專利名稱：一種枯草芽孢桿菌變異菌株的批量培養(yǎng)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種枯草芽孢桿菌變異菌株(Bucillus Subrilis sp.)的批量培養(yǎng)方法，確切說，涉及一種枯草芽孢桿菌變異菌株1#、2#、3#和4#的批量培養(yǎng)方法，屬微生物菌體培養(yǎng)技術(shù)領(lǐng)域。
水產(chǎn)養(yǎng)殖池的池水主要受到二種污染大量人類生活污水，如人畜糞尿、洗滌水等排入河、湖，使河、湖水中含有大量氨氮和硝基氮，上述池水汲自河、湖，該池水中也含有大量氨氮和硝基氮；上述池水還受到殘存飼料和水產(chǎn)品排泄物的污染，污染物所含的大分子有機(jī)化合物造成水體的富營養(yǎng)化和有毒藻類及細(xì)菌大量繁殖。上述二種污染導(dǎo)致水產(chǎn)品，如魚、蝦、蟹生病死亡。四株枯草芽孢桿菌變異菌株枯草芽孢桿菌變異菌株1#、2#、3#和4#既能分解轉(zhuǎn)化池水中的氨氮和硝基氮，又能分解池水中的殘存飼料和水產(chǎn)品排泄物所含的大分子有機(jī)化合物，適于用來制備復(fù)合型活菌生物凈水劑。為實(shí)現(xiàn)該凈水劑的工業(yè)化生產(chǎn)，需有獲得大量上述變異菌株菌體的方法。
背景技術(shù)：
中有一種液體發(fā)酵法，可用來批量培養(yǎng)上述變異菌株先用蛋白胨、酵母膏、牛肉膏、葡萄糖和無機(jī)鹽等配制液體培養(yǎng)基；然后把上述四株變異菌株的細(xì)菌種子分別接入四個盛有上述液體培養(yǎng)基的發(fā)酵罐中；最后通過液體發(fā)酵，批量培養(yǎng)，獲得大量活菌體枯草芽孢桿菌變異菌株1#、2#、3#和4#。1噸的發(fā)酵罐可裝700Kg的液體培養(yǎng)基，能得到7～8Kg的濕菌體，以每克濕菌體含活菌數(shù)100億個計，獲得的活菌數(shù)僅為700000億～800000億個。
背景技術(shù)：
雖能批量培養(yǎng)活菌體，但有成本高昂、獲得的活菌數(shù)少和不易推廣使用的缺點(diǎn)。
本發(fā)明的目的是提出一種成本低廉、獲得的活菌數(shù)多和易于推廣使用的枯草芽孢桿菌變異菌株的批量培養(yǎng)方法。
該目的通過采用以下技術(shù)方案得以實(shí)現(xiàn)一種枯草芽孢桿菌變異菌株的培養(yǎng)方法，其特征在于，操作步驟第1步 配制液體培養(yǎng)基，為四個1噸的發(fā)酵罐配制液體培養(yǎng)基，向每罐投入原料700Kg，該原料配方為黃豆并粉7～56Kg，玉米粉14～49Kg，麩皮3.5～35Kg，工業(yè)級硫酸銨2.8～4.9Kg，工業(yè)級氯化銨0.7～2.1Kg，水553～672Kg，混和攪拌均勻，制成相同的液體培養(yǎng)基四罐；第2步 滅菌，在壓力為1.1～1.4Kg/cm2的的條件下，對罐內(nèi)的液體培養(yǎng)基進(jìn)行高壓滅菌處理，處理時間為30～40分鐘；第3步 菌體培養(yǎng)，待罐內(nèi)的液體培養(yǎng)基冷卻到30～50℃時，按5～10∶95～90的重量比率把預(yù)先經(jīng)二級培養(yǎng)成的處于對數(shù)生長期的枯草芽孢桿菌變異菌株1#、2#、3#和4#的細(xì)菌種子分別接入上述的四個發(fā)酵罐，在罐壓、通風(fēng)量、轉(zhuǎn)速和罐溫分別為0.4～0.6Kg/cm2、0.5～1.0∶0.6～1.2V/V、200～300rpm和20～50℃的條件下，連續(xù)培養(yǎng)20～72小時；第4步 獲得活菌，經(jīng)上步發(fā)酵的液體培養(yǎng)液，用轉(zhuǎn)速為3000～10000rpm的離心機(jī)離心20～30分鐘，從四個發(fā)酵罐分別得到60～70Kg的枯草芽孢桿菌變異菌株1#、2#、3#和4#的濕菌體，以每克濕菌體含活菌20億～50億個計，從每罐獲得的活菌數(shù)為1200000億～3500000億個。
與
背景技術(shù)：
相比，本發(fā)明具有以下優(yōu)點(diǎn)1.成本低廉。因?yàn)樵现饕寝r(nóng)副產(chǎn)品的下腳或飼料，所用無機(jī)鹽為工業(yè)級，量少價廉。
2.獲得的活菌數(shù)多。約是背景技術(shù)的1.5～5倍。
3.便于推廣使用。
本發(fā)明特別適于用來批量培養(yǎng)枯草芽孢桿菌變異菌株1#、2#、3#和4#菌體，為工業(yè)化生產(chǎn)復(fù)合型活菌生物凈水劑提供活菌原料，是一項能促進(jìn)水產(chǎn)養(yǎng)殖的、能產(chǎn)生巨大經(jīng)濟(jì)效益的和便于推廣使用的新技術(shù)。
權(quán)利要求
1.一種枯草芽孢桿菌變異菌株的培養(yǎng)方法，其特征在于，操作步驟第1步 配制液體培養(yǎng)基，為四個1噸的發(fā)酵罐配制液體培養(yǎng)基，向每罐投入原料700Kg，該原料配方為黃豆并粉7～56Kg，玉米粉14～49Kg，麩皮3.5～35Kg，工業(yè)級硫酸銨2.8～4.9Kg，工業(yè)級氯化銨0.7～2.1Kg，水553～672Kg，混和攪拌均勻，制成相同的液體培養(yǎng)基四罐；第2步 滅菌，在壓力為1.1～1.4Kg/cm2的的條件下，對罐內(nèi)的液體培養(yǎng)基進(jìn)行高壓滅菌處理，處理時間為30～40分鐘；第3步 菌體培養(yǎng)，待罐內(nèi)的液體培養(yǎng)基冷卻到30～50℃時，按5～10∶95～90的重量比率把預(yù)先經(jīng)二級培養(yǎng)成的處于對數(shù)生長期的枯草芽孢桿菌變異菌株1#、2#、3#和4#的細(xì)菌種子分別接入上述的四個發(fā)酵罐，在罐壓、通風(fēng)量、轉(zhuǎn)速和罐溫分別為0.4～0.6Kg/cm2、0.5～1.0∶0.6～1.2V/V、200～300rpm和20～50℃的條件下，連續(xù)培養(yǎng)20～72小時；第4步 獲得活菌，經(jīng)上步發(fā)酵的液體培養(yǎng)液，用轉(zhuǎn)速為3000～10000rpm的離心機(jī)離心20～30分鐘，從四個發(fā)酵罐分別得到60～70Kg的枯草芽孢桿菌變異菌株1#、2#、3#和4#的濕菌體，以每克濕菌體含活菌20億～50億個計，從每罐獲得的活菌數(shù)為1200000億～3500000億個。
全文摘要
一種枯草芽孢桿菌變異菌株的批量培養(yǎng)方法,屬微生物菌體培養(yǎng)技術(shù)領(lǐng)域,操作包括配制液體培養(yǎng)基、來菌、菌體培養(yǎng)和獲得活菌四個步驟,有成本低廉、獲得的活菌數(shù)多和便于推廣使用的優(yōu)點(diǎn),適于用來批量培養(yǎng)枯草芽孢桿菌變異菌株菌體,為工業(yè)化生產(chǎn)復(fù)合型活菌生物凈水劑提供活菌原料,是一項能促進(jìn)水產(chǎn)養(yǎng)殖的新技術(shù)。
文檔編號C02F3/34GK1384187SQ0111278
公開日2002年12月11日 申請日期2001年4月27日 優(yōu)先權(quán)日2001年4月27日
發(fā)明者吳自榮, 郭大磊, 黃靜 申請人:華東師范大學(xué), 昆山科新環(huán)境生物工程有限公司