包括水解去保護(hù)步驟和固相萃取的18F-標(biāo)記化合物的純化發(fā)明的技術(shù)領(lǐng)域本發(fā)明涉及合成18F-標(biāo)記化合物且特別是可用作正電子發(fā)射斷層攝影(PET)示蹤劑的18F-標(biāo)記化合物的方法。相關(guān)技術(shù)描述適合在正電子發(fā)射斷層攝影(PET)中檢測的放射性同位素具有值得注意的短半衰期。碳-11(11C)具有約20分鐘的半衰期，氮-13(13N)具有約10分鐘的半衰期，氧-15(15O)具有約2分鐘的半衰期且氟-18(18F)具有約110分鐘的半衰期。制備用這些放射性核素標(biāo)記的化合物的合成方法必須盡可能地快且盡可能地高產(chǎn)。這在通常稱作PET示蹤劑的將會用于體內(nèi)成像的化合物的情況下特別重要。另外，將放射性同位素加到該化合物的步驟應(yīng)該在合成中盡可能地遲，且在加入放射性同位素之后用于后處理和純化放射性同位素標(biāo)記的化合物的任何步驟應(yīng)該在盡可能短的時間和盡可能少的工作下完成。PET示蹤劑且尤其是[18F]-放射性示蹤劑現(xiàn)在常借助于自動放射性合成設(shè)備如得自GEHealthcareLtd.的TracerlabTM和FastlabTM方便地制備。將在其中進(jìn)行反射性化學(xué)的一次性盒裝配到該設(shè)備。該盒通常包括流體路徑、反應(yīng)容器和用于接收試劑小瓶的開口以及在放射性合成后純化步驟中(cleanupstep)使用的任何固固相萃取(SPE)柱。開發(fā)成熟的自動合成方法提供速度、便利性和通?？煽康匕从媱澒?yīng)PET示蹤劑的優(yōu)勢。另外且重要地，將對操作人員的輻射負(fù)荷降至最小。許多18F-標(biāo)記的PET示蹤劑的合成包括受保護(hù)的前體化合物的18F標(biāo)記，隨后通過酸性或堿性水解除去保護(hù)基團(tuán)。所述18F-標(biāo)記的PET示蹤劑的實(shí)例包括18F-氟脫氧葡萄糖(18F-FDG)、6-[18F]-L-氟多巴(fluorodopa)(18F-FDOPA)、18F-氟胸苷(fluorothymidine)(18F-FLT)、1-H-1-(3-[18F]氟-2-羥基丙基)-2-硝基咪唑(18F-FMISO)、18F-1-(5-氟-5-脫氧-α-阿糖呋喃糖)-2-硝基咪唑(18F-FAZA)、16-α-[18F]-氟雌二醇(18F-FES)和6-[18F]-氟間羥胺(18F-FMR)(例如參見“放射性藥物手冊(HandbookofRadiopharmaceuticals)”的第6章和第9章，2003;Wiley:WelchandRedvanly和“PET成像基礎(chǔ)(BasicsofPETImaging)，第二版”的第8章，2010;Springer:Saha)。用[18F]FMISO作為實(shí)例，Oh等(2005NucMedBiol;32:899-905)描述了用于其合成的自動方法。在TracerLabMx[18F]FDG合成模塊(GEHealthcare)上且使用改進(jìn)的一次性[18F]FDG盒，使前體化合物1-(2'-硝基-1'-咪唑基)-2-O-四氫呋喃基-3-O-甲苯磺?；荚谝译?MeCN)中的溶液與[18F]氟化物(18Fˉ)在95-120℃下反應(yīng)300-600秒且在75℃下反應(yīng)280秒，隨后在除去溶劑之后在105℃下用1NHCl水解300秒，并使用NaOH中和。中和的[18F]FMISO粗溶液使用高效液相色譜(HPLC)純化以產(chǎn)生具有衰減校正端值(decay-correctedend)的[18F]FMISO，合成(EOS)放射化學(xué)產(chǎn)率為58.5±3.5%。所報道的合成時間為60.0±5.2分鐘。Frank等(2009ApplRadiatIsotop;67(6):1068-1070)報道了使用自動合成器合成[18F]FMISO。將前體化合物1-(2'-硝基-1'-咪唑基)-2-O-四氫吡喃基-3-O-甲苯磺?；?NITTP)在乙腈中用18F-在120℃下標(biāo)記10分鐘，在105℃下用1NHCl去保護(hù)歷時5分鐘且用1NNaOH中和。中和的粗產(chǎn)物反應(yīng)混合物使用HPLC純化。據(jù)報道衰減校正的產(chǎn)率為20-30%。用于制備[18F]FMISO的上述自動方法均使用HPLC來純化。優(yōu)選使用耗費(fèi)較少的時間和空間的純化方法，諸如固相萃取(SPE)。Chang等(2007AppRadIsotop;65:682-686)描述了使用ScanditronixAnatechRBIII機(jī)器人系統(tǒng)合成[18F]FMISO的自動方法。將在乙腈中的前體化合物(2'-硝基-1'-咪唑基)-2-O-乙?；?3-O-甲苯磺酰基丙醇在95℃下用18F-標(biāo)記10分鐘，在除去溶劑之后在90℃下使用1NHCl水解10分鐘，并用NaOH溶液中和。中和的粗反應(yīng)產(chǎn)物通過首先通過C18Sep-Pak柱且隨后通過中性氧化鋁Sep-Pak柱來純化。所報道的未校正的EOS放射化學(xué)產(chǎn)率為30±5%，且合成時間為65分鐘。與由Oh等公開的包括HPLC純化的先前方法(上文提到)相比較，放射化學(xué)產(chǎn)率降低且由該方法沒有提供合成時間方面的明顯優(yōu)勢。因此，存在提供用于制備[18F]FMISO及其他18F-標(biāo)記化合物的自動方法的空間，其中制備包括水解去保護(hù)步驟，該自動方法對本領(lǐng)域已知的方法加以改善。附圖簡述圖1為根據(jù)本發(fā)明的盒的示意圖。圖2為如在實(shí)施例1中更詳細(xì)地描述進(jìn)行在本發(fā)明的方法中包括的稀釋和捕集步驟的一種方法的示意圖。圖3為示出了本發(fā)明的方法可如何進(jìn)行且在實(shí)施例1中更詳細(xì)地描述的工藝流程圖。發(fā)明概述本發(fā)明提供了制備18F-標(biāo)記化合物的改進(jìn)的方法，其中所述合成包括水解去保護(hù)步驟。具體地講，本發(fā)明的方法容許在不使用任何中和化學(xué)品的情況下中和酸性或堿性粗產(chǎn)物。實(shí)際上，將產(chǎn)物捕集在SPE柱上且隨后用水充分沖洗。由于該工藝簡化，本發(fā)明的方法可在自動合成器上更容易地進(jìn)行。除了本發(fā)明的放射性氟化方法之外，本發(fā)明還提供設(shè)計用來在自動合成器上進(jìn)行所述方法的盒。優(yōu)選實(shí)施方案的詳述因此，本發(fā)明的一方面提供了如下方法，其包括：(i)用18F標(biāo)記受保護(hù)的前體化合物；(ii)通過水解使在步驟(i)中獲得的18F-標(biāo)記化合物去保護(hù)；(iii)用水稀釋在步驟(ii)中獲得的受保護(hù)的18F-標(biāo)記化合物；(iv)通過使在步驟(iii)中獲得的稀釋溶液通過固相萃取(SPE)柱而將所述去保護(hù)的18F-標(biāo)記化合物捕集在所述柱上；(v)從所述SPE柱洗脫在步驟(iv)中獲得的去保護(hù)的18F-標(biāo)記化合物；條件是在所述去保護(hù)步驟之后不進(jìn)行中和步驟。在本發(fā)明的上下文中，“18F-標(biāo)記化合物”為包含至少一個18F原子的化合物。優(yōu)選本發(fā)明的18F-標(biāo)記化合物僅包含一個18F原子。在本發(fā)明的上下文中，術(shù)語“標(biāo)記”是指涉及將18F加到化合物上的放射化學(xué)步驟。使前體化合物與合適的18F源反應(yīng)以產(chǎn)生18F-標(biāo)記化合物?！昂线m的18F源”通常為18F-氟化物或18F-標(biāo)記的合成子。18F-氟化物通常作為得自核反應(yīng)18O(p,n)18F的水溶液獲得。為了增加反應(yīng)性且避免由水的存在產(chǎn)生的羥基化副產(chǎn)物，在該反應(yīng)之前通常從18F-氟化物中除去水，且氟化反應(yīng)使用無水反應(yīng)溶劑進(jìn)行(Aigbirhio等，1995，JFluorChem;70:279-87)。自18F-氟化物除去水稱為制備“純(naked)”18F-氟化物。用于改善用于放射性氟化反應(yīng)的18F-氟化物的反應(yīng)性的另一步驟是在除去水之前加入陽離子反荷離子。合適地所述反荷離子在無水反應(yīng)溶劑內(nèi)應(yīng)當(dāng)具有足夠溶解性以保持18F-氟化物的溶解性。因此，通常使用的反荷離子包括諸如銣或銫的大但軟的金屬離子、與諸如KryptofixTM的穴狀配體絡(luò)合的鉀、或四烷基銨鹽，其中優(yōu)選與諸如KryptofixTM的穴狀配體絡(luò)合的鉀或四烷基銨鹽。術(shù)語“前體”是指當(dāng)與合適的18F源反應(yīng)時產(chǎn)生所要的18F-標(biāo)記化合物的化合物。術(shù)語“受保護(hù)”是指在前體上存在一個或多個保護(hù)基團(tuán)，這些保護(hù)基團(tuán)的存在是定點(diǎn)引入18F所需要的。術(shù)語“保護(hù)基團(tuán)”和“去保護(hù)”在本領(lǐng)域中是公知的。保護(hù)基團(tuán)的使用描述在“有機(jī)合成中的保護(hù)基團(tuán)(ProtectiveGroupsinOrganicSynthesis)”，Greene和Wuts(第四版，JohnWiley&Sons,2007)中。去保護(hù)步驟通常使用酸或堿水解來進(jìn)行。本發(fā)明的去保護(hù)步驟優(yōu)選通過酸水解進(jìn)行。術(shù)語“稀釋”在本領(lǐng)域中是公知的且是指通過與更多的溶劑混合降低溶質(zhì)在溶液中的濃度的過程。在本發(fā)明的上下文中，在稀釋步驟中使用的溶劑為水。所述稀釋步驟的目的在于增加反應(yīng)混合物的極性以讓產(chǎn)物較高且可重現(xiàn)地捕集在非極性(還通常稱為“反相”)SPE柱上。本發(fā)明中的術(shù)語“捕集”是指通過去保護(hù)的18F-標(biāo)記化合物與SPE柱的吸附劑之間的相互作用將去保護(hù)的18F-標(biāo)記化合物保留在SPE柱上。這些相互作用是依賴于溶劑的。術(shù)語“固相萃取”(SPE)是指使用溶解或懸浮在液體(稱作流動相)中的溶質(zhì)對于樣品所通過的固體(稱為固定相或吸附劑)的親和性將混合物分離成想要的組分和不想要的組分的化學(xué)分離技術(shù)。結(jié)果是樣品中所關(guān)注的想要的分析物或不想要的雜質(zhì)保留在吸附劑上，即如上定義的捕集步驟。通過吸附劑的部分根據(jù)其是否含有想要的分析物或不想要的雜質(zhì)來決定收集或棄去。如果保留在吸附劑上的部分包含想要的分析物，則隨后可將其從吸附劑上移除以便在另外的步驟中收集，在該步驟中將吸附劑用適當(dāng)洗脫劑沖洗。吸附劑通常填充在細(xì)長柱體內(nèi)的兩個多孔介質(zhì)層之間以形成“固相萃取(SPE)柱”。在本發(fā)明的上下文中從SPE的定義中具體地排除高效液相色譜(HPLC)。本文使用的術(shù)語“中和”是指調(diào)節(jié)溶液的pH以使其回到pH7或盡可能地靠近pH7的過程。因此，酸性溶液可通過加入合適量的堿如NaOH來中和，且堿性溶液可通過加入合適量的酸如HCl來中和。術(shù)語“洗脫”是指通過使合適的溶劑通過SPE柱而從該柱上移除想要的化合物的過程。用于洗脫的合適溶劑為破壞在SPE柱的吸附劑與想要的化合物之間的相互作用由此使得化合物通過SPE柱并被收集的溶劑。在本發(fā)明的方法中，沒有進(jìn)行明顯的(distinct)中和步驟。相反地，稀釋步驟既用于使pH達(dá)到中性且用于制備用于SPE純化的反應(yīng)混合物。與現(xiàn)有技術(shù)方法相比較，本發(fā)明的方法因此通過去掉中和步驟而簡化，這使得該方法更直接地進(jìn)行且自動化。本發(fā)明的方法可應(yīng)用到任何18F-標(biāo)記PET示蹤劑的合成，所述合成包括18F標(biāo)記包含保護(hù)基團(tuán)的前體化合物和隨后通過酸或堿水解除去所述保護(hù)基團(tuán)。所述18F-標(biāo)記的PET示蹤劑的非限制性實(shí)例包括18F-氟脫氧葡萄糖(18F-FDG)、6-[18F]-L-氟多巴(18F-FDOPA)、18F-氟胸苷(18F-FLT)、1-H-1-(3-[18F]氟-2-羥基丙基)-2-硝基咪唑(18F-FMISO)、18F-1-(5-氟-5-脫氧-α-阿糖呋喃糖)-2-硝基咪唑(18F-FAZA)、16-α-[18F]-氟雌二醇(18F-FES)和6-[18F]-氟間羥胺(18F-FMR)。所述18F-標(biāo)記化合物優(yōu)選為18F-氟脫氧葡萄糖(18F-FDG)、6-[18F]-L-氟多巴(18F-FDOPA)、18F-氟胸苷(18F-FLT)或18F-氟硝基咪唑(18F-FMISO)，且最優(yōu)選為18F-氟胸苷(18F-FLT)或18F-氟硝基咪唑(18F-FMISO)。這些PET示蹤劑中每一種的已知合成包括去保護(hù)步驟和中和步驟(例如參見“放射性藥物手冊”的第6章和第9章，2003;Wiley:WelchandRedvanly和“PET成像基礎(chǔ)(BasicsofPETImaging)，第二版”的第8章，2010;Springer:Saha)。進(jìn)行本發(fā)明的方法以通過省略中和步驟并進(jìn)行如本文定義的稀釋、捕集和洗脫步驟而以直接的方式獲得以純化形式的這些PET示蹤劑中的任一種?？赏ㄟ^本發(fā)明的該方面的方法合成的PET示蹤劑的實(shí)例包括[18F]-氟脫氧葡萄糖([18F]-FDG)、[18F]-氟二羥基苯基丙氨酸([18F]-F-DOPA)、[18F]-氟尿嘧啶、[18F]-1-氨基-3-氟環(huán)丁烷-1-羧酸([18F]-FACBC)、[18F]-阿坦色林(altanserine)、[18F]-氟多巴胺、3’-脫氧-3’-18F-氟胸苷[18F-FLT]和[18F]-氟苯并噻唑。在本發(fā)明的方法的步驟(i)中獲得的各種18F-標(biāo)記的受保護(hù)前體化合物的結(jié)構(gòu)如下(其中P1-P4各自獨(dú)立地為氫或保護(hù)基團(tuán))：在一個實(shí)施方案中，本發(fā)明的方法用于合成18F-FMISO：。當(dāng)18F-FMISO為通過本發(fā)明的方法獲得的18F-標(biāo)記化合物時，優(yōu)選的受保護(hù)前體化合物為式I化合物：其中：R1為羥基官能的保護(hù)基團(tuán)；且R2為離去基團(tuán)。式I的R1優(yōu)選選自乙?；?、苯甲?；?、二甲氧基三苯甲基(DMT)、β-甲氧基乙氧基甲基醚(MEM)、甲氧基甲基醚(MOM)和四氫吡喃基(THP)，且最優(yōu)選為THP。式I的R2為離去基團(tuán)，其中術(shù)語“離去基團(tuán)”是指適合親核取代的部分且為在鍵異裂中帶著一對電子離開的分子碎片。R2優(yōu)選選自Cl、Br、I、甲苯磺酸根(OTs)、甲磺酸根(OMs)和三氟甲磺酸根(OTf)，最優(yōu)選選自O(shè)Ts、OMs和OTf，且最特別優(yōu)選OTs。用于合成18F-FMISO的最優(yōu)選的前體化合物為1-(2’-硝基-1’-咪唑基)-2-O-四氫吡喃基-3-O-甲苯磺酰基-丙二醇，即式I化合物，其中R1為四氫吡喃基且R2為OTs。在本發(fā)明的一個優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述稀釋步驟包括：(a)將第一體積的水加到所述去保護(hù)的18F-標(biāo)記化合物中以獲得第一稀釋溶液，和(b)將后續(xù)體積的水加到所述第一稀釋溶液的等分試樣中以獲得后續(xù)稀釋溶液。所述稀釋步驟的意圖是產(chǎn)生具有適合使得較高且可重現(xiàn)地捕集在非極性SPE柱上的極性的反應(yīng)混合物。理想地，為了達(dá)到該目的，稀釋的反應(yīng)混合物應(yīng)該在水中具有不大于約10-15%的有機(jī)溶劑。使所述稀釋溶液的等分試樣通過所述SPE柱以將去保護(hù)的18F-標(biāo)記化合物捕集到所述柱上。任選一旦全部稀釋溶液都已經(jīng)通過了所述SPE柱，則可在洗脫步驟之前進(jìn)行用水洗滌所述柱的另外步驟。優(yōu)選所述洗脫步驟使用乙醇水溶液進(jìn)行。在18F-FMISO的情況下，優(yōu)選洗脫步驟用包含2-20%乙醇、最優(yōu)選5-10%乙醇的乙醇水溶液進(jìn)行。用于本發(fā)明的SPE柱的吸附劑可為任何基于硅膠或基于聚合物的非極性吸附劑。合適的非極性SPE柱的非限制性實(shí)例包括基于聚合物的OasisHLB或StrataXSPE柱，或基于硅膠的C2、C4、C8、C18、tC18或C30SPE柱。本發(fā)明的SPE柱優(yōu)選選自O(shè)asisHLB、tC18和StrataX。18F-標(biāo)記的PET示蹤劑現(xiàn)在常在自動放射性合成設(shè)備方便地制備。因此，在一個優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明的方法為自動合成。術(shù)語“自動合成”是指在沒有人干預(yù)的情況下進(jìn)行的化學(xué)合成。換句話說，其是指通過至少一臺機(jī)器驅(qū)動并控制且在不需要手動干預(yù)的情況下完成的過程。存在這類設(shè)備的多個市售實(shí)例，包括TRACERlabTM和FASTlabTM(GEHealthcareLtd)。這類設(shè)備通常包括在其中進(jìn)行放射性化學(xué)的常常為一次性的“盒”，將其裝配到所述設(shè)備以進(jìn)行放射性合成。所述盒通常包括流體路徑、反應(yīng)容器和用于接收試劑小瓶的開口以及在放射性合成后純化步驟中使用的任何固相萃取柱。在合成器平臺上進(jìn)行的PET示蹤劑的合成的自動化通過有用試劑開槽(slot)的數(shù)目來限制。本發(fā)明的方法容許通過去掉中和劑來減少所需要的化學(xué)品的數(shù)目。另一方面，本發(fā)明提供了進(jìn)行本發(fā)明方法的盒，所述盒包括：(i)含有如本文定義的所述受保護(hù)前體化合物的容器；(ii)用如本文定義的合適18F源洗脫含有所述受保護(hù)前體化合物的容器的設(shè)備；(iii)用于使在用合適18F源洗脫含有所述受保護(hù)前體化合物的容器之后獲得的18F-標(biāo)記化合物去保護(hù)的設(shè)備；和(iv)適合捕集所述去保護(hù)的18F-標(biāo)記化合物的如本文定義的SPE柱；條件是含有適合中和所述去保護(hù)18F-標(biāo)記化合物的pH的中和劑的容器未包括在所述盒中或未與所述盒流體連接。在本發(fā)明的盒的上下文中，“中和劑”為設(shè)計用來中和分別包含去保護(hù)的標(biāo)記的18F-標(biāo)記化合物的堿性溶液或酸性溶液的pH的酸性溶液或堿性溶液。在本文中關(guān)于本發(fā)明的方法所給出的式Ia的前體化合物、18F-氟化物和SPE柱的所有合適、優(yōu)選、最優(yōu)選、特別優(yōu)選且最特別優(yōu)選的實(shí)施方案也適用于本發(fā)明的盒。本發(fā)明的盒另外可包括：(iv)用于去除過量的[18F]-氟化物的離子交換柱。實(shí)施例簡述實(shí)施例1描述根據(jù)本發(fā)明的方法如何獲得18F-FMISO。在實(shí)施例中使用的縮寫的列表在實(shí)施例中使用的縮寫的列表EtOH乙醇18F-氟離子18F-FMISO1-H-1-(3-[18F]氟-2-羥基丙基)-2-硝基咪唑ID內(nèi)徑NITTP1-(2’-硝基-1’-咪唑基)-2-O-四氫吡喃基-3-O-甲苯磺酰基-丙二醇MeCN乙腈QMA甲基季銨THP四氫吡喃基。實(shí)施例實(shí)施例1：合成18F-FMISO將在圖1中所示的盒裝配到FASTlab合成器(GEHealthcare)上。[18F]氟化物自GEHealthcare在GEPETrace回旋加速器上供應(yīng)。初始活性物質(zhì)(initialacitivity)使用真空經(jīng)由FASTlab盒的活性物質(zhì)入口轉(zhuǎn)移。該活性物質(zhì)從活性入口轉(zhuǎn)移到其中捕集[18F]的(經(jīng)過預(yù)處理的)QMA柱，且使用用于推動的N2和用于拉動的真空的組合使水通過到18O水回收小瓶。在將含有18F-活性物質(zhì)的洗脫劑轉(zhuǎn)移到反應(yīng)容器中之后，將溶劑蒸發(fā)，直至干燥。在干燥過程期間，將少量的乙腈(80μl)加到反應(yīng)容器中。該蒸發(fā)在氮?dú)饬飨虑以谡婵障略诩訜嵯逻M(jìn)行。將1-(2’-硝基-1’-咪唑基)-2-O-四氫吡喃基-3-O-甲苯磺酰基-丙二醇前體(也稱作NITTP)加到干燥殘余物中。在110℃下的親核取代在封閉的反應(yīng)容器中進(jìn)行，其中前體的甲苯磺酸根基團(tuán)被18F-離子置換。在標(biāo)記之后，將溶液冷卻至60℃。四氫吡喃化(tetrahydropyranylated，THP)化合物通過除去THP保護(hù)基團(tuán)而轉(zhuǎn)變成18F-FMISO。該去保護(hù)在反應(yīng)容器中在90℃下借助于1ml0.6MH3PO4進(jìn)行約5分鐘。該酸濃度通過用約840μl水稀釋約360μl2.29MH3PO4獲得。所得18F-FMISO在有機(jī)/水混合物中獲得。有機(jī)溶劑(MeCN)通過結(jié)合真空(-10kPa(-100mBar))在8分鐘期間在90℃下吹氮?dú)馔ㄟ^右手側(cè)連接器而除去。將粗FMISO在注射器中與3.5ml水混合且將其送回反應(yīng)容器。隨后將該溶液(B)用水分3份稀釋。將1.5ml的該溶液(B)用5.0ml水稀釋(溶液C)且隨后使其通過反相柱(Oasis?HLB)。該操作用在反應(yīng)容器中的剩余溶液進(jìn)行3次。將FMISO捕集到柱上。溶劑、未反應(yīng)的18F-離子和雜質(zhì)用7ml水洗到外部廢物瓶中。圖2為該稀釋和捕集過程的示意圖。捕集的FMISO在洗脫之前用整管注射器水(≈7ml)沖洗。FMISO的洗脫通過用水稀釋無水乙醇到5-6%EtOH的比率來進(jìn)行。該稀釋在中間注射器中通過首先移出約350μlEtOH，隨后移出約6.5ml水且重復(fù)三次來進(jìn)行。FMISO從Oasis?HLB柱槽的酸性氧化鋁輕質(zhì)柱洗脫到產(chǎn)物收集小瓶。在洗脫的最后，用2整管注射器的氮?dú)獯迪床坜D(zhuǎn)移管，接著30秒直接氮?dú)獯迪?HF；100kPa(1000毫巴))，以容許轉(zhuǎn)移槽具有15m長管材(最小ID：1mm)。非極性副產(chǎn)物保留在Oasis?HLB柱上且極性物如最后痕量的未反應(yīng)的18F-保留在氧化鋁上。溶液最后通過0.22μm的排放過濾器。18F-FMISO的最后體積為20mL±0.5mL。整個過程的示意圖示于圖3中。該過程總共耗時小于57分鐘且產(chǎn)生約35%的未校正的產(chǎn)率。