專利名稱：骨質(zhì)疏松癥的診斷和/或骨質(zhì)疏松癥骨折危險的預測方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種能夠迅速、簡便并且正確地對骨質(zhì)疏松癥進行診斷和/或?qū)琴|(zhì)疏松癥骨折危險進行預測的方法。
在骨密度減少較輕度時，并不立刻出現(xiàn)臨床癥狀，但隨著減少程度的變大，也就變得越容易引起骨折或骨變形。脊椎容易引起骨折或骨變形，而出現(xiàn)由于錐體的壓迫骨折或脊椎變形引起的腰痛等癥狀。
另外，大腿骨頸部或骨盆的骨折，有時會使患者失去運動功能，從而對以后的生活帶來很大影響。
現(xiàn)在，骨質(zhì)疏松癥的診斷，是通過X線照相等物理學方法進行，但是該方法須要大規(guī)模的診斷裝置，并且不僅具有由于使用X線產(chǎn)生的安全性問題，還存在只有在骨密度明顯減少的發(fā)病后期才能有效診斷的缺點。
所以，通過對以絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥或老年性骨質(zhì)疏松癥為代表的各種骨質(zhì)疏松癥進行早期發(fā)現(xiàn)并且診斷、從而對骨折危險進行預測，有望確立可以有效治療的迅速、簡便并且準確的方法。
近年，通過從血液或尿中檢測與骨代謝有關的因子，并且以此為骨代謝標記進行測定，從而使診斷骨質(zhì)疏松癥的方法獲得了急速的進步。骨代謝標記與骨吸收標記和骨形成標記有很大區(qū)別，但是，其中已知骨基質(zhì)主要成分的I型膠原交聯(lián)成分的分解產(chǎn)物Pyridinoline(Pyr)、去氧Pyridinoline(D-Pyr)、I型膠原C末端端肽片斷(CTx)、I型膠原C末端端肽片斷(ICTP)、I型膠原N端端肽片斷(NTx)、破骨細胞產(chǎn)生的酒石酸抵抗性酸性磷酸酯酶(TRAP)作為骨吸收標記有效。但是，人們正在探索在特異性和靈敏度方面更優(yōu)良的骨吸收標記。
本發(fā)明發(fā)明人等鑒于上述問題，進行了種種探討，結果發(fā)現(xiàn)，尿中的γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶(以下簡稱為γ-GTP)可以用作骨吸收標記，γ-GTP越多，骨密度就越低，骨質(zhì)疏松癥處于發(fā)病期，或者通過給予骨質(zhì)疏松癥的治療藥發(fā)現(xiàn)使γ-GTP減少和骨密度的恢復(增加)，通過利用這種相關性，發(fā)現(xiàn)了能夠迅速、簡便并且正確地對骨質(zhì)疏松癥進行診斷和/或?qū)琴|(zhì)疏松癥骨折危險進行預測的方法。
γ-GTP已知為作為特異性的反映肝膽道類疾病的標記的轉(zhuǎn)移酶。在特開平10-87507號公報中公開了γ-GTP具有促進破骨細胞分化的活性，但是，本次發(fā)現(xiàn)尿中的γ-GTP作為特異骨吸收標記發(fā)揮作用是不能根據(jù)所述公報公開的內(nèi)容而完全預知的以外發(fā)現(xiàn)。
本發(fā)明是根據(jù)所述見解而完成的，本發(fā)明的骨質(zhì)疏松癥的診斷和/或骨質(zhì)疏松癥骨折危險的預測方法，如權利要求1所述，其特征在于，測定尿中的γ-GTP。
另外，權利要求2所述的方法是在權利要求1所述的方法中，其特征在于，在尿中添加γ-GTP活性測定用基質(zhì)，通過由顯色程度測定γ-GTP的活性，從而測定γ-GTP。
另外，本發(fā)明的骨密度的監(jiān)控方法，如權利要求3所述，其特征在于，測定尿中的γ-GTP。
另外，本發(fā)明，如權利要求4所述，其特征在于，將尿中的γ-GTP作為骨吸收標記使用。
另外，本發(fā)明的試劑，如權利要求5所述，其特征在于，至少含有γ-GTP活性測定用基質(zhì)的、用于對骨質(zhì)疏松癥進行診斷和/或?qū)琴|(zhì)疏松癥骨折危險進行預測的試劑。
圖2是表示治療3個月后兩者的相關圖。
圖3是表示治療6個月后兩者的相關圖。
圖4是表示治療12個月后兩者的相關圖。
圖5是表示治療中的尿中γ-GTP和尿中NTx的推移圖。
本發(fā)明的骨質(zhì)疏松癥的診斷和/或骨質(zhì)疏松癥骨折危險的預測方法，其特征在于，測定尿中的γ-GTP。
對于尿中的γ-GTP的測定方法無特殊的限制，可以根據(jù)利用對γ-GTP的特異抗體的酶免疫定量法(EIA)、放射性免疫定量法(RIA)、利用高效液相色譜法(HPLC)的定量方法等，其中優(yōu)選通過在尿中添加γ-GTP活性測定用基質(zhì)，由顯色程度來測定γ-GTP活性的方法(酶法)。根據(jù)酶法，由于無須對檢體進行前處理等，在短時間內(nèi)可以確定結果，所以具有能夠簡便、快速測定的優(yōu)點。另外，用于該方法的測定試劑作為肝膽道類疾病等的診斷試劑有各種市售品，在本發(fā)明中，利用該市售的測定試劑，可以以與肝膽道類疾病等的診斷中的操作方法(用法、用量)相同的方法測定。γ-GTP的測定值如果須要可以根據(jù)尿中的肌酸酐值進行修正。
作為γ-GTP活性測定用基質(zhì)，可以使用所述市售診斷試劑中的各種合成基質(zhì)，例如，L-γ-谷?；鶎ο趸；桨?、L-γ-谷?；?3-羧基-4-硝基酰基苯胺、L-γ-谷酰基-3-羧基-4-羥基?；桨?、L-γ-谷酰基-對-N-乙基-N-羥基乙基氨基?；桨贰-γ-谷?；?3，5-二溴-4-羥基?；桨贰-γ-谷?；?α-萘胺、L-γ-谷酰基-3-羧基-1，4-亞苯基二胺等。另外，作為L-谷?；氖荏w物質(zhì)通常添加甘氨酰甘氨酸。
由γ-GTP活性的顯色程度的測定，根據(jù)由γ-GTP活性測定用基質(zhì)游離產(chǎn)生的顯色物質(zhì)、由基質(zhì)游離產(chǎn)生的物質(zhì)產(chǎn)生的顯色物質(zhì)的顯色程度進行測定，為能夠進一步高精度地測定，優(yōu)選根據(jù)比色法測定。比色測定可以以與肝膽道類疾病等的診斷中的比色測定相同的方法進行測定。如果使用各種自動分析裝置，可以在短時間內(nèi)對大量的檢體進行處理。
為使測定簡便，也可以視覺測定。此時，由于尿為檢體，顯色優(yōu)選黃色以外的顏色。作為能夠制作黃色以外顯色的基質(zhì)，可以舉出L-γ-谷酰基-3，5-二溴-4-羥基?；桨?3，5-二溴-4-羥基酰基苯胺(DBHA)游離，通過單酚單氧酶的作用，而DBHA與N-甲基-N-(3-甲基苯基)-N’-琥珀?；费趸s和生成綠色色素)。
在以上方法中，若測定尿中的γ-GTP，由于γ-GTP具有骨吸收標記的作用，所以γ-GTP越多，說明骨密度越低，骨質(zhì)疏松癥正處于發(fā)病期。另一方面，由于γ-GTP的減少意味著骨密度的恢復(增加)，所以癥狀正處于改善期。所以，利用該相關性，可以迅速、簡便并且正確地對骨質(zhì)疏松癥進行診斷和/或?qū)琴|(zhì)疏松癥骨折危險進行預測。另外，對于各個患者通過多次測定尿中的γ-GTP來對骨密度進行監(jiān)測，從而可以容易地對骨質(zhì)疏松癥治療藥的選擇或者其效果進行判定。以下在實施例中對本發(fā)明進行詳細說明，但本發(fā)明不受以下限制。
(方法)以無肝膽道類疾病的未對骨質(zhì)疏松癥進行治療的絕經(jīng)女性35人為對象，在征求同意的前提下測定血清和尿中的γ-GTP(各個測定根據(jù)將關東化學社制的Merck Liquid γ-GT J用作測定試劑的酶法，根據(jù)操作程序利用日立制作所社制7170型自動分析裝置進行測定)。
另外，作為對照的骨吸收標記，將尿中的I型膠原N末端端肽片斷(NTx)用作對照的骨形成標記并測定血清中的堿性磷酸酯酶(ALP)(前者的測定根據(jù)將持田制藥社制Osteomark用作測定試劑的ELISA法，后者的測定根據(jù)將和光純藥工業(yè)社制L型EWaKoATP·J用作測定試劑的酶法進行測定)。
另外，用Lunar社制DPX對腰椎和大腿骨頸部的密度進行測定。從所述測定的時間點，對每個人在12個月期間作為激素補充療法的治療，每日單獨服用結合型雌激素0.625mg或每日服用它和甲羥孕酮2.5mg，在治療開始后3個月、6個月、12個月測定血清中和尿中的γ-GTP、尿中的NTx、血清中的ALP。另外，在治療開始后6個月和12個月測定骨密度。
(結果)發(fā)現(xiàn)根據(jù)激素補充療法的治療中，尿中γ-GTP和尿中NTx之間有顯著的正相關(參照

圖1～圖4)。兩者顯示相同的推移，在治療12個月后尿中的γ-GTP平均減少21.4％，尿中的NTx平均減少37.7％。
骨密度在治療12個月后，腰椎骨密度(L2-L4BMD)平均增加6.0％，大腿骨頸部骨密度(Femoral neck BMD)平均增加1.7％(參照圖5)。另外，血清ALP在治療12個月后平均減少18.5％。血清中γ-GTP在治療中無顯著變化。
由以上結果可知，尿中的γ-GTP越多，骨密度就越低；在激素補充療法中測定的γ-GTP的減少和骨密度的恢復(增加)一致；另外，尿中的γ-GTP與可以有效地作為骨吸收標記的尿中的NTx顯示相同的推移；所以尿中的γ-GTP可以有效地作為骨吸收標記。
如前述，γ-GTP由于具有促進破骨細胞的分化作用，所以尿中的γ-GTP可以有效地用作具有現(xiàn)存骨吸收標記中不具有的性質(zhì)的標記。
根據(jù)本發(fā)明，提供了尿中作為新型的骨吸收標記的γ-GTP，通過測定尿中的γ-GTP可以迅速、簡便并且準確地對骨質(zhì)疏松癥進行診斷和/或?qū)琴|(zhì)疏松癥骨折危險進行預測。
權利要求
1.一種骨質(zhì)疏松癥的診斷和/或骨質(zhì)疏松癥骨折危險的預測方法，通過測定尿中的γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶(γ-GTP)進行診斷和預測。
2.根據(jù)權利要求1所述的方法，通過在尿中添加γ-GTP活性測定基質(zhì)，由顯色程度測定γ-GTP的活性，從而測定γ-GTP。
3.一種骨密度的監(jiān)測方法，通過測定尿中的γ-GTP進行監(jiān)測。
4.尿中的γ-GTP作為骨吸收標記的使用。
5.一種試劑，至少含有γ-GTP活性測定用基質(zhì)，并且用于對骨質(zhì)疏松癥進行診斷和/或?qū)琴|(zhì)疏松癥骨折危險進行預測。
全文摘要
以提供新型的骨吸收標記為基礎，從而提供一種能夠迅速、簡便并且正確地對骨質(zhì)疏松癥進行診斷和/或?qū)琴|(zhì)疏松癥骨折危險進行預測的方法，其特征在于，測定尿中的γ－GTP。
文檔編號G01N33/50GK1454263SQ01815376
公開日2003年11月5日 申請日期2001年9月12日 優(yōu)先權日2000年9月14日
發(fā)明者新飯?zhí)锟∑? 真田光博, 石塚保行 申請人:株式會社應用細胞生物工程