專(zhuān)利名稱(chēng)：多糖及其保健品去色素的新方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種去色素的方法，更具體地說(shuō)是多糖及其保健品的去色素方法。
以植物和真菌類(lèi)為原料提取的多糖粗品或作為保健品的多糖，常因含有酚型化合物，使之有較深的色澤，用堿提取獲得的多糖則顏色更深。這些色素的存在，不但影響多糖作為保健品或藥物時(shí)的外觀，而且給多糖的進(jìn)一步分離、純化和結(jié)構(gòu)鑒定帶來(lái)極大的困難。目前，主要采用以下三種方法除去多糖粗品(包括保健品多糖)中所含有的色素，然而這三種方法均存在一定的局限性。
1.活性炭吸附脫色?；钚蕴繉?duì)多糖具有較強(qiáng)的吸附作用，多糖的損失較大，而且采用這種方法脫色后，過(guò)濾起來(lái)也相當(dāng)困難，可以說(shuō)這種方法對(duì)多糖脫色是不合理的。
2.弱堿性樹(shù)脂脫色，如Duolite A-7，DEAE-纖維素等吸附多糖中的色素。這種方法主要應(yīng)用于除去多糖粗品中游離的色素，如果色素與多糖結(jié)合，多糖也被樹(shù)脂同時(shí)吸附，用水難以洗脫下來(lái)。另外，對(duì)酸性多糖不宜采用該方法脫色。
3.雙氧水氧化脫色。采用這種方法對(duì)除去與多糖結(jié)合色素具有一定的效果，然而，在脫色過(guò)程中，雖然嚴(yán)格控制脫色的條件，如溫度、時(shí)間、PH值等，但還會(huì)引起多糖的部分降解。
以上三種方法應(yīng)用于醫(yī)藥工業(yè)中多糖粗品的脫色均存在很多缺陷。
本發(fā)明目的是在于多糖具有多方面的功能，如多糖作為廣譜免疫促進(jìn)劑用以治療與機(jī)體免疫系統(tǒng)有關(guān)疾?。欢嗵堑奶擎湻肿俞t(yī)學(xué)中具有凝性作用；它在醫(yī)藥上又是一種良好的佐劑。而多糖中的色素存在直接影響多糖作為藥物或保健品的外觀，尋找一種應(yīng)用新的脫色方法去除多糖粗品中的色素并減少對(duì)多糖、保健品本身的影響具有重要的實(shí)用意義。
本發(fā)明另一目的是目前采用的脫多糖中的色素常對(duì)多糖的分離、純化和結(jié)構(gòu)鑒定工作產(chǎn)生干擾，尋找一種新的脫色素方法，它既可脫去多糖中的色素而且不破壞多糖的結(jié)構(gòu)。
本發(fā)明的技術(shù)方案是這樣實(shí)施的一種多糖、保健品去色素的方法，其特征在于由反膠束溶液與多糖或保健品粗品預(yù)處理液在1∶1～1∶8(V/V)的比例下劇烈混合3分鐘，靜置分層，下層液為脫色后的多糖或保健品樣品液；反膠束溶液由CTAB濃度10-250mM、正己醇5％-35％(V/V)、異辛烷65％-95％(V/V)組成；多糖或保健品的預(yù)處理為原料經(jīng)95％乙醇脫脂，殘?jiān)梅兴崛?，提取液濃縮后經(jīng)乙醇沉淀得多糖粗提物，粗提物按比例溶于水中，沸水浴加熱30分鐘，振蕩溶解，3000rpm離心3分鐘，上清液加入一定量NaCl，得多糖、保健品預(yù)處理液；1.反膠束溶液，多糖或保健品粗品預(yù)處理液的比例為1∶1～1∶8(V/V)。
首先制備反膠束溶液，它由十六烷基三甲基溴化銨(CTAB)、正己醇、異辛烷組成。
它們的濃度和含量如下CTAB的濃度為10-250mM正己醇的含量為5％-35％(V/V)異辛烷的含量為65％-95％(V/V)上述按比例組成備用。
2.對(duì)多糖粗品預(yù)處理液的制備植物和真菌類(lèi)原料，經(jīng)95％乙醇脫脂，殘?jiān)梅兴崛?，提取液濃縮后經(jīng)乙醇沉淀得多糖粗提物。稱(chēng)取2mg-6mg多糖粗提物于1mL水中，沸水浴加熱30分鐘，震蕩溶解，3000rpm離心3分鐘，根據(jù)不同性質(zhì)的多糖上清液加入氯化鈉50mM-500mM，即為多糖粗品預(yù)處理液。
3.多糖的脫色過(guò)程取上述反膠束溶液與多糖粗品預(yù)處理液，以1∶1～1∶8(V/V)比例，劇烈混合3分鐘，靜置分層后，下層水液即為脫色后的多糖樣品液。該多糖樣品液繼續(xù)進(jìn)行分離、純化，最終獲得顏色淺淡的脫色后多糖產(chǎn)品。
多糖回收率的計(jì)算糖含量的測(cè)定硫酸-苯酚法，100μl待測(cè)定的樣品液加入0.4mL及2mL硫酸(98％)，振動(dòng)后顯色，測(cè)定λ＝490nm時(shí)的吸光度A。
標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作準(zhǔn)確稱(chēng)取2mg葡萄糖并溶于5mL相應(yīng)鹽濃度(與多糖預(yù)處理液相同)的水溶液中，分別取0.2mL，0.4mL，0.6mL，0.8mL，1.0mL，稀釋至1.0mL，測(cè)定λ＝490nm時(shí)的吸光度A，以吸光度對(duì)相應(yīng)的葡萄糖的濃度作圖，得一元線性回歸方程Y＝2.887X，吸光度A小于1.2，均能保持較好的線性關(guān)系。
為消除萃取得到的下層多糖溶液中少量的CTAB及正己醇，對(duì)糖含量測(cè)定所可能造成的影響，以相應(yīng)鹽濃度的水溶液與1～8體積的反膠束溶液混合，靜置分層，以下層水溶液配制標(biāo)準(zhǔn)的葡萄糖液，采用上述方法作標(biāo)準(zhǔn)曲線，所得結(jié)果在硫酸苯酚比色測(cè)定法的誤差范圍內(nèi)(＜5％)。
多糖的回收率的計(jì)算C1/C2×V1/V2×100％＝＝(A11-A12)/(A21-A22)×V1/V2×100％C1-脫色后的下層多糖水溶液的糖濃度C2-多糖粗品預(yù)處理液的糖濃度V1-脫色后的下層多糖水溶液的體積V2-多糖粗品預(yù)處理液的體積A11-脫色后的下層多糖水溶液，稀釋5倍，加硫酸-苯酚顯色后的吸光度A12-脫色后的下層多糖水溶液，稀釋5倍，加硫酸及0.2mL鹽水，測(cè)定的吸光度A21-多糖粗品預(yù)處理液，稀釋5倍，加硫酸-苯酚顯色后的吸光度
A22-多糖粗品預(yù)處理液，稀釋5倍，加硫酸及0.2mL鹽水，測(cè)定的吸光度本發(fā)明具有如下優(yōu)點(diǎn)1.采用本法脫色效果較好，對(duì)色澤愈深的多糖粗品，脫色效果更佳，而且對(duì)未經(jīng)脫蛋白質(zhì)處理的多糖粗品具有同樣的脫色效果。
2.采用本法多糖的回收率較高，在90％以上，對(duì)酸性多糖含量較高的粗品回收率也超過(guò)80％。
3.采用本法可以一次性除去多糖中的絕大部分色素，無(wú)需多次脫色。
下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明做詳細(xì)說(shuō)明。
實(shí)施例首先制備反膠束溶液，它由十六烷基三甲基溴化銨(CTAB)、正己醇、異辛烷組成。
它們的濃度和含量如下CTAB的濃度為10-250mM正己醇的含量為5％-35％(V/V)異辛烷的含量為65％-95％(V/V)上述按比例組成備用。
實(shí)施例一 積雪草(中性)多糖粗提物的脫色準(zhǔn)確稱(chēng)取32mg積雪草多糖粗提物，加入8mL水，沸水浴30分鐘，攪拌溶解，3000rpm離心3分鐘，上清液中加入氯化鈉(300mM)，得積雪草多糖預(yù)處理液，取4mL與1mL反膠束溶液混合3分鐘，靜置30分鐘分層，萃取分離得下層多糖溶液，按照前述方法，測(cè)得的結(jié)果為A11＝0.570A12＝0.011A21＝0.647A22＝0.013積雪草多糖的回收率為(0.570-0.011)/(0.647-0.013)×4.4/4×100％＝97.4％
實(shí)施例二 螺旋藻(肽)多糖粗提物的脫色準(zhǔn)確稱(chēng)取32.2mg螺旋藻多糖粗提物(未經(jīng)脫蛋白質(zhì)處理)，加入8mL水，沸水浴30分鐘，攪拌溶解，3000rpm離心3分鐘，上清液中加入氯化鈉(100mM)，得螺旋藻多糖預(yù)處理液，取8mL與1mL反膠束溶液混合3分鐘，靜置30分鐘分層，萃取分離得下層多糖溶液，按照前述方法，測(cè)得的結(jié)果為A11＝0.447A12＝0.000A21＝0.543A22＝0.000螺旋藻多糖的回收率為(0.570-0.000)/(0.647-0.000)×4.4/4×100％＝90.6％實(shí)施例三 靈芝(中性)多糖粗提物的脫色準(zhǔn)確稱(chēng)取17.3mg靈芝多糖粗提物(未經(jīng)脫蛋白質(zhì)處理)，加入5mL水，沸水浴30分鐘，攪拌溶解，3000rpm離心3分鐘，上清液中加入氯化鈉(100mM)，得靈芝多糖預(yù)處理液，取5mL與1mL反膠束溶液混合3分鐘，靜置30分鐘分層，萃取分離得下層多糖溶液，按照前述方法，測(cè)得的結(jié)果為A11＝0.236A12＝0.000A21＝0.264A22＝0.000靈芝多糖的回收率為(0.236-0.000)/(0.264-0.000)×4.4/4×100％＝98.3％實(shí)施例四 石見(jiàn)穿(酸性)多糖粗提物的脫色準(zhǔn)確稱(chēng)取24.6mg石見(jiàn)穿多糖粗提物，加入6mL水，沸水浴30分鐘，攪拌溶解，3000rpm離心3分鐘，上清液中加入氯化鈉(500mM)，得石見(jiàn)穿多糖預(yù)處理液，取1mL與1mL反膠束溶液混合3分鐘，靜置30分鐘分層，萃取分離得下層多糖溶液，按照前述方法，測(cè)得的結(jié)果為A11＝0.236A12＝0.000A21＝0.348A22＝0.000石見(jiàn)穿多糖的回收率為(0.236-0.000)/(0.348-0.000)×4.4/4×100％＝80.87％
權(quán)利要求
1.一種多糖、保健品去色素的方法，其特征在于由反膠束溶液與多糖或保健品粗品預(yù)處理液在一定的比例下劇烈混合3分鐘，靜置分層，下層液為脫色后的多糖或保健品樣品液。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述多糖、保健品去色素的方法，其特征在于反膠束溶液由濃度10-250mM CTAB、正己醇5％-35％(V/V)、異辛烷65％-95％(V/V)組成。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述多糖、保健品去色素的方法，其特征在于多糖或保健品的預(yù)處理為原料經(jīng)95％乙醇脫脂，殘?jiān)梅兴崛√崛∫航?jīng)乙醇沉淀得多糖粗提物，粗提物按比例溶于水中，沸水浴加熱30分鐘，振蕩溶解，3000rpm離心3分鐘，上清液加入50-500mM NaCl，得多糖、保健品預(yù)處理液。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述多糖、保健品去色素的方法，其特征在于反膠束溶液與多糖或保健品粗品預(yù)處理液的比例為1∶1～1∶8(V/V)。
全文摘要
本發(fā)明提供一種多糖及其保健品的去色素方法,該方法采用反膠束溶液與多糖或保健品粗品預(yù)處理液在一定比例下激烈混合,放置分層,下層即為脫色后的多糖或保健品液。
文檔編號(hào)B01D11/04GK1369510SQ01105320
公開(kāi)日2002年9月18日 申請(qǐng)日期2001年2月13日 優(yōu)先權(quán)日2001年2月13日
發(fā)明者段金友, 方積年 申請(qǐng)人:中國(guó)科學(xué)院上海藥物研究所