二氫黃酮類化合物在制備抗真菌藥物中的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明設(shè)及醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體地說，是二氨黃酬類化合物在制備抗真菌藥物組 合中的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 真菌病，即由真菌引起的疾病。作為一類廣泛存在于自然界中的真核生物，真菌可 感染人體的不同部位。從臨床的致病情況上看，真菌病可分為淺部真菌病和深部真菌病兩 大類?？股貫E用等諸多的問題導(dǎo)致細(xì)菌和真菌間正常的菌叢共生關(guān)系遭到一定的破壞； 其次在臨床應(yīng)用器官移植手術(shù)也越來越多的在臨床開展，術(shù)后當(dāng)中免疫抑制劑的使用影響 了機(jī)體正常的免疫功能，使人體對(duì)真菌的抵抗力降低W上問題令深部臟器的真菌感染發(fā)病 率越來越高，也越發(fā)嚴(yán)重。白色念珠菌是真菌感染的主要病因。但是近年隨著來抗真菌藥物 的大量使用，真菌對(duì)藥物的耐藥性逐漸增加。對(duì)氣康挫有耐藥作用的菌株通常會(huì)對(duì)其他挫 類藥物產(chǎn)生交叉耐藥作用，使得對(duì)于治療白念珠菌的感染方面的臨床藥物選擇十分困難。 因此，尋找抗真菌藥物耐藥逆轉(zhuǎn)劑，提高真菌對(duì)藥物的敏感性，與現(xiàn)有藥物產(chǎn)生協(xié)同的抗真 菌作用，是一種提高目前現(xiàn)有藥物的治療效果的重要方法。二氨楊梅素（1)、二氨搬皮素
[2] 、二氨山奈酪(3)和抽皮素(4)屬于二氨黃酬類化合物，是來源于植物的天然產(chǎn)物，從目 前的研究情況來看，未見有報(bào)道二氨黃酬類化合物的抗真菌作用研究。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003] 本發(fā)明的目的是針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)中的不足，提供二氨黃酬類化合物在制備抗真菌藥 物中的應(yīng)用。
[0004] 本發(fā)明的目的是，提供一種抗真菌的藥物組合物。
[0005] 為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采取的技術(shù)方案是:二氨黃酬類化合物及其藥學(xué)上可接 受的鹽、溶劑化物、前藥在制備抗真菌藥物中的應(yīng)用，所述的二氨黃酬類化合物為二氨楊梅 素、二氨搬皮素、二氨山奈酪或抽皮素，
[0006] 二氨楊梅素的結(jié)構(gòu)式為：
[000引二氨搬皮素的結(jié)構(gòu)式為：
[0010]二氨山奈酪的結(jié)構(gòu)式為：
[0012]抽皮素的結(jié)構(gòu)式為：
[0014] 二氨黃酬類化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物、前藥在制備抗真菌藥物的 增效劑中的應(yīng)用，所述的二氨黃酬類化合物為二氨楊梅素、二氨搬皮素、二氨山奈酪或抽皮 素。
[0015] 所述的抗真菌藥物為氮挫類抗真菌藥物。
[0016] 所述的氮挫類抗真菌藥物為氣康挫。
[0017] 所述的真菌為耐藥白色念珠菌。
[0018] 為實(shí)現(xiàn)上述第二個(gè)目的，本發(fā)明采取的技術(shù)方案是:一種抗真菌的藥物組合物，所 述的組合物中包含氮挫類抗真菌藥物和二氨黃酬類化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化 物、前藥，所述的二氨黃酬類化合物為二氨楊梅素、二氨搬皮素、二氨山奈酪或抽皮素。
[0019] 所述的氮挫類抗真菌藥物為氣康挫。
[0020] 本發(fā)明優(yōu)點(diǎn)在于：
[0021 ]本發(fā)明是在大量實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)上，提供了二氨楊梅素（1 )、二氨搬皮素(2 )、二氨山奈酪 (3)和抽皮素(4)及藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物或前藥的用途一一用于制備抗真菌藥物的 組合。該類化合物可W與挫類抗真菌藥物共同使用，可提高耐藥菌對(duì)挫類藥物的敏感性，實(shí) 現(xiàn)逆轉(zhuǎn)耐藥作用，協(xié)同抗真菌作用。
【具體實(shí)施方式】
[0022] 下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明提供的【具體實(shí)施方式】作詳細(xì)說明。
[0023] 化合物（1)~(4)為本實(shí)驗(yàn)室分離制備得到。也可從商業(yè)來源上獲得，如，但不限于 Aldrich Chemical Co. (MiIwaukee，Wis.)或Sigma Chemical Co. (St丄ouis，Mo.)、百靈威 化學(xué)等公司。
[0024] 實(shí)施例1:化合物的協(xié)同氣康挫抗耐藥真菌作用實(shí)驗(yàn)
[0025] 應(yīng)用棋盤式稀釋法體外藥敏實(shí)驗(yàn)測化合物(1)~(4)協(xié)同氣康挫抗耐藥真菌作用
[0026] 下述試驗(yàn)實(shí)施例中的菌種為臨床分離得到的耐藥白色念珠菌103菌。所有實(shí)驗(yàn)用 菌均于沙堡葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基(SDA)劃板活化，于30°C培養(yǎng)2周后，分別挑取單克隆再次劃 板活化，取第二次所得單克隆置SDA斜面，于30°C培養(yǎng)2周后在4°C下保存。培養(yǎng)液為RPMI 1640液體培養(yǎng)液，均按照標(biāo)準(zhǔn)方法進(jìn)行培養(yǎng)前處理。抗真菌藥物氣康挫注射液由大連輝瑞 藥業(yè)有限公司提供;二甲亞諷(DMSO)購置于中國醫(yī)藥集團(tuán)上?；瘜W(xué)試劑公司。所用的儀器 有Multiskan MK3型酶標(biāo)檢測儀(芬蘭Labsystems);隔水式電熱恒溫培養(yǎng)箱(上海躍進(jìn)醫(yī)療 器械廠）；MJX型智能菌酶培養(yǎng)箱（寧波江南儀器廠）；THZ-82A臺(tái)式恒溫振蕩器(上海躍進(jìn)醫(yī) 療器械廠）；SW-CT-IF型超凈化工作臺(tái)（蘇州安泰空氣技術(shù)有限公司）；倒置顯微鏡 (Amersham Pharmacia);微量加樣器（芬蘭Fin噸ette) ;96孔細(xì)胞培養(yǎng)板（丹麥Nunclon公 司）。
[0027]實(shí)驗(yàn)步驟：
[00%]真菌懸液的配置
[0029] 實(shí)驗(yàn)前，用接種圈從4°C保存的SDA培養(yǎng)基上挑取耐藥白色念珠菌103菌少量，接種 至Iml YEPD培養(yǎng)液，于30°C，200巧m振蕩培養(yǎng)，活化16h，使真菌處于指數(shù)生長期后期。取該 菌液至Iml YEPD培養(yǎng)液中，用上述方法再次活化，1化后，用血細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)，WRPMI 1640培養(yǎng)液調(diào)整菌液濃度至1 X IO3-S X IO3C即/ml。
[0030] 藥敏反應(yīng)板的制備
[0031] 取無菌96孔板，于每排1號(hào)孔加 RPMI 1640液體培養(yǎng)基10化1作空白對(duì)照;3-12號(hào)孔 各加新鮮配制的菌液10化1; 2號(hào)孔加菌液16化1和受試化合物溶液40iU ; 12號(hào)孔不含藥物， 只加菌液10化1作陽性生長對(duì)照。2-11號(hào)孔進(jìn)行倍比稀釋，使各孔的最終藥物濃度分別為 64、32、16、8、4、2、1、0.5、0.25和0.12扣旨/1111，各孔中0150含量均低于1%。每次配制藥敏板 的同時(shí)均制備一塊質(zhì)控菌藥敏板(質(zhì)控菌:根據(jù)NCXLS M27-A方案的建議，我們采用近平滑 念珠菌ATCC18062為質(zhì)控菌，每次配制藥敏板的同時(shí)均制備一塊質(zhì)控菌藥敏板，其MIC參考 值如下:氣康挫(?！?):1眼〇值0.化-1.0蛇/1111;41118:11(：值0.5-2.0蛇/1111。每次試驗(yàn)^此菌株 為參照菌株，只有當(dāng)其MICso值界于上述范圍時(shí)，方認(rèn)為試驗(yàn)操作準(zhǔn)確可靠。如同時(shí)試驗(yàn)菌株 生長良好，則可認(rèn)為試驗(yàn)成功，結(jié)果可接受。），各藥敏板于30°C恒溫箱培養(yǎng)。
[0032] 體外藥敏實(shí)驗(yàn)方法的選取
[0033] 我們?cè)趯?duì)本發(fā)明公開的化合物協(xié)同氣康挫抗耐藥真菌作用體外活性評(píng)價(jià)時(shí)，選擇 了棋盤式微量稀釋法。棋盤式微量稀釋法是體外藥敏實(shí)驗(yàn)的延伸，即合用的兩種藥物于96 孔板上W二維棋盤的縱(A至H)橫(2至11)兩方向分別進(jìn)行二倍的倍比稀釋。例如化合物1與 一種抗真菌藥物氣康挫合用后，使得氣康挫的終濃度為128、64、32、16、8、4、2、1、0.5、0.25 和0.12扣g/ml，化合物1的終濃度為64、32、16、8、4、2、化g/ml。實(shí)驗(yàn)所用試劑、藥物、實(shí)驗(yàn)操 作步驟同上述體外藥敏實(shí)驗(yàn)。
[0034] 評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)
[OO%]部分抑菌濃度指數(shù)（fractional inhibitoiT concenhation index,FICI)是評(píng) 價(jià)聯(lián)合用藥的兩藥相互作用方式的主要參數(shù)。抑菌濃度分?jǐn)?shù)(FIC)，分別為每一種藥物聯(lián)合 抑菌時(shí)所需最低抑菌濃度(MIC)與單用時(shí)MIC的比值.而FI巧旨數(shù)(FICI)則等于兩種藥物FIC 之和。當(dāng)MIC值高于檢測最高限時(shí)W最高限濃度的兩倍值用W計(jì)算FICI。很多文獻(xiàn)報(bào)道當(dāng) FICI含0.5時(shí)兩藥的相互作用確定為協(xié)同作用，且FI巧旨數(shù)越小，協(xié)同作用越強(qiáng);0.5<FICI < 1時(shí)兩藥的相互作用確定為相加作用；KFICI含4時(shí)為無關(guān)作用；當(dāng)FICIM時(shí)兩藥產(chǎn)生括抗 作用。本專利選用目前國外期刊采用的最新標(biāo)準(zhǔn)：當(dāng)FICI ^ 0.5時(shí)，兩藥的相互作用確定為 協(xié)同作用;0.5<FICI含4時(shí)為無關(guān)作用；當(dāng)FICIM時(shí)兩藥產(chǎn)生括抗作用。
[0036] 測試結(jié)果
[0037] 化合物(1)~(4)協(xié)同氣康挫抗耐藥真菌作用的測試結(jié)果見表1。
[0038]表1化合物結(jié)構(gòu)與協(xié)同氣康挫抗耐藥真菌作用
[0040] 實(shí)驗(yàn)結(jié)論
[0041] 應(yīng)用棋盤式稀釋法體外藥敏實(shí)驗(yàn)測試化合物（1)~(4)協(xié)同氣康挫抗耐藥白色念 珠菌103菌的作用，我們發(fā)現(xiàn)化合物（1)~(4)均對(duì)氣康挫產(chǎn)生耐藥的白色念珠菌103菌有明 顯的協(xié)同抗菌作用，可作為提高氣康挫抗菌譜的增效劑。
[0042] W上所述僅是本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式，應(yīng)當(dāng)指出，對(duì)于本技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人 員，在不脫離本發(fā)明方法的前提下，還可W做出若干改進(jìn)和補(bǔ)充，運(yùn)些改進(jìn)和補(bǔ)充也應(yīng)視為 本發(fā)明的保護(hù)范圍。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 二氫黃酮類化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物、前藥在制備抗真菌藥物中的 應(yīng)用，所述的二氫黃酮類化合物為二氫楊梅素、二氫槲皮素、二氫山奈酚或柚皮素， 二氫楊梅素的結(jié)構(gòu)式為：二氫槲皮素的結(jié)構(gòu)式為：二氫山奈酚的結(jié)構(gòu)式為： 柚皮素的結(jié)構(gòu)式為：2. 二氫黃酮類化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物、前藥在制備抗真菌藥物的增 效劑中的應(yīng)用，所述的二氫黃酮類化合物為二氫楊梅素、二氫槲皮素、二氫山奈酚或柚皮 素。3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的應(yīng)用，其特征在于，所述的抗真菌藥物為氮唑類抗真菌藥物。4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的應(yīng)用，其特征在于，所述的氮唑類抗真菌藥物為氟康唑。5. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的應(yīng)用，其特征在于，所述的真菌為耐藥白色念珠菌。6. -種抗真菌的藥物組合物，其特征在于，所述的組合物中包含氮唑類抗真菌藥物和 二氫黃酮類化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽、溶劑化物、前藥，所述的二氫黃酮類化合物為二 氫楊梅素、二氫槲皮素、二氫山奈酸或柚皮素。7. 根據(jù)權(quán)利要求6所述的藥物組合物，其特征在于，所述的氮唑類抗真菌藥物為氟康 唑。
【專利摘要】本發(fā)明涉及二氫黃酮類化合物：二氫楊梅素、二氫槲皮素、二氫山奈酚和柚皮素制備抗真菌的藥物中的應(yīng)用。其優(yōu)點(diǎn)表現(xiàn)在：二氫楊梅素、二氫槲皮素、二氫山奈酚和柚皮素具有較好的協(xié)同氟康唑抗耐藥真菌的作用。
【IPC分類】A61K31/352, A61K31/4196, A61P31/10
【公開號(hào)】CN105663114
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201610060695
【發(fā)明人】金永生, 安毛毛, 王元花, 周鶴洋, 姜遠(yuǎn)英, 張開霞, 張大志
【申請(qǐng)人】中國人民解放軍第二軍醫(yī)大學(xué)
【公開日】2016年6月15日
【申請(qǐng)日】2016年1月28日