nm處，以蘆丁標(biāo)準(zhǔn)液為對(duì)照，測(cè)定各樣品原液、 吸附液、洗脫液的黃酮濃度。分別精確移取各樣品原液、洗脫液lml 50ml濃縮至干，計(jì)算 黃酮含量和提取率。
(8) 分別收集各段洗脫液(解吸液)，減壓濃縮，得高黃酮含量的花紅片浸膏。 實(shí)施例1:
稱取花紅片藥材水提醇沉浸膏0.5kg，加入10L去離子水溶解，靜置6h后過濾，濾渣干 燥稱重，濾液經(jīng)過0.5um陶瓷復(fù)合膜分離，濃縮至干，得到干浸膏。稱取上述浸膏2.5g， 加水定容至50ml，得到質(zhì)量濃度為50mg/ml的樣品液。精確稱取4.28g (濾紙吸干)已預(yù)處 理AB-8大孔吸附樹脂于250ml錐形瓶中；樣品液中加幾滴10%醋酸水溶液，調(diào)節(jié)樣品液pH 至5.0，移取40ml樣品液于錐形瓶中(大孔吸附樹脂用量與吸附液用量之比為1 : 10(g/ml))， 密封瓶口，放入恒溫?fù)u床震蕩，溫度為0'C，轉(zhuǎn)速為40rad/min, 24h后取出吸附液；加入 10ml去離子水，室溫下充分振搖6min，取出水洗液；加入40ml 10%乙醇水溶液(洗脫液用 量與吸附液用量相等)，放入恒溫?fù)u床同上述條件下震蕩12h，取出醇洗液。分別測(cè)定原液、 水洗液、醇洗液的黃酮濃度。精確移取10ml原液、水洗液、醇洗液濃縮得到干浸膏，通過 計(jì)算，原液浸膏黃酮含量為15.47%，水洗液浸膏含量為4.83%，醇洗液浸膏含量為49.35%， 提取率為30.76%。
實(shí)施例2:
稱取花紅片藥材水提醇沉浸膏l(xiāng)kg，加入30L去離子水溶解，靜置5h后過濾，濾渣干 燥稱重，濾液經(jīng)過0.2um聚四氟乙烯膜分離，濃縮至干，得到干浸膏。稱取上述浸膏0.5g， 加水定容至100ml，得到質(zhì)量濃度為5mg/ml的樣品液。精確稱取4.11g (濾紙吸干)已預(yù)處理D101大孔吸附樹脂于250ml錐形瓶中；樣品液中加幾滴95%醋酸水溶液，調(diào)節(jié)pH至1.0, 移取80ml樣品液于錐形瓶中(大孔吸附樹脂用量與吸附液用量之比為1 : 20 (g/ml))，密封 瓶口，放入恒溫?fù)u床震蕩，溫度為80'C，轉(zhuǎn)速為200rad/min, 12h后取出吸附液；加入8ml 去離子水，室溫下充分振搖6min，取出水洗液；加入8ml 50%乙醇水溶液(洗脫液用量為吸 附液用量的0.1倍)，放入恒溫?fù)u床同上述條件下震蕩24h,取出醇洗液。分別測(cè)定原液、水 洗液、醇洗液的黃酮濃度。精確移取lml原液、水洗液、醇洗液濃縮得到干浸膏，通過計(jì)算， 原液浸膏黃酮含量為17.45%，水洗液浸膏含量為4.12%，醇洗液浸膏含量為45.55%，提取 率為34.26%。
實(shí)施例3:
稱取花紅片藥材水提醇沉浸膏0.5kg，加入40L去離子水溶解，靜置4h后過濾，濾渣干 燥稱重，濾液經(jīng)過O.l陶瓷復(fù)合um膜分離，濃縮至干，得到干浸膏。稱取上述浸膏0.5g， 加水定容至100ml，得到質(zhì)量濃度為5mg/ml的樣品液。精確稱取4.52g (濾紙吸干)已預(yù)處 理DM301大孔吸附樹脂于250ml錐形瓶中；樣品液中加幾滴95%醋酸水溶液，調(diào)節(jié)pH至 1.0，移取80ml樣品液于錐形瓶中(大孔吸附樹脂用量與吸附液用量之比為1 : 20 (g/ml))， 密封瓶口，放入恒溫?fù)u床震蕩，溫度為80'C，轉(zhuǎn)速為200rad/min， 0. lh后取出吸附液；加 入8ral去離子水，室溫下充分振搖6min,取出水洗液；加入8ml 50%乙醇水溶液(洗脫液用 量為吸附液用量的O.l倍)，放入恒溫?fù)u床同上述條件下震蕩0. lh,取出醇洗液。分別測(cè)定 原液、水洗液、醇洗液的黃酮濃度。精確移取lml原液、水洗液、醇洗液濃縮得到干浸膏， 通過計(jì)算，原液浸膏黃酮含量為18.18%,水洗液浸膏含量為3.23%,醇洗液浸膏含量為 38.78%，提取率為29.39%。
實(shí)施例4:
稱取花紅片藥材水提醇沉浸膏0.2kg，加入20L去離子水溶解，靜置3h后過濾，濾渣干
燥稱重，濾液經(jīng)過0.05pm陶瓷復(fù)合膜分離，濃縮至干，得到干浸膏。稱取上述浸膏30.0g，
加水定容至2000ml，得到質(zhì)量濃度為15mg/ml的樣品液。稱取10gDM-301濕樹脂裝柱，徑
高比為1 : 8。調(diào)節(jié)吸附速度為20ml/min,對(duì)2000ml樣品液進(jìn)行動(dòng)態(tài)吸附(大孔吸附樹脂用
量與吸附液用量之比為1 :200 (g/ml))，吸附次數(shù)1次，吸附時(shí)間1.7h?？刂葡疵撍俣葹?br> lml/min，用200ml95。/。乙醇洗脫(洗脫液用量為吸附液用量的0.1倍)，洗脫時(shí)間3.5h，收
集洗脫液200ml。分別測(cè)定原液、洗脫液的黃酮濃度，移取50ml洗脫液濃縮得到干浸膏，
通過計(jì)算，原液浸膏黃酮含量為17.81%，濃組分洗脫液浸膏黃酮含量為64.53%，提取率為27.38%。
實(shí)施例5:
稱取花紅片藥材水提醇沉浸膏0.6kg，加入12L去離子水溶解，靜置4h后過濾，濾渣干 燥稱重，濾液經(jīng)過0.1wm聚四氟乙烯膜分離，濃縮至干，得到干浸膏。稱取上述浸膏5.0g， 加水定容至200ml，得到質(zhì)量濃度為25mg/ml的樣品液。稱取50gD-101濕樹脂裝柱，徑高 比為1 : 30。樣品液中幾滴加入20%氫氧化鉀水溶液，調(diào)節(jié)pH至10.0，控制吸附速度為 lml/min，對(duì)200ml樣品液進(jìn)行動(dòng)態(tài)吸附(大孔吸附樹脂用量與吸附液用量之比為1 :4 (g/ml))，吸附次數(shù)2次，吸附時(shí)間7.0h?？刂葡疵撍俣葹?0ml/min，用600ml 30%乙醇洗 脫(洗脫液用量為吸附液用量的3倍)，洗脫時(shí)間0.5h，收集洗脫液596ml。分別測(cè)定原液、 洗脫液的黃酮濃度，移取50ml洗脫液濃縮得到干浸膏，通過計(jì)算，原液浸膏黃酮含量為 16.43%，濃組分洗脫液浸膏黃酮含量為61.59%，提取率為45.32%。
實(shí)施例6:
稱取花紅片藥材水提醇沉浸膏0.3kg，加入12L去離子水溶解，靜置4h后過濾，濾渣干 燥稱重，濾液經(jīng)過O.lum陶瓷復(fù)合膜分離，濃縮至干，得到干浸膏。稱取上述浸膏2.0g, 加水定容至200ml，得到質(zhì)量濃度為10mg/ml的樣品液。稱取10gAB-8濕樹脂裝柱，徑高比 為1 : 1。樣品液中加入幾滴4%氫氧化鈉水溶液，調(diào)節(jié)pH至8.0,控制吸附速度為5.0ml/min， 對(duì)20ml樣品液進(jìn)行動(dòng)態(tài)吸附(大孔吸附樹脂用量與吸附液用量之比為1 : 2),吸附次數(shù)5 次，吸附時(shí)間0.4h?？刂葡疵撍俣葹?.0ml/min，用60ml7()Q/。乙醇洗脫(洗脫液用量為吸附 液用量的3倍)，洗脫時(shí)間0.2h，收集洗脫液58ml。分別測(cè)定原液、洗脫液的黃酮濃度，移 取lml洗脫液濃縮得到干浸膏，通過計(jì)算，原液浸膏黃酮含量為16.27%，濃組分洗脫液浸 膏黃酮含量為62.52%,提取率為57.86%。
實(shí)施例7:
稱取花紅片藥材水提醇沉浸膏0.4kg，加入12L去離子水溶解，靜置4h后過濾，濾渣干 燥稱重，濾液經(jīng)過0.2um聚四氟乙烯膜分離，濃縮至干，得到干浸膏。稱取上述浸膏2.0g， 加水定容至200ml，得到質(zhì)量濃度為10mg/ml的樣品液。稱取10g D101濕樹脂裝柱，徑髙 比為1:1。樣品液中加入幾滴4%氫氧化鈉水溶液，調(diào)節(jié)pH至8.0，控制吸附速度為 3.34ml/min,對(duì)20ml樣品液進(jìn)行動(dòng)態(tài)吸附(大孔吸附樹脂用量與吸附液用量之比為1 :2 (g/ml))，吸附次數(shù)1次，吸附時(shí)間O.lh?？刂葡疵撍俣葹?0.0ml/min,用60ml 70%乙醇洗脫(洗脫液用量為吸附液用量的3倍)，洗脫時(shí)間0.1h，收集洗脫液60ml。分別測(cè)定原液、 洗脫液的黃酮濃度，移取lml洗脫液濃縮得到干浸膏，通過計(jì)算，原液浸膏黃酮含量為 16.34%，濃組分洗脫液浸膏黃酮含量為60.26 %，提取率為41.62%。 實(shí)施例8:
稱取花紅片藥材水提醇沉浸膏0.8kg,加入40L去離子水溶解，靜置3h后過濾，濾渣干 燥稱重，濾液經(jīng)過0.1um陶瓷復(fù)合膜分離，濃縮至干，得到干浸膏。稱取上述浸膏2.0g， 加水定容至200ml,得到質(zhì)量濃度為10mg/ml的樣品液。稱取10gAB-8濕樹脂裝柱，徑高比 為1 : 1。樣品液中幾滴加入20%氫氧化鈉水溶液，調(diào)節(jié)pH至10.0，控制吸附速度為 1.0ml/min，對(duì)20ml樣品液進(jìn)行動(dòng)態(tài)吸附(大孔吸附樹脂用量與吸附液用量之比為1 :2 (g/mU)，吸附次數(shù)3次，吸附時(shí)間lh。控制洗脫速度為1.0ml/min，用60ml70。/。乙醇洗脫 (洗脫液用量為吸附液用量的3倍)，洗脫時(shí)間lh,收集洗脫液60ml。分別測(cè)定原液、洗脫 液的黃酮濃度，移取lml洗脫液濃縮得到干浸膏，通過計(jì)算，原液浸膏黃酮含量為15.96%， 濃組分洗脫液浸膏黃酮含量為62.61%，提取率為43.48%。
權(quán)利要求
1.一種純化花紅片粗提物浸膏中黃酮類化合物的方法，其特征是純化方法為(1)將花紅片藥材水提醇沉浸膏按1∶20～1∶200g/ml溶于去離子水中，待充分溶解后減壓抽濾，除去水不溶成分；(2)進(jìn)行膜過濾，合并濾液并濃縮至干；膜材料為聚丙烯中空纖維、陶瓷復(fù)合膜或聚四氟乙烯膜，膜孔徑為0.05μm～0.5μm；(3)用醋酸水溶液和氫氧化鈉或氫氧化鉀水溶液調(diào)節(jié)pH值至1.0～10.0；(4)在瓶中靜態(tài)吸附、解吸或上大孔吸附樹脂柱動(dòng)態(tài)吸附，用乙醇-水組合洗脫，控制吸附速度和洗脫速度；大孔吸附樹脂是DM130、AB-8、D101、DM301或X-5；大孔吸附樹脂與吸附液用量之比為1∶2～1∶200g/ml；(5)收集各段洗脫液，減壓濃縮，得高含量黃酮的花紅片浸膏。
2.如權(quán)利要求1所述的純化花紅片粗提物浸膏中黃酮類化合物的方法，其特征是洗脫液 pH值為1.0 10.0，洗脫液乙醇濃度為10 95%,洗脫液用量為吸附液體積的0.1 3倍，洗 脫速度1 20ml/min，洗脫時(shí)間0.1 24h。
全文摘要
一種純化花紅片浸膏中黃酮類化合物的方法，其純化方法為將花紅片藥材水提醇沉浸膏溶于去離子水中，充分溶解后減壓抽濾，除去水不溶成分，進(jìn)行膜過濾，去除大分子物質(zhì)。在瓶中靜態(tài)吸附、解吸或上大孔吸附樹脂柱動(dòng)態(tài)吸附，用乙醇-水組合洗脫，收集各段洗脫液，減壓濃縮，得高黃酮含量的花紅片浸膏。用本發(fā)明的方法生產(chǎn)的花紅片浸膏，總黃酮含量大于60％，較現(xiàn)有花紅片水提醇沉浸膏中黃酮含量提高四倍以上，可直接入藥。且生產(chǎn)成本低，安全無毒副作用，經(jīng)濟(jì)效益顯著。
文檔編號(hào)A61K36/185GK101618097SQ20091011429
公開日2010年1月6日 申請(qǐng)日期2009年8月10日 優(yōu)先權(quán)日2009年8月10日
發(fā)明者周永紅, 華 楊, 王立升 申請(qǐng)人:廣西大學(xué)