專利名稱：一種可富集咖啡酸苯乙酯的分子印跡聚合物制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于生物工程領(lǐng)域，特別涉及一種可富集咖啡酸苯乙酯的分子印跡聚合 物制備方法。
背景技術(shù)：
咖啡酸苯乙酯(caffeic acid phenethyl ester，CAPE),最早發(fā)現(xiàn)于蜂膠中，是蜂膠
中最主要的活性成分。由于其具有廣泛的生物學(xué)活性，如抗炎癥、免疫調(diào)節(jié)、抗氧化作 用以及對(duì)腫瘤細(xì)胞特異的抑制作用等，使其在食品、醫(yī)學(xué)上有廣闊的應(yīng)用前景。同時(shí)， 咖啡酸苯乙酯還表現(xiàn)出對(duì)HIV-I整合酶有較強(qiáng)的抑制活性，以及較低的細(xì)胞毒性。然 而，咖啡酸苯乙酯的天然來源有限，目前報(bào)道的含有咖啡酸苯乙酯的天然產(chǎn)物主要有蜂 膠、楊樹芽以及蜂蜜，并且含量存在地域性差異。因此，進(jìn)一步開發(fā)含有咖啡酸苯乙酯 的天然資源有著重要的實(shí)際意義。分子印跡技術(shù)是20世紀(jì)出現(xiàn)的一種高選擇性分離技術(shù)，這種技術(shù)是模擬自然界 存在的分子識(shí)別作用，如酶和底物、抗體與抗原等，以目標(biāo)分子為模板合成聚合物的方 法。由于這種印跡聚合物能夠?qū)Ｒ坏淖R(shí)別模板分子，并且具有良好的物理化學(xué)穩(wěn)定性， 以及使用壽命長等優(yōu)點(diǎn)，使得分子印跡技術(shù)在手性藥物分離、固相萃取、臨床藥物分 析、膜分離技術(shù)、模擬酶催化、仿生傳感器等領(lǐng)域都展現(xiàn)了良好的應(yīng)用前景。因此，采 用分子印跡聚合物作為分離富集材料，可以建立一套快速、準(zhǔn)確、簡便的分離目標(biāo)物的 提取分離方法。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是制備一種可富集咖啡酸苯乙酯的分子印跡聚合物，利用這種高 分子聚合物與模板分子在空間結(jié)構(gòu)和結(jié)合位點(diǎn)的完全匹配，直接從天然產(chǎn)物中分離富集 咖啡酸苯乙酯，建立一種能夠快速、安全、簡便的咖啡酸苯乙酯提取分離方法。本發(fā)明的技術(shù)方案一種可富集咖啡酸苯乙酯的分子印跡聚合物制備方法，以咖啡酸苯乙酯為模板 分子、以四氫呋喃和異辛烷的混合溶劑為致孔劑、以4-乙烯吡啶為功能單體、以乙二醇 二甲基丙烯酸酯為交聯(lián)劑，以偶氮二異丁腈為引發(fā)劑，制備步驟如下1)將模板分子咖啡酸苯乙酯和功能單體4-乙烯吡啶溶解在致孔劑四氫呋喃和異 辛烷的混合溶劑中，混勻并攪拌2h;2)加入交聯(lián)劑乙二醇二甲基丙烯酸酯，混勻并攪拌IOmin ；3)加入引發(fā)劑偶氮二異丁腈，混勻并攪拌IOmin ；4)將上述混合液吹氮脫氧4min、恒溫60 °C下水浴24h ；5)將上述生成的高分子聚合物通過索氏抽提液抽提以去除未反應(yīng)物，抽提時(shí)間 為 48h ；6)將上述制得的高分子聚合物在溫度為60°C下干燥，即可制得可富集咖啡酸苯乙酯的分子印跡聚合物。所述致孔劑中四氫呋喃和異辛烷的體積比為2 3。所述模板分子、功能單體和交聯(lián)劑的摩爾比為1 4 10。所述引發(fā)劑偶氮二異丁腈的加入量為致孔劑、功能單體和交聯(lián)劑總質(zhì)量的 0.5%。所述索氏抽提液為甲醇和乙酸的混合液，其體積比為9 1。本發(fā)明的積極效果本發(fā)明制備的可富集咖啡酸苯乙酯的分子印跡聚合物，具 有合成簡單、價(jià)格低廉、專一性強(qiáng)、使用壽命長等特點(diǎn)，可用于從天然產(chǎn)物中分離提取 咖啡酸苯乙酯，特別是對(duì)于一些咖啡酸苯乙酯含量很低的天然產(chǎn)物，此分子印跡聚合物 可以達(dá)到富集純化的目的。


附圖為應(yīng)用該分子印跡聚合物分離蜂膠粗提物中的咖啡酸苯乙酯的測(cè)試圖。圖中峰A為咖啡酸苯乙酯的測(cè)試值；曲線(1)為蜂膠粗提物的測(cè)試值；曲線⑵為經(jīng)過咖啡酸苯乙酯分子印跡柱分離純化得到的洗脫液的測(cè)試值。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例一種可富集咖啡酸苯乙酯的分子印跡聚合物制備方法，步驟如下將284mg模 板分子咖啡酸苯乙酯和420 μ L功能單體4-乙烯吡啶溶解在2mL四氫呋喃和3mL異辛烷 的混合溶劑中，混勻并攪拌2h;加入1882yL交聯(lián)劑乙二醇二甲基丙烯酸酯，混勻并攪 拌IOmin ；加入30mg引發(fā)劑偶氮二異丁腈，混勻并攪拌IOmin ；將上述混合液吹氮脫氧 4min,密封，置于恒溫水浴鍋中在60°C下反應(yīng)24小時(shí)后，制得塊狀聚合物；將制得的塊 狀聚合物用研缽磨碎，用分級(jí)篩進(jìn)行篩選，保留60目-100目的聚合物；將上述聚合物用 250mL索氏抽提液抽提以去除未反應(yīng)物，抽提時(shí)間為48h，索氏抽提液為甲醇和乙酸的混 合液，其體積比為9 1 ；將上述制得的高分子聚合物在溫度為60°C下干燥，即可制得可 富集咖啡酸苯乙酯的分子印跡聚合物。實(shí)際應(yīng)用效果在一根4mL的SPE空管兩端放置墊片，在其中均勻的裝填150mg所制備的分子 印跡聚合物。將填有分子印跡聚合物的SPE用10mL10%甲醇平衡；將2mg樣品蜂膠粗 提物溶于50mL 10%的甲醇溶液；將50mL樣品溶液過裝有分子印跡聚合物的SPE柱，這 時(shí)咖啡酸苯乙酯就被吸附在富集材料上。然后用6mL 75%甲醇洗雜，洗去非特異性吸附 在柱子上的物質(zhì)，最后用2mL甲醇和乙酸(9 1，V/V)的混合溶液洗脫，得到的洗脫 液即為被分子印跡柱特異性吸附的咖啡酸苯乙酯。檢測(cè)結(jié)果如附圖所示，蜂膠粗提物的 成分較為復(fù)雜，咖啡酸苯乙酯只是其中一部分，而經(jīng)過特異性分子印跡柱富集分離后， 蜂膠粗提物中的其他組分的含量都有明顯降低，其中的咖啡酸苯乙酯被保留了下來。由 此可見，制備的咖啡酸苯乙酯分子印跡聚合物能夠?qū)Ｒ坏奈綐悠分械目Х人岜揭阴ィ?從而達(dá)到富集純化的目的。
權(quán)利要求
1.一種可富集咖啡酸苯乙酯的分子印跡聚合物制備方法，其特征在于以咖啡酸苯 乙酯為模板分子、以四氫呋喃和異辛烷的混合溶劑為致孔劑、以4-乙烯吡啶為功能單 體、以乙二醇二甲基丙烯酸酯為交聯(lián)劑，以偶氮二異丁腈為引發(fā)劑，制備步驟如下1)將模板分子咖啡酸苯乙酯和功能單體4-乙烯吡啶溶解在致孔劑四氫呋喃和異辛烷 的混合溶劑中，混勻并攪拌2h;2)加入交聯(lián)劑乙二醇二甲基丙烯酸酯，混勻并攪拌IOmin；3)加入引發(fā)劑偶氮二異丁腈，混勻并攪拌IOmin；4)將上述混合液吹氮脫氧4min、恒溫60°C下水浴24h；5)將上述生成的高分子聚合物通過索氏抽提液抽提以去除未反應(yīng)物，抽提時(shí)間為48h ；6)將上述制得的高分子聚合物在溫度為60°C下干燥，即可制得可富集咖啡酸苯乙酯 的分子印跡聚合物。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述可富集咖啡酸苯乙酯的分子印跡聚合物制備方法，其特征在 于所述致孔劑中四氫呋喃和異辛烷的體積比為2 3。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述可富集咖啡酸苯乙酯的分子印跡聚合物制備方法，其特征在 于所述模板分子、功能單體和交聯(lián)劑的摩爾比為1 4 10。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述可富集咖啡酸苯乙酯的分子印跡聚合物制備方法，其特征在 于所述引發(fā)劑偶氮二異丁腈的加入量為致孔劑、功能單體和交聯(lián)劑總質(zhì)量的0.5%。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述可富集咖啡酸苯乙酯的分子印跡聚合物制備方法，其特征在 于所述索氏抽提液為甲醇和乙酸的混合液，其體積比為9 1。
全文摘要
一種可富集咖啡酸苯乙酯的分子印跡聚合物的制備方法，以咖啡酸苯乙酯為模板分子、以四氫呋喃和異辛烷的混合溶劑為致孔劑、以4-乙烯吡啶為功能單體、以乙二醇二甲基丙烯酸酯為交聯(lián)劑，以偶氮二異丁腈為引發(fā)劑，經(jīng)過混勻、氮吹脫氧、恒溫水浴反應(yīng)、索氏抽提和干燥后即可制得可富集咖啡酸苯乙酯的分子印跡聚合物。本發(fā)明的積極效果本發(fā)明制備的可富集咖啡酸苯乙酯的分子印跡聚合物，具有合成簡單、價(jià)格低廉、專一性強(qiáng)、使用壽命長等特點(diǎn)，可用于從天然產(chǎn)物中分離提取咖啡酸苯乙酯，特別是對(duì)于一些咖啡酸苯乙酯含量很低的天然產(chǎn)物，此分子印跡聚合物可以達(dá)到富集純化的目的。
文檔編號(hào)B01J20/30GK102010479SQ20101052365
公開日2011年4月13日 申請(qǐng)日期2010年10月29日 優(yōu)先權(quán)日2010年10月29日
發(fā)明者劉方, 呂鵬云, 曲麗媛, 李寧, 王常容, 石玢, 趙蕊麗 申請(qǐng)人:南開大學(xué)