一種高密度培養(yǎng)枯草芽孢桿菌的方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種高密度培養(yǎng)枯草芽孢桿菌的方法，包括步驟：(1)以枯草芽孢桿菌為發(fā)酵菌種進行三級種子活化，其中，活化培養(yǎng)基的組份包括：蛋白胨10g/L、牛肉粉3g/L、氯化鈉5g/L、葡萄糖1g/L；(2)將活化后的菌種接種到發(fā)酵培養(yǎng)基中培養(yǎng)，發(fā)酵培養(yǎng)基的組份包括：葡萄糖 10g/L、豆餅粉 15g/L、MnSO4 0.3g/L、NaCl 5g/L、K2HPO4 0.3g/L、碳酸鈣5g/L；在30℃，攪拌轉(zhuǎn)速200r/min條件下發(fā)酵48h后得高密度培養(yǎng)的枯草芽孢桿菌。本發(fā)明通過對培養(yǎng)基配方及發(fā)酵條件的改進，枯草芽孢桿菌的活菌數(shù)達到8.9×109cfu/mL以上，為提高枯草芽孢桿菌的工業(yè)化發(fā)酵提供了必要條件，可大大提高生產(chǎn)率。
【專利說明】一種高密度培養(yǎng)枯草芽孢桿菌的方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于菌類培養(yǎng)【技術(shù)領(lǐng)域】，尤其是一種高密度培養(yǎng)枯草芽孢桿菌的方法。

【背景技術(shù)】
[0002]枯草芽孢桿菌在水體中繁殖的過程中能夠產(chǎn)生胞外酶，它能夠?qū)⑺w和底泥中的殘余餌料、排泄廢物和動植物殘體等有機物分解，這些有機物首先分解為小分子，如高級脂肪酸和多肽等，然后分解為更小的分子有機物，如單糖、氨基酸、低級脂肪酸和環(huán)烴等，最終分解為二氧化碳、硝酸鹽、硫酸鹽等，最終降低了水中的B0D、C0D，使水中的氮、氨、硫化物和亞硝酸氮的濃度降低，具有清除底泥和減輕水體富營養(yǎng)化的作用，此外芽孢桿菌分泌的多種抗生素和酶類都能抑制其它病原菌的生長。
[0003]枯草芽孢桿菌作為水產(chǎn)養(yǎng)殖用添加劑，一些研究證明其能夠促進養(yǎng)殖品種加速生長，降低飼料系數(shù)，維持腸道微生態(tài)平衡，增強動物機體免疫力，提高抗病能力和減少污染坐寸ο
[0004]目前國內(nèi)對枯草芽孢桿菌的研究主要集中在篩菌、抑菌效果以及枯草芽孢桿菌的產(chǎn)酶特性等，而對于高密度培養(yǎng)枯草芽孢桿菌的發(fā)酵技術(shù)則報道較少。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明的目的是針對現(xiàn)有技術(shù)的不足，而提出一種高密度培養(yǎng)枯草芽孢桿菌的方法。
[0006]本發(fā)明解決其技術(shù)問題是采取以下技術(shù)方案實現(xiàn)的:
[0007]一種高密度培養(yǎng)枯草芽孢桿菌的方法，包括步驟如下:
[0008](I)以枯草芽孢桿菌為發(fā)酵菌種進行三級種子活化，
[0009]其中，活化培養(yǎng)基的組份包括:蛋白胨10g/L、牛肉粉3g/L、氯化鈉5g/L、葡萄糖lg/L ；
[0010]三級種子活化培養(yǎng)條件均為:搖床培養(yǎng)、PH值7.5、溫度為30°C、時間24h ；
[0011](2)將活化后的菌種接種到發(fā)酵培養(yǎng)基中培養(yǎng)，
[0012]其中，發(fā)酵培養(yǎng)基的組份包括:葡萄糖10g/L、豆餅粉15g/L、MnS040.3g/L、NaC15g/L、K2HPO40.3g/L、碳酸鈣 5g/L ；
[0013]發(fā)酵條件為:pH自然、培養(yǎng)溫度30°C、攪拌轉(zhuǎn)速200r/min、培養(yǎng)時間48h后，得高密度培養(yǎng)的枯草芽孢桿菌。
[0014]而且，所述步驟(I)中三級種子活化培養(yǎng)的接種量均為8% v/v。
[0015]而且，所述步驟(2)中發(fā)酵培養(yǎng)的接種量為8% v/v。
[0016]而且，所述步驟(2)中發(fā)酵培養(yǎng)時，每發(fā)酵1L體積的通氧量大于0.5m3/h。
[0017]本發(fā)明的優(yōu)點和積極效果是:
[0018]1、本發(fā)明通過對培養(yǎng)基配方及發(fā)酵條件的改進，為提高枯草芽孢桿菌的菌體量、提聞廣品有效率提供了基礎(chǔ)條件。
[0019]2、使用本發(fā)明方法后，枯草芽孢桿菌的活菌數(shù)顯著提高，達到8.9X109cfu/mL以上，比優(yōu)化前的1.8X109cfu/mL活菌數(shù)提高了 4.9倍，顯著的提高了產(chǎn)量。

【具體實施方式】
[0020]以下對本發(fā)明實施做進一步詳述，以下實施例只是描述性的，不是限定性的，不能以此限定本發(fā)明的保護范圍。
[0021]一種高密度培養(yǎng)枯草芽孢桿菌的方法，包括步驟如下:
[0022](I)以枯草芽孢桿菌為發(fā)酵菌種進行三級種子活化，
[0023]其中，活化培養(yǎng)基的組份包括:蛋白胨10g/L、牛肉粉3g/L、氯化鈉5g/L、葡萄糖lg/L ；
[0024]三級種子活化培養(yǎng)條件均為:搖床培養(yǎng)、PH值7.5、溫度為30°C、時間24h、接種量8% (v/v)。
[0025](2)對活化后的菌種接種到發(fā)酵培養(yǎng)基中培養(yǎng)，
[0026]其中，發(fā)酵培養(yǎng)基的組份包括:葡萄糖10g/L、豆餅粉15g/L、MnS040.3g/L、NaC15g/L、K2HPO40.3g/L、碳酸鈣 5g/L ；
[0027]發(fā)酵條件為:pH自然、培養(yǎng)溫度30°C、攪拌轉(zhuǎn)速200r/min、接種量為8% (v/v)，培養(yǎng)時間48h，得高密度培養(yǎng)的枯草芽孢桿菌。
[0028]實例1:
[0029](I)種子培養(yǎng):
[0030]種子活化采用的培養(yǎng)基組成如下:蛋白胨10g/L、牛肉粉3g/L、氯化鈉5g/L、葡萄糖 lg/L。
[0031]活化培養(yǎng)的條件為:搖床培養(yǎng)；PH值7.5 ;溫度為30°C ;時間24h，接種量8% (v/V)。
[0032](2)發(fā)酵培養(yǎng):
[0033]將活化好的枯草芽孢桿菌接種到發(fā)酵培養(yǎng)基中培養(yǎng)，發(fā)酵體積為30L。
[0034]所述發(fā)酵培養(yǎng)基由以下原料組成:葡萄糖10g/L、豆餅粉15g/L、MnSO40.3g/L、NaC15g/L、K2HPO40.3g/L、碳酸鈣 5g/L。
[0035]發(fā)酵培養(yǎng)的條件為:pH自然；培養(yǎng)溫度30°C ;轉(zhuǎn)速200r/min ;通氧量2m3/h ;裝液量30L ;接種量8% (v/v);培養(yǎng)時間48h。
[0036]培養(yǎng)結(jié)束時其活菌數(shù)為8.9 X 109cfu/mL。
[0037]實例2
[0038]以枯草芽孢桿菌為發(fā)酵菌種，經(jīng)三級種子活化后接種到發(fā)酵培養(yǎng)基中培養(yǎng)。
[0039](I)活化培養(yǎng):蛋白胨10g/L、牛肉粉3g/L、氯化鈉5g/L、葡萄糖lg/L ;活化培養(yǎng)的條件為:搖床培養(yǎng)；PH值7.5 ;溫度為30°C ;時間24h。
[0040](2)發(fā)酵培養(yǎng):
[0041]將活化好的枯草芽孢桿菌接種到發(fā)酵培養(yǎng)基中培養(yǎng)，發(fā)酵體積為300L。
[0042]所述發(fā)酵培養(yǎng)基由以下原料組成:葡萄糖10g/L、豆餅粉15g/L、MnSO40.3g/L、NaC15g/L、K2HPO40.3g/L、碳酸鈣 5g/L。
[0043]發(fā)酵培養(yǎng)的條件為:pH自然；培養(yǎng)溫度30°C ;轉(zhuǎn)速200r/min ;通氧量15m3/h ;裝液量30L ;接種量8% (v/v);培養(yǎng)時間48h。
[0044]培養(yǎng)結(jié)束時其活菌數(shù)為8.2 X 109cfu/mL。
[0045]上述兩個實例中芽孢桿菌活菌數(shù)測定方法為:發(fā)酵結(jié)束后取ImL發(fā)酵液加入到9mL無菌生理鹽水中，依次做10倍系列稀釋，選取3個適當?shù)南♂尡稊?shù)，吸取0.1mL稀釋液注入到平板計數(shù)培養(yǎng)基中，用涂布棒將稀釋液混勻鋪平，每個稀釋度接三個平板，倒置，于37°C恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h，選取菌落數(shù)在30?300之間的培養(yǎng)皿計菌落數(shù)。
【權(quán)利要求】
1.一種高密度培養(yǎng)枯草芽孢桿菌的方法，其特征在于包括步驟如下: (1)以枯草芽孢桿菌為發(fā)酵菌種進行三級種子活化， 其中，活化培養(yǎng)基的組份包括:蛋白胨10g/L、牛肉粉3g/L、氯化鈉5g/L、葡萄糖lg/L ； 三級種子活化培養(yǎng)條件均為:搖床培養(yǎng)、PH值7.5、溫度為30°C、時間24h ； (2)將活化后的菌種接種到發(fā)酵培養(yǎng)基中培養(yǎng)， 其中，發(fā)酵培養(yǎng)基的組份包括:葡萄糖10g/L、豆餅粉15g/L、MnSO40.3g/L、NaC15g/L、K2HPO40.3g/L、碳酸鈣 5g/L ； 發(fā)酵條件為:PH自然、培養(yǎng)溫度30°C、攪拌轉(zhuǎn)速200r/min、培養(yǎng)時間48h，得高密度培養(yǎng)的枯草芽孢桿菌。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的高密度培養(yǎng)枯草芽孢桿菌的方法，其特征在于:所述步驟(I)中三級種子活化培養(yǎng)的接種量均為8% v/v0
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的高密度培養(yǎng)枯草芽孢桿菌的方法，其特征在于:所述步驟(2)中發(fā)酵培養(yǎng)的接種量為8% v/v0
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的高密度培養(yǎng)枯草芽孢桿菌的方法，其特征在于:所述步驟(2)中發(fā)酵培養(yǎng)時，每發(fā)酵1L體積的通氧量大于0.5m3/h。
【文檔編號】C12R1/125GK104293721SQ201410567431
【公開日】2015年1月21日 申請日期:2014年10月23日 優(yōu)先權(quán)日:2014年10月23日
【發(fā)明者】張云澤, 辛乃宏, 李炳乾, 劉穎芬 申請人:中鹽工程技術(shù)研究院有限公司